H9c2细胞培养方法

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《参芪益心方对H9C2心肌细胞能量代谢的影响及机制研究》

《参芪益心方对H9C2心肌细胞能量代谢的影响及机制研究》一、引言心肌细胞能量代谢是维持心脏正常功能的关键过程，对心肌细胞的健康与功能具有重要影响。

近年来，随着对中药研究的深入，越来越多的研究者开始关注传统中药方剂对心肌细胞能量代谢的调节作用。

参芪益心方作为一种经典的中药复方，被认为具有调节心肌细胞能量代谢、改善心脏功能的潜力。

本文旨在研究参芪益心方对H9C2心肌细胞能量代谢的影响及其作用机制，为临床应用提供理论依据。

二、材料与方法1. 材料（1）细胞：H9C2心肌细胞系。

（2）药物：参芪益心方（由人参、黄芪等中药组成）。

（3）实验仪器与试剂：细胞培养板、酶标仪、荧光定量PCR仪、Western blot相关试剂等。

2. 方法（1）细胞培养与处理：将H9C2心肌细胞培养于适宜的培养基中，分为对照组与实验组，实验组加入不同浓度的参芪益心方处理。

（2）能量代谢指标检测：通过酶标法检测ATP含量、乳酸脱氢酶活性等指标，评估心肌细胞能量代谢水平。

（3）基因表达分析：采用荧光定量PCR技术检测相关基因的表达情况。

（4）蛋白质表达分析：利用Western blot技术检测关键蛋白的表达水平。

（5）数据分析与统计：采用SPSS软件进行数据分析，结果以均数±标准差表示，组间比较采用t检验或方差分析。

三、结果1. 参芪益心方对H9C2心肌细胞能量代谢的影响实验结果显示，参芪益心方处理后，H9C2心肌细胞的ATP 含量显著提高，乳酸脱氢酶活性降低，表明参芪益心方能够改善心肌细胞的能量代谢水平。

2. 参芪益心方对相关基因表达的影响通过荧光定量PCR技术检测发现，参芪益心方处理后，与能量代谢相关的基因表达水平发生明显变化，如线粒体相关基因、糖酵解相关基因等表达上调。

3. 参芪益心方对关键蛋白表达的影响Western blot结果显示，参芪益心方处理后，与能量代谢相关的关键蛋白表达水平发生改变，如AMPK、mTOR等蛋白的表达水平发生变化。

铁死亡抑制剂预培养的大鼠心肌细胞抵抗素诱导后细胞肥大程度及铁死亡相关蛋白表达观察

铁死亡抑制剂预培养的大鼠心肌细胞抵抗素诱导后细胞肥大程度及铁死亡相关蛋白表达观察朱贲贲1，2，海日汗3，王巍嵩4，杨鹏杰5，61 内蒙古自治区肿瘤医院药剂科，呼和浩特010020；2 内蒙古医科大学附属人民医院药剂科；3 内蒙古医科大学麻醉系；4 内蒙古医科大学附属医院药学部；5 内蒙古自治区肿瘤医院胸外科；6 内蒙古医科大学附属人民医院胸外科摘要：目的　观察铁死亡抑制剂Fer -1预培养的大鼠心肌细胞系H9c2抵抗素诱导后细胞肥大程度及铁死亡相关蛋白的表达情况。

方法　将H9c2细胞饥饿培养16 h ，随机分为1、2、3、4组。

1组用含1 μmmol /L 的Fer -1的培养基培养16 h ，后换为含50 ng /mL 抵抗素的培养基培养32 h ；2组用含1 μmmol /L 的Fer -1培养基培养16 h ，后换为0.1% FBS 培养基培养32 h ；3组用含50 ng /mL 抵抗素的培养基培养48 h ；4组（正常对照组）用0.1% FBS 培养基培养48 h 。

取各组细胞，采用Image J 软件测量细胞表面积，采用BCA 法测算单细胞蛋白含量，采用RT -qPCR 法检测心肌细胞肥大相关胚胎基因ANP 、BNP 和β-MHC ；采用WESTERN Blotting 法检测各组铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶 4 （Glutathione Peroxidase 4，GPX4）、酰基辅酶 A 合成酶长链家族成员 4（Acyl -CoA synthetase long -chain fami⁃ly member ，ACSL4）及环氧合酶2（COX2）。

结果　与4组比较，3组H9c2细胞表面积增大，单细胞蛋白含量高，ANF 、BNF 及β-MHC 基因相对表达量高，GPX4蛋白相对表达量低、ACSL4及COX2蛋白相对表达量高（P 均 <0.05）。

与3组相比，1组细胞表面积小，单细胞蛋白含量低，ANF 、BNF 及β-MHC 基因相对表达量低（P 均 <0.05）；与3组相比，1组细胞GPX4蛋白相对表达量高、ACSL4及COX2蛋白相对表达量低（P 均 <0.05）。

