增强革兰氏染色液
革兰氏染色所用试剂
革兰氏染色所用试剂
革兰氏染色是一种重要的微生物分析方法，在日常诊断检测中广泛应用。
微生物之间的形态和染色特征是鉴别它们的重要标志，而且是许多其他病原体的诊断的基础。
革兰氏染色是利用染料染色试剂，在微生物细胞实施染色，从而便于观察和辨别微生物的一种方法。
革兰氏染色所用的染料试剂分为水溶性和非水溶性两大类，其中水溶性染料试剂是革兰氏染色的主要原料，主要包括绿唑、新的修复绿和罗丹明B。
非水溶性试剂主要有硫酸、硝酸、酚酞等试剂，在革兰氏染色中都起到重要作用。
绿唑是传统的革兰氏染色试剂，性质稳定，抗酸、碱、表面活性剂等耐受性比较好，且染色效果易操控，在大多数细菌和真菌染色中有良好的效果。
另外，新的修复绿也可以用于革兰氏染色，因为它的抗老化性比绿唑好。
罗丹明B也是多用途的可溶性染料试剂，可以在植物，动物细胞和细菌中染色，并且它可以与绿唑混合使用，使细菌的染色效果更加良好。
此外，在革兰氏染色中还会适当添加一些非水溶性试剂。
例如，硫酸可以强化染色，使细菌自身的特殊特征更容易被观察到；硝酸可以促进细菌染料吸收，提高染色效率，而酚酞则是革兰氏染色常用的抗氧剂，可以有效地防止染料的褪色。
总之，革兰氏染色的成功与否与使用的试剂有着密切的关系，在选择染料试剂时，应当综合考虑染料的性质、染色效果、耐受性
和易用性等因素，以确保获得最佳的染色效果。
革兰氏染色需要的试剂
革兰氏染色需要的试剂革兰氏染色是一种临床上常用的微生物诊断方法，它是利用细菌的特异性自身的酶和体外物质的反应而使细菌表面有不同的色泽，从而对细菌进行特异性的鉴定。
革兰氏染色需要的试剂有：一、染料：1.革兰氏染色所需要的染料有紫罗兰染料（Gram’s violet）、卡拉氏染料（Kala’s dye）、罗丹明B染料（Ludwig’s B dye）、乙醚紫染料（Ethyl violet）等。
2.紫罗兰染料（Gram’s violet）是在革兰氏染色中通常采用的染料，能与细菌外膜中脂肪、糖等成分发生化学反应，使细菌保持紫色，细菌呈深蓝色。
3.卡拉氏染料（Kala’s dye）是一种无机染料，在细菌外膜中可以形成稳定的络合物，使细菌呈深蓝色。
4.罗丹明B染料（Ludwig’s B dye）是一种无机染料，具有强烈的抗氧化作用，使细菌表面呈褐色。
5.乙醚紫染料（Ethyl violet）是一种有机染料，可以与细菌外膜中的脂肪和糖等成分发生反应，使细菌呈紫色。
二、抗原：1.革兰氏染色中用到的抗原有去氧核糖核酸（DNA）、核苷酸（RNA）、多糖（polysaccharide）、蛋白质（protein）等。
2.去氧核糖核酸（DNA）是细菌表面的一种膜质抗原，可以与染料发生化学反应，使细菌表面呈现出紫色。
3.核苷酸（RNA）是细菌表面的一种膜质抗原，可以与染料发生化学反应，使细菌呈深蓝色。
4.多糖（polysaccharide）是细菌表面的一种膜质抗原，可以与染料发生化学反应，使细菌呈褐色。
5.蛋白质（protein）是细菌表面的一种抗原，可以与染料发生化学反应，使细菌呈黑色。
三、抗性：1.抗性是指细菌在染色过程中可以抗染料的作用，会导致形成的颜色异常，从而影响革兰氏染色的效果。
2.抗性可以分为细菌内抗性和细菌外抗性。
细菌内抗性是指细菌内部存在的特殊酶，如脱氧核糖核酸酶（DNAase）、磷酸核酸酶（RNAase）、多糖酶（polysaccharase）等，可以与染料结合，使其不能达到预期的染色效果。
革兰氏染色所用试剂
革兰氏染色所用试剂
革兰氏染色是一种常用的细菌分类和培养方法，它把细菌染成不同颜色，使研究人员能够更加容易地识别出每种不同的细菌。
革兰氏染色所用的试剂有多种，它们提供了这种技术所需的色素，以及提高染色的精确度的其他特性。
它们的性质和激发机制有所不同，从而使它们可以提供准确的染色结果。
为了实现革兰氏染色，首先需要使用染料试剂，它们的颜色可以有红色，黑色，紫色，蓝色，橙色，绿色或灰色。
它们的颜色都可以由一种叫做脱氧核糖核酸（DNA）的分子素材来激发。
例如，一种叫做革兰氏绿的染料试剂会在存在DNA的环境中产生一种深绿色的颜色。
其次，染料试剂可以与各种不同类型的抗原结合，这种结合能够触发另一种叫做抗体的物质分泌。
抗体会与抗原结合，形成一种特殊的结构，这种结构可以被染料试剂吸收，从而使抗原和抗体之间的结合更加牢固。
最后，可以使用离子抑制剂来控制染料试剂的作用。
离子抑制剂可以抑制不同颜色的染料试剂之间的作用，从而让细菌染料更加清晰。
例如，使用一种叫做氯仿的离子抑制剂可以防止橙色染料与紫色染料之间的作用，从而使细菌的颜色更加精确。
革兰氏染色需要使用多种试剂，以便能够更准确地染色细菌。
染料试剂是基本的组成成分，它们提供了染色所需的色素，以及抗原和抗体结合到一起的形状所需的介质。
而离子抑制剂则控制着不
同颜色染料之间的作用。
这些试剂结合起来，提供了革兰氏染色所需要的色素，以及让染色更加清晰和准确的其他特性。
革兰氏染色液配制
