组织及血液碱性磷酸酶(AKP ALP)活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法
碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(磷酸苯二钠比色法)说明书
注意：由于检测仪器和操作手法等条件的不同，参考值范围会有波动，该值仅供参考，对于 要求精确计算 ALP 含量的，可以进行多点重复测定；根据测定经验显示，标准品浓度在 5U/L 以下，标准品浓度在 100U/L 以上，标准曲线会有偏差。
以系列 Phenol 标准(1～6 号)对应的金氏单位(10、20、30、40、50U/L)为横坐标，以相应的 A 标准(1～6 号)为纵坐标，绘制标准曲线。以 A 测定-A 对照的差值为实际的吸光度，用该差 值与标准曲线进行对比，求出酶活力单位。
参考区间(37℃)：
健康成年人 健康儿童
3～13 金氏单位 5～28 金氏单位
注意事项： 1、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。 2、如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定，但应注意 96 孔板最大检测体积。 3、所测样品的值高于标准曲线的上限，应稀释样品后重新测定。 4、空白管如果显红色，说明 ALP 显色液不可用，应丢弃。 5、加入显色基液时应迅速，并且及时混匀，否则显色不充分。 6、如无法检测 510nm，亦可检测 500～530nm 范围内吸光度。 7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
保存条件 4℃ 避光 4℃ 避光 4℃ 避光 4℃ 避光 4℃ 避光
自备材料： 1、离心管或小试管、水浴锅或恒温箱 2、分光光度计、比色杯 3、ddH2O、PBS 或生理盐水
操作步骤(仅供参考)： 1、准备样品： ①细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要可用 PBS 或生理盐水进行适当匀 浆，一般细胞数量在 106 以上，组织应在 100mg 以上，3000~4000rpm 离心取上清，-20℃ 冻存，用于碱性磷酸酶的检测。 ②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定， 尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了 血浆或血清但不加底物的对照。 ③高活性样品：如果样品中含有较高活性的碱性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或 PBS 等进 行稀释，如鸡血清、血浆可稀释 5～10 倍后检测。
碱性磷酸酶测定试剂（ALPAKP）
北京华宇亿康生物工程技术有限公司Co-Health (Beijing )Laboratories Co., Ltd. 液体生化试剂使用说明书_碱性磷酸酶测定试剂（ALP/AKP ） （IFCC ，AMP 缓冲液）【注册产品标准】YZB/国 1959-2003 ◇ 【医疗器械注册证号】京药监械（准）字2005第2400405号本试剂适用于人血清或血浆中碱性磷酸酶活性的体外定量分析。
临床意义碱性磷酸酶存在于体内多种组织和器官，其病理性变化表现在：增加：（1） 肝脏疾病如胆汁淤积和肝硬化；（2） 骨骼疾病如软骨病、佝偻病、成骨肉瘤； （3） 恶性肿瘤。
减少：（1） 停止生长（克汀氏病、软骨发育不全）； （2） 先天性低磷酸酶血症。
方法学原理磷酸对硝基苯酚（4-NPP ）在碱性磷酸酶的作用下，将其磷酸基转移到2-氨基-2-甲基-1-丙醇（AMP ）受体分子上，释放出的对硝基苯酚（4-NP ）在碱性溶液中分子重排形成黄色醌，可在405nm 下检测。
黄色醌形成速率与ALP 活力成正比。
ALP 4 -NPP + H 2O → 4 -NP + 磷酸 Mg 2+, 碱性 试剂组成试剂1（R 1） 试剂2（R 2）AMP 0.35mol/L 4 -NPP 80mmol/L MgCl 2 10.5mmol/L 稳定剂 适量 适用仪器ZYA-1003：适用于日立7060/7150、岛津7200/ 7300/8000全自动生化分析仪；ZYB-1003：适用于日立7170 A /7170、奥林巴斯AU400 /600/1000全自动生化分析；ZYC-1003：适用于日立7020全自动生化分析仪； ZYD-1003：适用于贝克曼CX 系列全自动生化分析仪；ZYE-1003：适用于东芝全自动生化分析仪；TYA-1003、TYB-1003、TYC-1003：适用于其它全自动生化分析仪及各类半自动生化分析仪。
试剂贮存及稳定性试剂自生产日期起2—8℃避光存放可稳定12个月；R 1、R 2按4:1比例混为工作液2—8℃避光可稳定4周。
碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒标准操作程序
碱性磷酸酶(ALP)测定标准操作程序1.摘要碱性磷酸酶（ALP）存在于成骨细胞、干细胞、白细胞、肾、脾、胎盘、前列腺和小肠内。
