气相色谱-质谱法与薄层扫描法测定六味地黄丸丹皮酚含量的差异对比
高效液相色谱法测定地黄丸类中成药中丹皮酚含量
高效液相色谱法测定地黄丸类中成药中丹皮酚含量李吉锋;祝保林;高锦红;王秋亚【摘要】用高效液相色谱法对不同品牌和类别地黄丸中的丹皮酚进行了测定.考察了甲醇、乙醇、氯仿、四氯化碳4种溶剂提取丹皮酚的效果,综合考虑提取剂毒性、提取率和对分离的影响,选择甲醇作提取剂.对色谱方法的稳定性、准确度、精密度和线性进行了考察.对不同品牌和类别地黄丸中的丹皮酚含量进行了比较分析,各品牌有较大差别.产生差别的主要原因是药材产地和组方不同.本方法可作为地黄丸生产中的质量控制方法.【期刊名称】《分析仪器》【年(卷),期】2010(000)001【总页数】3页(P59-61)【关键词】地黄丸;丹皮酚;高效液相色谱法【作者】李吉锋;祝保林;高锦红;王秋亚【作者单位】渭南师范学院化学化工系,渭南,714000;渭南师范学院化学化工系,渭南,714000;渭南师范学院化学化工系,渭南,714000;渭南师范学院化学化工系,渭南,714000【正文语种】中文1 前言知柏地黄丸、杞菊地黄丸、六味地黄丸是中药复方制剂，具有滋肾养肝之功效。
他们的共同成分有熟地黄、山茱萸、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻等六味，其中牡丹皮具有清热凉血、活血散瘀之功效[1]，主要活性成分丹皮酚具有镇静、催眠、解热、镇痛、抗炎等作用[2，3]，近来研究发现，丹皮酚在体内外具有抗肿瘤作用[4-6]。
为更好地控制产品质量，保证用药的有效与安全，我们通过实验研究，建立了以牡丹皮的主要活性成分丹皮酚为指标，经溶剂提取后用高效液相色谱法(HPLC)测定其含量的方法。
本法快速，简便，准确，重复性好，为该制剂的质量控制提供了快速、准确的方法。
2 实验部分2.1 仪器岛津 LC-10ATVP泵，SCL-10AVP控制器，DGU-14A脱气机，CTO-10AVP柱温箱，SPD-10AVP紫外检测器，Class-VP 6.12工作站， SZ-93自动双重纯水蒸馏器(上海亚荣)，岛津 C-18柱(4.6mm×250mm，5μm)。
六味地黄丸的组方解读及研究进展2
六味地黄丸的配伍组成及研究进展20101378 张婷10级硕士7班摘要:本文重点介绍了六味地黄丸的配方组成及特点,以及在临床中的应用,包括今年来在化学成分检测方面的进展。
关键词:六味地黄丸;组方;药理研究;临床应用;化学成分六味地黄丸是著名方剂,经历代医家临床反复验证,组方严谨合理,功效显著,其后许多滋阴补肾的方剂由此方衍化而来。
多年来,除丸剂外,亦被改为汤剂、颗粒剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、片剂、口服液等用于临床,运用范围逐渐扩大,主治病证相应增多。
本文将就六味地黄丸的组方及近几年内的临床研究应用进行概述。
1.六味地黄丸的组方及药物配伍特点1.1 六味地黄丸始见于宋代医家钱乙的《小儿药证直诀》,原名地黄丸,是根据历代名医张仲景《金匮要略》中的肾气丸化裁而来。
钱乙将肾气丸中补火助阳的附子、肉桂去掉,易干地黄为熟地黄而成滋阴补肾的经典名方六味地黄丸。
六味地黄丸复方主要由熟地黄,山茱萸,干山药,泽泻,牡丹皮,茯苓六味药组成。
主治肝肾阴虚导致的腰膝酸软、头目眩晕、耳鸣耳聋、盗汗遗精、小儿囟开不合之症,或虚火上炎而致的骨蒸潮热、手足心热、消渴、虚火牙痛、口燥咽干、舌红少苔、脉细数等。
1.2 六味地黄丸的方解及药物配伍特点本方为肾阴亏损,兼有虚火内扰之证而设。
故从滋阴补肾立法,体现了“壮水之主,以致阳光”的治疗原则。
中医认为肾藏有“先天之精”,为五脏六腑之本,生命之源,故有“先天之本”之称。