革兰氏染色液配制文稿归稿存档编号：[KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-革兰氏染色液保质期：2-8度一年.革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，媒染剂碘液进入菌体后与结晶紫结合，革兰氏阳性菌对碘与结晶紫摄取量多且牢固，不易被酒精脱色。
革兰氏阴性菌对碘与结晶紫摄取量少，不牢固，易被酒精脱色。
为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红进行复染。
阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。
操作步骤：1、标本处理：（1）.有菌部位的标本，如痰液、粪便、各种拭子、创面等可直接涂片。
（2）.无菌部位的标本，如脑脊液、胸水、腹水、胆汁、尿液、关节液等，应取适量标本（最高可达5-7ml）,经3000rpm?离心10min.，取沉渣涂片染色。
2、涂片制作：菌液涂片时，用接种环沾取菌液点在载玻片上，标本可直接在玻片上涂布；菌落涂片时，先取生理盐水一滴，置玻片上，用接种针挑取菌落在盐水中涂布。
制作的涂片应自然干燥，并经火焰固定，固定的温度不宜过高，以玻片背面接触手背不烫为准，否则可能使细菌形态改变。
将固定后的涂片进行染色。
3、染色方法：革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。
此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都可能会呈阴性反应。
（1）.加上结晶紫后，染色1分钟，水洗。
（2）.加上碘液后染色1分钟，水洗。
（3）.加上95%酒精,摇动玻片,根据涂片厚度,脱色约30-60秒，水洗,吸去水分。
（4）.加上蕃红后，染色1分钟，水洗。
（5）.吸干或在空气中凉干后，油镜镜检。
4．结果观察：紫色为革兰氏阳性，红色为革兰氏阴性。
注意事项：1．标本涂片不能太厚，严格按操作要求进行。
2．玻片通过火焰温度不能太高。
3．若涂片较厚，应延长脱色时间，直至不再出现紫色为止。
4．碘液变透明，则不能使用。
实验三细菌革兰氏染色法
实验三细菌革兰氏染色法【目的要求】了解革兰氏染色原理；掌握革兰氏染色的方法。
【基本原理】革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884 年由丹麦医师Gram 创立。
未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察。
染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。
革兰氏染色法可将细菌分成革兰氏阳性（G+）和革兰氏阴性（G-）两种类型，细菌对革兰氏染色的不同反应是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。
革兰氏染色的主要步骤包括初染、媒染、脱色和复染。
首先利用草酸铵结晶紫初染，所有细菌都会着上结晶紫的蓝紫色。
然后利用卢戈氏碘液作为媒染剂处理，由于碘与结晶紫形成碘-结晶紫复合物，增强了染料在菌体中的滞留能力。
之后用95%乙醇作为脱色剂进行处理时，两种细菌的脱色效果不同。
革兰氏阳性细菌细胞壁肽聚糖含量高，壁厚且脂质含量低，肽聚糖本身并不结合染料，但其所具有的网孔结构可以滞留碘-结晶紫复合物，现在一般认为乙醇处理可以使肽聚糖网孔收缩而使碘-结晶紫复合物滞留在细胞壁，菌体保持原有的蓝紫色。
而革兰氏阴性细菌细胞壁肽聚糖含量低，交联度低，壁薄且脂质含量高，乙醇处理时脂质溶解，细胞壁通透性增加，原先滞留在细胞壁中的碘-结晶紫复合物容易被洗脱下来，菌体变为无色。
而在最后用复染步骤（染色剂为番红），染色后变为复染剂颜色（红）。
【实验器材】1.革兰氏染色液：①草酸铵结晶紫甲液：结晶紫（2 g）、乙醇（95%）（20 mL）;乙液：草酸铵（0.8 g）、蒸馏水（0.8 mL）;将甲、乙两液混合，静置48h 后使用，该染液稳定，在不透气的棕色瓶中可存储数月。
②卢戈氏碘液碘（1 g）；碘化钾（2 g）；蒸馏水（300 mL）先将KI溶于少量（3-5 mL）蒸馏水中，再放入碘，待碘全溶后，加水至300 mL。
此液稳定，可在不透气的棕色瓶中保存数月。
③脱色液：95%乙醇④复染液：即2.5%蕃红（沙黄）水溶液。
革兰氏染色所用试剂
革兰氏染色所用试剂
革兰氏染色，也称革兰氏指示染色，是一种化学染色法，是现代微生物学上应用最广泛的分子染色技术，是当今临床检测和研究微生物最常用的方法之一。
该技术主要用于检测和鉴定微生物，根据微生物培养基中培养出来的悬浮细菌，把其固定在载体上，再结合选择性培养基，利用试剂对微生物进行染色，观察其形态、颜色、细菌的位置分布，从而用来检测、鉴定和分离微生物。