测定血清或肝素化血浆中的碱性磷酸酶活力，做临床辅助诊断用。
2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中碱性磷酸酶（ALP）的活力。
3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定碱性磷酸酶（ALP）活力的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的碱性磷酸酶（ALP）试剂盒采用的是AMP缓冲液法。
5.原理在AMP的缓冲环境下，磷酸对硝基苯在碱性磷酸酶的作用下，可以水解成磷酸盐和对硝基苯酚。
在一定底物浓度范围内,磷酸对硝基苯的水解产物对硝基苯酚会引起405nm处吸光度的上升，其上升速率与血清中碱性磷酸酶的活力成正比。
−→−+OH−−磷酸盐对硝基苯酚磷酸对硝基苯碱性磷酸酶+26.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：R1：AMP缓冲液（PH10.50）、乙酸镁；R2：AMP缓冲液（PH8.85）、磷酸对硝基苯、乙酸镁。
AMP：2-氨基-2-甲基-1-丙醇7.3试剂稳定性：试剂在2-8℃避光保存，有效期1年。
试剂工作液在2-8℃避光保存，可稳定4周，15-25℃可保存稳定4天。
7.4试剂准备：试剂为即用式。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用某某公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
碱性磷酸酶测定试剂盒(NPP底物-AMP缓冲液法)产品技术要求zhongshengbeikong
碱性磷酸酶测定试剂盒（NPP底物-AMP缓冲液法）适用范围：本产品用于体外定量测定人血清中碱性磷酸酶的活性。
1.1包装规格液体双剂型试剂1（R1）：80mL×3，试剂2（R2）：60mL×1；试剂1（R1）：80mL×2，试剂2（R2）：20mL×2；试剂1（R1）：60mL×3，试剂2（R2）：45mL×1；试剂1（R1）：40mL×3，试剂2（R2）：30mL×1；试剂1（R1）：40mL×3，试剂2（R2）：10mL×3。
1.2主要组成成分试剂1（R1）液体：AMP缓冲液350mmol/L（pH 10.5）2.5mmol/LMgCl2试剂2（R2）液体：对硝基苯磷酸盐 16mmol/L2.1 外观试剂盒中各组件的外观应满足：2.1.1试剂1（R1）应为无色透明溶液，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损；2.1.2 试剂2（R2）应为淡黄色透明溶液，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损。
2.2 净含量液体试剂净含量不少于标示值。
2.3 试剂空白吸光度在波长410nm（400nm～420nm）（光径1cm）处，试剂空白吸光度（A）应≤1.000；试剂空白吸光度变化率（△A/min）应≤0.005。
2.4准确度测定GBW(E)090593，相对偏差应不超过±10％。
2.5分析灵敏度对应于活性为120U/L的ALP所引起的吸光度变化率（△A/min）的绝对值应在0.010～0.050范围内。
2.6重复性重复测试同一样本，变异系数（CV）应≤5%。
2.7批间差测试同一样本，批间差（R）应≤6%。
2.8线性范围在[1，1200]U/L（37℃）范围内，线性相关系数（r）应≥0.990；在(20，1200] U/L（37℃）范围内，线性相对偏差应不超过±10％；在[1，20]U/L（37℃）范围内，线性绝对偏差应不超过±2U/L。
Elabscience碱性磷酸酶(ALP)比色法测试盒使用说明书
（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断！）Elabscience®碱性磷酸酶(ALP)比色法测试盒Alkaline Phosphatase (ALP) Activity Assay Kit产品货号：E-BC-K091-M产品规格：48T(32 samples)/96T(80 samples)检测仪器：酶标仪（500-530 nm）使用前请仔细阅读说明书。
如果有任何问题，请通过以下方式联系我们：销售部电话************，************技术部电话131****6790具体保质期请见试剂盒外包装标签。
请在保质期内使用试剂盒。
联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。
用途本试剂盒适用于检测动物血清(浆)、体液、组织及细胞中碱性磷酸酶的活力。
检测原理在pH=10的反应液中，碱性磷酸酶催化磷酸苯二钠水解，生成游离酚和磷酸。
酚在碱性溶液中与4-氨基安替吡啉结合，并经铁氰化钾氧化生成红色的醌的衍生物，根据红色的深浅计算酶活的高低。
本试剂盒检测组织和细胞样本时，需测定总蛋白浓度，推荐使用BCA法（货号：E-BC-K318-M）。
提供试剂和物品说明：试剂严格按上表中的保存条件保存，不同测试盒中的试剂不能混用。
