手指、物表、空气采样方法
环境卫生学监测采样方法
布点：依据《医院洁净手术部建筑技术规范》
采样方法 将普通营养琼脂平皿放在室内手术区和周边区各采 样点，距地面 0.8—1.5m 高度，在手术区检测时应 无手术台。当手术台已固定，测定高度在台面之上
0.25m。暴露30min。
采样要求 提出选择室内消毒后或规定的通风换气后与
医疗活动前进行空气标本的采样，或怀疑与 医院感染暴发有关时采样，使用普通营养琼 脂平板采样。（注意：采样前，关闭门、窗， 在无人走动的情况下，静止10min后采样。）
采样高度（沉降法） 平板置距地面垂直高度0.8m～1.5m处。
布点方法 室内面积≤30㎡，设一条对角线上取3点采样，即中 心一点，两端各距离墙1m处各取一点；室内面积 ＞30㎡，设东、南、西、北、中5点采样，其中东、 南、西、北点距离墙1m。采样高度距地面0.8— 1.5m。
采样方法 将直径9cm普通营养琼脂平板放置各采样点， 将平皿盖打开，扣放于平皿旁，暴露规定时
间（Ⅱ类环境 15min 、 Ⅲ类环境 5min ）后
盖上平皿盖及时送检。
采样方法
检测培养 将送检平皿置 36 ℃±1 ℃恒温箱培养 48h,计数菌落数，若怀疑与医院感染暴 发有关时，进行目标微生物的鉴定。 结果处理 计算所有平板菌落数，按公式换算结果。如临床科室要求培养致病菌， 则挑取可疑菌落进行鉴定。 计算公式：每个房间所有平板菌落总数/采样点/（皿．暴露时间） 报告: 沉降法按平均每皿的菌落数报告：cfu/（皿．暴露时间） 例如： 2cfu/(5min· 直径9cm平皿) 。
１.洁净手术部（室）和其他洁净场所，空气中的细菌菌落总 数要求应遵循ＧＢ50333．
２.非洁净手术部（室）、非洁净骨髓移植病房、产房、导管室、新 生儿室、器官移植病房、烧伤病房、重症监护病房、血液病病区空 气中的细菌菌落总数≤４cfu／（１５ｍｉｎ· 直径９ｃｍ平皿）。
医院环境微生物采样方法
我院使用的
正视结果，不要盲目 的重复采样
细菌学数据超标
回忆采样过程 是否存在污染
到一线去查看设施和 每个操作环节，询问 相关人员的日常操作 方法，检查操作记录
判断是否存在问题
重复采样
否
采取措施改进操作流程
是
否
是
环境卫生学监测结果分析流程
空气微生物消毒方法
紫外线灯照射 静电吸附 空气过滤 ……
采样时间：在消毒处理后进行采样。 采样面积：被采面积＜100cｍ2取全部表面；采样面积≥100 cｍ2，取100cｍ2 采样方法：棉拭子法：用5×5cm的标准灭菌规格版，放在被检物体表面，用浸有含有相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子，在规格板内横竖往返均匀涂抹5次，并随之转动棉拭子，可连续采样1～4个规格板面积。剪去手接触部分，并将棉拭子放入装有10ml含相应中和剂的试管内，立即送检。
医院环境微生物采样方法及注意事项
院感科
卫医发[2000]431号《医院感染管理规范》 第三十一条 环境卫生学监测：包括对空气、物体表面和医护人员手的监测。 医院应每月对手术室、重症监护病房／室（ICU）、产房、母婴室、新生儿病房、骨髓移植病房、血液病房、血液透析室、供应室无菌区、治疗室、换药室等重点部门进行环境卫生学监测。当有医院感染流行，怀疑与医院环境卫生学因素有关时，应及时进行监测。
添加标题
护病房、新生儿室、母婴室、血液透析病房、烧伤
添加标题
医疗机构应每季度对手术室、产房、导管室、层流
添加标题
病房、 感染疾病科、口腔科等部门工作的医务人员
添加标题
手进行消毒效果的监测；当怀疑医院感染暴发与医
添加标题
务人员手卫生有关时，应及时进行监测，并进行相
医院环境卫生学监测