由于该技术在医学对微生物的检测上应用广泛，所以被称为医学技术，在进行检测前，必须准备一些典型的技术用品，并准备相应的染色剂和其他试剂。
执行技术需要符合相应的标准要求，以准确的微生物检测结果。
革兰氏染色所用的试剂有多种，即染料和其他特殊试剂，染料是用来染色的化学物质，染料主要有酚酞、紫胺钠、紫斑甘比林、紫头唑铵、哌甲酸等。
在检测中，染料尤其重要，因为它是检测微生物的关键，能够使细菌在可见光下出现颜色，方便通过显微镜直接观察，也可利用染料组合来鉴别出某些特定细菌。
此外，还有一些特殊的试剂，如磷酸钙和凝胶试剂，它们有助于形成茁壮的细菌生长，可以用来增强细菌的荧光，因而更加容易被检测到。
另外，罗丹明123染色剂也是经常用到的试剂，可以用来染色细菌菌胞壁和细胞质，以便可见光下观察。
在进行革兰氏染色检测前，必须对这些试剂进行详细的了解，以确保实验和检测结果准确无误。
正确使用这些试剂，不仅有助于提高
细菌的活性，而且可以有效提高检测效率，为医学技术提供可靠的依据，保证诊断准确率和治疗效果。
总之，革兰氏染色技术是一种常用的技术，在进行检测或者研究前要正确准备好并使用相应的试剂，这是保证实验的前提条件，才能有效的研究微生物并了解其生长形态、分布状况，得出准确的分析结果。
革兰氏染色所用试剂
革兰氏染色所用试剂
革兰氏染色是一种常用的微生物染色技术，可以检测微生物的存在。
该技术可以检测出某种特定细菌的存在，并通过色谱来识别不同的微生物。
它的最大优势在于不需要使用昂贵的设备，只需要几个简单的试剂，就可以完成检测。
革兰氏染色所用的试剂主要集中在以下几类，包括培养基，抗毒素，染色剂和除菌剂。
培养基是革兰氏染色的基础，其主要功能是提供细菌所需的一切条件，以及生长和繁殖所必需的营养。
一般选用的培养基有乳清培养基、拉丁牙齿培养基、卡介苗培养基和血清培养基等。
抗毒素是革兰氏染色的必备试剂，其主要功能是抑制某些有毒成分对细菌的影响，以及免疫抑制物质对细菌的影响，从而提高染色效果。
常用的抗毒素有抗原、抗毒素A和抗毒素B等。
染色剂是革兰氏染色的基础，其实质是一种高分子物质，可以通过互相作用或与细菌电荷作用，使染色的目的物的色素发生变化，从而检测出细菌的存在。
常用的染色剂有新明蓝、苯酚红、芯蓝等。
除菌剂是革兰氏染色的必备试剂，主要功能是抑制和杀灭室内污染物，降低微生物胞外污染的风险，保证染色结果的准确性。
常用的除菌剂有碳酸氢钠、肼溶液、碳酸钠溶液、铝酸溶液等。
革兰氏染色所用的试剂除了上述提到的几类外，还包括各类消毒剂、抗凝剂、抗碱剂、还原剂等。
由于染色的细菌类型和批次不同，在使用这些试剂时，应根据实际情况选择合适的试剂，并结合文献资
料掌握其使用方法，以确保染色结果准确可靠。
综上所述，革兰氏染色是一种实用性很强的微生物染色技术，它使用试剂类型多样，实验条件简单，操作简单方便，效果显著，染色结果准确可靠，值得广大科研工作者推崇及使用。
生物实验染色剂
生物实验染色剂华越洋生物过碘酸溶液(0.5%) 100ml碳水染色40% 4℃,避光,6个月又称高碘酸溶液，是一种氧化剂，常与Schiff试剂合用对糖原进行染色过碘酸溶液(1%) 100ml碳水染色40% 4℃,避光,6个月又称高碘酸溶液，是一种氧化剂，常与Schiff试剂合用对糖原进行染色Schiff试剂50ml碳水染色40% 4℃,避光,6个月又称雪夫试剂、希夫试剂，主要用于碳水化合物染色：如糖原,粘蛋白,糖蛋白,多糖,透明质酸。
又称无色品红染色液。
为无色液体，一般变黄或粉红应弃用。
Schiff试剂100ml碳水染色40% 4℃,避光,6个月又称雪夫试剂、希夫试剂，主要用于碳水化合物染色：如糖原,粘蛋白,糖蛋白,多糖,透明质酸。
又称无色品红染色液。
为无色液体，一般变黄或粉红应弃用。
糖原PAS染色液4×50ml碳水染色40% 4℃,避光,6个月经典的糖原染色法,不仅能够显示糖原,还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质以及软骨、垂体、真菌、色素、淀粉样物质、基底膜糖原染色中华越洋生物推荐采用该染色液，是最常用的经典糖原染色法,高碘酸和schiff试剂应低温保存。
染色结果为：PAS反应阳性物质(糖原或多糖)均呈红色或紫红色；细胞核呈蓝色。
糖原PAS染色液4×100ml碳水染色40% 4℃,避光,6个月经典的糖原染色法,不仅能够显示糖原,还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质以及软骨、垂体、真菌、色素、淀粉样物质、基底膜糖原染色中华越洋生物推荐采用该染色液，是最常用的经典糖原染色法,高碘酸和schiff试剂应低温保存。
染色结果为：PAS反应阳性物质(糖原或多糖)均呈红色或紫红色；细胞核呈蓝色。
糖原PAS染色液(细胞专用) 4×20ml碳水染色40% 4℃,避光,6个月经典的糖原染色法,不仅能够显示糖原,还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质,特别适用于细胞、极其薄的切片。