对于体积较少的试剂，使用前请先离心，以免量取不到足够量的试剂。
所需自备物品仪器：酶标仪（500-530 nm，最佳检测波长520 nm）、涡旋混匀仪、37℃恒温箱。
耗材：枪头（1000 µL，200 µL，10 μL）、EP管（10 mL，2 mL）。
试剂：双蒸水、PBS（0.01 M，pH 7.4）或生理盐水（0.9% NaCl）试剂准备①试剂盒中的试剂平衡至室温。
②工作液的配制：按试剂一：试剂二为1:1的体积比混匀，现用现配，未用完的试剂2-8℃避光可保存1天。
③不同浓度标准品的稀释：样本准备①样本处理血清血浆等液体样本：直接测定。
生物化学大实验-akp的浓度测定与活性检测
用于制备样品和分离细 胞或组织中的不同组分。
用于保持反应温度恒定。
用于精确移取一定量的 样品和试剂。
PART 04
实验步骤与方法
REPORTING
WENKU DESIGN
AKP的浓度测定步骤与方法
准备试剂和设备
01
根据实验要求准备所需的试剂和设备，如AKP标准品、酶标仪、
酶标板等。
配置标准品溶液
改进建议
为了更准确地测定AKP的浓度和活性，建议采取以下措施：首先，确保试剂的纯度，避免使用含有杂质或污染物 的试剂；其次，严格控制实验条件，如温度、pH值等，确保实验条件的一致性和准确性；最后，采用更先进的 检测方法和技术，如色谱法、质谱法等，以提高实验结果的准确性和可靠性。
PART 07
参考文献
数据处理
根据标准品溶液的浓度和光密 度值绘制标准曲线，并计算待
测样本中AKP的浓度。
AKP的活性检测步骤与方法
准备试剂和设备
01 根据实验要求准备所需的试剂
和设备，如底物、终止液、分 光光度计等。
配置反应体系
02 将底物溶解在适当的缓冲液中
，加入待测样本，设置空白对 照。
启动反应
03 将反应体系在恒温条件下孵育
进行AKP的浓度和活性检测。
PART 02
实验原理
REPORTING
WENKU DESIGN
AKP的浓度测定原理
酶联免疫吸附法（ELISA）
利用抗原与抗体的特异性结合，通过酶与底物反应的显色反应，测定AKP的浓 度。
分光光度法
利用特定波长下的吸光度值与AKP浓度的线性关系，通过测定吸光度值计算 AKP的浓度。
掌握AKP的浓度测定 与活性检测方法
碱性磷酸酶测定试剂盒(NPP底物-AMP缓冲液)产品技术要求dd
碱性磷酸酶测定试剂盒（NPP底物-AMP缓冲液）
组成：
适用范围：用于体外定量测定人血清中碱性磷酸酶的活性。
2.1外观
试剂盒外观应整洁，液体无渗漏，文字符号标识清晰；试剂1：无色澄清液体；试剂2：淡黄绿色澄清液体。
2.2装量
每瓶不少于标示值。
2.3试剂空白吸光度
用指定的空白样品测试试剂（盒），在光径1cm下，在A405nm处测定试剂空白吸光度A≤0.8，空白变化率△A/min≤0.005。
2.4分析灵敏度
试剂测定（120±12）U/L被测物，吸光度变化△A/min≥0.01。
2.5线性范围
2.5.1在[25，750]U/L内，相关系数R≥0.990。
2.5.2在 [25，100]U/L时绝对偏差不超过±10U/L，测定（100，750]U/L相对偏差不超过±10%。
2.6精密度
2.6.1 重复性
重复测试（120±12）U/L的样本，所得结果的变异系数（CV%）应不大于5%。
2.6.2批间差
测定（120±12）U/L样本，所得结果的批间相对极差（R）应不大于10%。
2.7准确度
比对试验相关系数r2≥0.95， [25，100]U/L区间内，绝对偏差不超过±10U/L，（100，750]U/L区间内，相对偏差不超过±10%。
2.8 效期稳定性
试剂有效期为12个月，取到效期后一个月内进行检测，测定结果应符合2.3-2.6.1、2.7项要求。
土壤碱性磷酸酶活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法
土壤碱性磷酸酶(S-AKP/ALP)活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号:BC0280规格:50T/48S产品简介：土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。
土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响。
通常按照其最适pH范围，分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。
碱性环境中，S-AKP/ALP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-AKP/ALP活性。
产品内容：试剂一：液体21mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。
用前加50mL蒸馏水充分溶解。
试剂三：液体5mL×1瓶，4℃保存。
试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
临用前加1152μL无水乙醇（自备），48μL蒸馏水充分溶解。
