干旱处理的条件下小麦中脯氨酸含量的测定

中文摘要：在实验中先制作标准脯氨酸含量曲线，再分别提取干旱条件和正常条件下生长的小麦的游离脯氨酸，然后与标准曲线比较，得出每个样品中的脯氨酸含量，然后分析差异的显著程度。

英文摘要：In the experiment, first make a standard curve of proline content, and then were extracted under normal conditions of drought conditions and the growth of wheat proline, and then compared with the standard curve obtained in the proline content of each sample, then significant level differences.

【实验原理】

在酸性条件下，脯氨酸与茚三酮反应生成稳定的红色缩合物，此缩合物在波长520nm 处有一最大吸收峰。用甲苯萃取红色产物后，在该波长下，吸光度与溶液中红色产物的含量成正比。

【实验目的】

通过分别测定正常处理的小麦和干旱处理的小麦中脯氨酸含量，验证在逆境条件下生长的小麦中脯氨酸含量高于正常条件下生长的小麦中脯氨酸含量。

【实验器材和试剂】

植物材料:正常供水和干旱条件下生长的小麦。

实验器材:分光光度计、水浴锅、分析天平、容量瓶、研钵、滤纸、漏斗、25ml具塞刻度试管15支、移液管。

实验试剂:3%磺基水杨酸水溶液、甲苯、冰醋酸、2.5%酸性茚三酮显色液、脯氨酸标准溶液【实验步骤】

一：标准曲线制作

1、取7支25mL具塞试管并编号；

2、按表1 加入各试剂，混匀后，在沸水中加热30min；

3、取出冷却后，向各管加入5.0mL甲苯，充分振荡，以萃取红色物质；

4、避光静置2-3小时，待分层后用吸管吸取甲苯层，以“0”管为对照在波长520nm下比

色

5、以吸光度为纵坐标，脯氨酸含量为横坐标，绘制标准曲线，求线性回归方程。

表一

二、样品游离脯氨酸提取

1、取正常供水和干旱条件下生长的小麦新鲜叶片0.2～0.5g各三份；

2、分别置于研钵中，加入5mL 3%磺基水杨酸溶液及少许石英砂，研成匀浆，移入具塞试管中，加盖；

3、将试管浸入沸水浴中浸提15min，过滤，滤液待测。

三、样品测定

1、每个处理取三个样本，在试管中加滤液0.5mL，加水1.5 mL、2mL冰乙酸和2mL茚三酮，摇匀后于沸水浴中加热30min；

2、冷却后，各加5.0 mL甲苯，充分摇匀萃取，暗中静置2-3小时（参见表2）。

表二

四、结果处理

从标准曲线中查出测定液中脯氨酸浓度，按下式计算样品中脯氨酸含量的百分数。

式中 C——提取液中脯氨酸浓度（μg），由标准曲线求得；

V——提取液总体积（ml）；

a——测定时所吸取的体积（ml）；

W——样品重（g）

【实验结果】

实验室温度：296K

一：脯氨酸标准曲线

【实验讨论】

干旱处理的小麦的脯氨酸含量百分数平均值高于正常供水的小麦中脯氨酸含量百分数的平均值；同时利用独立样本T检验得sig=0.251，其显著性值低。但附表一、二显示干旱处理的程度符合要求，显著性值低的原因可能是干旱处理时间太短（干旱处理前浇水太多）造成差异不显著。

【附表】

附表一：干旱处理后干旱组与对照组的株高平均变化值

附表二：干旱处理后与干旱处理前含水量的变化