金标法乙肝表面抗原检测方法学探讨

金标法乙肝表面抗原检测方法学探讨《中华中西医杂志》2008年第06期

作者单位：430065 湖北武汉，湖北中医学院医学检验与技术系

【摘要】通过从灵敏度、特异性、准确性及稳定性等四个方面对金标乙肝表面抗原检测法进行方法学探讨，并分别用金标法及酶免疫法对1200例体检及临床标本进行检测，发现金标法检测血清中乙肝表面抗原特异性强，灵敏度高，与酶免疫法符合率为99.0%，且无需特殊仪器设备，简便快速，具有广泛应用价值。

【关键词】金标法；乙肝表面抗原

乙肝表面抗原（hbsag）是乙型肝炎病毒外壳蛋白中的主要成分阳性是感染乙肝病毒的标志，是检查乙肝血清标志物中较重要的一项［1］。近年来发展的金标法检测hbsag，与传统的酶免疫法（eia）相比，具有简便、快速、准确，不需要仪器设备等优点，能满足临床急诊快速出结果的需要，且较适合使用于流行病学调查，应用前景非常宽广。

1 材料与方法

1.1 材料（1）金标试纸条：上海洪泰生物技术发展有限公司产品。（2）hbsag灵敏度标准参比品：中国药品生物制品检定所产品。（3）hbsag酶免疫诊断试剂盒，hbsag、hbcag、hbeag阳性对照血清：中外合资上海实业科华生物技术有限公司产品。（4）血清标本：1200份体检及临床血清标本，其中乙型肝炎患者血清172份，健康人血清1028份。

1.2 方法（1）5ng/ml标准参比品用生理盐水分别稀释成4ng/ml,3ng/ml,2ng/ml,1ng/ml几种浓度，各取0.1～0.2ml置于洁净试管中，用金标法试纸条进行检测，严格按照说明书所述，将测试条有金标抗体端插入血清内，放置一定时间后观察结果。（2）hbsag、hbcag、hbeag阳性对照血清各取3份，每份为0.1～0.2ml加入已备好洁净试管中，用金标法对各份血清进行检测。（3）分别用金标法、eia法对1200份体检及临床血清标本进行检测。（4）将金标试纸条各10条分置于37℃、室温（25℃）保存5天，做热稳定试验。

2 结果

（1）用金标法对5种浓度的hbsag阳性标准参比品进行检测。结果确定时间：强阳性参比品（4～5ng/ml）在2min内即可在检测线见到红色胶体金颗粒聚集；阳性参比品（3mg/ml）在5min内即可出现两条紫红色线条，弱阳性标本（1～2ng/ml）约需20min确定结果。说明了金标法敏感性较强，灵敏度可达1ng/ml，可以满足临床要求。（2）将金标试纸条分别插入hbsag、hbcag、hbeag阳性对照血清各3份中，结果只有hbsag阳性对照血清管中试纸条出现两条红色线，说明该试纸条只与hbsag有特异性反应，特异性强，不易出现假阳性。（3）分别用金标法、eia法对1200份体检及临床血清标本进行检测，所得结果显示：金标法与eia法所做结果有162例阳性结果一致，有1026例阴性结果一致，有12份血清两法检测结果不

符，比较两法检测hbsag的一致性，符合率为99.0%。12份两法结果不符的血清中，有5例（乙肝组3份，健康组2份）金标法呈弱阳性，而eia阴性，但这5份血清eia吸光度值均接近临界值。另7例（均为乙肝组血清）金标法阴性，eia为hbsag弱阳性。通过计算，可得出金标法临床灵敏度为95.9%，临床特异性为99.8%，临床准确度为99.2%，阳性预测率为98.8%。（4）将金标法试纸于37℃、25℃各10条放置5天后，测定10份不同血清标本（乙肝组与健康组各5例），所得结果与放置4℃的试纸检测结果无明显差别。说明金标法试纸条性质较稳定，易保存。

3 讨论

hbsag的检测可作为乙型肝炎病毒感染的一个重要指标，目前多采用eia或eia一步法，由于其试剂盒中酶标试剂不易保存，操作中需通过加样、加试剂、孵育、洗板等一系列过程，延时长，且易引起标本间交叉污染或阳性标本对人体的污染，给实验室检测工作带来一些不便，不能满足临床急诊快速出结果的要求。

近年来，随着现代免疫化学技术的发展，出现了胶体金免疫层析法［2］。该法是将羊抗hbs、羊抗鼠igg分别固定在特制的纤维素试带上并呈两条线上下排列，羊抗鼠igg线在试带条上方为阴性对照，抗hbs 在下方为测定。试带条中含均匀分布的胶体金-抗hbs和无关的金标记鼠igg。检测时血清沿试带上行，其中hbsag在上行过程中与胶体金-抗hbs结合，待行至羊抗hbs线时，形成金标记抗hbs-hbsag-抗hbs复合物而在试带上显红色线，试带上无关的金标鼠igg随血清继续上行至羊抗鼠igg处时形成红色金标复合物为阴性对照。判断结果时，出现两条红色线时为阳性，只在对照线出现红色线时为阴性，如对照线未出现红色，则表明该试纸条失效。该法集免疫反应与免疫层析的特点，灵敏度高，特异性强，且试纸条轻便易带易保存、易操作，无需仪器设备，病人标本可随来随查，20min内即可发出结果，适合于大批健康体检、流行病学调查及门诊急诊标本的应用。

当然，该法与eia相比，只能作定性检查，灵敏度稍差，易将少数弱阳性标本忽视，出现假阴性，具体原因及改善办法，有待进一步探讨。

【参考文献】

1 周继文.胶体金免疫层析法检测乙型肝炎病毒表面抗原.中华医学检验杂志,1998，21：30-32.

2 李成文.现代免疫化学技术.上海：上海科学技术出版社，1992，165-181.