急性白血病患者氧化应激状态与抑郁情绪之间的关系.

急性白血病患者氧化应激状态与抑郁情绪之间的关

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作者：周芙玲，张王刚，苏智祥，蒙昕，田纬

【摘要】本研究探讨急性白血病患者氧化应激状态与抑郁情绪之间的关系。用抑郁自评量表（self-rating depression scale， SDS）等调查表对

92例初发急性白血病患者的抑郁症状进行评定。检测血浆总抗氧化能力（T-AOC）、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛(MDA)及一氧化氮（NO）含量。采用实时定量PCR检测DNA修复基因人8- 羟基鸟嘌呤糖苷酶（human 8-hydroxyguanine glycosylase，hOGG1）的表达。结果证明，急性白血病患者抗氧化酶防御能力下降，抑郁情绪发生率47.83%，伴抑郁障碍的患者

T-AOC和SOD水平明显降低，ROS、NO及MDA水平明显升高，DNA修复基因

hOGG1 mRNA的表达升高。急性白血病患者病程、hOGG1水平与抑郁程度呈正相关，T-AOC水平与抑郁程度呈负相关。结论：急性白血病患者存在氧化损伤，

伴抑郁症状的患者抗氧化酶防御能力进一步减弱,提示氧化应激与急性白血病抑郁症状的发生和发展密切相关。

【关键词】氧化应激；急性白血病；抑郁；DNA修复基因hOGG1 Relationship between Oxidative Stress and Depression in Patients with Acute Leukemia AbstractThis study was aimed to investigate the relationships between oxidative stress and depression in patients

with acute leukemia. Ninety two cases of acute leukemia were randomly enrolled in the study. Depressive disorder was assessed by self-

rating depression scales (SDS) and multiple items questionaires. The total anti-oxidation capability (T-AOC), reactive oxygen species (ROS) and superoxide dismutase (SOD) activities, as well as malondialdehyde (MDA) and nitric oxide (NO) levels were measured in pre-treatment periods. Meanwhile, the steady state level of human 8-hydroxyguanine glycosylase（hOGG1）mRNA transcript was monitored by quantitative

real-time PCR. The results showed that the defence of antioxidant system was impaired in patients with acute leukemia. The incidence of depression was 47.83% in 92 cases. T-AOC and SOD activities were significantly decreased in patients with depression，while ROS, NO, MDA levels and hOGG1 mRNA expression were reverse of the former. It revealed that depression positively correlated with course of disease and hOGG1, and negatively correlated with T-AOC. It is concluded that oxidative damage occurs in patients with acute leukemia, moreover, lower antioxidant defences exist in depressive patients. These

results underscore the notion that oxidative stress may promote the development of depression. Key wordsoxidative stress; acute leukemia; depression; hOGG1 氧化应激(oxidative stress)是指机体或

细胞内氧自由基的产生与清除失衡,导致活性氧(reactive oxygen species, ROS)和活性氮(reactive nitrogen species, RNS)在体内或细胞内蓄积而引起

的氧化损伤过程。近年来研究显示，氧化应激可促进DNA损害、遗传突变等并

导致肿瘤发生［1-4］。肿瘤患者普遍存在心身疾病［5-7］，但国内外有关氧化应激状态与肿瘤患者心身疾病关系的报道少见。本研究通过研究初发急性白血病患者血浆中活性氧类物质、抗氧化酶防御系统及DNA氧化损伤修复基因hOGG1的水平，对初发急性白血病患者机体抗氧化状态与抑郁情绪之间的关系做了一些初步分析。材料和方法临床资料92例患者均为2004年3月到2005年7月在西安交通大学第二医院血液科经骨髓穿刺等检查确诊的急性白血病初发患者，其中男54例，女38例，中位年龄45（19-73）岁。按FAB病理分型：急性非淋巴细胞白血病(ANLL ) 62 例(M1 5例，M2 16例，M3 14例，M4 8例，M5 15例，M6 4例) ，急性淋巴细胞白血病(ALL) 30例(L1 14例，L2 10例，L3 6例)。92例患者在本研究前1月未曾服用抗抑郁药及抗氧化剂，心、肝、肾功能基本正常，既往无精神病史、酒精和药物依赖病史，无脑器质性疾病和内分泌疾病史，无严重认知障碍。取20名正常人外周血作正常对照，与急性白血病组间性别、年龄等资料对比差异无显著性。抑郁自评抑郁自评量表（self-rating depression scale，SDS）含有20个项目、四级评分。统计指标为总分，由研究者计算并判断，总分≥50表示有不同程度的抑郁症状，分数越高表示症状越重。多项目问卷调查多项目调查问卷包括患者的一般人口社会学资料等内容，调查遵循了伦理学、患者知情认知及医师对调查资料完全保密等原则。氧化应激检测用氧化应激指标检测试剂盒（由南京建成生物公司提供），按照说明书操作检测。

T-AOC、ROS、SOD、MDA、NO检测用Fe3 还原法测定血浆总抗氧化能力（T-AOC），采用Fenton 反应及Gress 显色原理测定活性氧(ROS)，黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD），硫代巴比妥酸法(TBA)测定丙二醛(MDA)含量，硝酸还原酶法测定一氧化氮（NO）。实时定量PCR检测取肝素抗凝新鲜人外周血5 ml，淋巴细胞分离液［密度1 g/cm3(20℃)］分离外周血单个核细胞，加入TRIZOL(Invitrogen公司产品)，抽提总RNA。紫外吸收测定法检测RNA浓度和纯度，A 260 nm/A 280 nm比值在1.8-2.1之间。采用变性琼脂糖凝胶电泳, 紫外透射光下观察并拍照。5 μg总RNA经oligo(dT) 引物逆转录合成cDNA，逆转录反应为37℃ 1小时、95℃ 5分钟，cDNA溶液储存于-20℃备用。由上海康成生物公司合成引物，hOGG1正义引物： 5'- CCCCAGACCAACAAGGAACT-3'；反义引物： 5'-TGGAACCCTTTCTGCGCTTT-3'，扩增片段145 bp；管家基因正义引物： 5'- CCTGTACGCCAACACAGTGC-3'；反义引物： 5'-ATACTCCTGCTTGCTGATCC-3'，扩增片断211 bp。定量阳性模板扩增曲线以hOGG1模板起始拷贝数的常用对数为横坐标，循环阈值为纵坐标，得到标准曲线，相关系数r=0.99991。荧光定量PCR反应体系25 μl：

Syberg reenⅠ(Invitrogen公司产品) 终浓度6.25 μl，25 mmol/L MgCl2 溶液3 μl， 20 μmol/L 的PCR特异引物各0.5 μl，Taq聚合酶3 U， dNTP 混合液3 μl，cDNA 1 μl。反应条件(Rotor-Gene3000 Realtime PCR仪): 94℃5分钟，40个循环(94℃ 10秒，58℃ 15秒，72℃ 20秒)。PCR产物与100 bp DNA Ladder在2％琼脂糖凝胶电泳，GoldViewTM染色，检测PCR产物是否为单一特异性扩增条带。hOGG1与β-actin绝对拷贝数之比，作为hOGG1基因的相对表达量。

统计学分析本研究共发出问卷109份，收回有效问卷 92份，回收率为84.40％。采用SPSS 11.5统计软件处理，原始数据组间方差齐时用单因素方差分析（one-way ANOVA），组间比较用Dunnett-t检验，检验水