（变褐色后不能再使用）标准品：液体1mL×1支，0.5μmol/mL苯酚标准液，4℃保存。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水、乙醇和甲苯（不允许快递）。
操作步骤：催化反应：称取风干混匀土壤约0.1g，加入0.05mL甲苯（自备），轻摇15min；加0.4mL试剂一并且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。
10000rpm室温离心10min，取上清液置于冰上待测。
显色反应：1.分光光度计预热30min以上，调节波长到660nm，蒸馏水调零。
2.空白管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL试剂一，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm测定吸光度，记为A空白管。
碱性磷酸酶(AKP、ALP)的测定及医学意义
碱性磷酸酶（AKP、ALP）的测定及医学意义
1．正常参考值：
①速率法
女性：
1～12岁：＜500 U/L
15岁以上：40～150 U/L
男性：
1～12岁：＜500 U/L
12～15岁：＜750 U/L
25岁以上：40～150 U/L
②比色法：
健康成年人：3-13 金氏单位
儿童：5-28 金氏单位
2．临床意义
碱性磷酸酶活力测定常作为肝胆疾病和骨骼疾病的临床辅助诊断的指标。
血清碱性磷酸活力增高可见于下列疾病：
①肝胆疾病：阻塞性黄疸、急性或慢性黄疸型肝炎、肝癌等。
②骨骼疾病：由于骨的损伤或疾病使成骨细胞内所含高浓度的碱性磷酸酶释放入
血液中，引起血清碱性磷酸酶活力增高。
如纤维性骨炎、成骨不全症、佝偻病、骨软化病、骨转移癌和骨折修复愈合期等。
AKP说明书
碱性磷酸酶 (U / gprot)
=
测定管吸光度 标准管吸光度
×
标准管含酚的量 (0.003mg)
÷
取样量中的蛋白克数
= 0.081 × 0.003 ÷ (1.29 ×10−3 × 0.03) = 32.37U / gprot 0.194
南京建成生物工程研究所 南京建成科技有限公司
地 址： 南京市中央路 258－27 号 电 话：（025）83360321
基质液(ml)
0. 5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
充分混匀,37℃水浴 15 分钟
显色剂(ml)
1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
立即混匀,在 520nm 处,1cm 光径,0 管调零,测各管 OD 值
以所测得的吸光度为纵坐标，以相应的标准浓度单位为横坐标，绘制标准曲线。
×
100ml 0.05ml
= 0.404 × 0.005 × 100 = 16.16金氏单位 /100ml
0.250
0.05
1
本试剂盒仅用于科研、实验室
南京建成
（二）、组织匀浆中 AKP 的测定：
1、 操作表：
测定管
标准管
空白管
1%组织匀浆(ml)
0.03
0.1mg/ml 酚标准液(ml)
三、操作：
Байду номын сангаас
(一)、血清（浆）中 AKP 的测定： 1、操作表：
测定管
标准管
空白管
血
清（ml）
0.05
0.1mg/ml 酚标准应用液（ml）
0.05
双 蒸 水（ml）
0.05
碱性磷酸酶(ALP)测定试剂盒(AMP缓冲液法)产品技术要求迈瑞
碱性磷酸酶（ALP）测定试剂盒（AMP缓冲液法）
性能指标
2.1外观
试剂应为清澈透明的液体，无沉淀、悬浮物和絮状物。
2.2净含量
液体试剂的净含量应不少于标示值。
2.3试剂空白
2.3.1试剂空白吸光度
试剂以水为空白在37℃±1℃，405nm波长条件下，吸光度应小于2.5A。
2.3.2试剂空白吸光度变化率
试剂以水为空白在37℃±1℃，405nm波长条件下，吸光度变化率应小于0.007A/min。
2.4分析灵敏度
当样本浓度为75U/L时，吸光度变化率应不小于0.014A/min。
2.5线性范围
试剂盒在（5~800）U/L范围内：
a)线性相关系数r应不小于0.9900；
b)当样本浓度不大于120U/L时，线性绝对偏差应在±12.0U/L内；当样本浓度大于120U/L时，线性相对偏差应在±10.0%内。
2.6测量精密度
2.6.1重复性
变异系数：CV应不大于3.0％。
2.6.2批间差
相对偏差：R应不大于5.0％。
2.7准确度
测定校准品，测定结果与靶值的相对偏差应在±10.0%内。
2.8分析特异性
血红蛋白浓度在500mg/dL内、抗坏血酸浓度在30mg/dL内、内源性酯浓度在500 mg/dL内、胆红素浓度在40mg/dL内，对试剂检测结果的偏差影响应在±10%以内。
（以下内容为空白。
）
1。
组织及血液碱性磷酸酶(AKP ALP)活性检测试剂盒说明书 微量法