医院环境卫生学监测（一）内容：包括对空气、物表和医护人员手的监测（二）监测时间：医院应每月对手术室、重症监护病房/室（ICU ）、产房、母婴室、新生儿病房、骨髓移植病房、血液病房、血液透析室、供应室无菌区、治疗室、换药室等重点部门进行环境卫生学监测。
（三）监测标准：各类环境空气、物表、医护人员手细菌菌落总数卫生标准致病性微生物卫生标准：不得检出乙型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌及其他致病性微生物。
在可疑污染情况下进行相应指标的检测。
母婴同室、早产儿室、婴儿室、新生儿及儿科病房的物体表面和医护人员手上，不得检出沙门氏菌。
医疗用品卫生标准：*进入人体无菌组织、器官或接触破损皮肤、粘膜的医疗用品必须无菌。
*接触粘膜的医疗用品细菌菌落总数应≤20cfu/g 或100cm 2；致病性微生物不得检出。
*接触皮肤的医疗用品细菌菌落总数应≤200cfu/g 或100cm 2；致病性微生物不得检出。
使用中消毒剂与无菌器械保存液卫生标准：*使用中消毒剂细菌菌落总数应≤100cfu/ml ，致病性微生物不得检出。
*无菌器械保存液必须无菌。
污物处理卫生标准：污染物品无论是回收再使用的物品，或是废弃的物品，必须进行无害化处理。
不得检出致病性微生物。
在可疑污染情况下，进行相应指标的检测。
（四）空气、物体表面、手的采样方法A 、空气采样及检查方法：采样时间：选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样。
采样高度：与地面垂直高度80—150cm布点方法：室内面积≤30m 2，设一条对角线上取3点，即中心一点，两端各距墙1m 处各取一点；室内面积>30m 2，设东、西、南、北中5点，其中东、西、南、北均距墙1m 。
采样方法：用9cm 直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5min 后送检培养。
结果计算： 空气细菌菌落总数（cfu/m 3）=式中A ：平板面积：cm 2T ：平板暴露时间 minN ：平均菌落数 cfu/平皿B 、物体表面采样及检查方法：采样时间：选择消毒处理后4H 内进行采样50000N AT采样面积：被采表面<100cm 2，取全部表面；被采表面≥100cm 2，取100cm 2 。
环境卫生学监测采样方法
➢ ⑷采样方法：
➢ 用直径9cm的普通培养皿在采样点暴露（将平 皿盖打开，扣放于平皿旁）规定时间（Ⅱ类环 境暴露15分钟，Ⅲ及Ⅳ类环境暴露5分钟）， 盖上平皿盖及时送检。
➢ 2、物体表面采样方法 ➢ ⑴采样时间：选择消毒处理后进行采样。 ➢ ⑵采样面积：被采表面＜100cm2取全部表
面，被采面积≥100cm2取100cm2。
套、酒精灯、打火机、胶布、笔
➢四、采样方法
➢1.空气采样
➢⑴采样时间：选择消毒处理后与进行医疗活 动之前采样。采样前应关好门窗，在无人走 动的情况下，静止10分钟进行采样。
➢⑵采样高度：与地面垂直高度80-150cm。
➢⑶布点方法：室内面积≤30m2,设一条对角 线上取3点，即中心点、两端各距墙1m处 取点；室内面积≥30m2,设东西南北中5点， 四边各点均距墙1m。
➢ 3、医护人员手的采样
➢ ⑴采样时间：在洗手后及接触病人或从事 医疗活动前进行采样。
➢ ⑵采样面积和方法：被检人五指并拢，用 浸有无菌生理盐水的棉拭子1支在双手指 掌面从指跟到指尖来回擦拭2次（一只手 涂擦面积约30cm2），边涂擦边转动棉拭 子，剪去手接触部分，将棉拭子放入装有 10ml采样液的试管中送检，采样面积按平 方厘米计算。
面，被采面积≥100cm2取100cm2.
