临床分子生物学检验复习提纲

临床分子生物学检验

1.DV A的一级结构是由哪种化学键连接

两条单链间：碱基氢键；相邻碱基间：范德华力；脱氧核苷酸间：3’-5’磷酸二酯键

2.可以出现在人体循环系统中的游离核苷酸是

脱氧核苷酸，核糖核酸

3.原核生物DNA的复制方式是θ型半保留复制

4.核小体结构中的组蛋白是哪些蛋白各自的作用有

H2A、H2B、H3、H4：核心颗粒，形成核小体。H1：连接线上，锁定核小体、参与包装

5.PCR体系中抑制Taq酶活性的物质有哪些过量加入什么会减少Mg2+浓度导致Taq酶活性降低

游离的Mg2+浓度；dNTP、引物和模板DNA等中的磷酸基团，螯合剂如EDTA均可与镁离子结合减少Mg2+浓度。

6.PCR扩增时，链的延伸从什么地方开始对于引物是哪一端模板链呢

从引物的3’端开始，方向5’到3’；模板DNA序列的3’端；3’端

7.在波长260nm的紫外线下，A值=1时双链DNA的浓度大约相当于

50ug/ml的双链DNA。（40ug/ml的单链DNA或单链RNA ，33ug/ml的单链寡聚核苷酸）（紫外分光光度法，核酸浓度的鉴定）

计算公式：

双链DNA ＝50×A260样本×稀释倍数

÷1000（ug/ul）

单链DNA／RNA ＝40×A260样本×

稀释倍数÷1000（ug/ul）

单链寡聚核苷酸DNA ＝33×A260样本

×稀释倍数／1000（ug/ul）

8.关于基因的定义正确的是

能编码有功能的蛋白质多肽链或合成RNA所必需的全部核酸序列，是核酸分子的功能单位。

是遗传的结构和功能单位。

一个基因大都包括编码蛋白质多肽链或RNA的编码序列，保证转录和加工所必须的调控序列（启动子，增强子），5’端、3’端非编码序列。

9.β—地中海贫血患者的基因缺陷主要是

基因突变中的点突变

酶的特性有

有很高的耐热稳定性

酶量增加使反应特异性下降，酶量过少影响反应产量；

Taq DNA聚合酶无3′→5′外切酶活性，因而无校正功能，在复制新链的过程中会发生碱基错配；Taq DNA聚合酶在每次循环中产生的移码突变率为1/30000，碱基替换率为1/8000，因此扩增的片段越长，错配的机率越高。