肾阴不足,则变生诸证。
本方组方科学,以肾、肝、脾三阴并补而重在补肾阴为主。
方中重用熟地黄,主入肾经,滋阴补肾,填精益髓,为君药;辅以山茱萸,主入肝经,补养肝肾,并能涩精;山药主入脾经,补益脾阴,亦能固精,共为臣药。
三药配伍,滋补肝脾肾,熟地黄用量是山茱萸和山药两味之和,共成三阴并补以收补肾治本之功,此为“三补”。
泽泻配熟地黄泻肾降浊;丹皮配山茱萸清泻肝火;茯苓配山药淡渗脾湿,三药相配为“三泻”。
六药相配,三补三泻,补泻并用,补中有泻,寓泻于补,相辅相成,补药用量重于泻药,是以滋补为主。
不同厂家六味地黄丸质量比对分析
不同厂家六味地黄丸质量比对分析白林;方旬;任韡【摘要】目的:比较四个不同厂家生产的六味地黄丸的质量差异.方法:按照2010年版<中国药典>质量标准,采用HPLC法测定六味地黄丸中丹皮酚和马钱苷的含量,并进行体外溶出度的测定.结果:两个厂家的产品含量不合格;不同厂家生产的六味地黄丸中,丹皮酚和马钱苷的含量及其体外溶出度有显著性差异.结论:为达到临床疗效的一致性,有必要对中成药的原料药材进行严格地质量控制,对制剂工艺进行标准化研究.%Objective: To compare the quality of Liuweidihuang pill produced by different pharmaceutical companies. Methods: According to the Chinese Pharmacopeia (2010th edition), the HPLC method was used for the content determination of paeonol and loganin in Liuweidihuang pill. The standard dissolution test was used to investigate the dissolution in vitro of paeonol and loganin. Results: The assay results showed that samples from two manufactures were unqualified. The content of paeonol and loganin in Liuweidihuang pills from different manufactures differed significantly as well as the dissolution in vitro. Conclusion: In order to obtain the similar clinical effect, it is necessary to control the quality of the Chinese herbs strictly and develop the standardization research about the preparation technology.【期刊名称】《中国药物应用与监测》【年(卷),期】2011(008)005【总页数】4页(P278-281)【关键词】六味地黄丸;丹皮酚;马钱苷;含量;溶出度【作者】白林;方旬;任韡【作者单位】解放军总医院药检室,北京,100853;蚌埠医学院,安徽,蚌埠,233003;解放军总医院药检室,北京,100853【正文语种】中文【中图分类】R917六味地黄丸具有滋阴补肾的功效，是补阴方药中的代表方。
中药及其制剂中丹皮酚的含量测定
中药及其制剂中丹皮酚的含量测定摘要：丹皮酚的含量是衡量牡丹皮、徐长卿等中药材及以其组方的制剂六味地黄丸等质量控制的重要指标。
本文综述了近年含丹皮酚的中药材及中药制剂测定时的前处理条件和各种测定方法。