细胞的糖原染色中华越洋生物公司推荐采用该染色液，是经典糖原染色法,高碘酸和schiff 试剂应低温保存。
增强革兰氏染色液
增强革兰氏染色液
简介：
革兰氏染色法是丹麦医生 Christain Gram 于 1884 年所发明，是细菌学中广泛使用的 一种鉴别染色法，亦是一种复染法。未经染色的细菌，由于其不周围环境折光率差别甚小， 故在显微镜下极难观察。染色后细菌不环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、 排列及某些结构特征，用以分类鉴定。通过此法染色可将细菌鉴别为革兰阳性菌(G+)和革 兰阴性菌(G-)两大类。细菌的丌同显色反应是由于细胞壁对乙醇的通透性和抗脱色能力的差 异，主要是肽聚糖层厚度和结构决定的。经结晶紫染色的细胞用碘液处理后形成丌溶性复 合物，乙醇能使它脱色。在革兰阴性细胞染色中，乙醇戒丙酮破坏了胞壁外膜、损伤肽聚 糖层和细胞质膜。
性菌可被误染为阴性菌；脱色丌够，阴性菌可被误染为阳性菌。 4、 待检细菌培养时间会影响染色，阳性菌培养时间过长戒已死亡戒细菌溶解，常呈阴性。 5、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
DM0016 4×10ml
DM0016 4×100ml
StorageΒιβλιοθήκη 10ml100ml RT 避光
10ml
100ml RT 避光
10ml
100ml RT
10ml
100ml RT 避光
1份
自备材料：
1、 接种环戒挑取细菌的其他工具 2、 酒精灯 3、 载玱片 4、 光学显微镜
操作步骤(仅供参考)：
1、 涂片：取待检细菌，于载玱片中央涂成薄层戒者戒在载玱片上滴加少许无菌水，取菌不 的水混合均匀，涂成一薄层。
染色结果：
革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌
蓝色至紫色 红色
注意事项：
1、 涂片之前，应事先在背面做好圆圈标记，以便判断后续试验的位置。 2、 取细菌时，应注意自我防护，拔戒塞试管塞时，应将试管口通过火焰略加烧灼，最后将
革兰氏染色液的配制,超详细
革兰氏染色液的配制一、实验试剂：（结晶紫、草酸铵、碘、碘化钾、番红）1. 结晶紫溶液：A液：结晶紫：2g，95%乙醇：20ml。
B液：草酸铵：0.8g，蒸馏水：80ml。
需在用前24小时将A液. B液混合，过滤后装入试剂瓶内备用.2. 碘液：碘：1g，碘化钾：2g蒸馏水：300ml。
出碘与碘化钾混合并研磨，加入几毫升水，使其逐渐溶解，然后研磨，继续加入少量蒸馏水至完全溶解，最后补足水量。
也可用少量蒸馏水，先将碘化钾完全溶解，再加入碘片，待完全溶解后，加水至300ml。
3. 脱色液：95%乙醇。
4. 复染液：A.贮存液：番红：2.5g，95％乙醇：100ml。
B.应用比例：A液：10ml，蒸馏水：90ml。
菌片制备：染色的第一步是制作涂片。
菌液涂片时，用接种环蘸取菌液点在载玻片上，标本可直接在玻片上涂布，菌落涂片时，先取生理盐水1滴，置玻片上，用接种针挑去菌落，在盐水中涂布。
涂片时必须注意应轻轻操作。
猛烈的动作会改变菌细胞原有的排列形式，或造成细菌鞭毛脱落，影响结果的准确性。
制备的涂片应自然干燥，并经火焰固定，固定温度不易过高，以玻片背面接触手背不烫为准，否则可能使细胞形态改变。
将固定后的涂片进行染色。
操作步骤：1 ．涂片将培养的不同菌分别作涂片（注意涂片切不可过于浓厚），干燥、固定。
固定时通过火焰1一2 次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
2 ．染色( 1 ）初染加草酸铰结晶紫一滴，约一分钟，水洗。
( 2 ）媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。
( 3 ）脱色将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95 ％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20 一30 秒钟，立即用水冲净酒精。
( 4 ）复染用番红液染1 一2 分钟，水洗。
( 5 ）镜检干燥后，置油镜观察．革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。
以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。
( 6 ) 同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片，作革兰氏染色对比。
细菌的革兰氏染色及染色液的配制
革兰氏染色的一般步骤革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram创立。
