RNA提取方法

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rna提取方法及原理

rna提取方法及原理

rna提取方法及原理RNA是一种生物大分子,具有非常重要的生物学功能,在生物研究中有着广泛的应用。

为了研究RNA的功能和结构,科学家们需要从细胞中提取出RNA。

本文将介绍RNA提取的几种常用方法及其原理。

一、酚/氯仿法酚/氯仿法是RNA提取的一种经典方法,它基于RNA和DNA的物理性质差异进行分离。

该方法的步骤如下:1. 细胞破碎:将待提取RNA的细胞或组织经过低温致裂,使细胞膜破裂释放出RNA。

2. 酚酸提取:加入酚酸溶液,与DNA形成两相体系。

RNA主要溶于上层的酚酸相中,而DNA则主要溶于下层的酚氯仿相中。

3. 氯仿提取:将上层的酚酸相与下层的酚氯仿相分离,得到含有RNA的上层液体。

4. 沉淀:通过加入异丙醇或乙醇使RNA沉淀,然后用冷乙醇洗涤并干燥沉淀,最后用水溶解得到纯净的RNA。

酚/氯仿法的原理是利用RNA和DNA的溶解度差异以及RNA在酚酸上层相中的亲和力较大,从而实现RNA的提取。

二、硅胶膜柱法硅胶膜柱法是一种常用的RNA提取方法,它使用硅胶膜柱与试剂盒结合,以实现RNA的高效提取。

该方法的步骤如下:1. 细胞破碎:将待提取RNA的细胞或组织破碎,并加入试剂使RNA不受降解酶的影响。

2. 结合:将破碎后的细胞溶液与硅胶膜柱结合,RNA结合到硅胶膜柱的表面。

3. 洗涤:通过洗涤剂洗去杂质和其他污染物,保留纯净的RNA在硅胶膜柱上。

4. 解吸:将洗涤后的硅胶膜柱加入含有RNase-free水的管中,使RNA从硅胶膜柱中解离。

5. 沉淀:通过加入异丙醇或乙醇使RNA沉淀,然后用冷乙醇洗涤并干燥沉淀,最后用水溶解得到纯净的RNA。

硅胶膜柱法的原理是利用硅胶膜柱的高亲和性和离心过滤来纯化RNA,同时通过试剂的作用保护RNA免受降解酶的影响。

三、磁珠法磁珠法是一种高效且易于自动化的RNA提取方法,它利用磁珠表面的化学基团与RNA分子进行特异性结合。

该方法的步骤如下:1. 细胞破碎:将待提取RNA的细胞或组织破碎,并加入试剂使RNA稳定。

提取细胞中的rna的方法

提取细胞中的rna的方法

提取细胞中的rna的方法提取细胞中的RNA是一项重要的实验技术,它能够帮助研究人员深入了解RNA在细胞中的生物学功能及表达调控机制。

下面将介绍几种常见的RNA提取方法。

1. TRIzol法TRIzol法是一种广泛应用于RNA提取的方法。

该方法基于TRIzol试剂对细胞或组织样品中RNA的溶解作用,通过氯仿沉淀和酒精洗涤来纯化RNA。

该方法简单易行,适用于各种类型细胞和组织,同时提取的RNA质量较好,但相对来说RNA纯度不高。

2. 磁珠法磁珠法是一种全自动化的RNA提取方法,通过使用磁性珠子将RNA 特异性结合剂捕获目标RNA,再通过磁力将磁性珠子从混合物中分离出来。

该方法操作简便,具有较高的RNA纯度和产量,且适用于从小样品中提取RNA。

3. 柱式纯化法柱式纯化法即RNA纯化柱法,基于RNA特异性结合柱将RNA捕获,由于RNA与柱子上的化学物质发生特异性亲和作用,其它核酸和蛋白质可以被去除。

该方法RNA纯度高,产量也比较可靠。

4. 整体细胞RNA提取法整体细胞RNA提取法采用混合酚(phenol)和氯仿(chloroform)作为RNA溶解和分离剂,该方法能够直接溶解细胞膜来提取细胞中的RNA。

整体细胞RNA提取法的优点在于它可以同时纯化RNA和DNA,同时提取的RNA产量较高,但RNA质量不够纯粹。

5. 分子降解法分子降解法是使用各种离子、化学物质和酶来切断RNA的方法,从而释放出RNA。

该方法适用于各种细胞和组织类型,它在纯化RNA的同时能够消除能降解和干扰RNA研究的RNA样品,提高RNA纯度。

但该方法RNA产量比较低,不适合处理大量样品。

总之,以上提取RNA的方法各有优缺点,选择哪种方法取决于实验目的、样品类型和实验条件等因素。

rna提取的流程和方法

rna提取的流程和方法

rna提取的流程和方法RNA提取的流程和方法一、RNA 提取流程1、实验准备在RNA提取前,需要准备一些实验用品,如RNA提取试剂盒、干净的Eppendorf管、试剂管盒等。

2、组织采集从实验材料(如组织)中采集适量样品,将其添加到实验管中,并用恰当的液体(如液氮)固定。

3、细胞分离和消化将固定过的样品放置在消化槽中,并加入相应蛋白酶(常用的蛋白酶有 Protease、 DNase I 等)。

待消化完成后,细胞就可以分离出来,得到小分子和线粒体RNA。

4、细胞悬液处理细胞和消化液将放置在分离机中,以速度较快的离心来分离细胞悬液和上清液,获得纯净的细胞悬液,以及细胞内的RNA。

5、病毒筛选针对实验中可能存在的病毒,在RNA提取后期,可以采用专门的病毒筛选技术来检测病毒的存在与否,用以保证实验结果的可靠性。

6、RNA 提取利用加热或冷冻方法来预处理细胞悬液,再加入性质非常活跃的提取试剂,分离出RNA,最后经酶抑制剂处理,即可实现RNA的提取。

7、RNA 质量检测采用实时定量荧光PCR(qPCR)或定量实时荧光 PCR(qRT-PCR)技术,对提取出来的RNA进行质量检测,以确定RNA的质量是否满足后续研究的要求。

8、实验结束实验完成后,将所有的实验用品清洗干净,并完成实验报告记录和记录实验结果,结束实验。

二、RNA 提取方法1、常规方法(1)分离法利用细胞成分的不同溶解度,将细胞内的RNA和DNA分离出来,如甲醇分离法、混合洗涤法、膜过滤法等,然后将DNA除去,即可得到纯化的RNA样品。