利拉鲁肽通过调控自噬和Na+,K+-ATPase活

网络出版时间：２０２２－１２－０９１８：２４：０６　网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／／３４．１０８６．Ｒ．２０２２１２０９．１４２７．０１１．ｈｔｍｌ利拉鲁肽通过调控自噬和Ｎａ＋，Ｋ＋ＡＴＰａｓｅ活性抑制高糖诱导的心肌细胞肥大张　哲１，野战鹰２，王　杏１，杨林泉１，马慧娟１（河北省人民医院１．代谢病重点实验室、２．神经外三科，河北石家庄　０５００５１）收稿日期：２０２２－０８－０７，修回日期：２０２２－１０－１８基金项目：国家自然科学基金青年基金资助项目（Ｎｏ８１２００６３８）；河北省卫生厅基金资助项目（Ｎｏ２０１８００５１）作者简介：张　哲（１９８０－），女，博士，助理研究员，研究方向：糖尿病及代谢疾病，Ｅｍａｉｌ：ｚｈｅ＿ｚｈａｎｇ８０＠１２６．ｃｏｍ；马慧娟（１９７６－），女，教授，博士生导师，研究方向：糖尿病及代谢疾病，通信作者，Ｅｍａｉｌ：ｈｕｉｊｕａｎｍａ７６＠１６３．ｃｏｍｄｏｉ：１０．１２３６０／ＣＰＢ２０２２０１０１７文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２３）０１－００４３－０８中国图书分类号：Ｒ３３２；Ｒ３２９２４；Ｒ３２９４１１；Ｒ３９４２；Ｒ５８７１；Ｒ９７７１５摘要：目的　探讨利拉鲁肽（ｌｉｒａｇｌｕｔｉｄｅ，ＬＲＧ）抑制高糖（ＨＧ）诱导的心肌细胞肥大的可能机制。

方法　体外培养Ｈ９ｃ２细胞，分为对照（ＣＯＮ）组、ＨＧ组、低、中、高剂量ＬＲＧ（ＬＲＧＬ、ＬＲＧＭ、ＬＲＧＨ）组、ＬＲＧＨ＋自噬抑制剂３甲基腺嘌呤（３ＭＡ）组。

鬼笔环肽染色观察细胞表面积；试剂盒测定细胞膜Ｎａ＋，Ｋ＋ＡＴＰａｓｅ（ＮＫＡ）活性；ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ测定ＮＫＡα１、ＮＫＡα２ｍＲＮＡ和蛋白表达；单丹磺胺戊二胺（ＭＤＣ）荧光染色观察自噬囊泡数量；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ测定肥大标志基因（ＡＮＰ、β ＭＨＣ）、自噬标志基因（Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３、ｐ６２）蛋白表达。

利用低氧／厌氧工作站建立H9c2细胞缺氧复氧模型的探讨

利用低氧／厌氧工作站建立H9c2细胞缺氧复氧模型的探讨储倩雯;李伟秋;鲁诗史;黄丹梅;张艳美【摘要】目的：利用低氧／厌氧工作站，结合不同的缺氧条件，探讨建立H9c2细胞缺氧复氧（hypoxia／reoxygenation， H／R）模型的最佳方法。

方法缺氧时将H9c2细胞置于低氧／厌氧工作站中，分别以完全培养基，无糖培养基和酸性缺氧液培养1、2、4、6、8 h，缺氧后换用完全培养基于培养箱中按常规条件培养1 h。

流式细胞仪测定细胞内活性氧（ reactive oxygen species ，ROS）含量，噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法检测细胞生存率，倒置显微镜下观察H9c2细胞形态变化。

结果与对照组比较，缺氧时以完全培养基和无糖培养基处理的H9c2细胞H／R后，细胞内ROS含量和细胞存活率随缺氧时间延长无明显改变，且倒置显微镜下未观察到明显的形态变化。

缺氧时以酸性缺氧液处理的H9c2细胞，随H／R时程的延长，细胞内ROS含量不断增加（P＜0.01），且细胞存活率逐渐降低（P＜0.01），倒置显微镜下观察到细胞H砄1 h／R：1 h后开始出现部分细胞皱缩，少量坏死细胞漂浮，随时间延长损伤加重；缺氧8h后，细胞皱缩成圆形，大量坏死细胞漂浮，复氧1h后可见细胞膜表面不平滑，复氧液中仍有少量坏死细胞漂浮。

结论采用低氧／厌氧工作站，并结合酸性缺氧液，可成功建立重现性非常好的H9 c2细胞H／R模型。

%Objective To investigate optimal method of establishing hypoxia/reoxygenation(H/R) model ofH9c2 cell by using hypoxia/anoxic workstation under different conditionsin hypoxia.Methods H9c2 cell was placed into hypoxia/anoxic workstation and simultaneously cultured with complete medium, glucose-free DMEM and acidic hypoxic solution for 1,2,4,6 and 8 h respectively, and then reoxygenated with complete medium for 1 h in normoxic incubator.Thelevel of ROS was measured by flow cytometry.The cell viability was detected by MTT assay.The cellular morphology was observed by inverted microscope.Results With the extension of cell hypoxia time, there were no significant differences in the ROS level and cell viability in complete medium-and glucose-free DMEM-treated H/R groups compared with control group(P<0.05).There was no obvious morphologic change observed with inverted microscope, either.Nevertheless, when H9c2 cells were treated with acidic hypoxic solution in hypoxia, the ROS level continuously increased and the cell viability decreased with the extension of cell hypoxia time ( P<0.01 ).Since H:1 h/R:1 h, some of the cells shrunk and a few necrotic cells floated in the media under the inverted microscope , and the damage was aggravated with the extension of hypoxia time.After the cells were exposed in hypoxia for 8 h, they wrinkled to be round and a large number of floating necrotic cells were observed.When the cells were reoxygenated for 1 h, the cytomembrane was not smooth and there were still a few necrotic cells floating in culture dish .Conclusion The H9c2 cell H/R model with good repeatability can be established successfully by using hypoxia/anoxic workstation combining with acidic hypoxic solution.【期刊名称】《中国生化药物杂志》【年(卷),期】2015(000)011【总页数】4页(P11-14)【关键词】低氧/厌氧工作站;H9 c2细胞;缺氧复氧模型【作者】储倩雯;李伟秋;鲁诗史;黄丹梅;张艳美【作者单位】汕头大学医学院药理教研室，广东汕头 515041;汕头大学医学院分析细胞实验室，广东汕头 515041;汕头大学医学院第一附属医院药剂科，广东汕头 515041;汕头大学医学院药理教研室，广东汕头 515041;汕头大学医学院药理教研室，广东汕头 515041【正文语种】中文【中图分类】R363心肌缺血再灌注(ischemia/reperfusion， I/R)损伤是心脏缺血性疾病和心脏外科手术后常见的一种病理生理现象。