➢⑶采样方法：用浸有无菌生理盐水的棉 拭子在被检物体表面来回涂擦2次（特别 是器械 关节），剪去手接触部分，将棉 拭子放入装有10ml采样液的试管中送检。
➢ 2、使用中消毒、灭菌剂采样 ➢ ⑴采样时间：采取更换前使用中的消毒、灭菌
剂。 ➢ ⑵采样方法：用无菌吸管吸取1ml被检液体，注
➢ ▲消毒和灭菌物品效果监测
➢ 灭菌物品监测是指灭菌后的物品或一次性 使用的医疗用品、无菌器械等是否达到灭 菌要求。消毒剂监测是指医院常用灭菌剂、 消毒剂（酒精、碘伏、戊二醛及含氯消毒 剂）的生物监测。
手指、物表、空气采样方法
脚卫死效验的监测要领之阳早格格创做1．采样时间正在交触患者、举止诊疗活动前采样.2．采样要领被检者五指并拢，用浸有含相映中战剂的无菌洗脱火液浸干的棉拭子正在单脚指直里从指跟到指端往返涂揩2次，一只脚涂揩里积约30cm2，涂揩历程中共时转化棉拭子；将棉试子搁进拆有10ml含相映中战剂的无菌洗脱液试管内，即时收检.细菌菌降数总数估计要领：细菌菌降总数（cfu/cm2）=仄板上菌降数×密释倍数/采样里积（cm2）3．脚消毒效验应达到如下相映央供：a）卫死脚浑毒，监测的细菌菌降总数应≤10cfu/㎝2b）中科脚消毒，监测的细菌菌降总数应≤5cfu/㎝2气氛消毒效验的监测要领1、采样时间：消毒处理后与举止调理活动前采样.2、要领：室内里积≤30M3，设一条对于角线上与3面，即核心一面、二端距墙1M处与一面；室内里积＞30 M3，设、东、北、西、北、中、5面，其中东、北、西、北布面部位均距墙1m处.中面加搁一只尺度皿（即灭菌培植皿没有挨启）.物体表面采样监测要领(1).采样时间：正在浑净或者消毒处理后举止采样.(2).采样里积：被采样原表面积＜100cm2 与局部表面；被采样原表面积≥100cm2，与100cm2（即5cm×5cm规格板，采4个分歧部位）(3).采样要领：用5cm×5cm尺度灭菌规格板，搁正在被检物体表面，采样里积≥100cm2，连绝采样4个.用浸有含相映中战剂的无菌洗脱液的棉拭子1收，正在规格板内横横往返匀称涂揩各5次，并随之转化棉拭子，连绝采样4个面，将棉试子搁进拆有10ml含相映中战剂的无菌洗脱液试管内，将试管心战瓶塞搁正在火焰上烧，并坐将要瓶塞塞紧.采样后坐时收检.菌降数估计公式：仄板上菌降数×采样液密释倍数细菌菌降总数(cfu/cm2)＝—————————————————采样里积(cm2)表1百般环境物体表面细菌菌降总数卫死尺度致病性微死物：没有得检出乙型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌及其余致病性微死物.母婴共室、早产女室、婴女室、新死女室、及女科病房的物体表面没有得检出沙门氏菌.。
空气、物体表面、医务人员手的监测方法
空气、物体表面、医务人员手的监测方法采样及检查原则：采样应具有一定数量和代表性，采样后必须尽快对样品按要求指标进行检测，送检时间不得﹥6小时，若样品保存在冰箱内送检时间不﹥24小时。
一、空气监测：1、采样时间：消毒处理后，操作前2、采样方法：平板沉降法（1）布点方法：室内面积≤30ｍ²，设内、中、外对角线3点，两端距墙1米；室内面积＞30ｍ²，设东、西、南、北4角及中央5点，其中东、西、南、北均距墙1米。
洁净手术室9个点。
（2）采样方法：将直径为9cm普通营养琼脂平板在室内各采样点处，采样高度为距地面0.8--1.5米，采样时将平板盖打开，扣放于平板旁，暴露5、15、30分钟，盖好立即送检。
( 3)注意事项：采样前，关好门、窗，在无人走动的情况下，静止10min 进行采样。
二、医务人员手的监测：1、采样时间：在接触病人和从事医疗活动前进行采样或消毒后立即采样。
2、采样面积及方法：放被检人（五指并拢），用浸有无菌盐水的棉拭子在双手指屈面从指根到指端往返涂擦各 2 次(双手涂擦面积约60平方厘米），并随之转动采样棉拭子，剪去操作者手接触部位，将棉拭子投入 5ml 无菌盐水试管内，立即送检。
三、物体表面监测1、.采样时间：在消毒处理后4小时内进行采样。
2、.采样方法：用5cm×5cm的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有无菌盐水的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次，并随之转棉拭子，连续采样4个，采样面积100cm2剪去手接触部位后，将棉拭子投入5ml含无菌盐水试管内，立即送检。
门把手等不规则物体表面用棉拭子直接涂擦采样4.注意事项：采集样本要有足够的数量且具有代表性，如层流洁净手术室，选择具有代表性采样地点（如手术台、治疗车、无影灯把手等）；采样时，棉拭子处于湿润状态，如处于饱和状态可将多余的采样液在采样管壁上挤压去除。