(2)磁珠法采用特定的磁珠技术,通过磁场的作用,将RNA结合在磁珠上,然后加入洗涤液,脱除磁珠上的杂质和有害物质,最终得到纯化的RNA样品。

2、新型方法(1)多尺度细胞抗分离法利用细胞的多尺度的抗性,通过不同直径的磁珠把细胞内的RNA 分离出来,可以节约实验时间,并有效提高细胞内RNA的收量、纯度和活性。

(2)膜过滤法采用膜过滤的方法,可以快速准确的将细胞内的RNA纯化,提高RNA的收率,并保护RNA免受外界环境的破坏,为实验提供良好的保护条件。

提取rna的方法

提取rna的方法

提取rna的方法RNA(核酸)是一种由核苷酸构成的高分子,有多种类型,诸如mRNA、rRNA、tRNA等,比较常见的是 mRNA 和 rRNA,是细胞生物学中最重要的两种类型。

提取 RNA 是细胞和分子生物学方面的重要实验步骤,可以用于基因表达和基因组学研究,其重要性不言而喻。

提取 RNA 的方法有很多种,具体而言,包括三种主要类型:一是病理化学的方法,主要是通过破碎细胞,并利用琼脂糖或氯化钠中和病理性酶来抑制除特定 RNA 外的其他核酸类型,从而提取所需的 RNA;二、利用分子生物学的技术,主要是采用逆转录PCR(RT-PCR)技术,利用逆转录酶将 RNA 转化为 DNA,然后扩增 DNA,从而提取 RNA;三、生物学分离技术,主要是利用乙醇分离技术、酰胺衍生法等技术,从样品中提取 RNA。

第一种技术首先需要将细胞分解成一种适合于提取技术的状态,实现这一目标可以使用一种适当的细胞毒性剂和破碎分解剂,以及一系列化学试剂。

病理化学方法试图通过机体的物理过程和化学反应来分离出特定的 RNA,其核心就是中和病理性酶,并使用琼脂糖或氯化钠之类的物质来吸收其他核酸,实现纯化 RNA 的目的。

第二种技术是利用分子生物学技术来提取 RNA,具体步骤是将样品中的 RNA 放入实验室内,利用逆转录酶将其转化为 DNA,再进行 PCR 扩增,利用酶切手段提取所需的RNA。

这种技术易于操作,能够直接提取 RNA,是一个比较好的技术。

最后一种技术是利用生物学分离技术,具体方法有乙醇分离技术和酰胺衍生法等,由于它们有不同的分子量、电荷和氨基酸残基,因此可以使用不同的材料来做抑制,从而提纯出特定的 RNA 前体分子,实现提取特定 RNA 的目的。

rna的提取方法

rna的提取方法

rna的提取方法
1.细胞或组织的采集:采集样品时应尽量避免RNA的降解或污染,可使用RNase-free工具和试剂,避免手套和工作表面受到RNase污染。

2. 细胞或组织的破碎:可使用机械方法、化学方法或冻融法等
方法将细胞或组织破碎,释放RNA。

3. RNA的纯化:RNA的纯化可使用酚/氯仿法、商用RNA纯化试
剂盒等方法。

其中,酚/氯仿法是最常用的RNA纯化方法。

该方法利
用酚将RNA从DNA和蛋白质中分离,然后通过氯仿的密度梯度离心分离出RNA。

4. RNA的质量检测:RNA的纯化后,需要进行质量检测,以确保RNA的完整性和纯度。

可使用紫外线吸收法、琼脂糖凝胶电泳等方法进行检测。

5. RNA的保存:RNA的保存应避免RNA降解,需使用RNase-free 的保存液,如RNAlater等,或在零下80℃的冷冻库中保存。

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rna提取方法及原理 -回复

rna提取方法及原理 -回复

rna提取方法及原理 -回复RNA提取方法及原理引言:RNA(Ribonucleic Acid),核糖核酸,是DNA的姐妹分子,在细胞中具有多种功能,包括催化化学反应和携带遗传信息。

研究RNA的结构和功能对于理解生物学和疾病发生机理至关重要。

而RNA的提取是研究RNA的第一步,本文将介绍RNA提取的方法和原理。

一、总体原则RNA提取的总体原则是要快速、高效地获得高质量的RNA。

在提取过程中,需要注意避免RNA的降解和污染,并且尽量减少DNA和蛋白质的污染。

二、RNA提取方法目前常用的RN A提取方法主要有以下几种:1. 酚/氯仿法(Phenol/Chloroform Extraction):这是最早应用的RNA提取方法之一。

其原理是通过酚酸的溶解作用和氯仿的去除作用来实现R N A的提取。

该方法通常包括细胞裂解、DNA和蛋白质的去除和RNA的沉淀等步骤。

2. 硅胶柱法(Silica Column-based Method):硅胶柱法是一种高效的RNA提取方法,其基本原理是利用硅胶柱中的硅胶微球与RNA的亲和力,将RNA固定在柱上,而去除杂质。

该方法一般包括裂解、去除D NA和蛋白质、加入条件性溶解剂、将样品通过硅胶柱、洗脱RNA等步骤。

3. 磁珠法(Magnetic Bead-based Method):磁珠法利用磁珠颗粒的特性,将RNA通过磁性吸附来分离和提取。

该方法通常包括样品裂解、去除DNA和蛋白质、加入磁珠颗粒、磁珠的洗脱和洗净等步骤。

三、RNA提取方法的原理不同的RNA提取方法有不同的原理,下面将以酚/氯仿法为例进行详细说明。

1. 细胞裂解首先,细胞必须被裂解,以释放RNA。

裂解的方法可以根据样品的特性选择,常用的方法包括刮取法、超声法和酶解法等。

刮取法是指将细胞沉淀刮取到离心管中,然后用细胞裂解缓冲液进行裂解。

超声法是利用超声波的机械能来破坏细胞膜。

酶解法则是通过加入细胞裂解酶来酶解细胞。

RNA提取方法总结

RNA提取方法总结

RNA提取方法总结这篇文章主要讲的是几种常用的RNA提取方法。

1、异硫氰酸胍氯化铯超速离心法原理:使用蛋白质变性剂异硫氰酸胍有效抑制RNA酶的活性,经过起始密度为 1.78g/ml的氯化铯介质,进行密度梯度超速离心,RNA 沉淀于管底,而DNA与蛋白质在上清中。

使用这种方法,不但能得到高质量的RNA,而且能同时分离出细胞染色体DNA.本法对于冷冻时间长、细胞质和细胞核不易分离的组织标本以及富含RNA酶的组织细胞(如胰腺)的RNA提取尤其适合。