组织及血液碱性磷酸酶（AKP/ALP）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC2145规格：100T/48S产品内容：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体5mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体5mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体15mL×1瓶，4℃避光保存，变成蓝绿色不能使用。
标准品：液体1mL×1支，2μmol/mL酚标准液，4℃保存。
产品说明：AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。
AKP/ALP 广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。
在碱性环境中，AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510nm吸光度增加速率，来计算AKP活性。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、粗酶液提取：称取约0.1g组织，加提取液1mL充分研磨，4℃、10000rpm离心10min，取上清液待测。
血液可直接用于测定，或者适当稀释后用于测定。
二、测定步骤：1.分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到510nm，蒸馏水调零。
2.试剂二置于37℃水浴中预热30min以上。
试剂名称（μL）测定管对照管空白管标准管蒸馏水--4-2μmol/mL标准品---4上清液4---试剂一40404040试剂二40404040混匀后置于37℃水浴中保温15min试剂三120120120120上清液-4--混匀后于510nm测定吸光度，分别记为A测定管、A对照管、A空白管、A标准管。
三、AKP/ALP活性计算：1.按蛋白浓度计算活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。
alp活性检测
WAKO原装产品现货特价：碱性磷酸酶（ALP）的活性检测试剂盒/offer_sale/detail/2039842.html摘要碱性磷酸酶的活性检测试剂盒。
常用于检测培养的成骨细胞、实验动物血清和骨组织中的碱性磷酸酶活性。
碱性磷酸酶(ALP)广泛分布于肝脏、骨、小肠之中。
特别在骨代谢研究领域方面被用作为骨形成指标之一。
本品是用p–硝基苯磷酸作为底物的碱性磷酸酶检测试剂盒，利用微孔板，可进行多种样品的检测。
【检测原理】样品在含有p-硝基苯磷酸的碳酸盐缓冲液(pH9.8)中反应，在样品中的碱性磷酸酶作用下，p-硝基苯磷酸分解为p-硝基酚和磷酸。
生成的p-硝基酚为碱性，呈黄色。
根据测量其405nm的吸光值，计算出样品中碱性磷酸酶的活性。
■LabAssay TM ALP [p-硝基苯磷酸基质法]【性能】检测范围：>0.06 mmol/L标准曲线范围：0～0.5 mmol/L再现性：C.V.<10%【试剂盒组成】・底物---------------------20片（溶解时：p-硝基苯磷酸二钠6.7mmol/L)・底物溶解液-------100ml×1瓶（2.0mmol/L氯化镁含有0.1mol/L碳酸盐缓冲液pH9.8)・反应终止液-------100ml×1瓶（0.2mol/L氢氧化钠溶液）・标准液---------------10ml×1瓶（0.5mmol/L p-硝基酚溶液）【试剂的配制】1）底物缓冲液：1片底物溶解于5mL底物溶解液中。
2）反应终止液：直接使用。
3）系列稀释标准液：将标准液用蒸馏水依次稀释为0.5、0.25、0.125、0.0625 mmol/L等2倍率稀释液系列。
【标准操作法】向96孔微孔板内添加100μl底物缓冲液和20μl样品，在微孔板震荡器上充分振荡1分钟后，37℃孵育15分钟。
添加80μl反应终止液，在微孔板震荡器上充分振荡1分钟后，用酶标仪测量405nm处的吸光值。
碱性蛋白酶(AKP)活性测定试剂盒说明书
碱性蛋白酶（AKP）活性测定试剂盒说明书碱性蛋白酶（Alkaline protease, AKP）活性测定试剂盒说明书微量法100T/48S注意：正式测定之前选择23个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：AKP是指在碱性条件下催化蛋白质肽键水解的酶类，属于丝氨酸蛋白酶。
此外，该酶还能够水解酯键、酰胺键，具有转酯及转肽的功能。
该酶是主要工业用酶之一，广泛应用于制药、丝绸、食品、制革等行业。
测定原理：在碱性条件下，AKP水解酪蛋白生成酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸生成钨蓝；钨蓝在680nm有特征吸收峰，测定680nm吸光度增加速率，来计算AKP活性。
自备仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、0.5 mL EP管和蒸馏水。
试剂组成和配制：试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加5mL蒸馏水溶解。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