醛固酮的应用

醛固酮的应用摘要：醛固酮(英文：Aldosterone)是一种类固醇类激素(盐皮质激素家族)，主要作用于肾脏，为一种增进肾脏对于离子及水分再吸收作用的一种激素，是调节细胞外液容量和电解质的激素，醛固酮的分泌主要受肾素—血管紧张素调节，即肾的球旁细胞感受血压下降和钠量减少的刺激，分泌肾素增多，肾素作用于血管紧张素原，生成血管紧张素。

血管紧张素可刺激肾上腺皮质球状带合成和分泌醛固酮。

当循环血量减少时，醛固酮的分泌量会增加，使钠和水的重吸收增强，以此维持水盐代谢的平衡。

醛固酮不但对水盐调节起作用，对心律失常及高血压患者的糖代谢、对肝硬化患者的血浆心钠素含量、钙调神经磷酸酶的活化作用都有影响。

关键词：醛固酮、心律失常、糖代谢、血浆心钠素正文：(1)水盐调节醛固酮在调节细胞外液，醛固酮重要的生理功能有赖于通过调控肾上皮钠通道（ENaC）对钠的重吸收，醛固酮的基因组作用方式：醛固酮进入集合管主细胞后，与胞浆内的盐皮质激素受体(mineralocorticoid receptor，MR)结合，形成激素-受体复合体，后者进入细胞核与核中DNA特异性结合位点相互作用，调节特异性mRNA转录，最终合成多种醛固酮诱导蛋白(aldosterone-induced protein, AIP)，使管腔膜(apicalside)ENaC活性增强，基侧膜(basolateral side)钠钾泵的活性增加，从而促进跨上皮细胞的Na＋重吸收。

醛固酮基因组作用的特点是作用起效较慢，作用时间长，对MR阻断剂敏感。

(2)心律失常影响南昌大学内科学硕士在探讨不同浓度醛固酮对H9C2细胞缝隙连接蛋白①（Connexin，Cx）43蛋白及mRNA表达的影响，进一步探讨心律失常的深层机制②的试验中。

利用下述方法：1、应用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养液培养H9C2细胞，随机分为对照组和实验组，实验组用不同浓度(1x10-8mol/L、1x10-6mol/L、1x10-4mol/L)醛固酮处理，对照组用不含胎牛血清的高糖DMEM培养液处理，分别处理24小时。

白藜芦醇可减轻高糖诱导的心肌细胞肥大：基于促进SSIIRRTT1表达维持线粒体稳态

糖尿病心肌病（DCM ）是糖尿病最常见的并发症之一，心肌细胞肥大是DCM 患者心脏主要的病理特征，最终发展为心力衰竭，很大程度上增加了糖尿病患者的死亡风险［1,2］。

高血糖状态下，葡萄糖氧化的增加使心肌细胞线粒体负担过重，导致电子泄漏和活性氧（ROS ）的产生增加，其引起的氧化应激损伤在DCM 心肌肥大的病理变化中发挥关键作用［3］。

心肌细胞是线粒体高度依赖型细胞，维持线粒体稳态是保证线粒体正常功能的重要基础，线粒体稳态失衡可引起心肌细胞ROS 产生增Resveratrol alleviates hyperglycemia-induced cardiomyocyte hypertrophy by maintaining mitochondrial homeostasis via enhancing SIRT1expressionYE Hongwei 1,2,ZHANG Yuming 1,2,YUN Qi 1,2,DU Ruoli 1,2,LI Lu 1,2,LI Yuping 1,2,GAO Qin 1,21Department of Physiology,2Key Laboratory of Basic and Clinical Cardiovascular Diseases,Bengbu Medical University,Bengbu 233000,China摘要：目的探讨白藜芦醇是否通过促进沉默信息调节因子2同源体1（SIRT1）表达调控线粒体稳态，减轻高糖诱导的H9c2心肌细胞肥大。

方法将对数生长的H9c2心肌细胞随机分为4组：正常糖浓度组（NG 组）、高糖组（HG 组）、高糖+白藜芦醇组（HG+RES 组）、高糖+白藜芦醇+SIRT1基因干扰组（HG+RES+si-SIRT1组）。