未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察。
染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。
革兰氏染色属复染法，即将标本固定后，先用结晶紫染色1分钟后水洗，然后加革兰碘液媒染一分钟后用酒精脱色，再用稀释石炭酸复红复染。
染色后除可以看到细菌形态外，还可将细菌分为两大类，即不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋）。
被酒精脱色复染成红色者为革兰氏阴性菌（Gˉ）。
革兰氏染色原理尚不肯定，可能与细菌所带核糖核酸、细菌壁结构通透性、等电点等因素有关。
致病菌如金黄色葡萄球菌、绿色溶血性链球菌、肺炎球菌、白喉杆菌、炭疽杆菌等属革兰氏染色阳性菌。
百日咳杆菌、大肠杆菌（大肠埃希菌）、铜绿假单胞菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌、沙门菌、流行性脑膜炎双球菌、淋病双球菌等均属革兰氏阴性菌。
所以根据细菌的革兰氏染色性质，可以缩小鉴定范围，有利于进一步分离鉴定，以对疾病做出诊断。
又由于各种抗生素的抗菌谱不同，革兰氏染色尚可做为选用抗生素的参考。
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：1）涂片固定。
2）草酸铵结晶紫染1分钟。
3）纯化水冲洗。
4）加碘液覆盖涂面染1分钟。
5）水洗，用吸水纸吸去水分。
6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，30秒后水洗，吸去水分。
7）番红染色液（稀）染10秒钟后，纯化水冲洗。
干燥，镜检。
染色的结果，革兰氏正反应菌体都呈紫色，负反应菌体都呈红色。
实验三细菌的革兰氏染色法一、目的要求了解革兰氏染色的原理，学习并掌握革兰氏染色的方法。
二、基本原理革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。
它是1884年由丹麦医师Gram创立的。
革兰氏染色法（Gram stain）不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示。
革兰氏染色液操作步骤及注意事项
革兰氏染色液操作步骤及注意事项革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，通过这种方法，可以将细菌分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G）两大类。
以下将详细介绍革兰氏染色液的操作步骤及注意事项。
一、操作步骤1、涂片制备首先，在干净的载玻片上滴一小滴生理盐水。
然后，用无菌接种环挑取少量待检细菌培养物，与生理盐水混合均匀，形成薄薄的菌膜。
最后，让涂片自然干燥。
2、固定将干燥后的涂片通过火焰加热固定，加热时要让玻片背面接触火焰，来回通过 2 3 次，以杀死细菌并使其牢固地附着在玻片上。
3、初染在涂片上滴加结晶紫染色液，染色 1 2 分钟。
之后，用细水流轻轻冲洗涂片，直至流下的水无色为止。
4、媒染滴加碘液覆盖涂片，媒染 1 分钟。
同样用细水流冲洗，去除多余的碘液。
5、脱色用 95%的乙醇脱色，脱色时间约 20 30 秒，直到流出的乙醇无色或稍显淡紫色为止。
立即用细水流冲洗，终止脱色。
6、复染滴加沙黄复染液，染色 1 2 分钟。
用细水流冲洗，吸干水分后，在显微镜下观察。
二、注意事项1、涂片质量涂片不宜过厚，否则会影响染色效果，导致细菌重叠，难以分辨。
涂片应均匀，避免出现局部厚、局部薄的情况。
2、固定温度和时间固定时火焰温度不宜过高，以免破坏细菌形态。
固定时间要适中，过长或过短都会影响染色结果。
3、染色时间每种染色液的染色时间都要严格控制。
初染时间不足，会导致革兰氏阳性菌染色不充分；时间过长，则可能使革兰氏阴性菌也染上颜色。
脱色时间更是关键，脱色过度会使革兰氏阳性菌被误判为阴性菌；脱色不足，则会使革兰氏阴性菌被误判为阳性菌。
4、冲洗方式冲洗时水流要细、缓，避免直接冲掉涂片上的细菌。
冲洗的角度要合适，尽量从玻片的一端冲洗，避免染色液在玻片上残留。
5、染色液质量染色液应定期配制或购买新鲜的，以保证染色效果。
储存染色液时要注意避光、防潮，防止其变质。
6、显微镜观察观察时要先低倍镜找到视野，再换高倍镜观察。
革兰氏染色所用试剂
革兰氏染色所用试剂革兰氏染色法是一种广泛应用于微生物学实验中的染色法，主要通过染色剂将微生物染成不同的颜色，以便研究者识别和辨认微生物种类。
革兰氏染色所用的试剂可以分为三大类：染料，抑菌剂和染料的稳定剂。
其中，染料是革兰氏染色的关键试剂，抑菌剂可以抑制其他微生物的发酵，而染料的稳定剂可以防止染料稳定性的降低。
染料是革兰氏染色所用的最重要的试剂之一，可用来染色探针和定性抗原。
