实验1叶绿体的分离与荧光分析

中国海洋大学实验报告姓名：系年级：**级专业：生物科学

科目：分子细胞生物学实验学号：**

一、实验目的：

（1）、通过对植物叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法

（2）、观察叶绿体的间接荧光，并了解荧光显微镜的使用方法

二、实验原理

颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的黏度有关。在一定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同，一次增加离心力和离心时间，就能使非均一悬浮液中的颗粒按其大小。密度的先后分批沉降在离心管的底部分批收集，即可获得各个亚细胞的组分。

叶绿体的分离应该在等渗溶液中进行，以免渗透压影响叶绿体，对其造成损伤。

在荧光显微镜下可以观察叶绿体的自发荧光和间接荧光。

三、实验材料

新鲜菠菜。

等渗溶液：0.35mol/L氯化钠溶液，

试剂：0.01%吖啶橙(acridine orange)

四、实验方法

１、叶绿体的分离

2、菠菜叶手撕片的制备

①、下表皮因海绵组织较疏松，可以直接手撕下表皮的薄膜在显微镜下观察。

②、上表皮因栅栏组织较致密，可以用刀片将下表皮刮掉，在显

微镜下观察上表皮的细胞和气孔。

3、菠菜的叶绿体的观察

在普通光学显微镜下，将制得的手撕片放在载玻片的等渗溶液中，游离的叶绿体悬浊液点在在载玻片上，轻轻地盖上盖玻片（防止气泡

产生），即可观察。

在荧光显微镜下，将游离叶绿体悬浊液的的标本放在荧光显微镜下，先后用绿光、蓝光对其进行照射，在电脑上观察其产生的自发荧

光。

向手撕片的标本、游离叶绿体悬浊液的的标本中加入1-2滴

0.01% 吖啶橙染液，先后用绿光、蓝光对其进行照射，在电脑上观察

其产生的间接荧光。

五、实验结果

气孔保卫细胞

叶绿体

图1菠菜手撕片的标本中，上表皮及其气孔

图2菠菜手撕片的标本中，下表皮及其气孔图3叶表皮在绿光照射下的间接荧光

游离叶绿体保卫细胞

表皮细胞叶肉细胞

气孔

游离叶绿体

图 4叶表皮在蓝光照射下的间接荧光

图 6 游离叶绿体在绿光照射下的间接荧光

图 5游离叶绿体在蓝光照射下的间接荧光

气孔保卫细胞

游离叶绿体 表皮细胞