关键词：丹皮酚;牡丹皮;徐长卿;药物分析牡丹皮为毛茛科芍药属牡丹(PaeoniasuffruticosaAndr.)的干燥根皮，徐长卿为摩萝科植物徐长卿(Cynanchumpaniculatum(Bge.)kitag.)的根及全草。
两者均是具有抗菌消炎作用的常用中草药，其主要有效成分均是丹皮酚(patpnol)。
在常见的中药制剂六味地黄丸、金匮肾气丸、麦味地黄丸、当归养血丸等十余种中成药处方中均有配伍使用。
丹皮酚含量是评价这些中成药质量的重要定量指标。
中国药典(一九九五年版)规定六味地黄丸中丹皮酚含量是其定量指标之一[1]。
由于中药材及其制剂成分十分复杂，若需要测定其中某一成分，样品的前处理是关键的一步，而处理方法又必须与选定的分析方法相适应。
现将含丹皮酚的中药材及其制剂的样品处理和含量测定方法综述如下。
1、光谱法1.1紫外-可见分光光度法(Ultravioet-VisibleSpectrophotometry，UV)紫外-可见分光光度法具有操作简单、费用较低等优点。
但由于该法基本上没有分离能力，样品处理要求严格，故常被用于一般要求不很严格的测定以及中药材炮制方法、处理条件的比较、制剂工艺选择等方面。
丹皮酚具有一定的挥发性，光谱法中样品处理一般都用水蒸气蒸馏或直接蒸馏法提取，以减少混入杂质，通常蒸馏液稀释后于274nm处测定吸收度。
周玉生等[2]用该法测定了牡丹皮中丹皮酚含量，比较了不同加工方法的丹皮酚的含量：取已加工的牡丹皮样品适量，置蒸馏瓶中，加水约120mL，蒸馏后得馏出液约有95mL，稀释后在274nm测定吸收度。
结果发现，水洗50℃烘干损失率最高，为34.96%;白酒喷淋晾干，损失率最低，为11.19%。
六味地黄丸方药四种提取液有效成分含量的比较研究_吴静澜
六味地黄 丸 为 滋 阴 补 肾 的 经 典 代 表 方 剂［1］。 原 方 以 药材 原 粉 入 药，服 用 量 大，生 物 利 用 度 低，因 此，市 场 上 出 现了多种剂改品种，如浓缩六味地黄丸、六味地黄颗粒、六 味地黄胶囊、六 味 地 黄 丸 口 服 液 等。 目 前，中 药 制 剂 常 用 的提取工艺，如水提取法（ WE 法） 、水提醇沉法（ WAE 法） 等在保留有效成分弃出无效成分的方面有所提高，但仍存 在有效成分损失大，工序多、周期长、成本高等特点。本实 验在优选出六味地黄丸方药半仿生［2 － 4］提取工艺条件、药 材组合方式、半 仿 生 提 取 醇 沉 浓 度 的 基 础 上，以 半 仿 生 提 取液（ SBE 液） 、水 提 取 液 （ WE 液） 、半 仿 生 提 取 醇 沉 液 （ SBAE 液） 、水提取醇沉液（ WAE 液） 等四种提取液进行比 较研究，优选出 最 佳 的 提 取 方 法，进 一 步 验 证 半 仿 生 提 取 法的优越性。
* 基金项目： 贵州省科技厅计划项目，编号： 黔科合 NY［2005］3013 号 . 收稿日期： 2012 － 11 － 01
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贵阳中医学院学报
第 35 卷
用四层纱布过滤，分别合并三次提取液，直接浓缩至 150mL 左右。再将其合煎药浓缩至一定量（ ＜ 150ml） ，使溶液在 150 ml 左右，再 将 浓 缩 液 经 水 浴 浓 缩 至 浸 膏，放 置 冰 箱 保存。 3. 2. 3 SBAE、WAE 浸膏的制备 分别取 100mLSBE 提取 液与 WE 提取液，分别加入适量的 60% 的乙醇，放置冰箱 静置，滤过，水浴浓缩至浸膏，即得 SBAE、WAE 样品。 3. 3 5 － HMF 的含量测定［5］ 3. 3. 1 供试液的制备 分别取 3. 2 项下 4 组样品浸膏 1 /6 的量于 150ml 锥形瓶中，加 50ml 无水甲醇溶解，超声 2 h 摇匀，用无水甲醇补足至 50ml，混合液经减压滤过，滤液置 50mL 容量瓶中，不足者用无水甲醇补足至刻度，摇匀，滤 液再经干过虑一次，取其干过虑滤液 2ml 至 10ml 容量瓶 中，用无水甲醇补足至刻度，摇匀既得供试液。 3. 3. 2 对照液的制备 精密称取 5 － HMF 标准品 0. 0243g