此法提取的RNA 的质量好和成功率高,已成为提取哺乳动物细胞RNA的常规方法。

其缺点是操作复杂、流程长,一次提取的样品数量有限。

2、盐酸胍-有机溶剂法本法有MacDonald 1987年在Strohman报道的方法基础上改进而成的,适用于没有超速离心及设备的情况下提取细胞总RNA。

它利用盐酸胍抑制RNA酶,匀浆裂解细胞,有机溶剂抽提去除蛋白质,通过选择性沉淀RNA分子而去除DNA,提取的RNA质量较好,但整个操作过程繁杂费时。

3、氯化锂-尿素法本法首先由Auffray报道,利用高浓度尿素变性蛋白质同时抑制RNA 酶,3mol/L LiCl选择性沉淀RNA。

其缺点是有时会存在DNA污染,LiCl 沉淀RNA会丢失一些小分子量的RNA,如5S RNA等。

优点是快速简捷,尤其适用于大量样品少量组织细胞的RNA提取,其质量可以满足Northern分析,Oligo(dT)提取mRNA,SI核酸酶或RNase保护实验等。

本法每提取107个细胞能提取总RNA约10 g。

4、热酚法本法主要用于少量细胞样品RNA提取,其产量不高,但简单易行。

5、快速提取法本法主要用于培养细胞,通过0.5%SDS裂解细胞,酚抽提去除蛋白质和DNA沉淀,快速纯化RNA。

6、细胞质RNA提取法本法主要适用于培养细胞,首先去除细胞核,然后用蛋白酶K消化蛋白质,酚/氯仿抽提去除蛋白质。

操作简单,同时能进行多个样品操作,多数步骤在室温下进行,提取的RNA质量较高,可满足体外无细胞翻译系统、cDNA合成、引物延伸以及核酸酶SI保护实验。

提rna步骤及原理

提rna步骤及原理

提rna步骤及原理RNA是一种重要的生物大分子,它参与了许多基因表达和调控过程。

研究RNA的结构和功能对于理解生物体内的生物学过程至关重要。

下面将介绍RNA的提取步骤以及其原理。

1. 细胞破碎:首先需要破碎细胞壁,使RNA释放出来。

可以通过机械破碎、酶解或超声波破碎等方法,将待提取的细胞或组织进行处理,使其细胞壁破裂。

2. 蛋白质消化:为了去除细胞中的蛋白质,需要进行蛋白酶处理,将蛋白质分解释放RNA。

常用的蛋白酶有蛋白酶K、蛋白酶ase等。

3. RNA沉淀:利用盐溶液将RNA沉淀下来。

常用的盐溶液有醋酸钠、氯化钠等。

加入盐溶液后,RNA会形成带负电荷的物质,与阳离子结合形成沉淀。

4. RNA纯化:通过将RNA溶解于适当的缓冲液中,并加入醇类或其他试剂,去除干扰物质如DNA、蛋白质和多余的盐等。

这里主要利用了RNA在不同条件下的溶解性差异,从而将RNA纯化。

5. RNA沉淀及洗涤:使用无水乙醚、异丙醇等有机溶剂,将纯化后的RNA沉淀下来。

然后进行洗涤以去除残留的盐和其他杂质。

6. RNA溶解:将RNA沉淀融于适当的溶液中,如去离子水或缓冲液,以便后续实验的进行。

RNA提取的原理主要基于RNA具有独特的化学结构和物理性质。

RNA是由核苷酸组成的,与DNA相似,但其具有URACIL(U)碱基而非胸腺嘧啶(T)碱基。

RNA在细胞内参与转录和翻译过程,是转录过程产生的物质,通过提取RNA可以获得物种特异性的RNA序列,进而进行RNA测序、定量PCR等分子生物学实验。

在RNA提取过程中,细胞破碎、蛋白质消化、RNA沉淀、纯化及溶解等步骤的设计,使得RNA能够被高效地提取出来,并且不受到外界干扰物质的影响,确保获取纯净的RNA样品,用于后续的实验分析。

rna提取方法

rna提取方法

rna提取方法RNA提取方法。

RNA提取是分子生物学研究中的重要步骤,其质量和纯度直接影响后续实验结果的准确性和可靠性。

在进行RNA提取时,我们需要选择合适的提取方法,并严格按照操作规程进行操作,以确保提取到高质量的RNA样品。

本文将介绍常用的RNA提取方法及其操作步骤,希望能对您的实验工作有所帮助。

1. 常用的RNA提取方法。

(1)酚/氯仿法,这是最常用的RNA提取方法之一,通过酚和氯仿的相分离,将RNA从细胞裂解液中提取出来。

该方法操作简单,适用于大多数样品类型,但需要注意的是酚/氯仿对操作者和环境有一定的危害性,需要在安全通风下进行操作。

(2)硅基柱法,该方法利用硅基柱上的硅胶膜吸附RNA,通过洗脱的方式提取RNA。

该方法操作简便,提取效率高,且对DNA和蛋白质有较好的去除效果,适用于高质量RNA的提取。

(3)磁珠法,磁珠法利用磁珠载体对RNA进行特异性结合,通过磁场的作用实现RNA的分离和提取。

该方法操作简单,易于自动化,且对样品量要求较低,适用于高通量样品的提取。

2. RNA提取操作步骤。

(1)样品裂解,将待提取RNA的样品进行裂解,一般使用细胞裂解液或组织裂解液进行细胞破碎,释放RNA。

(2)酚/氯仿提取,将裂解液与酚/氯仿按比例混合,离心分离出上清液中的RNA。

(3)酒精沉淀,向上清液中加入等体积的异丙醇或乙醇,使RNA沉淀出来,再经过洗涤和干燥步骤得到RNA沉淀物。

(4)溶解RNA,用无DEPC的水或TE缓冲液溶解RNA沉淀物,得到可用于后续实验的RNA样品。

3. 注意事项。

(1)操作环境,在进行RNA提取时,需要在RNase-free的环境下进行操作,避免RNA受到RNase的污染。

(2)样品保存,裂解后的样品需要在-80℃的环境下保存,以避免RNA的降解。

(3)避免污染,在操作过程中需要避免外源RNA的污染,使用RNase-free的试剂和耗材,并注意操作规范。

(4)质量检测,提取得到的RNA样品需要进行质量检测,包括浓度、纯度和完整性的检测,以确保提取到高质量的RNA。

rna的提取方法

rna的提取方法

rna的提取方法RNA的提取是从生物样品中获取RNA的过程,这个过程通常包括以下几个步骤:1. 样品收集:根据需求选择生物样品,如细胞、组织、血液等,并采用合适的方法收集。