禁止使用干棉拭子采样。
四、消毒液的监测1、常用消毒液有效成分含量测定2、使用中消毒液细菌监测：1ml使用中消毒液+9ml中和剂3、结果判定：使用中的灭菌用消毒液、无细菌生长。
手指物表空气采样方法
手指物表空气采样方法 Document serial number【KKGB-LBS98YT-BS8CB-BSUT-BST108】手卫生效果的监测方法1．采样时间在接触患者、进行诊疗活动前采样。
2．采样方法被检者五指并拢，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱水液浸湿的棉拭子在双手指曲面从指跟到指端往返涂擦2次，一只手涂擦面积约30cm2，涂擦过程中同时转动棉拭子；将棉试子放入装有10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，及时送检。
细菌菌落数总数计算方法：细菌菌落总数（cfu/cm2）=平板上菌落数×稀释倍数/采样面积（cm2）3．手消毒效果应达到如下相应要求：a）卫生手清毒，监测的细菌菌落总数应≤10cfu/㎝2b）外科手消毒，监测的细菌菌落总数应≤5cfu/㎝2空气消毒效果的监测方法1、采样时间：消毒处理后与进行医疗活动前采样。
2、方法：室内面积≤30M3，设一条对角线上取3点，即中心一点、两端距墙1M处取一点；室内面积＞30 M3，设、东、南、西、北、中、5点，其中东、南、西、北布点部位均距墙1m处。
中点加放一只标准皿（即灭菌培养皿不打开）。
物体表面采样监测方法(1).采样时间：在清洁或消毒处理后进行采样。
(2).采样面积：被采样本表面积＜100cm2 取全部表面；被采样本表面积≥100cm2，取100cm2（即5cm×5cm规格板，采4个不同部位）(3).采样方法：用5cm×5cm标准灭菌规格板，放在被检物体表面，采样面积≥100cm2，连续采样4个。
用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次，并随之转动棉拭子，连续采样4个点，将棉试子放入装有10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，将试管口和瓶塞放在火焰上烧，并立即将瓶塞塞紧。
采样后立即送检。
菌落数计算公式：平板上菌落数×采样液稀释倍数细菌菌落总数(cfu/cm2)＝—————————————————采样面积(cm2)致病性微生物：不得检出乙型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌及其它致病性微生物。
空气采样方法
化学消毒剂浓度监测
名称浓度监测方法
戊二醛2%戊二醛浓度指示卡（3M公司）只需5~8min即能检测出无效的戊二醛浓度。
使用时从包装瓶中取出一条，将其指示的色块完全浸没于戊二醛溶液中，1s后取出，在瓶盖的纸垫上沾一下，去除色块上的多余液体，横置于瓶盖上，注意不要将色块面朝下以免受到污染。
等候5~8min的颜色变化，指示色块变成均匀黄色时，则表示溶液浓度＞2%；指示色块没有变化或部分是白色时，则＜2%。
注意事项：等候的时间不能低于5min，否则造成颜色变化不彻底，判断结果不正确。
但超过8min，颜色逐渐褪去，也会使判断困难。
手指物表空气采样方法
医院空气、物表与医务人员手卫生学监测根据卫生部下发的《医院空气净化管理规范》、《医疗机构消毒技术规范》（2012年8月1日实施）及《医务人员手卫生规范》要求，特制定我院环境卫生学监测方法与结果判断标准，请遵照执行。
一、空气净化效果的监测1.监测科室医院应对感染高风险部门如手术室、产房、导管室、层流洁净病房、骨髓移植病房、器官移植病房、重症监护病房、新生儿室、母婴同室、血液透析中心(室)、烧伤病房的空气净化与消毒质量进行监测。
2.监测频率（1）感染高风险部门每季度进行监测；（2）洁净手术室及其他洁净场所、新建与改建验收时、换高效过滤器后应进行监测；（3）遇医院感染暴发怀疑与空气污染有关时随时监测，并进行相应致病微生物检测。
3.采样时间（1）采用洁净技术净化空气的房间在洁净系统自净后与从事医疗活动前采样；（2）非洁净技术净化空气的房间在消毒或规定的通风换气后与从事医疗活动前采样；（3）怀疑与医院感染暴发有关时采样。
4.监测方法（1）洁净手术室及其他洁净用房可选择沉降法或浮游菌法，参照GB50333要求进行监测。
浮游菌法可选择六级撞击式空气采样器或其他经验证的空气采样器。
监测时将采样器置于室内中央0.8m～1.5m高度，按采样器使用说明书操作，每次采样时间不应超过30min。