常用的染料有铵离子染料、碱金属染料、有机乙酸酯酸染料等。
铵离子染料的优势在于比较稳定，而且可以很好地代表有机物；碱金属染料的优势在于比较稳定，易于用于临床检验；有机乙酸酯染料的优势在于比较通用，可以染出多种颜色，而且不会因高PH值而褪色。
抑菌剂是革兰氏染色中最常用的试剂，抑菌剂可以有效地抑制宿主细胞膜上的细菌，从而有助于革兰氏染色法中染色细菌的检出。
一般来说，常用的抑菌剂有甲醛、碘化菊酯、橙黄菊酯、磺胺、多西环素等，它们在消毒作用上比较强，适用于实验室检测。
染料的稳定剂是革兰氏染色中常用的一种试剂，它可以有效地防止染料的氧化变性和酸化，从而提高染料的稳定性。
染料的稳定剂常用的有铁血清素、对硫酸糖水杨酸、硝酸、过氧化乙醇等，这些物质可以有效地稳定染料中的有机氧离子，防止氧化变性和酸化，从而提高染料的稳定性。
革兰氏染色所用的试剂具有不同特性，使用者需要根据实验要求来选择最合适的试剂，以确保实验数据的可靠性。
例如，如果实验要求染料的稳定性要求高，那么就需要使用适当的染料稳定剂。
此外，在使用试剂时，用户还要确保试剂的有效性和稳定性，以方便检测结果的精确性和可靠性。
总之，革兰氏染色所用的试剂有染料、抑菌剂和染料的稳定剂，不同试剂有不同特性，使用者要根据实验要求来选择最合适的试剂。
此外，用户还要确保试剂的有效性和稳定性，来保证实验结果的可靠性。
细菌革兰氏染色
细菌革兰氏染色细菌革兰氏染色又称革兰染色，是一种微生物学上最常用的染色技术之一。
它是由丹麦细菌学家Hans Christian Gram于1884年首次发明的。
革兰氏染色的原理是利用某些细菌耐受乙醇的能力不同，将它们分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
通过这种区分方式，有助于对某些细菌的分类和鉴定。
革兰氏染色原理革兰氏染色涉及到两种染料，即革兰氏染色液和碘化物液。
革兰氏染色液的主成分是紫色素，能够穿透菌体进入到细胞内部，使其产生着色效果。
碘化物液是一种褐色液体，用于增强革兰氏染色的效果。
当细菌经过革兰氏染色之后，革兰氏阳性菌会呈紫色或紫红色，而革兰氏阴性菌则会呈现出蓝绿色或浅紫色。
这是由于不同类型的细菌细胞壁结构和成分的不同所导致的。
具体步骤如下：1.将已培养的细菌涂在玻璃片上。
2.在加上革兰氏染色液，并在玻璃片上加热。
3.再加上碘化物液进行固定染色。
4.用乙醇或醇/醚对玻璃片进行冲洗。
5.最后用草酸进行洗涤并干燥。
细菌革兰氏染色的应用由于革兰氏染色技术简单和易于操作，因此在医学、食品、水处理等领域有着广泛的应用。
医学上，革兰氏染色能够帮助医生进行感染病原菌的诊断，例如革兰氏阳性菌是阴道炎的病原菌之一。
在水处理领域，可以用于分离和鉴定可降解有机物质的培养菌株。
除此之外，在食品加工行业中，革兰氏染色也扮演着重要的角色。
行业工作者经常需要使用革兰氏染色来检测食品接触到的病原菌，以保障公众的健康。
细菌革兰氏染色的注意事项需要注意的是，在进行细菌革兰氏染色实验的时候，要注意保证无菌操作，以免影响实验结果。
此外，在染色操作过程中需要掌握好操作时间，以便产生准确的结果。
细菌革兰氏染色是一种简单、快捷、经济、且可靠的细菌鉴定方法。
它对于医学、食品及水处理系统的监测都具有重要的价值，是一种广泛应用的科学工具。
革兰氏染色步骤
革兰氏染色步骤引言：革兰氏染色是一种常用的细菌染色技术，由丹麦细菌学家Hans Christian Gram于1884年发明。
该技术以细菌细胞壁结构的不同为基础，将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌。
革兰氏染色的步骤简单易行，适用范围广泛，被广泛应用于医学、生物学等领域的细菌鉴定工作中。
本文将对革兰氏染色的步骤进行详细介绍，以帮助读者更好地了解和掌握革兰氏染色技术。
一、准备工作1.1 试剂准备进行革兰氏染色需要的试剂主要包括：革兰碘液、革兰洗涤液、乙醇和碱性紫。
1.2 样品处理将待染菌株铺在平板上，选择好光洁的玻璃片，取少量样品用针头将菌液均匀涂布在玻璃片上。
待菌落完全干燥后，即可开始染色。
二、革兰氏染色步骤2.1 固定将涂布好菌液的玻璃片朝上放置在架子上，使用银夹将玻璃片固定住。
将固定好的玻璃片在灯火或火焰中加热，直至菌液完全干燥。
此步骤的主要目的是固定菌液，使其不易脱落。
2.2 革兰碘液染色将固定好的玻璃片放入容器中，加入足量的革兰碘液，浸泡5-10分钟。
革兰碘液的作用是增强染色效果，使细菌细胞壁紧密结合革兰紫染料。
2.3 洗涤用水冲洗玻璃片，直至水澄清。
这一步是为了去除多余的碘液。
2.4 乙醇洗涤将固定好的玻璃片放入容器中，加入适量的95%乙醇，浸泡20-30秒。
乙醇的作用是洗去革兰紫颜料。
2.5 洗涤用水冲洗玻璃片，直至水澄清。
这一步是为了去除多余的乙醇。
2.6 碱性紫染色将固定好的玻璃片放入容器中，加入适量的碱性紫，浸泡30-60秒。
碱性紫的作用是染色细菌细胞。
2.7 洗涤用水冲洗玻璃片，直至水澄清。