临用前加入10mL试剂一，沸水浴中磁力搅拌溶解。
（可在烧杯上盖一层保鲜膜，注意观察，避免水分全部蒸发，一般加热1530分钟，该试剂为过饱和试剂，充分混匀后仍出现颗粒物不溶物不影响使用）。
试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加20mL蒸馏水溶解。
试剂五：液体5mL×1瓶，4℃保存。
标准品：液体1mL×1支，0.25μmol/mL标准酪氨酸溶液，4℃保存。
粗酶液提取：1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即粗酶液。
2. 血清或培养液：直接测定。
3. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
碱性磷酸酶的提取分离和比活力的测定
碱性磷酸酶的提取分离和比活力的测定项目名称碱性磷酸酶的提取分离和比活力的测定xinpingzhao@实验目的1. 了解酶提取纯化的基本实验技术;2. 掌握碱性磷酸酶酶活力及比活力的测定方法实验材料新鲜兔肝或兔肾主要仪器设备匀浆器,冷冻离心机,分光光度计,电子天平等.实验原理碱性磷酸酶（简称AKP）在磷酸盐代谢中起重要作用。
核酸序列分析、DNA重组技术、酶标免疫检测技术以及临床检验中都需要利用此酶。
本实验取材于兔肝，经匀浆、正丁醇抽提、硫酸胺分段盐析或者有机溶剂沉淀，获得碱性磷酸酶制品。
本实验采用对硝基苯磷酸二钠（p-NPP）为底物的方法测定酶活。
对硝基苯磷酸二钠在碱性磷酸酶的作用下被水解为游离磷酸及对硝基苯酚，对硝基苯酚在强碱性条件下显示亮黄色，在405nm处有强烈的吸收峰。
因此可以测定405nm处的吸收值A405nm来计算产物的生成量，从而计算出酶活力，然后通过各级纯化步骤产物蛋白含量的测定,从而计算出酶的比活力.第一部分: 碱性磷酸酶的提取以下操作均在4℃进行。
方案一:1. 称取新鲜兔肝2g，剪碎后，置于玻璃匀浆器中，按1:2（m/v）加入预冷的0.05mol/LTris-HCl （pH9.0）缓冲液，匀浆后4℃抽提20 min；4℃，8000r/min离心10min；取上清；此为A 液。
另取1支试管编号为A，取0.1mLA 液，加1.9mLTris缓冲液(pH 8.8)，混匀，供测酶活性用。
2.上清液中加入1/5体积预冷正丁醇脱脂20min；8000r/min离心10min，取上清；此为B液。
吸取0.1m1B 液，置于编号为B 的试管中，加入1.9m1Tris 缓冲液(pH 8.8)，供测酶活用。
3.加入硫酸铵至35%饱和度；4℃30 min；8000r/min离心10min，弃沉淀；取上清；此为C 液。
吸取C 液0.2m1置于编号为c 的试管中，加入1.8m1Tris 缓冲液(PH 8.8)，供测酶活性用4.然后在上清液中加入硫酸铵至75%饱和度，4℃静置30 min后8000r/min离心10min，得沉淀..用0.05mol/LTris-HCl（pH9.0）缓冲液溶解沉淀；此为D 液。
碱性磷酸酶(ALP) SFBC速率法
目录1. 检测原理2. 标本采集与处理2.1 受检者的准备2.2 静脉采血2.3 抗凝剂2.4 标本处理3. 试剂3.1 试剂3.2 校准血清3.3 试剂、校准血清的稳定性4. 仪器5. 操作6. 计算7. 操作性能7.1 精密度7.2 准确度7.3 灵敏度7.4 可报告范围7.5 特异性7.6 干扰8. 参考值9. 临床意义附录A: 参数1. 检测原理无色的对硝基苯磷酸二钠在碱性磷酸酶的作用下，生成在405nm处有特异吸收的淡黄色对硝基苯酚。
通过测定在405nm处吸光度的变化速率来计算ALP的活性。
碱性磷酸酶对硝基苯磷酸二钠+ H2O ----------------- 对硝基苯酚+ H3PO42．本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂：血浆使用肝素或EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。
2.4 标本处理：血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。
3．试剂3.1 试剂：本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司ALP试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：3.2 校准血清：使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。
校准频次：空白定标：每日需做试剂空白定标。
全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。
alp试剂盒 说明书
碧云天生产的碱性磷酸酶检测试剂盒(Alkaline Phosphatase Assay Kit)是一种用于快速、便捷地检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血清、血浆、尿液等样品中内源性的碱性磷酸酶活性的试剂盒。
碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase)，也称碱性磷酸酯酶，可以在碱性条件下催化磷酸酯键的水解。
哺乳动物中，肝脏、胆管、肾脏、骨头和胎盘中的碱性磷酸酶活性比较高。
常见的碱性磷酸酶包括肠道碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, intestinal, ALPI)、非组织特异性碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, tissue-nonspecific isozyme, ALPL)和胎盘碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, placental type, 也称placental alkaline phosphatase, PLAP)。
干细胞，如iPS中，碱性磷酸酶的活性很高，常被用作iPS成功诱导的标志。
另外，分化的结肠癌细胞中碱性磷酸酶的活性也会显著升高，被当作结肠癌细胞分化程度定性和定量的指标。
此外，血清中碱性磷酸酯酶的升高，被称作高碱性磷酸酶血症(hyperalkalinephosphatasemia)，被认为和恶性胆管阻塞(malignant biliary obstruction)、原发性胆管硬化(primary biliary cirrhosis)、原发性硬化胆管炎(primary sclerosing cholangitis)、肝淋巴瘤(hepatic lymphoma)和肝肉瘤(hepatic sarcoidosis)等肝胆疾病密切相关。
血清中碱性磷酸酶活性升高还和骨头生成密切相关，因为碱性磷酸酶是成骨细胞的副产物。
血清中碱性磷酸酶活性过低也和一些疾病相关。
儿童和孕妇血清中的碱性磷酸酶活性较普通人高一些。
血清中碱性磷酸酶活性范围在20-140U/L。
碱性磷酸酶染色
产品简介： 碱性磷酸酶（简称 ALP 或 AKP）为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内。细胞
中的碱性磷酸酶，在碱性的缓冲液中，催化底物水解，生成物进而与一种稳定的黑色沉淀。 经本试剂盒染色后，阳性者胞浆中出现棕褐色或咖啡色颗粒。
本试剂盒采用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性。此法以天然存在的 beta-甘油磷酸钠 为底物，经酶水解释放出磷酸，磷酸根与钙离子结合为磷酸钙沉淀，再依次被置换为磷酸钴 和硫化钴，最终产物为黑色硫化钴沉淀。
结果分析： 酶活性部位：
黑色沉淀
对照片处理方法： 切片入孵育液前，先经碘、5%硫代硫酸钠溶液各 3 分钟，充分水洗后，用试剂 D 取代
试剂 A，按上述步骤处理即可。
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试剂盒以外自备试剂和仪器
● 蒸馏水
● 温箱或水浴锅
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咨询邮箱：bestbio@
电话：021-33921235
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
产品说明书
使用方法： 1、 石蜡切片脱蜡至蒸馏水。 2、 冰冻切片在丙酮-氯仿等量混合液中 4℃固定 2-5 分钟。 3、 切片入试剂 A，37℃孵育。冰冻切片 5-15 分钟，石蜡切片 2-12 小时。 4、 流水冲洗 2 分钟后入蒸馏水。 5、 入试剂 B，37℃，5 分钟。 6、 流水冲洗 5 分钟后入蒸馏水。 7、 试剂 C 用蒸馏水 50 倍稀释，即配即用。 8、 切片入试剂 C 稀释液 2 分钟。 9、 流水冲洗 10 分钟后入蒸馏水。 10. 冰冻切片用甘油明胶封片；石蜡切片常规脱水，透明，树胶封片。
碱性磷酸酶km实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除碱性磷酸酶km实验报告篇一：碱性磷酸酶Km值得测定(1)碱性磷酸酶Km值得测定原理在适宜条件下，酶促反应的初速度随底物浓度【s】增大而增大，当底物浓度达一定时则反应趋于稳定，反应速度最大。
关系可用米氏方程表示Km是酶的特征性常数。
将米氏方程变形为双倒数方程对1/s作图可算出Km步骤，以1/V结果由y=9.2961x+1.1465算出当y=0时x=-0.233，继而算出Km值=8.11mmol/L讨论计算出来的Km值与查资料所得到的值有一定的差距。
实验是粗测，本身存在实验误差，我们在操作过程中也造成误差，所以导致与实际值差距较大。
尿蛋白定性检测原理加热可以使蛋白质变性，溶液ph等于pI时溶解度最小。
步骤1.取大试管一支，加入5ml澄清尿液。
2.用试管夹持试管上端，酒精灯加热尿液斜面至沸。
(:碱性磷酸酶km实验报告)3.滴加5%乙酸2~3滴于尿液表面，轻轻混匀局部，加热。