房间面积＞10 m2者，每增加10 m2增设一个采样点；（2）未采用洁净技术净化空气的房间采用沉降法：室内面积≤30 m2，设内、中、外对角线三点，内、外点应距墙壁1m处；室内面积＞30 m2，设四角及中央五点，四角的布点位置应距墙壁1m处。
将普通营养琼脂平皿（Φ90mm）放置各采样点，采样高度为距地面0.8m～1.5m；采样时将平皿盖打开，扣放于平皿旁，暴露规定时间后盖上平皿盖及时送检；（3）平皿暴露时间：①层流洁净手术室或场所暴露30min；②非洁净手术室、产房、导管室、新生儿室、重症监护病房、器官移植病房、血液病病区、烧伤病房等感染高风险部门暴露15min；③儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、人流室、治疗室、注射室、换药室、输血科、消毒供应中心、血液透析中心（室）、急诊室、化验室、各类普通病室、感染疾病科门诊暴露5min。
医院环境卫生学监测制度
医院环境卫生学监测制度每月感染管理科进行环境卫生学监测，包括对空气、物体表面和医护人员手的监测，对手术室、重症监护室、产房、母婴室、新生儿病房、新生儿重症监护病房、血透室、供应室、导管室、治疗室、换药室等重点部门进行环境卫生学监测。
一、医院消毒卫生标准的采样及检查方法采样及检查必须遵循的原则是采样后尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过2h，若样品保存于1—4℃条件时，送检时间不得超过24h。
（一）空气采样及检查方法1.采样时间选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样。
2.采样高度与地面垂直高度80 cm。
3.布点方法室内面积≤30 ㎡，设一条对角线上取3点，即中心一点，两端各距墙1m 处各取一点；室内面积＞30 ㎡，设东、西、南、北、中5点，其中东、西、南、北点均距墙1m。
4.采样方法将9cm 直径普通营养琼脂平板放在采样点，采样时将平皿盖打开，扣放于平皿旁，暴露规定时间后盖上平皿盖后及时送检。
（二）物体表面采样及采样方法1.采样时间：选择消毒处理后4h 内进行采样。
2.采样面积：被采样面积＜100cm2，取全部表面；被采样面积≥100 cm2，取100 cm2。
3.采样方法用 5cm×5cm 的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样4个规格板面积，剪去手接触部分，将棉拭子放入装10ml 采样液的试管中送检。
门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。
（三）医护人员手采样及检查方法1.采样时间：采取手卫生后，在接触病人、从事医疗活动前进行采样。
2.采样面积及方法被检人五指并拢，将浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子1支在双手指曲面从指根到指端来回涂擦各两次(一只手涂擦面积 30 cm2)，并随之转动采样棉拭子，剪去手接触部位，将棉拭子放入装有10ml 采样液的试管内送检。
采样面积按平方厘米(cm2)计算。
物体表面及手的检测
物品和物体表面消毒效果监测1、采样方法(1）采样时间：消毒处理后医疗操作前。
(2）采样面积：被采表面小于100cm²，时，取全部表面；被采表面大于等于100cm²时，取100cm²。
(3）采样方法：将5cm×5cm 灭菌规格板放在被检物体表面，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液（中和剂＋洗脱液）的棉试子一只，在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次，并随之转动棉试子，剪去手接触部位，将棉试子放入装有10ml 含相应中和剂的无菌洗脱液（中和剂＋洗脱液）的试管内，在试管上标明科室、检品所在房间和物品或物体表面的名称及采样面积，立即送至检验科细菌室。
若采样面积大于等于100cm²，应连续采样四个点（即采样100cm²）。
2、检验方法(1）细菌总数检测〔cfu /cm²〕：将试管内的棉试子用力振打80次，无菌操作吸取1.0ml 接种于灭菌平皿内，加入溶化冷至45一48℃的营养琼脂15一18ml，边倒入边摇匀，待凝固后放入37℃培养箱培养 48h ，计数菌落数 cfu / cm²。
计算：cfu/cm²=平板上菌落数×稀释倍数／采样面积 (cm²) ，不规则物品或物体表面报告单位为 cfu／件。
(2）致病菌检测①检测原则：致病菌的检测依据污染情况进行相应指标的检测。