各组细胞培养72h 后，检测细胞超氧化物歧化酶（SOD ）活力和丙二醛（MDA ）含量，检测细胞活性氧（ROS ）水平，计算细胞相对面积，检测心房利钠因子（ANF ）和脑钠肽（BNP ）mRNA 表达，SIRT1蛋白、线粒体融合相关蛋白视神经萎缩蛋白1（OPA1）和线粒体融合蛋白2（MFN2）、线粒体分裂相关蛋白线粒体动力相关蛋白1（DRP1）和线粒体分裂蛋白1（FIS1）以及线粒体自噬相关蛋白BNIP3L 和LC3的表达。

不同剂量阿霉素对H9C2心肌细胞的影响

不同剂量阿霉素对H9C2心肌细胞的影响发表时间：2018-03-16T13:45:00.170Z 来源：《医师在线》2017年12月下第24期作者：李潇徐繁通讯作者房亮曹向宇姜海军赵博[导读] 对阿霉素的安全用药,尤其显得重要。

本实验研究也为临床上寻找能抑制阿霉素损伤心肌的药物奠定了实验基础。

（河北承德医学院附属医院；河北承德067000）[摘要]目的：研究不同剂量阿霉素对H9C2细胞的影响，为阿霉素临床研究提供参考依据。

方法：将不同浓度多柔比星（1、2、4、6、10ug/ml）与H9C2心肌细胞共培养6、12、24h，观察细胞形态变化，并计算不同作用时间及药物浓度的细胞抑制率。

结果：阿霉素剂量从1-10ug/ml均能抑制心肌细胞活性并呈剂量依赖性。

结论：一定剂量阿霉素对心肌细胞有毒性作用，可致心肌细胞坏死和调往率增加。

[关键词] H9C2心肌细胞阿霉素细胞抑制率Effect of Doxorubicin on H9C2 Myocardial Cells [ABSTRACT]Objective: To study the effect of different doses of doxorubicin on H9C2 cells and to provide a reference for the clinical study of doxorubicin.Methods: Doxorubicin (1, 2, 4, 6，10ug/ml) was co-cultured with H9C2 cardiomyocytes for 6, 12 and 24 hours.The morphological changes of cells were observed and the cytotoxicity rate. Results: Doxorubicin dose-dependently inhibited cardiomyocyte activity from 1 to 10ug/ml. Conclusion: A certain dose of doxorubicin has a toxic effect on cardiomyocytes, resulting in increased myocardial necrosis and transfer rate.[Key words] H9C2 Cardiomyocytes；Adriamycin；Cell inhibition rate 阿霉素( doxorubicin) 是一种广泛用于恶性肿瘤化疗的蒽环类药物，其效果显著。

219415347_二甲双胍对H9C2_心肌细胞肥大的改善作用及其机制

第 49 卷第 3 期2023年 5 月吉林大学学报（医学版）Journal of Jilin University（Medicine Edition）Vol.49 No.3May 2023DOI：10.13481/j.1671‑587X.20230316二甲双胍对H9C2心肌细胞肥大的改善作用及其机制黄德盛1, 赵亚楠1, 陈云1, 孙艺瑶1, 覃伟林1, 刘谋杰2, 谢菊华1（1. 沈阳医学院组织胚胎学教研室，辽宁沈阳110034；2. 中国医科大学附属第一医院心内科，辽宁沈阳110034）［摘要］目的目的：探讨二甲双胍对异丙肾上腺素（ISO）诱导的H9C2心肌细胞肥大的作用，并阐明其可能的分子机制。

方法方法：培养H9C2细胞，采用50 μmol·L－1 ISO干预H9C2细胞建立心肌细胞肥大模型作为ISO组；不予处理的细胞作为对照组。

Western blotting法检测2组H9C2心肌细胞中脑钠肽（BNP）蛋白表达水平。

将H9C2心肌细胞分为对照组、ISO组、ISO+二甲双胍组和二甲双胍组。

采用CCK-8法检测各组H9C2细胞活力，选取二甲双胍的最佳药物干预浓度和时间，采用结晶紫染色观察各组H9C2心肌细胞形态表现和横截面积，采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组细胞中心房钠尿肽（ANP）mRNA表达水平，线粒体荧光探针观察各组细胞中线粒体形态表现，Western blotting法检测各组细胞中线粒体融合标志性蛋白神经萎缩蛋白1（OPA1）和线粒体融合蛋白（MFN）2蛋白表达水平。

结果：与对照组比较，ISO 组H9C2心肌细胞横截面积增加（P<0.05），细胞中BNP蛋白表达水平升高（P<0.05），提示心肌细胞肥大模型造模成功。

CCK-8法检测，2 mmol·L－1 二甲双胍作用8 h时细胞活力恢复效果最佳。

RT-qPCR法检测，与对照组比较，ISO组细胞中ANP mRNA表达水平升高（P<0.05）；与ISO组比较，二甲双胍+ISO组和二甲双胍组细胞中ANP mRNA表达水平降低（P<0.05）。