2. 细胞破碎:通过细胞破碎,将细胞内的RNA释放到溶液中。

破碎方法包括机械破碎、超声波破碎、化学破碎等。

3. RNA分离:分离RNA和其他分子,如DNA、蛋白质等。

4. RNA纯化:将RNA纯化,去除杂质,获得高质量RNA。

纯化方法包括硅胶柱层析、离心管基质层析等。

下面详细介绍三种常用的RNA提取方法:1. 酚-氯仿法这种方法可用于组织和细胞的RNA提取。

首先使用酚将细胞或组织破碎,然后加入等体积的氯仿,混匀,使DNA和蛋白质沉淀于底部,RNA在上层水相中得到富集。

再通过异丙醇沉淀,将RNA分离出来。

最后,通过洗涤和纯化过程,得到高质量RNA。

酚-氯仿法是一种经济、简单和高收率的提取RNA的方法。

2. 硅胶柱纯化法该方法是一种高效、快速且高纯度的RNA提取方法,适用于多样品处理。

该方法使用硅胶柱将RNA分离,并消除DNA和酶的污染。

该方法能够从各种样本中提取高品质RNA,可用于测序、杂交和原位杂交等分子生物学应用。

3. 针头粘贴法这种方法是一种快速简单的RNA提取法,特别适用于某些免疫细胞和细胞样品。

利用针头从样品中取出细胞,将其粘贴在聚丙烯酰胺凝胶上,通过离心将RNA分配到凝胶上。

该方法提取RNA量小,但可以高度升质和纯化的RNA,是一种快速且相对简单的RNA提取方法。

总之,根据不同的实验目的,可选择适用于不同的RNA提取方法。

rna提取方法

rna提取方法

rna提取方法RNA提取方法。

RNA提取是分子生物学研究中的重要步骤,它能够从细胞或组织中分离出RNA,并为后续的实验和分析提供可靠的样本。

在实验室中,有多种方法可以用来提取RNA,每种方法都有其特点和适用范围。

本文将针对常用的RNA提取方法进行介绍和比较,希望能为科研工作者提供一些参考和帮助。

一、酚/氯仿提取法。

酚/氯仿提取法是一种经典的RNA提取方法,它通过酚和氯仿的相分离特性来分离RNA。

首先,细胞或组织样本被加入到酚中,然后加入氯仿和异丙醇,最后进行离心分离。

这种方法简单易行,适用于大多数样本类型,但对RNA的纯度要求较高,且操作过程中需要注意避免RNA的降解。

二、硅基柱法。

硅基柱法是一种基于硅基质的RNA提取方法,它通过硅基柱的亲和吸附作用来富集RNA。

样本经过细胞裂解后,加入硅基柱柱子进行离心,然后通过洗脱步骤得到纯净的RNA。

这种方法操作简便,适用于高通量提取,但对样本量和纯度要求较高。

三、磁珠法。

磁珠法是一种利用磁珠颗粒来富集RNA的提取方法,它具有操作简便、高效快速的特点。

样本经过裂解后,加入磁珠颗粒进行混合,然后通过磁场分离得到RNA。

这种方法适用于多样本处理和自动化操作,但对磁珠颗粒的选择和配比要求较高。

四、酶法。

酶法是一种利用酶来选择性降解DNA而保留RNA的提取方法,它适用于需要高纯度RNA的实验。

通过加入DNA酶和蛋白酶K来去除DNA和蛋白质,最终得到纯净的RNA。

这种方法操作简便,适用于小样本和特定实验要求,但需要注意酶的活性和浓度控制。

五、TRIzol法。

TRIzol法是一种利用TRIzol试剂来提取RNA的方法,它通过酚-醇混合物和氯仿的相分离特性来富集RNA。

样本经过混合后,加入氯仿进行离心分离,最后得到RNA。

这种方法适用于多种样本类型,但需要注意操作过程中的酚和氯仿的使用安全。

综上所述,不同的RNA提取方法各有特点,科研工作者可以根据实验需求和样本特性选择合适的方法。

提取rna的步骤

提取rna的步骤

提取rna的步骤
提取RNA是一项基础实验,在许多分子生物学和遗传学研究中都需要用到。

以下是提取RNA的步骤:
1. 获得样本:样本可以是细胞、组织、血液或其他生物材料。

样本通常需要在提取前保持新鲜或在低温下储存。

2. 细胞破碎:将样本经过机械或化学方法破碎,以释放RNA。

机械方法可以是超声波、震荡器或高压细胞破碎机。

化学方法可以是用各种缓冲液和酶进行细胞裂解。

3. 提取RNA:使用酚-氯仿混合物或商业提取试剂盒等方法,将RNA从细胞裂解物中分离出来。

酚-氯仿混合物可以去除DNA和蛋白质等杂质,同时保留RNA。

4. 去除DNA:使用DNA酶或DNA消化酶将RNA样品中的DNA去除。

5. 纯化RNA:使用酒精沉淀或商业纯化试剂盒等方法,将RNA 分离出来并纯化。

6. 定量RNA:使用分光光度计或荧光分析仪等方法定量RNA。

7. 分析RNA:使用聚合酶链反应(PCR)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Northern blotting或RNA测序等方法分析RNA的表达和功能。