结果未加热部分是澄清，加热部分浑浊明显讨论正常尿液中不会出现浑浊，本实验尿液加入了蛋白质。
尿液中如果出现沉淀则说明出现了病症。
分子筛层析（凝胶过滤法）原理多孔凝胶对不同大小分子的排阻效应，使不同分子分离。
大分子先出，小分子后出。
步骤1.取5~8滴4mg/ml蓝色葡萄聚糖液和4滴2mg/ml重铬酸钾液混匀。
2.将层析柱出水口打开，缓放柱内液体至凝胶柱表面加入混匀的待层析液。
3.从上口缓加蒸馏水，成2~3cm高水柱，出水口用小试管接水。
4.在上口加洗脱液洗脱。
每支小试管接1cm液体，并编号。
5.观察不同小试管的液体颜色的变化。
结果讨论分子筛层析能够大致的分离分子量不同的物质，但是分离的物质不纯有杂质，实验时间也相对较长，操作复杂。
篇二：实验名称碱性磷酸酶的分离纯化实验报告实验名称碱性磷酸酶的分离纯化、比活性测定与动力学分析实验日期20XX年10月25号实验地点生化实验室合作者指导老师总分教师签名批改日期碱性磷酸酶（AKp或ALp）是一种底物特异性较低，在碱性条件下能水解多重磷酸单脂化合物的酶，需要镁和锰离子为激活剂。
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组织及血液碱性磷酸酶（AKP/ALP）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法
注意：正式测定前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC2140
规格：50T/24S
产品内容：
提取液：液体30mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体30mL×1瓶，4℃避光保存，变成蓝绿色不能使用。
标准品：液体0.5mL×1支，2μmol/mL酚标准液，4℃保存。
产品说明：
AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。
AKP/ALP 广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。
在碱性环境中，AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510nm吸光度增加速率，来计算AKP活性。
试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
称取约0.1g组织，加提取液1mL充分研磨，4℃，10000rpm离心10min，取上清液待测。
血液可直接用于测定，或者适当稀释后用于测定。
二、测定步骤：
1.可见分光光度计预热30min以上，调节波长到510nm，蒸馏水调零。
2.操作表
试剂名称（μL）测定管对照管空白管标准管蒸馏水--20-2μmol/mL标准品---20
上清液20---
试剂一200200200200
试剂二200200200200
混匀后置于37℃水浴中保温15min
试剂三600600600600
上清液-20--混匀后于510nm测定吸光度，分别记为A测定管、A对照管、A空白管、A标准管。
三、AKP/ALP活性计算：
1.按蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。
AKP/ALP(U/mg prot)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样]÷(Cpr×V样)÷T =0.133×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
2.按样本鲜重计算
活性单位定义：37℃中每克组织每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。
AKP/ALP活力(U/g鲜重)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样]÷(W÷V提取×V 样)÷T=0.133×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
3.血液中ACP活性计算
活性单位定义：37℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。
AKP/ALP活力(U/mL)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样]÷V样÷T
=0.133×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
C标准品：2μmol/mL；V反总：反应体系总体积，1020μL=1.02mL；
V样：加入反应体系中上清液体积，0.02mL；T：反应时间，15min；
V提取：加入提取液体积，1mL；W：样本鲜重，g；
Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL。
注意事项：
1、试剂一、试剂二和试剂三均需避光保存。
2、试剂三变蓝绿色后不能再使用。
3、加入试剂三后必须立即混匀，否则显色不完全。