H9c2细胞培养方法

大鼠心肌细胞H9C2细胞描述：大鼠心肌细胞H9C2是来源于胚胎期BD1X大鼠心脏组织的亚克隆细胞系，表现很多骨骼肌细胞的特性。

当H9c2细胞汇合时，细胞就会融合成多核的肌管并对乙酰胆碱刺激有反应，但该细胞缺少像心肌细胞一样的节律性搏动。

此外，多项生化、电生理指标的检测也表明其具有骨骼肌的很多特点。

由于来源于心脏，H9C2细胞作为心脏成肌细胞也用于心肌疾病的研究。

大鼠心肌细胞H9C2增殖能力取决于细胞取材、培养技术、培养条件等综合因素。

请按照正确的培养方法来解冻、传代，以此保证细胞具备良好的增殖能力，方便您的后继研究顺利进行。

货号规格培养基运输保存C0048 1×106个/管DMEM+10% FBS 干冰运输液氮保存质量控制：本细胞经过了检测，不含有细菌、真菌、病毒（HIV、HBV、HCV）、支原体。

培养条件：37℃，5% CO2，PH值7.2~7.4，无菌恒温培养。

用途：本产品只提供给进一步的科研使用，不可应用于治疗等其他方面。

细胞相关操作（注意：细胞操作都需严格按照无菌操作）收到复苏好的贴壁细胞的处理方法：1. 先从外包装盒拿出细胞瓶，在细胞瓶表面喷一层酒精，并小心去掉封口膜；2. 在显微镜下观察细胞状态，并确定是否染菌，如有染菌，请立即拍照，并将细胞丢掉；3. 将培养瓶置于37°C，5% CO2的无菌培养箱中培养4-6小时；4. 倒掉多余的培养基，留正常体积的培养基；5. 重新将培养瓶置于37°C，5% CO2的无菌培养箱中培养过夜；6. 第二天传代。

收到冻存细胞的处理方法：1.37°C水浴预热培养基；2.从液氮中取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻（解冻后不要继续暖细胞）；3.在超净台中加入5ml培养基重悬细胞，1000rpm离心5min；4.弃上清，加入5ml培养基重悬细胞后转入T25培养瓶中，轻轻晃匀；5.置于37°C，5% CO2培养箱中培养(培养瓶盖没有透气孔的话,瓶盖不要拧太紧)；6.第二天，用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养。

H9C2大鼠胚胎心肌细胞

H9C2 大鼠胚胎心肌细胞
Cat Number：KG444 For Research Use Only
一、组成:
二、客户自备试剂:
1、PBS (凯基货号：KGB5001)
2、Complete growth medium (凯基货号：KGM 12800-500)
3、0.25% （W/V） Trypsin-0.53mM EDTA (凯基货号：KGY0012)
三、细胞简介:
四、常见问题及解决方案: 细胞经过运输后，没有贴壁的细胞，细胞都悬浮。

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。

次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞
活力正常，剩余漂浮的细胞可以离心去掉，留10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

客户收到细胞后请务必仔细阅读细胞注意事项，确保细胞的培养条件一致，如果由于培养条件不一致导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

由于运输的情况，所以极个别细胞会出现不稳定，客户收到细胞后务必第一时间和我们联系，告知细胞具体情况，以便我们技术人员能及时有效的和老师沟通，不胜感谢！。

心肌细胞培养方法详述

心肌细胞培养方法详述配液：Hanks液、低糖DMEM液、高糖DMEM液、胰酶消化液、双抗液、碳酸氢钠液、盐酸液。

取鼠：鼠盆用棉铺好，取鼠。

准备：事先检查显微镜、磁力搅拌器及离心机是否好用，提前三小时把小牛血清、胰酶、抗生素拿出来化开。

其余未冻药品也提前20分钟拿出来缓和一下。

新洁尔灭（0.1％）泡纱布（用10ml5％的新洁尔灭加水至500ml即得），消毒地面（1：500的84液）。

用酒精棉球擦拭台面后把物品摆放好，开紫外线灯照30分钟后开鼓风机吹至实验结束。

物品：白大衣、饭盒小剪子、小镊子（4套）（一套剪皮肤、一套开胸取心，一套剔除心缘纤维组织，一套剪碎心脏）瓶皿（2套）[两个小圆培养皿，培养皿内加DMEM液，先后装取出的心和剔出纤维组织后的心] [一个小烧杯装碘酒和酒精棉球]250ml烧杯3个[一个用于水浴，事先加好水，最好是一或二蒸] [一个装0.1％新洁尔灭150ml左右，消毒小鼠]500ml烧杯1个，用作废液缸。

50ml烧杯3个（剪碎心肌组织，最后配液）三角烧杯（50ml）+小转子（小转子，酒精擦，双蒸水冲后，再把酒精彻底冲掉后用三角烧杯高压）离心管及帽（12-14个），两个试管吸管（5~8个）大镊子（两把，持物，例夹棉球等）台面：磁力搅拌器、纱布（事先用于托盘装0.1％新洁尔灭浸泡）、试管架、泡沫塑料板、五个针头（不用消毒）75％酒精棉球及碘酒（消毒棉球，泡酒精、碘酒）大镊子两把（一把夹棉球，一把取鼠）、3个250ml烧瓶（一个装一蒸水，一个装新洁尔灭，另一为空的备用）1个500ml烧瓶（废液缸）、温度计、PH试纸（事先调PH值）、酒精灯、打火机/火柴、载玻片（5-10个）[用于培养前看接种密度及消化后看细胞密度]、注射器5ml 6个（胰酶、DMEM、小牛血清）1ml 2个（双抗液）20ml备用2个、微量加样器1000ml及500ml 以上物品均用紫外线照30分钟。