以上是提取RNA的基本步骤,每个步骤都需要严格控制条件以确保得到高质量和纯度的RNA。

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RNA提取方法范文

RNA提取方法范文

RNA提取方法范文一、酚/氯仿法酚/氯仿法是最常用的RNA提取方法之一、该方法利用酚和氯仿两种溶剂的不同密度,能够有效地分离RNA、DNA和蛋白质。

步骤:1.细胞或组织的裂解:将待提取的细胞或组织样品加入含有裂解缓冲液的离心管中,利用离心作用将细胞或组织破碎,释放核酸和蛋白质。

2.加入酚酚:向裂解样品中加入等体积的酚酚,轻轻混合均匀,使细胞成分溶解在酚酚层中。

3.加入氯仿:向上一步得到的混合液中加入等体积的氯仿,轻轻混合均匀,使液体分为上层的酚酚层、中间的DNA和RNA层以及下层的蛋白质层。

4.分离RNA:使用离心将混合液离心,以分离出上层的酚酚层和下层的水相。

此时RNA会留在水相中。

5.沉淀RNA:将水相转移至新的离心管中,加入等体积的异丙醇,静置冷藏30分钟至1小时,以沉淀RNA。

6.洗涤:将RNA沉淀用75%乙醇洗涤至洗脱洁净。

7. 干燥:将洗涤后的RNA干燥或溶于RNase-free水中即可进行后续实验。

二、硅胶柱法硅胶柱法是另一种常用的RNA提取方法,通过硅胶柱和柱洗涤缓冲液的结合,可将RNA与其他杂质有效分离。

步骤:1.细胞或组织的裂解:与酚/氯仿法相同。

2.加入酚酚:与酚/氯仿法相同。

3.加入硅胶柱:将混合液转移到硅胶柱上,使RNA和DNA结合在硅胶柱上,其他组分通过柱下滤液排除。

4.柱洗涤:使用柱洗涤缓冲液多次洗涤硅胶柱,以除去残留的DNA和其他杂质。

5. 洗脱RNA:将洗涤液从柱子中移除,加入洗脱液(如RNase-free 水),静置或离心,以洗脱RNA。

6.干燥:与酚/氯仿法相同。

三、自动化RNA提取系统为提高RNA提取的效率和准确性,许多实验室使用自动化RNA提取系统,如磁珠提取仪或液体处理工作站。

这些系统能够自动完成RNA提取的各个步骤,并且可以进行高通量的RNA提取。

自动化RNA提取系统的优点在于其高度自动化、高效率、高通量和稳定性。

但是,与传统方法相比,它的成本较高,设备和试剂的采购费用较高。

rna提取方法

rna提取方法

rna提取方法RNA提取方法。

RNA提取是分子生物学研究中的重要步骤,它能够从细胞或组织中提取出RNA,为后续的实验分析和研究奠定基础。

本文将介绍几种常用的RNA提取方法,希望能够为实验工作者提供一些参考和帮助。

1. Trizol法。

Trizol法是一种常用的RNA提取方法,它利用Trizol试剂将细胞或组织中的RNA溶解,然后通过酚-氯仿提取的方式分离RNA。

该方法操作简单,提取效果好,适用于各种类型的样品。

但需要注意的是,在操作过程中要避免RNA的降解,尽量减少搅拌和离心的时间,以保证提取的RNA质量。

2. 氯仿-异丙醇法。

氯仿-异丙醇法是另一种常用的RNA提取方法,它通过氯仿和异丙醇的相分离作用,将RNA从其他细胞成分中提取出来。

该方法提取的RNA纯度高,适用于大规模的样品处理。

但需要注意的是,在操作过程中要避免氯仿的挥发和异丙醇的残留,以免对后续实验造成影响。

3. 磁珠法。

磁珠法是近年来发展起来的一种RNA提取方法,它利用表面修饰的磁珠与RNA特异性结合,通过磁场的作用将RNA分离出来。

该方法操作简便,提取效果稳定,适用于高通量的样品处理。

但需要注意的是,在操作过程中要避免磁珠的污染和RNA的降解,以保证提取的RNA质量。

4. 硅胶柱法。

硅胶柱法是一种经典的RNA提取方法,它利用硅胶柱的吸附作用将RNA从细胞或组织中提取出来。

该方法提取的RNA质量好,适用于对RNA纯度要求较高的实验。

但需要注意的是,在操作过程中要避免硅胶柱的交叉污染和RNA的降解,以保证提取的RNA质量。

总结。

以上介绍了几种常用的RNA提取方法,每种方法都有其特点和适用范围。

在选择合适的RNA提取方法时,需要根据样品的特性和实验的要求进行综合考虑。

同时,在操作过程中要严格控制各项操作条件,以保证提取的RNA质量。

希望本文能够对实验工作者有所帮助,谢谢阅读!。

RNA提取方法范文

RNA提取方法范文

RNA提取方法范文一、酚酸法酚酸法是最常用的RNA提取方法之一,它可以从多种生物样本中提取RNA。

这个方法的基本步骤如下:1.新鲜采集生物样本,并迅速将其转移到离心管中。

2.加入三倍体积的酸性酚:酚氯仿(5:1)溶液,对细胞进行破碎和溶解。

破碎细胞过程也可以用高压破碎机或超声波破碎器进行。

3.加入等体积的氯仿,并混匀离心。

4.收集上清液,使用等体积的异丙醇沉淀RNA。

5. 用70%乙醇洗涤RNA沉淀物,离心沉淀后空干,最后用RNase-free水重溶。

二、硅胶柱法硅胶柱法是一种基于硅胶材料的RNA提取方法,可以高效地纯化RNA。

它的基本步骤如下:1.用碱性裂解液将细胞或组织破碎,破坏蛋白质酶和其他核酸酶的活性。

2.加入等体积的酚氯仿提取混合物中的细胞碎片和其他凝固物。

3.加入等体积的异丙醇沉淀RNA。

4.将RNA沉淀物洗涤并去除DNA污染物。

5.将RNA反复吸附到硅胶柱上,去除杂质。

