RT-PCR引物设计及注意事项
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第四讲 RT-PCR引物设计
及注意事项
一、步骤
1.查找目的基因序列
目的序列的选择
TNFalpha用全称
小鼠的TNFalpha序列
大鼠的TNFalpha序列
一、步骤
2.在线设计引物
一、步骤
3.在线验证引物
Leabharlann Baidu
二、注意事项
1. 找对靶序列(要cDNA，不要gDNA)
2. 引物的位置(5’调控区、阅读框、3‘调控区) 3. 目的片段的长度(定量100-300，定性300500bp)
4. 注意剪接异构体(P63为例)
谢谢！
及注意事项
一、步骤
1.查找目的基因序列
目的序列的选择
TNFalpha用全称
小鼠的TNFalpha序列
大鼠的TNFalpha序列
一、步骤
2.在线设计引物
一、步骤
3.在线验证引物
Leabharlann Baidu
二、注意事项
1. 找对靶序列(要cDNA，不要gDNA)
2. 引物的位置(5’调控区、阅读框、3‘调控区) 3. 目的片段的长度(定量100-300，定性300500bp)
4. 注意剪接异构体(P63为例)
谢谢！