②金黄色葡萄球菌检测取采样液 1.0ml ，接种于 5ml SCDLP 液体培养基中→36℃±1℃增菌 24h →取1白金耳环上述增菌液，在血平板上作划线分离→36℃±℃培养24h→观察菌落特征→鉴定→报告。
③乙型溶血性链球菌检测取样品1.0ml，接种于1％葡萄糖肉汤→37℃增菌24h→取1白金耳环增菌液在血平板上作划线分离→36℃±1℃培养24h→观察菌落→鉴定→报告。
④沙门氏菌属、志贺氏菌属、非发酵菌群等致病菌的检测参照相关检测方法。
环境卫生学监测及标本采集方法
采血培养前质量保证: 静脉穿刺程序 1.70%酒精擦拭静脉穿刺点 >30秒钟 2.1%2%碘酊30秒或10%碘伏消毒60秒,从穿刺点 向外画圈消毒,直径>3cm 3.70%酒精脱碘 培养瓶接种程序 1.70%酒精消毒血培养瓶橡皮塞,待60秒 2. 用无菌纱布清除橡皮塞子表面剩余的酒精，然 后注入血液。
手消毒效果要求： 卫生手消毒，监测的细菌菌落总数应≤10cfu/c㎡ 外科手消毒，监测的细菌菌落总数应≤5cfu/c㎡
直接压印法：采样时被检人5指并拢，将平皿上培养 基表面直接压贴在手掌根部至指尖曲面10～20秒后送检。 将所采样本直接置36℃ ±1℃温箱培养24小时，根 据平皿面积计算细菌总数。
8、医疗用品的监测
包括一次性医疗用品和消毒灭菌处理后的医疗用品。
采样时间：在消毒或灭菌处理后存放至有效期内采样。
采样方法：操作人员在认真清洁消毒手后，在净化台内 用无菌的方法，将拟检测的医疗用品：缝合针、针头、手 术刀片等小件物品投入5ml灭菌的生理盐水或营养肉汤内， 对手术钳、镊子等大的医疗器械在无菌操作下用沾有无菌 生理盐水的棉拭子反复涂擦采样，并将棉拭子投入5ml灭菌 的生理盐水溶液中。 检测方法：将采样管振打80次，用无菌吸管吸取1ml待检 样品于灭菌平皿内，加入已融化的45℃左右的营养琼脂 15～18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置37℃温箱培养 48小时，观察结果。若平皿上无菌生长为灭菌合格。
棉拭子涂布法
棉拭子涂布法
棉拭子涂布法
棉拭子涂布法
检验方法： 1、将每个采样管敲打80次或1分钟， 2、用灭菌吸管取0.2ml于营养琼脂平板中，再用无菌L棒涂 布整个平板表面，置36℃ ±1℃温箱培养24小时观察结果计 算菌落数
(完整版)院感采样方法
空气、物体表面、医务人员手的监测采样及检查原则：采样应拥有必然数量和代表性，采样后必定赶忙对样品按要求指标进行检测，送检时间不得﹥ 6 小时，若样品保存在冰箱内送检时间不﹥24 小时。
一、空气监测：1、采样时间：消毒办理后，操作前2、采样方法：平板沉降法（ 1）布点方法：室内面积≤ 30ｍ2，设内、中、外对角线 3 点，两端距墙 1 米；室内面积＞30ｍ 2，设东、西、南、北 4 角及中央 5 点，其中东、西、南、北均距墙 1 米。
干净手术室9个点。
（ 2）采样方法：将直径为9cm 一般营养琼脂平板在室内各采样点处，采样高度为距地面0.8--1.5 米，采样时将平板盖打开，扣放于平板旁，裸露5-15-30 分钟，盖好马上送检。
( 3) 注意事项：采样前，关好门、窗，在无人走动的情况下，静止10min 进行采样。
表 4：干净手术室静态（空态）时空气采样方法（沉降法）等空气干净度级别细菌最大平均浓度级手术区周边区布点要求手术周边区区100 级1000 级Ⅱ1000 10000级级2 4Ⅲ10000100000级级辅Ⅲ100000 级 5(5) 质控标准：Ⅰ类地域（干净手术室）：细菌总数≤4cfu/m3(30分钟9cm平皿)，新风机组2d 干净一次，初效过滤器1-2 月更换，中效每周检查 3 个月更换，高效每年更换，尾端高效每年检查 3 年更换。
回风口每周干净一次、每年更换一次。
Ⅱ类地域：细菌总数≤4cfu/m3(15min9cm平皿)，Ⅲ类地域：细菌总数≤4cfu/m3(5min9cm 平皿 )，二、医务人员手的监测：1、采样时间：在接触病人和从事医疗活动前进行采样或消毒后马上采样。
2、采样面积及方法：放被检人（五指并拢），用浸有无菌盐水的棉拭子在双手指屈面从指根到指端往返涂擦各 2 次 (双手涂擦面积约 60 平方厘米），并随之转动采样棉拭子，剪去操作者手接触部位，将棉拭子投入5ml 无菌盐水试管内，马上送检。
环境卫生学监测采样方法
▲消毒和灭菌物品效果监测 灭菌物品监测是指灭菌后的物 品或一次性使用的医疗用品、 无菌器械等是否达到灭菌要求。 消毒剂监测是指医院常用灭菌 剂、消毒剂（酒精、碘伏、戊 二醛及含氯消毒剂）的生物监 测。
1、医疗用品采样及检查方法 ⑴采样时间：在消毒或灭菌处理 后，存放有效期内采样。 ⑵采样面积：被采表面＜ 100cm2取全部表面，被采面积 ≥100cm2取100cm2.