6.用低盐溶液洗涤硅胶柱,去除剩余的杂质。

7.用高盐洗脱RNA,收集纯化的RNA。

三、磁珠法磁珠法是一种通过磁珠将RNA与其他核酸或杂质分离的方法,它的基本步骤如下:1.用碱性裂解液将细胞或组织破碎,破坏蛋白质酶和其他核酸酶的活性。

2.加入等体积的异丙醇沉淀RNA。

3.将沉淀物沉淀,并洗涤去除DNA和其他杂质。

4.加入磁性磁珠,使其结合RNA。

5.使用磁性架将磁珠捕获,并洗涤去除杂质。

6.重新悬浮磁珠,将RNA从磁珠上洗脱。

7. 收集洗脱的RNA,用RNase-free水重溶。

需要注意的是,在RNA提取过程中应该尽量避免RNA降解和污染。

为了保证RNA的完整性和纯度,可以在提取过程中使用RNase酶抑制剂、做好境外灭菌的操作以及选择合适的材料和试剂。

综上所述,RNA提取方法有多种选择,每种方法都有其特点和适用范围。

选择适合的RNA提取方法对于分子生物学研究和基因表达分析的准确性至关重要。

RNA的提取方法

RNA的提取方法

RNA的提取方法RNA提取是一项关键的实验技术,用于从生物样本中分离和纯化RNA分子。

RNA的提取方法通常包括细胞破碎、RNA的溶解和纯化。

以下是几种常见的RNA提取方法:1.酚/氯仿提取法这是一种常见且经典的RNA提取方法。

首先将样品中的细胞进行破碎,然后将细胞裂解液与等体积的酚混合,并进行振荡离心。

酚可与蛋白质结合形成上清和有机相,而RNA会在有机相中沉淀。

接下来,用氯仿去除DNA等杂质,然后将上清转移到新离心管并加入异丙醇,以沉淀RNA。

最后,通过离心将RNA沉淀物收集并洗涤,最终得到纯化的RNA。

2.硅基膜或硅树脂提取法这是一种使用硅基膜或硅树脂来纯化RNA的高效方法。

在这种方法中,首先通过物理或化学方法破坏细胞膜,然后在硅基膜或硅树脂的表面上固定RNA。

接下来,通过对固定RNA进行洗涤和去除杂质的步骤,最终得到纯化的RNA。

3.列柱纯化法这是一种使用RNA捕获柱或硅膜柱等纯化RNA的方法。

在这种方法中,首先将裂解的细胞滤液加入到柱上,并经过多次洗涤,以去除杂质。

然后,通过改变柱的条件,如pH、盐浓度等,使RNA释放出来并收集。

这种方法具有高纯度、高通量和可自动化的优点。

4.磁珠提取法磁珠提取法是一种快速、高效的RNA提取方法。

在这种方法中,首先将裂解的细胞滤液与具有亲和性RNA结合能力的磁珠混合,并经过洗涤步骤去除杂质。

然后,通过改变磁场的条件,使磁珠内的RNA释放并收集。

这种方法适用于高通量的RNA提取,具有高产率和高纯度。

5.TRIZOL法TRIZOL法是一种常用的综合性RNA提取方法。

在这种方法中,样品中的细胞先与TRIZOL试剂混合,然后加入氯仿使得细胞的核酸沉淀。

接下来,将上清转移至新的离心管中,并加入异丙醇使得RNA沉淀。

最后,通过洗涤和离心将RNA沉淀物收集并纯化。

需要注意的是,不同的RNA提取方法适用于不同类型的样本和实验需求。

选择合适的RNA提取方法对于后续实验的成功与结果的准确性至关重要。

RNA的提取方法

RNA的提取方法

RNA 的提取( TRIzol 法)TRIzol 试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA 。

TRIzol 试剂有多组分分离作用,与其他方法如硫氰酸胍 / 酚法、酚 /SDS 法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比,最大特点就是可同时分离一个样品的 RNA/DNA/ 蛋白质。

TRIzol 使样品匀浆化,细胞裂解,溶解细胞内含物,同时因含有 RNase 抑制剂可保持RNA 的完整性。

在加入氯仿离心后,溶液分为水相和有机相,RNA 在水相中。

取出水相用异丙醇沉淀可回收RNA ,用乙醇沉淀中间层可回收DNA ,用异丙醇沉淀有机相可回收蛋白质。

TRIzol 试剂可用于小量样品( 50-100mg 组织)也适用于大量样品(≥1g 组织)。

可同时处理大量不同样品,整个提取过程在一个小时内即可完成。

分离的总RNA 无蛋白质和 DNA 污染,可用于 Northern Blot , dot blot ,ployA 筛选,体外翻译, RNase保护分析和分子克隆。

在用于RT-PCR 时如果两条引物存在于一个单一外显子内,建议用无RNase 的DNaseⅠ处理RNA 样品,避免出现假阳性。

共纯化的DNA 可用作标准,比较不同样品RNA 的得率,也可用于 PCR 和酶切。

蛋白质可用于 Western Blotting。

规格: 100mL 黄色透明液体,储存条件:2-8℃避光保存 12 个月,注意:请勿直接接触皮肤或吞咽,以免灼伤。

如接触皮肤应立即用洗涤剂和大量水冲洗,乙醇会加重灼伤程度。

1、预防 RNase 污染注意事项(1)经常更换新手套,皮肤上常带有的细菌、霉菌可能成为RNase的来源。

(2)使用灭过菌的 RNA 专用塑料制品避免交叉污染。

(3)RNA 在TRIzol 试剂中不会被RNase污染,但提取后继续处理过程中应使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。