另外准备手套、帽子、口罩、24孔培养板、离心机+一把小锁、未冻药品及DMEM、HCL、NaHCO3、小牛血清。

有氧运动通过心肌细胞吞运内皮细胞来源外泌体抑制细胞凋亡

有氧运动通过心肌细胞吞运内皮细胞来源外泌体抑制细胞凋亡吴方南1，2，李卓1，田振军1*（1.陕西师范大学体育学院暨运动生物学研究所，陕西西安710119；2.西安交通大学生命科学与技术学院，陕西西安710049）摘要：目的：探讨运动干预对H9C2细胞内吞外泌体及抑制细胞凋亡的影响。

方法：C57/BL6小鼠随机分为假手术组（S组）、心梗组（MI组）、心梗有氧运动组（ME组），每组8只，采用左冠状动脉前降支结扎术（left anterior de‐scending of the coronary artery,LAD）制备MI模型，ME组手术结束1周后进行持续6周的有氧运动。

训练结束后超声检测心脏LVIDs、LVIDd、FS和EF，Masson染色检测心肌纤维化；使用无外泌体培养基培养HUVEC细胞，并提取外泌体孵育H9C2细胞。

使用AMPK激动剂（AICAR，2mmol/L，24h）、脂多糖（LPS，10μg/mL，4h）干预H9C2细胞。

NTA和Western Blotting鉴定、检测提取的外泌体；Hoechst33342染色及TUNEL检测细胞凋亡水平；Western Blotting 检测小鼠心肌及H9C2细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和cleaved-Caspase3。

结果：与MI组比较，ME组心功能指标EF和FS显著增加（P＜0.05），细胞凋亡蛋白Bax/Bcl-2，cleaved-Caspase3/GAPDH表达显著下降（P＜0.05）；NTA粒径及Western Blotting鉴定外泌体为阳性结果；正常组细胞无外泌体内吞现象；与单纯LPS诱导的H9C2凋亡组比较，AICAR干预后可显著促进H9C2对外泌体的吞运作用；Hoechst33342染色及TUNEL检测细胞凋亡阳性数目显著减少（P＜0.05），且凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2，cleaved-Caspase3/GAPDH表达显著下降（P＜0.05）。

熊去氧胆酸对阿霉素诱导的H9c2心肌细胞的影响及机制研究

• 418 •现代生物医学进展 Progress in Modern Biomedicine VoL21 NO«3 FEB»2021doi: 10.13241/ki.pmb.2021.03.004熊去氧胆酸对阿霉素诱导的H9c2心肌细胞的影响及机制研究*王皓12夏薇薇u龙广凤口杨大恒口裴知音u陈红兵1夂(1南京医科大学附属儿童医院检验科江苏南京2丨〇〇〇8;2南京医科大学江苏省儿科学重点实验室江苏南京210008)摘要目的：探讨熊去氧胆酸（UDCA)对阿霉素(DOX)诱导的H9c2心肌细胞损伤的影响及机制方法：体外培养H9c2细胞，1pM DOX和不同浓度UDCA处理H9c2,CCK-8法测定细胞活力；实时定量聚合酶链反应检测心肌细胞凋亡分子Bax及炎症因子IL-ip、IL-6的表达;Western blotting检测UDCA对D0X诱导的心肌细胞凋亡相关蛋白Bax、ticl2、Caspase3表达水平变化。

结果：与对照组相比,D0X组心肌细胞活力减弱；炎症因子IL-ip,IL-6表达上调；促凋亡分子B ax和cleaved Caspase3表达增多；抑制凋亡蛋白Bcl2下调(P<0.05)。

与D0X组相比,UDCA+DOX组显著恢复心肌细胞活力；炎症因子IL-l|3、IL-6表达下调；促凋亡分子Bax、cleaved Caspase3下调；抑制凋亡蛋白Bcl2表达上调(/M).05):结论:UDCA能缓解DOX诱导的H9c2心肌细胞损伤，其机制可能与抑制炎症及凋亡有关。

本研究为阿霉素心肌毒性的防治提供新的实验基础及理论依据。

关键词：熊去氧胆酸；阿霉素；心肌保护；炎症；凋亡中图分类号：R-33;Q813;R322.11 文献标识码:A 文章编号：1673-6273(2021 )03-418-06Effects of Ursodeoxycholic Acid on Doxorubicin-induced Injury in H9c2Cardiomyocytes and Its Mechanism*WANG Hao'-2, X IA W ei-wei'J, LONG Guang-fengIJ, YANG Da-heng1'2, PEI Zhi-yinIJ, CHEN H o n g-b in^(1 Department o f C linical Laboratory, Children's Hospital o f N anjing Medical University, Nanjing, Jiangsu, 210008, China;2 K ey Laboratory o f P ediatrics, Nanjing M edical University, Nanjing, Jiangsu, 210008, China)ABSTRACT Objective:To investigate the effect of Ursodeoxycholic Acid(UDCA)on doxorubicin(DOX)-induced cardiotoxicity in H9c2 cardiomyocytes and the mechanisms.Methods:The H9c2 cardiomyocytes were treated with DOX with or without UDCA of different doses.The cell viability was measured by CCK-8assay,and the inflammatory factors were examined by quantitative real-time polymerase chain reaction(qRT-PCR).As for apoptosis,Western blotting,qRT-PCR were used to analyze.Results:Compared with control group,the viability of H9c2 cells,the anti-apoptotic protein Bcl2 were decreased (P<0.05). Additionally,the release of inflammatory factors(IL-lp,IL-6),apoptotic molecules(Bax and Cleaved Caspase3) was increased(/i<0.05). Compared with DOX group,UDCA+DOX group restored the cell viability,ameliorated the release of inflammatory factors(IL-1p,IL-6),inhibited pro-apoptotic molecules(Bax and Cleaved Caspase3),promoted anti-apoptotic molecules Bcl2 as well(P<0.05). Conclusions:UDCA suppresses DOX-induced injury in H9c2 cardiomyocytes by reducing inflammation and apoptosis,which provides a pivotal theoretical basis for the clinical application of UDCA in the prevention and treatment of DOX-induced cardiotoxicity.Key words:Ursodeoxycholic Acid(UDCA);Doxorubicin(DOX);Myocardium protection;Inflammation;ApoptosisChinese Library Classification(CLC):R-33; Q813; R322.ll Document code:AArticle ID: 1673-6273(2021)03-418-06.l/. —刖目阿霉素(doxorubicin,DOX)是蒽环类广谱抗肿瘤药物，广泛用于各类实体肿瘤、肉瘤、血液肿瘤等的化疗11]。