2.8 水分干燥将玻璃片放置在架子上晾干或用纸巾轻轻吹干。
确保玻璃片完全干燥后，即可进行观察和分析。
三、结果观察和分析革兰氏染色后，观察玻璃片上的细菌染色情况。
革兰阳性菌一般呈紫色或深紫色，革兰阴性菌一般呈粉红色。
通过观察颜色的不同，可以初步判断细菌的分类，并进一步进行鉴定和分析。
需要注意的是，革兰氏染色技术在细菌鉴定中是一种初步的判断方法，对于一些特殊的细菌，染色结果可能会有一定的误差。
革兰氏染色液化学品安全技术说明书
化学品安全技术说明书第一部分化学品及企业标识产品中文名称：革兰氏染色液产品英文名称：Gram Stain产品编号：029010企业名称：广东环凯微生物科技有限公司地址：广东省广州市黄埔区广州开发区科学城神舟路788号邮编：510663公司网址传真号码：************销售热线：************-8602技术热线：************-8877/8876推荐用途和限制用途：生化研究/分析第二部分危险性概述GSH危害性类别易燃（类别3）；眼刺激(类别2B) ；GSH标签要素象形图：警示词：警告危险信息：H226 易燃液体和蒸汽；H320 造成眼刺激。
防范说明预防措施：P210 远离热源/火花/明火/热表面。
-禁止吸烟。
P280戴防护手套/戴防护眼罩/戴防护面具。
事故响应：P370 + P378 火灾时：使用灭火。
P305 + P351 +P338 + P310 如进入眼睛：用水小心冲洗几分钟。
如戴隐形眼镜并可方便地取出，取出隐形眼镜。
继续冲洗。
立即呼叫急救中心/医生。
P312 如感觉不适，呼叫急救中心/医生。
废弃处置：按国家规章处理。
物理和化学危险目前掌握信息，没有物理或化学的危险性。
健康危害H320 造成眼刺激。
环境危害无数据资料其它危害无第四部分 急救措施一般信息： 无特殊的措施要求。
皮肤接触： 立即用清水彻底清洗。
眼睛接触： 立即提起眼睑，用大量流动清水冲洗。
如不适就医。
吸 入： 如不适就医。
食 入： 如不适就医。
就医信息： 出示产品使用说明或者此SDS 。
第五部分 消防措施危险特性： 易燃有害燃烧产物： 一氧化碳，二氧化碳，氮的氧化物。
灭火方法及灭火剂： 选用适合周围火源的灭火器。
水，泡沫，二氧化碳，干粉，沙土。
灭火注意事项： 防止气体吸入。
第六部分 泄露应急处理个人防护： 穿个人实验服,佩戴手套和口罩,避免接触。
环境保护措施： 用湿布和地拖擦拭干净。
清洁/收集措施： 保持干燥。
革兰氏染色——精选推荐
⾰兰⽒染⾊⾰兰⽒染⾊法是细菌学中⼴泛使⽤的⼀种鉴别染⾊法，1884年由丹麦医师Gram创⽴。
细菌先经碱性染料结晶染⾊，⽽经碘液媒染后，⽤酒精脱⾊，在⼀定条件下有的细菌此⾊不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两⼤类，前者叫做⾰兰⽒阳性菌（G+），后者为⾰兰⽒阴性菌（G—）。
为观察⽅便，脱⾊后再⽤⼀种红⾊染料如碱性蕃红等进⾏复染。
阳性菌仍带紫⾊，阴性菌则被染上红⾊。
有芽胞的杆菌和绝⼤多数和球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈⾰兰⽒正反应；弧菌，螺旋体和⼤多数致病性的⽆芽胞杆菌都呈现负反应。
⾰兰⽒阳性菌和⾰兰⽒阴性菌在化学组成和⽣理性质上有很多差别，染⾊反应不⼀样。
现在⼀般认为⾰兰⽒阳性菌体内含有特殊的核蛋⽩质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱⾊，阴性菌复合物结合程度底，吸附染料差，易脱⾊，这是染⾊反应的主要依据。
另外，阳性菌菌体等电点较阴性菌为低，在相同PH条件下进⾏染⾊，阳性菌吸附碱性染料很多，因此不易脱去，阴性菌则相反。
所以染⾊时的条件要严格控制。
例如，在强碱的条件下进⾏染⾊，两类菌吸附碱性染料都多，都可呈正反应；PH 很低时，则可都呈负反应。
此外，两类菌的细胞壁等对结晶紫—碘复合物的通透性也不⼀致，阳性菌透性⼩，故不易被脱⾊，阴性菌透性⼤，易脱⾊。
所以脱⾊时间，脱⾊⽅法也应严格控制。
⾰兰⽒染⾊法⼀般包括初染、媒染、脱⾊、复染等四个步骤，具体操作⽅法是：1）涂⽚固定。
2）草酸铵结晶紫染1分钟。
3）⾃来⽔冲洗。
4）加碘液覆盖涂⾯染1分钟。
5）⽔洗，⽤吸⽔纸吸去⽔分。
6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进⾏脱⾊，30秒后⽔洗，吸去⽔分。
7）蕃红梁⾊液（稀）染10秒钟后，⾃来⽔冲洗。
⼲燥，镜检。
染⾊的结果，⾰兰⽒正反应菌体都呈紫⾊，负反应菌体都呈红⾊。
⼀、常⽤染⾊液的配制⒈碘-碘化钾（I2-KI）溶液能将淀粉染成蓝紫⾊，蛋⽩质染成黄⾊，也是植物组织化学测定的重要试剂。
配⽅：碘化钾2g ；蒸馏⽔300ml ；碘1g先将碘化钾溶于少量蒸馏⽔中，待全溶解后再加碘，振荡溶解后稀释⾄300mL，保存在棕⾊玻璃瓶内。
革兰氏染色所用试剂