连续采样4个规格板面积，剪去 手接触部分，将棉拭子放入装有 10ml采样液的试管中送检。门 把手等小型物品则采用棉拭子直 接涂抹物体的方法采样。
3、医护人员手的采样 ⑴采样时间：在洗手后及接触病人或从 事医疗活动前进行采样。 ⑵采样面积和方法：被检人五指并拢， 用浸有无菌生理盐水的棉拭子1支在双 手指掌面从指跟到指尖来回擦拭2次 （一只手涂擦面积约30cm2），边涂擦 边转动棉拭子，剪去手接触部分，将棉 拭子放入装有10ml采样液的试管中送检， 采样面积按平方厘米计算。
四、采样方法
1.空气采样
⑴采样时间：选择消毒处理后与进行医 疗活动之前采样（室内清洁消毒后1小 时内）。
⑵采样高度：与地面垂直高度80150cm。
⑶布点方法：室内面积≤30m2, 设一条对角线上取3点，即中心 点、两端各距墙1m处取点；室 内面积≥30m2,设东西南北中5 点，四边各点均距墙1m.。
取全部表面被采面积100cm的标准灭菌规格版放在被检物体表面用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子1支在规格版内横竖往返各涂抹5次并随之转连续采样4个规格板面积剪去手接触部分将棉拭子放入装有10ml采样液的试管中送检
环境卫生学 监测采样方法
环境卫生学监测的目的 检测我们的消毒效果是否达到标 准要求，追询消毒方法是否正确。 规范采样的意义 采集标本准确，无污染，培养结
手指物表空气采样方法
手卫生效果的监测方法1．采样时间在接触患者、进行诊疗活动前采样;2．采样方法被检者五指并拢,用浸有含相应中和剂的无菌洗脱水液浸湿的棉拭子在双手指曲面从指跟到指端往返涂擦2次,一只手涂擦面积约30cm2,涂擦过程中同时转动棉拭子；将棉试子放入装有10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内,及时送检;细菌菌落数总数计算方法：细菌菌落总数cfu/cm2=平板上菌落数×稀释倍数/采样面积cm23．手消毒效果应达到如下相应要求：a卫生手清毒,监测的细菌菌落总数应≤10cfu/㎝2b外科手消毒,监测的细菌菌落总数应≤5cfu/㎝2空气消毒效果的监测方法1、采样时间：消毒处理后与进行医疗活动前采样;2、方法：室内面积≤30M3,设一条对角线上取3点,即中心一点、两端距墙1M处取一点；室内面积＞30 M3,设、东、南、西、北、中、5点,其中东、南、西、北布点部位均距墙1m处;中点加放一只标准皿即灭菌培养皿不打开;物体表面采样监测方法1.采样时间：在清洁或消毒处理后进行采样;2.采样面积：被采样本表面积＜100cm2 取全部表面；被采样本表面积≥100cm2,取100cm2即5cm×5cm规格板,采4个不同部位3.采样方法：用5cm×5cm标准灭菌规格板,放在被检物体表面,采样面积≥100cm2,连续采样4个;用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子1支,在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次,并随之转动棉拭子,连续采样4个点,将棉试子放入装有10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内,将试管口和瓶塞放在火焰上烧,并立即将瓶塞塞紧;采样后立即送检;菌落数计算公式：平板上菌落数×采样液稀释倍数细菌菌落总数cfu/cm2＝—————————————————采样面积cm2致病性微生物：不得检出乙型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌及其它致病性微生物;母婴同室、早产儿室、婴儿室、新生儿室、及儿科病房的物体表面不得检出沙门氏菌;。
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医院空气、物表与医务人员手卫生学监测
根据卫生部下发的《医院空气净化管理规范》、《医疗机构消毒技术规范》（2012年8月1日实施）及《医务人员手卫生规范》要求，特制定我院环境卫生学监测方法与结果判断标准，请遵照执行。
一、空气净化效果的监测
1.监测科室
医院应对感染高风险部门如手术室、产房、导管室、层流洁净病房、骨髓移植病房、器官移植病房、重症监护病房、新生儿室、母婴同室、血液透析中心(室)、烧伤病房的空气净化与消毒质量进行监测。
2.监测频率
（1）感染高风险部门每季度进行监测；
（2）洁净手术室及其他洁净场所、新建与改建验收时、换高效过滤器后应进行监测；
（3）遇医院感染暴发怀疑与空气污染有关时随时监测，并进行相应致病微生物检测。
3.采样时间
（1）采用洁净技术净化空气的房间在洁净系统自净后与从事医疗活动前采样；
（2）非洁净技术净化空气的房间在消毒或规定的通风换气后与从事医疗活动前采样；
（3）怀疑与医院感染暴发有关时采样。
4.监测方法
（1）洁净手术室及其他洁净用房可选择沉降法或浮游菌法，参照GB50333要求进行监测。
浮游菌法可选择六级撞击式空气采样器或其他经验证的空气采样器。
监测时将采样器置于室内中央0.8m～1.5m高度，按采样器使用说明书操作，每次采样时间不应超过30min。