Sirt3-FoxO1在H9C2心肌细胞缺血再灌注损伤过程中作用的研究

Sirt3-FoxO1在H9C2心肌细胞缺血再灌注损伤过程中作用的研究Sirt3-FoxO1在H9C2心肌细胞缺血再灌注损伤过程中作用的研究摘要：缺血再灌注损伤是心肌梗死等心血管疾病常见的临床问题，了解其发生机制对疾病的防治有重要意义。

Sirt3是一种重要的去乙酰化酶，受FoxO1转录因子调控，参与心脏代谢平衡的调节。

本研究通过建立H9C2细胞缺血再灌注模型，探究Sirt3-FoxO1在该过程中的作用。

结果显示，缺血再灌注后，H9C2心肌细胞的Sirt3和FoxO1表达均发生改变，且负相关。

过表达Sirt3或FoxO1前体磷酸化抑制剂能够减轻H9C2心肌细胞的损伤。

进一步实验发现，Sirt3作为FoxO1的底物，参与过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活器1α（PGC-1α）调控的线粒体合成及抗氧化反应的过程。

综合结果表明，Sirt3-FoxO1通路对心肌细胞缺血再灌注损伤的发生具有重要的调节作用，可能成为治疗心血管疾病的新靶点。

关键词：Sirt3-FoxO1，H9C2心肌细胞，缺血再灌注损伤，线粒体合成，抗氧化反应引言：心血管疾病是当前危害人类健康的主要病因之一，其主要表现为冠心病、心肌梗死、高血压和心力衰竭等。

缺血再灌注（I/R）损伤是心肌梗死等心血管疾病常见的临床问题，其发生机制极其复杂，需进一步深入探究。

近年来，研究表明心肌细胞代谢平衡的失衡在I/R损伤中具有重要作用，而Sirt3-FoxO1信号通路作为调控心肌细胞代谢平衡的关键信号通路之一，在心血管疾病中引起了广泛关注。

Sirt3是一种重要的去乙酰化酶，主要分布在线粒体内。

由于其对线粒体功能的调节作用，Sirt3的表达与心肌细胞的代谢调节密切相关。

FoxO1是一种重要的转录因子，参与多种生理过程的调控，其中包括Sirt3的转录调控。

Sirt3和FoxO1在心肌细胞代谢平衡的调节中相互调节作用，具有重要的生理功能。

本研究旨在探究Sirt3-FoxO1信号通路在H9C2心肌细胞I/R损伤中的作用。

AAV-DJ病毒对H9C2细胞感染效果的研究

AAV-DJ病毒对H9C2细胞感染效果的研究章晶晶钟鹏孔彬黄鹤摘要目的将AAV-DJ-EGFP转染至H9C2细胞中,探究AAV-DJ病毒对H9C2的感染能力，从而寻找出一种新型的安全的对H9C2细胞感染能力强的病毒载体。

方法往H9C2细胞中分别加人一定量的AAV-DJ-EGFP病毒及AAV9-EGFP病毒，通过荧光显微镜观察荧光强度来评价两者对H9C2细胞的感染效率，并通过细胞明场照片及CCK-8(cell counting kit-8)试剂盒检测评价AAV-DJ病毒对H9C2细胞活性的影响。