玻璃器皿可在 150℃烘烤 4 小时,塑料制品可在 0.5M NaOH 中浸泡 10min,然后用水彻底清洗,高温灭菌。

RNA提取的原理与方法

RNA提取的原理与方法

RNA提取的原理与方法1.细胞破碎:首先需要使细胞破碎,使RNA暴露在细胞外部。

这可以通过物理方法(如振荡器、超声波处理)或化学方法(如细胞裂解缓冲液的使用)来实现。

2. RNA稳定性保护:细胞破碎后,RNA容易被内源性核酸酶降解,因此需要加入RNase抑制剂来保护RNA的完整性。

3.蛋白质沉淀:为了去除DNA和蛋白质,可以加入蛋白酶K或其他蛋白质沉淀剂,如氯酸酚、酚/氯仿等,将蛋白质沉淀下来。

4.RNA纯化:在RNA与其他杂质分子被蛋白酶沉淀下来后,可以通过酚/氯仿法、硅胶膜法、离心柱法等方法纯化RNA。

其中最常用的方法是酚/氯仿法,利用RNA在酚相上溶解度较高、而DNA和蛋白质在水相上溶解度较高的差异来实现RNA的纯化。

5.RNA沉淀:将纯化后的RNA通过加入适量的醋酸乙酯或异丙醇进行沉淀,将RNA沉淀下来。

6. RNA溶解:将RNA沉淀物重悬于适当的缓冲液中,如RNase-free水或核酸稀释缓冲液。

1.酚/氯仿法:酚/氯仿法是一种经典的RNA提取方法,通过利用RNA、DNA和蛋白质在酚相和水相之间的差异来分离纯化RNA。

该方法简单易行,适用于大多数生物样本。

2.硅胶膜法:硅胶膜法是一种基于RNA与硅胶膜之间的亲和性质,将RNA结合在硅胶膜上,通过洗脱来纯化RNA。

该方法适用于RNA的小样本量提取,纯化效果较好,但操作较为复杂。

3.离心柱法:离心柱法是一种快速、方便的RNA提取方法,它基于在离心柱内含有离心柱膜,通过对样品进行破碎和混合,RNA能够在膜上固定,去除DNA和蛋白质等杂质。

该方法适用于多样本高通量分析。

4.磁珠法:磁珠法利用了具有特定亲和性的磁珠与RNA的结合来纯化RNA。

该方法高度自动化,适用于高通量分析,但对特定仪器设备的需求较高。

在进行RNA提取时,需要注意以下几点:1.细胞破碎后,尽快进行RNA提取,以避免RNA的降解。

2. 使用无RNase的试剂和消毒工具,以防止RNase的污染。

RNA的提取方法

RNA的提取方法

RNA的提取方法RNA提取是生物学中一项非常重要的实验技术,它可以用于研究RNA在生物体内的表达以及功能调控。

RNA提取的方法有多种,下面将介绍一些常用的RNA提取方法。

1.总RNA提取:总RNA提取是最常用的RNA提取方法之一,它可以提取细胞或组织中的所有RNA种类,包括mRNA、rRNA和tRNA等。

总RNA提取的步骤包括细胞或组织的裂解、蛋白酶处理、RNA溶液的提取和纯化等。

提取时可以使用商业化的总RNA提取试剂盒,也可以自制试剂进行提取。

2.mRNA提取:mRNA是总RNA中占比相对较小的一部分,它包含了大部分的转录信息。

mRNA的提取主要是通过使用寡聚dT寡核苷酸的亲和浸润材料,富集含有poly(A)尾的RNA分子。

提取步骤包括细胞裂解、磁珠富集和纯化等。

3. miRNA提取:miRNA是一类长度较短的非编码RNA,具有多种生物学功能。

miRNA的提取相对较为复杂,步骤包括细胞裂解、蛋白酶处理、有机溶剂萃取、硅胶膜纯化和乙酸乙酯沉淀等。

商业化的miRNA提取试剂盒则简化了这一过程。

4.胚胎RNA提取:胚胎RNA提取主要适用于研究早期胚胎发育过程中的基因表达变化。

提取步骤包括选择合适的胚胎发育阶段、胚胎裂解、RNA的提取和纯化等。

在这个过程中,需要注意减少RNA的降解,因为胚胎RNA含有RNA酶。

5.组织RNA提取:组织RNA提取是为了研究不同组织中特定基因的表达差异。

提取组织RNA的步骤包括组织的裂解、蛋白酶处理、RNA的提取和纯化等。

组织RNA的含量通常较少,需要采取额外的措施来提高RNA的得率。

6.体液RNA提取:体液RNA的提取用于研究循环系统或分泌系统中的RNA信息。

体液RNA的提取步骤包括样本的离心、细胞裂解、RNA的提取和纯化等。

一般情况下,体液RNA的浓度较低,因此需要使用高敏感的RNA提取方法。

总的来说,RNA提取是RNA研究的基础,根据不同的研究目的和样本类型选择合适的RNA提取方法非常重要。

提取rna有哪些方法

提取rna有哪些方法

提取rna有哪些方法
提取RNA的方法有以下几种:
1. 酚/氯仿提取法:加入酚溶液和氯仿,使细胞裂解,并使RNA萃取至有机相中。

然后使用异丙醇和盐沉淀RNA,最后用乙醇洗涤和脱水。

2. 链霉亲和纯化法:利用链霉素结合特定序列(例如poly A序列)的能力,通过链霉素磁珠或石蜡树脂来纯化多聚A尾的mRNA。

3. 柱层析法:使用离子交换柱、凝胶层析柱或亲和层析柱(例如,根据RNA与硅胶柱或根据RNA酶的抗体选择性地结合)来分离和纯化RNA。

4. 总RNA提取法:将细胞或组织裂解,使用一种提取试剂(如TRIzol试剂)来提取总RNA。

总RNA中包含mRNA、rRNA和tRNA等各种类型的RNA。

5. 过滤提取法:通过使用尺寸排除膜或滤波器来去除细胞碎片和DNA,然后使用过滤盘或纤维膜纯化RNA。

需要根据实验需求和样品性质选择适合的RNA提取方法。

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3. Total RNA 的提取。 ① 向上述步骤 2 的匀浆裂解液中加入氯仿(RNAiso Plus 的 1/5 体积量),盖紧离心管盖,用手剧烈 振荡 15 秒(氯仿沸点低、易挥发,振荡时应小心离心管盖突然弹开)。待溶液充分乳化(无分相 现象)后,再室温静置 5 分钟。 ② 12,000 g 4℃离心 15 分钟。 ③ 从离心机中小心取出离心管,此时匀浆液分为三层,即:无色的上清液、中间的白色蛋白层及带 有颜色的下层有机相。吸取上清液转移至另一新的离心管中(切忌吸出白色中间层)。 ④ 向上清中加入等体积的异丙醇,上下颠倒离心管充分混匀后,在 15~30℃下静置 10 分钟。 ⑤ 12,000 g 4℃离心 10 分钟。一般在离心后,试管底部会出现沉淀。 -2-
图 1.动物组织 RNA 提取结果电泳图
2. 从植物组织中提取 Total RNA。 使用本试剂盒从马铃薯块根、香菇子实体、烟草叶片、水稻叶片、芒果果实、花生果实等组织中提取 了 Total RNA,电泳结果见图 2。
1 2 3 4 5 6 M1
1% Agarose 凝胶电泳图 M1:DL2,000 DNA Marker 1:马铃薯块根 2:香菇子实体 3:烟草叶片 4:水稻叶片 5:芒果果实 6:花生果实
● 制品组成
RNAiso Plus*
100 ml
* RNAiso Plus 中含有强变性剂,应避免与皮肤、衣物等接触。若不小心接触到眼睛或皮肤时,请 立即到医院进行处理。
【试剂盒之外所需准备试剂】 ◆ 氯仿 ◆ 异丙醇 ◆ 75%乙醇(DEPC 处理水配制) ◆ RNase-free 水(制备方法:使用 RNase-free 的玻璃瓶,向超纯水中加入 DEPC 至终浓度 0. 1%
2. 有关 RNA 的吸光度说明如下: 260nm、320nm、230nm、280nm下的吸光度分别代表了核酸、背景(溶液浑浊度)、盐浓度和蛋白质 等有机物的吸光度值。OD 260 /OD 280 (R)体现了RNA中的蛋白质等有机物的污染程度,质量较好的 RNA的R值应在 1.8~2.2 之间,当R<1.8 时,溶液中的蛋白质等有机物的污染比较明显;当R> 2.2 时, 说明RNA已经被水解成了单核苷酸。 在对核酸进行吸光度检测时,需要注意稀释液应使用 TE Buffer。
RNAiso Plus 具有以下特性: 1. 广谱性强。可以从动物组织、植物材料、各种微生物、培养细胞等中提取 Total RNA。 2. 纯度俱佳。提取的 Total RNA 纯度高,基本不含蛋白质及基因组 DNA,可以直接用于 Northern 杂交、