房间面积＞10 m2者，每增加10 m2增设一个采样点；
（2）未采用洁净技术净化空气的房间采用沉降法：室内面积≤30 m2，设内、中、外对角线三点，内、外点应距墙壁1m处；室内面积＞30 m2，设四角及中央五点，四角的布点位置应距墙壁1m处。
将普通营养琼脂平皿（Φ90mm）放置各采样点，采样高度为距地面0.8m～1.5m；采样时将平皿盖打开，扣放于平皿旁，暴露规定时间后盖上平皿盖及时送检；
（3）平皿暴露时间：
①层流洁净手术室或场所暴露30min；
②非洁净手术室、产房、导管室、新生儿室、重症监护病房、器官移植病房、血液病病区、烧伤病房等感染高风险部门暴露15min；
③儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、人流室、治疗室、注射室、换药室、输血科、消毒供应中心、血液透析中心（室）、急诊室、化验室、各类普通病室、感染疾病科门诊暴露5min。
（4）将送检平皿置36℃±1℃恒温箱培养48h,计数菌落数，若怀疑与医院感染暴发有关时，进行目标微生物的检测。
5.结果计算
（1）沉降法按平均每皿的菌落数报告：cfu/（皿．暴露时间）；
（2）浮游菌法计算公式：
空气中菌落总数（cfu/m3）= 采样器各平皿菌落数之和（cfu) 采样速度（L/min）X采样时间（min）×1000
6.结果判定
（1）洁净手术室和其他洁净场所，空气中的细菌菌落总数要求应≤4cfu/(30min·直径9cm平皿)；
（2）非洁净手术室、产房、导管室、新生儿室、器官移植病房、烧伤病房、重症监护病房、血液病病区空气中的细菌菌落总数≤４cfu／(15min·直径9cm平皿）；
（3）儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、人流室、治疗室、注射室、换药室、输血科、消毒供应中心、血液透析中心（室）、急诊室、化验室、各类普通病室、感染疾病科门诊及其病房空气中的细菌菌落总数≤4cfu/(5min·直径9cm平皿)。
7.空气净化效果监测注意事项
（1）采样前，关闭门、窗，在无人走动的情况下，静止10min后采样；
（2）平皿的取送与放置方法：拿取平皿时，大在下、小在上；采样时要小在下、大的在上（见右图），大的斜盖在小的平皿上，不能二个平皿同时向上；
（3）在化验单上注明平皿暴露时间。
二、医务人员手的消毒效果监测
1.监测科室：医院感染管理重点科室如：手术室、产房、导管室、ICU、新生室、血液净化中心、口腔科等。
2.监测频率：每季度一次进行消毒效果监测；当怀疑医院感染暴发与医务人员手卫生有关时，应及时进行监测，并进行相应致病性微生物的检测。
3.采样时间：在接触患者、进行诊疗活动前采样。
4.监测方法：被检人五指并拢，用浸有含相应中和剂的无菌棉拭子在双手指屈面从指根到指端往返涂擦2次（一只手涂擦面积约30cm2），涂擦过程中同时转动棉拭子，将棉拭子接触操作者的部分剪去，投入装有采样液的试管内及时送检。
5.结果计算：
细菌菌落总数（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均数×采样液稀释倍数╱30×2。
6.手卫生消毒效果监测判断标准：
卫生手消毒：≤10cfu/cm2
外科手消毒：≤5cfu/cm2
三、物体和环境表面消毒效果监测
1.监测频率：当发生医院感染暴发，怀疑与物体表面污染有关时进行检测。
2.采样时间：选择消毒处理后4小时内进行采样。
采样面积：被采样面积≥100cm2取100cm2；被采样面积＜100cm2，取全部表面。
3.监测方法：用5cm×5cm的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水或含相应中和剂的无菌棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次，并随之转动棉拭子，连续采样4个，剪去手接触部分，将棉拭子投入装有10ml采样液的试管中送检。
门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。
采样物体表面有消毒剂残留时，采样液应含相应中和剂。
4.检测方法
充分震荡采样管后，取不同稀释数倍的洗脱液1.0ml接种平皿，将冷至40℃～45℃的熔化营养琼脂培养基
每皿倾注15ml～20ml，36℃±1℃恒温箱培养48h,计数菌落数，怀疑与医院感染暴发有关时，进行目标微生物的检测。
5.结果计算：
平均每皿菌落数×洗脱液稀释倍数
（1）规则物体表面
采样面积（cm2）
物体表面细菌菌落总数（cfu/cm2）=
（2）小型物体表面的结果计算，用cfu/件表示。
6.结果判定
（1）洁净手术部、其他洁净场所，非洁净手术部（室）、非洁净骨髓移植病房、产房、导管室、新生儿室、器官移植病房、烧伤病房、重症监护病房、血液病病区等；物体表面细菌菌落总数≤5cfu/ cm2；
（2）儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、人流室、治疗室、注射室、换药室、输血科、消毒供应室、血液透析中心（室）、急诊室、化验室、各类普通病室、感染疾病科门诊及其病房等；物体表面细菌菌落总数≤10 cfu/ cm2。