结果与AAV9病毒比较,AAV-DJ病毒对H9C2细胞具有更高的感染效率，以AAV-DJ病毒为载体的绿色荧光蛋白的表达以时间梯度和浓度梯度递增。

且细胞明场照片及细胞毒性试验表明,与未转病毒组比较，感染AAV-DJ病毒后的H9C2细胞的活力无明显变化。

结论AAV-DJ病毒能安全高效地感染H9C2细胞。

关键词AAV-DJ-EGFP病毒H9C2细胞感染转导效率中图分类号R3文献标识码A DOI10.11969/j.issn.1673-548X.2021.01.006Analysis of AAV-DJ Virus Infection to H9C2.Zhang Jingjing,Zhong Peng,Kong Bin,et al.Department of Cardiology,Renmin Hospital of Wuhan University,Cardiovascular Research Institute of Wuhan University,Hubei Key Laboratory of Cardiology,Hubei430060, ChinaAbstract Objective To exploreLhe abiliLy of AAV一DJ virus Lo inf'ecL H9C2,so as Lo find a new and safe virus vecLor wiLh sLrong abiliLy Lo infecL H9C2cells.Methods A cerLain amounL of AAV-DJ-EGFP and AAV9-EGFP was added Lo H9C2cell culLure,followed by visualization of cell fluorescence inLensiLy using fluorescence microscopy Lo evaluaLe Lhe infecLion efficiency of Lhese virus sero-Lypes.The effecLs of AAV一DJ virus on Lhe viabiliLy of H9C2cells were evaluated by cell brighLf'ield phoLos and cell counLing kiL一8 (CCK-8)kiL deLecLion.Results AAV-DJ showed greaLer infecLion efficiency in cardiac H9C2cells compared Lo LhaL of AAV9,and AAVDJ一mediaLed EGFP expression increased in a dose and Lime一dependent manner.In addiLion,Lhe brighL一field phoLos of Lhe cells and Lhe cyLoLoxiciLy LesL showed LhaL Lhe viabiliLy of H9C2cells infecLed wiLh Lhe AAV一DJ virus did noL change significanLly compared wiLh Lhe LinLransfecLed group.Conclusion AAV一DJ virus could safely and efficienLly infecL H9C2cells.Key words AAV-DJ-EGFP virus；H9C2cells；InfecL；TransducLion efficiency外源基因转入真核细胞即通常所说的细胞转染技术,是研究基因表达调控及基因治疗的有效技术之一，目前可通过磷酸钙沉淀法、脂质体介导法、电穿孔法、显微注射法及病毒感染等实现［1~5］。

心肌肽对阿霉素诱导心肌细胞H9c2损伤的影响

收稿日期：２０１９－０３－１８，修回日期：２０１９－０４－２６基金项目：辽宁省自然科学基金项目（Ｎｏ２０１６０１０２１４３０１）作者简介：张婷婷（１９８１－），女，硕士，副主任药师，研究方向：药理
学和分子生物学，Ｅｍａｉｌ：ｚｔｔ２６４６＠１３９．ｃｏｍ；刘进朋（１９６８－），男，博士，主任药师，研究方向：分子生物学，通讯作者，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｕ６８ｄｌｆｄａ＠１６３．ｃｏｍ
良好的心肌保护作用［７］。２００５年，心肌肽被国家食品药品监督管理局批准为一类化学药，用于心脏外科手术围术期心肌保护的辅助药物。本实验采用ＤＯＸ损伤Ｈ９ｃ２心肌细胞，研究心肌肽的保护作用及对胰岛素样生长因子１受体（ｉｎｓｕｌｉｎｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ１ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＩＧＦ１Ｒ）、胰岛素样生长因子结合蛋白３（ｉｎｓｕｌｉｎｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ３，ＩＧＦＢＰ３）等蛋白表达的影响，揭示其可能的作用机制。１材料１．１细胞系大鼠心肌细胞株Ｈ９ｃ２细胞，购自中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所。１．２药物与试剂心肌肽（大连珍奥药业有限公司，批号：２０１７０４０１、２０１７０３０２、２０１７０１０３）；盐酸阿霉素（美国ＭＣＥ公司）；胰蛋白酶、增强化学发光液（北京全式金生物技术有限公司）；ＭＴＴ、二甲基亚砜（ｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｘｉｄｅ，ＤＭＳＯ）（美国Ｓｏｌａｒｂｉｏ公司）；ＤＭＥＭ高糖培养基、胎牛血清（ｆｅｔａｌｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍ，ＦＢＳ）（美国Ｇｉｂｃｏ公司）；ＢＣＡ蛋白浓度测定试剂盒、ＩＰ细胞裂解液、苯甲基磺酰氟（ｐｈｅｎｙｌｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｙｌｆｌｕｏｒｉｄｅ，ＰＭＳＦ）（碧云天生物技术研究所）；兔源一抗Ｂａｘ、Ｂｃｌ２、ｃａｓｐａｓｅ３、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＧＦＢＰ３、β ａｃｔｉｎ（美国Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ公司）；兔源二抗（武汉三鹰生物技术有限公司）。１．３仪器Ｈ１６５０离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）；超纯水装置（美国Ｃａｓｃａｄａ）；ＣＦ１６ＲＸ高速冷冻离心机、Ｕ３０１０紫外可见分光光度计（日本ＨＩＴＡＣＨＩ）；酶标仪（美国Ｔｈｅｒｍｏ）；ＤＹＣＺ４０Ｄ转印电泳仪（北京市六一仪器厂）；ＪＭ２５０型电泳仪（大连竞迈生物科技有限公司）；ＵＶＰ凝胶成像系统（美国ＢｉｏＳｐｅｃｔｒｕｍ）；ＴＥ２０００Ｕ显微镜（日本Ｎｉｋｏｎ）；ＣＣＬ１７０Ｂ８型ＣＯ２培养箱（新加坡ＥＳＣＯ）。２方法２．１细胞培养Ｈ９ｃ２细胞培养于含１０％ＦＢＳ的ＤＭＥＭ高糖培养基中，３７℃、５％ＣＯ２、饱和湿度条件下培养，待细胞密度达到８０％～９０％时，用０２５％胰蛋白酶消化传代，取对数生长期细胞进行