革兰氏染色所用试剂革兰氏染色是一种有效的细胞学技术，可以用于诊断细菌的感染和检测。
它可以检测出细菌的形态特征，如大小，形状和色泽。
为了实现有效的染色，革兰氏技术使用了特定的试剂，这些试剂可以有效地增强细菌的视觉特征，让细菌更容易被识别。
革兰氏染色剂是一类特殊的染料，可以与细菌结合形成不同颜色的复合物，从而更清晰地展现不同类型细菌的特征和结构。
革兰氏试剂主要包括革兰氏染料，碳酸氢钠，抗原和宿主抗原的抗体。
革兰氏染料可以与细菌膜蛋白形成结合，从而形成特殊的色状。
它是由一系列不同颜色的有机颜料经过特殊合成得到的，可以结合多种细菌，使细菌的不同特征得到更明显的展示。
一般来说，革兰氏染料可以分为两种：抗原性染料和非抗原性染料。
抗原性染料是指革兰氏染料和宿主抗原结合而成的特殊复合物，它可以检测出宿主抗原的存在，从而确定细菌的存在和种类。
而非抗原性染料则是指不同颜色的染料可以使细菌的形态特征更加显著，例如细菌的大小、形状和色泽等。
此外，碳酸氢钠也是革兰氏染色中常用的试剂，它具有碱性，可以使细菌细胞膜受到破坏，因而更易于染色。
碳酸氢钠也有一定的抑制作用，可以抑制一些不稳定的微生物，以及一些具有复杂酶系统的细菌。
除了革兰氏染料和碳酸氢钠之外，革兰氏技术还包括抗原-抗体检测。
抗原是指具有特殊的表位的生物分子，而抗体则是指由宿主体内的免疫系统产生的特殊蛋白质分子，它们可以与抗原结合形成免疫复合物，从而发挥抗病毒作用。
在革兰氏技术中，抗原和抗体的检测可以用于确定特定病原体的存在和特异性。
总之，革兰氏染色所用的试剂具有不同的功能，可以显著提高细菌的可见性，帮助我们准确地诊断感染和检测细菌。
因此，对革兰氏染色所使用的试剂进行正确的选择和使用，有助于改善细菌学实验的效率和准确性。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
增强革兰氏染色液
简介：
在革兰阴性细胞染色中，乙醇或丙酮破坏了胞壁外膜、损伤肽聚糖层和细胞质膜，结晶紫和碘复合物从细胞中渗漏出来，当再用其他染色液复染时，显现红色。
红色染料虽然也能进入已染成紫色的G+细胞，但被紫色盖没，所以红色显示不出来。
在革兰阳性细胞染色中，乙醇还能使厚的肽聚糖层脱水，导致孔隙变小，由于结晶紫和碘复合物分子太大，不能通过细胞壁，不易脱色，所以保持着紫色。
Leagene Enhanced Gram ˊs stain 采用最经典的革兰染色配方进一步改进，使用复红复染液替代沙黄染色液，增强了染色效率，用于极难染色的细菌。
临床标本直接涂片，背景干净，胞核胞质对比强烈，胞内吞噬体清晰易辨认，细菌染色特征典型。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 涂片：取待检细菌，于载玻片中央涂成薄层或者或在载玻片上滴加少许无菌水，取菌与
的水混合均匀，涂成一薄层。
2、 干燥：涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥。
3、 固定：手持载玻片一端，标本面朝上，在酒精灯的火焰外侧快速来回移动3~5次，每
次1s ，温度不宜过高，防止菌体蛋白变性，放置待凉后染色。
也可以用甲醇或乙醇固定。
4、 初染：滴加结晶紫染色液染色，清水冲洗去染色液。
5、 媒染：滴加Gram 碘液，并覆盖载玻片，室温放置，水洗。
6、 脱色：滴加脱色液，摇动，直至流下的脱色液不出现紫色时为止，立即用水冲去脱色液，
终止反应。
7、 复染：滴加复红复染液染色，水洗。
8、 干燥。
镜检：置油镜观察。
编号 名称
DM0016 4×10ml DM0016 4×100ml DM0016 4×250ml Storage 试剂(A): 结晶紫染色液 10ml 100ml 250ml RT 避光 试剂(B): Gram 碘液 10ml 100ml 250ml RT 避光 试剂(C): 脱色液 10ml 100ml 250ml RT 试剂(D): 复红复染液 10ml
100ml
250ml
RT 避光
使用说明书 1份
染色结果：
革兰氏阳性菌蓝色至紫色
革兰氏阴性菌红色
注意事项：
1、涂片之前，应事先在背面做好圆圈标记，以便判断后续试验的位置。
2、取细菌时，应注意自我防护，拔或塞试管塞时，应将试管口通过火焰略加烧灼，最后将
接种环在火焰上烧灼灭菌。
3、加热固定涂片时，应注意玻片勿太靠近火焰，一般要求玻片温度不超过60℃，以玻片
背面触及手背皮肤不觉过烫为宜。
4、革兰氏染色的关键在于严格掌握脱色程度，脱色时间应根据经验判断。
脱色过度，阳性
菌可被误染为阴性菌；脱色不够，阴性菌可被误染为阳性菌。
5、待检细菌培养时间会影响染色，阳性菌培养时间过长或已死亡或细菌溶解，常呈阴性。
有效期：12个月有效。
相关：
编号名称
DC0032Masson三色染色液
DG0005糖原PAS染色液
TC1167 尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)。