11.实时荧光定量PCR技术中非特异性荧光染色技术

SYBR Green I

12.人类基因组DNA多态性的形式

限制性片段长度多态性（RFLP）；短序列重复序列（STR）;单核苷酸多态性（SNP）

13.常用于菌种鉴定的分子标志物是

16sRNA

14.真核生物染色体的DNA三级结构不是闭环双链超螺旋结构的是

15.原核生物RNA聚合酶的特性有

原核生物细胞中只有1种RNA聚合酶，可参与合成mRNA、tRNA和rRNA。

RNA聚合酶催化聚合反应时需要Mg2+或Mn2+。

该酶无校正功能。

16.PCR反应的特异性取决于

引物

17.DNA的变性是指

在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。

变性后其它理化性质变化：

增色效应粘度下降

比旋度下降浮力密度升高

酸碱滴定曲线改变生物活性丧失

18.参与DNA复制的酶有哪些

（1）DNA聚合酶

（2）拓扑异构酶：:兼具内切酶和连接酶活力，能迅速将DNA超螺旋或双螺旋紧张状态变成松驰状态，便于解链。

(3）DNA解链酶

（4）单链结合蛋白(SSB)：结合在解开的DNA单链上，防止重新形成双螺旋。

(5）引物酶和引发体：启动RNA引物链的合成。

(6）DNA连接酶

19.第一个分离到的抑癌基因是

视网膜母细胞瘤基因（Rb基因）

年简悦威采用Southen分子杂交技术检测出了什么疾病

镰状细胞贫血症

21.核酸的分离和纯化中，沉淀DNA的常用试剂是

常用的有机溶剂有：

乙醇、异丙醇、聚乙二醇

常用的盐类有：

醋酸钠、醋酸钾、醋酸铵、氯化钠、氯化钾、氯化镁等。

22.通过紫外分光光度法可对核酸纯度进行鉴定，怎么鉴定反过来是否成立否

通过A260与A280的比值来判断有无蛋白质的污染。

在TE缓冲液中：

纯DNA的A260／A280比值为；

纯RNA的A260／A280比值为

【注意事项：

（1）蛋白质及酚的污染均可使比值下降，可通过蛋白质在280nm的高吸收峰与酚在270nm的高吸收峰来鉴别。

（2）RNA污染可致DNA样品的比值高于。

（3）比值为的DNA溶液不一定是纯DNA溶液，可能兼有蛋白质、酚、RNA的污染。

（4）是高质量的RNA的标志，但由于RNA二级结构的不同，其读数可能会在～之间波动。

（5）RNA溶液的pH值会影响A260／A280的读数，在水溶液中A260／A280的比值比在Tris缓冲液（）的读数低～。因此，精确测定RNA的浓度应使用水溶液，精确测定RNA的纯度应使用

Tris10mmol/L（）溶液。】

23.对于等位基因突变位点已被阐明的一些遗传病，可以采用基因诊断的方法是

直接诊断：

Southern 印迹技术

多重PCR技术

PCR-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）

等位基因特异性寡核苷酸（ASO）

DNA芯片技术（DNA chip）

单链构象多态性（SSCP）

变性梯度凝胶电泳（DGGE）

DNA序列分析（DNA sequencing）

24.限制性内切酶的（通常指Ⅱ类）特点是（Ⅱ类限制性核酸内切酶识别序列特点）

回文结构

CCTAGG

切口：

平端切口-- 平末端

粘端切口-- 粘性末端

【同功异源酶：

GGTACC

来源不同的限制酶，能识别和切割同一位点。

同尾酶：

有些限制性内切酶虽然识别序列不完全相同，但切割DNA后产生相同的粘性末端】

例如:

淀粉液化芽胞杆菌

（Bacillus amyloliguefaciens）H株

第1种限制性内切酶，命名为Bam HⅠ

25以mRNA为模板合成cDNA的酶是（RT—PCR内容）

逆转录酶

法DNA测序时ddNTP（双脱氧核苷酸，少一个羟基）的作用是

ddNTPs 是反应终止剂，可以当作正常碱基参与复制，一旦链入DNA中，其后就不能再继续连接。27Southern印迹法的步骤有

①待测核酸样品的制备②琼脂糖凝胶电泳分离待测DNA样品③电泳凝胶预处理④转膜⑤探针标记⑥预杂交⑦Southern杂交⑧洗膜⑨放射性自显影检测

芯片技术的本质

核酸分子杂交技术

29.影响限制性内切酶活性的物质有

乙醇、EDTA、SDS、酚、氯仿和Mg2+等某些高浓度金属离子,均会降低限制酶的催化活性,甚至使限制酶不起作用.

30.大肠杆菌（原核生物）基因组的特点

DNA较小；基因数目较少；通常为一条环状双链DNA（dsDNA）；只有一个DNA复制起始点；GC 含量差异很大；基因组DNA位于细胞中央的核区，无核膜，形成类核结构；结构基因中无内含子；多数为单拷贝基因，编码rRNA、tRNA的基因为多拷贝；具有编码同功酶的基因。

31.乙肝病毒（病毒）基因组特点

①分子较小，基因数少；

②双链DNA病毒（逆转录：是一类特殊类型的单链正链RNA病毒，含有RNA指导的DNA聚合酶，能使RNA反转录生成DNA。）【每种病毒只含一种核酸（RNA或DNA），可为双链或单链、环状或线性】