斑点杂交、mRNA 纯化、体外翻译、RNA 分解酶的。实验操作快速方便,整个操作在一小时内便可完成。 4. 颜色鲜明。加入氯仿离心后,会形成无色的上清层和鲜红色的下层(有机层)。
1% Agarose 凝胶电泳图 M1:DL2,000 DNA Marker 1:HL-60 细胞 2:HT293 细胞 3:CHO-K1 细胞 4:Hela 细胞 5:香菇培养菌丝 6:酵母培养细胞 7:E.coli JM109 细胞
图 4.各种培养细胞 RNA 提取结果电泳图
● Troubleshooting
【使用器具】 尽量使用一次性塑料器皿,若用玻璃器皿,应在使用前按下列方法进行处理。 (1) 用 0.1% DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在 37℃下处理 12 小时。 (2) 然后在 120℃下高压灭菌 30 分钟以除去残留的 DEPC。 RNA 实验用的器具建议专门使用,不要用于其它实验。
【试剂配制】 用于 RNA 实验的试剂,须使用干热灭菌(180℃,60 分钟)或使用上述方法进行 DEPC 水处理灭菌后的 玻璃容器盛装(也可以使用 RNA 实验用的一次性塑料容器),使用的无菌水须用 0.1%的 DEPC 处理后再 进行高温高压灭菌。 RNA 实验用的试剂和无菌水都应专用,避免混用后交叉污染。
4. RNA 沉淀的清洗。 小心弃去上清,缓慢地沿离心管壁加入 75%的乙醇 l ml(切勿触及沉淀),轻轻上下颠倒洗涤离心管管 壁,12,000 g 4℃离心 5 分钟后小心弃去乙醇(为了更好地控制 RNA 中的盐离子含量,应尽量除净乙 醇)。
5. RNA 的溶解。 室温干燥沉淀 2~5 分钟(不可以离心或加热干燥,否则 RNA 将会很难溶解,有关 RNA 溶解可以参 考 Troubleshooting 中的相关说明),加入适量的 RNase-free 水溶解沉淀,必要时可用移液枪轻轻吹 打沉淀,待 RNA 沉淀完全溶解后于-80℃保存。
● RNA 提取操作流程简图
适量的动植物组织或培养细胞 加入适量的 RNAiso Plus 后匀浆
室温静置 5 分钟 12,000 g 4℃离心 5 分钟, 上清转移至新的 1.5 ml tube 中
加入 1/5 RNAiso Plus 体积量的氯仿 振荡混匀
室温静置 5 分钟 12,000 g 4℃离心 15 分钟
图 3.全血 RNA 提取结果电泳图 -4-
4. 从培养细胞中提取 Total RNA。 使用本试剂盒从 HL-60 细胞、HT293 细胞、CHO-K1 细胞、Hela 细胞、香菇培养菌丝、酵母培养细 胞、E.coli JM109 细胞等培养细胞中提取了 Total RNA,电泳结果见图 4。
M1 1 2 3 4 5 6 7
M1 1 2 3 4 5 6 7 8
1% Agarose 凝胶电泳图 M1:DL2,000 DNA Marker 1:Rat Liver 2:Rat Heart 3:Rat Brain 4:Rat Spleen 5:Rat Kidney 6:Rat Small Intestine 7:Rat Skeletal 8:Rat Pancreas
将上清液转移至新的离心管中 加入与上清液等体积的异丙醇
室温静置 10 分钟 12,000 g 4℃离心 10 分钟
向沉淀中加入 1 ml 的 75%乙醇清洗沉淀 12,000 g 4℃离心 5 分钟
弃上清保留沉淀 干燥
溶解于适量的 DEPC 处理水中
-3-
● 实验例
1. 从动物组织中提取 Total RNA。 使用本试剂盒从大鼠肝脏、心脏、脑、脾、肾、小肠、骨骼肌、胰腺等组织中提取了 Total RNA,电 泳结果见图 1。
(v/v),过夜搅拌后,高温高压灭菌。)
● 保存和运输
1. 可以在室温下保存,建议在 2-8℃下避光保存,效果更佳。 2. 可以在常温下运输。
● RNA 提取实验前的准备
RNA 制备的关键是要抑制细胞中的 RNA 分解酶和防止所用器具及试剂中的 RNA 分解酶的污染。因此, 在实验中必须采取以下措施:戴一次性干净手套;使用 RNA 操作专用实验台;在操作过程中避免讲话等 等。通过以上办法可以防止实验者的汗液、唾液中的 RNA 分解酶的污染。
RNAiso Plus使用量(ml) 1
1~2 2 2 1 2 1
2. 实验样品的研磨和匀浆。 A. 贴壁培养细胞
① 倒出培养液,用 1×PBS 清洗一次。 ② 每 10 cm2生长的培养细胞中加入 1 ml的RNAiso Plus,水平放置片刻,使裂解液均匀分布于细胞
表面并裂解细胞,然后使用移液枪吹打细胞使其脱落(对于贴壁牢固的培养细胞可用细胞刮勺剥 离细胞)。 ③ 将内含细胞的裂解液转移至离心管中,用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀。 ④ 室温静置 5 分钟。 B. 悬浮培养细胞 ① 将悬浮培养细胞连同培养液一起倒入离心管中,8,000 g 4℃离心 2 分钟,弃上清。 ② 向每 107个细胞中加入l~2 ml的RNAiso Plus。 ③ 用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀。 ④ 室温静置 5 分钟。 C. 动物组织、植物材料样品 ① 将超低温冻结的 RNA 提取样品称量后迅速转移至用液氮预冷的研钵中,用研杵研磨组织,其间 不断加入液氮,直至研磨成粉末状(无明显的可见颗粒,如果没有研磨彻底会影响 RNA 的收率 和质量)。 ② 对于普通的 RNA 提取样品,可以向研钵中加入适量的 RNAiso Plus,将研磨成粉末状的样品完全 覆盖,然后室温静置,直至样品完全融化,再用研杵继续研磨至裂解液呈透明状。 对于特殊样品,如肝、脾、骨及软骨等,可以将研磨成粉末状的样品加入到含有适量的 RNAiso Plus 的匀浆管中,把匀浆管置于冰浴中进行匀浆,直至匀浆液呈无颗粒透明状。 ③ 将匀浆液转移至离心管中,室温静置 5 分钟。 ④ 12,000 g 4℃离心 5 分钟。 ⑤ 小心吸取上清液,移入新的离心管中(结果电泳图
3. 从全血中直接提取 Total RNA。 从全血中提取 RNA,通常需要分离白细胞,而使用 1 ml 本试剂可以直接从 100 μl 全血中提取 Total RNA,电泳结果见图 3。
M1 1 2
1% Agarose 凝胶电泳图 M1:DL2,000 DNA Marker 1:-80℃保存的全血样品 2:新鲜的全血样品
页码
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注意事项
本制品中含有苯酚,具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、 吞食等会中毒、导致灼伤以及其他身体伤害。使用本制品时应穿戴防护 物品,如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛时, 应立即用大量的水冲洗以及前往医院治疗;接触到皮肤时,应立即用大 量的聚乙二醇 400(Polyethylene glycol 400)冲洗,严重时请前往医院 治疗;使用本制品后感觉不舒服时请前往医院治疗。
1. 一般情况下的组织或细胞中所能提取的 RNA 量如下表:
组织材料 血
白细胞 肝脏 HL-60培养细胞 烟草叶片 肾脏 骨骼肌

起始样品量 1 ml
1×107个 1g
1×107个 1g 1g 1g 1g
Total RNA提取量 15~20 μg
约20~40 μg 约5,000 μg 约100 μg 约1,000 μg 约3,000 μg 约1,500 μg 约1,500 μg
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