六味地黄丸中丹皮酚含量的测定
植 红 景 天 中 的微 量 元 素含 量 ［ Ｊ ］ ．安 徽 农 业 科 学 ， ２ ０ １ １ ， ３ ９（ ２ ４） ：
１ ４ ６１ ６—１ ４ ６１ ７， １ ４ ６１ ９ ．
［ ６ ］ 张 ［ ７ ］ 丁 ［ ８ ］ 周
虹， 白红丽 ， 王宝森 ， 等． 云南红河紫山药与 白山药中微量元 锐， 王 瑾， 王英华 ， 等． 不 同产地甘草中微 量元素含量 的研
景［ Ｊ ］ ． 林业科学研究 ， ２ ０ ０ ４ ， １ ７ （ ５ ） ： ６ ７ ４— ６ ７ ９ ．
素 的比较分析 ［ Ｊ ］ ． 江苏农业科学 ， ２ ０ ｏ ９ （ ４ ） ： １ ６ ４— １ ６ ５ ．
道 。紫外分光光度法 是测定药 物含量最 常见 的方 法 ， 此方 法 迅速简便 ， 灵敏度高 、 重现性好 ， 而Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法仪器造价高 ， 对操 作人员要求高 、 费 时长 ， 故本研究用 ｕ Ｖ法测定六 味地 黄丸 中
空 白， 在２ ０ ０～ ５ ０ ０ ｎ ｍ波长范 围内进 行紫外可见扫描 。结果
表明 ， 丹皮 酚在 ２ ７ ４ ｎ ｌ ｎ处 有 最大 吸 收峰 （ 图１ ） ， 则 选择 在 ２ ７ ４ ｎ ｍ处测定样 品液 中丹皮酚的含量 。
０ ． ７ Ｏ ． ６ ０ ． ５
的丹皮酚含量。
１ 材 料 与 方 法
１ ． １ 材料
Ｏ ． ４ Ｏ． ３
热、 镇痛 、 抗炎 、 抗菌等药理作用 ， 是 牡 丹 皮 药 材 主 要 活 性成 分
０ ． ０ ０ ５ ｇ ， 置于 ５ ０ ｍ Ｌ烧杯 中 ， 以无水 乙醇 米 溶解 ， 转至 １ ０ ０ ｍ Ｌ
容量瓶 ， 用无水 乙醇定 容至 刻度 ， 摇匀 ， 得５ ０ ｇ ／ ｍ Ｌ 丹皮 酚
HPLC法测定六味地黄丸(浓缩丸)中丹皮酚的含量
HPLC法测定六味地黄丸（浓缩丸）中丹皮酚的含量摘要：时下，我国药品测量领域的技术日趋完善，在测定六味地黄丸（浓缩丸）中丹皮酚的含量时通常采取HPLC法。
在保障测量数据信息的准确性的同时，具有方便快捷的特点。
因此，HPLC法在使用过程中具有数据准确性高、误差相对较小、易于操作、数值控制性强等优越性。
关键词：HPLC法；六味地黄丸；丹皮酚；含量当前，六味地黄丸的制作工艺日趋合理，药效相对稳定，其原因在于浓缩丸内各类药材的科学准确配比。
其中丹皮酚在六味地黄丸的使用过程中发挥着重要作用，因此在对丹皮酚的含量配比控制的准确性是制药工作的首要前提，具体测量报告如下一、测试中所选用的设备、原料与测量手段（一）设备高效液相色谱仪、XS205DU电子天平、KH－600DB超声波清洗器、超纯水器（二）原料六味地黄丸、丹皮酚、色谱纯、超纯水、分析纯（三）测试条件采用DiamonsilTMC18（4．6mm×150mm，5μm）色谱柱，流动相为甲醇－水（70∶30）；流速1．0ml/min；柱温：室温；进样量10μl；检测波长274nm。
（四）取适量丹皮酚对照品，精密称定质量，加甲醇制成1ml含0．206mg丹皮酚的贮备液，精密吸取2．5ml该贮备液移置25ml容量瓶中，准确加入甲醇至刻度，即得到1ml含0．0206mg的对照品溶液。
（五）取六味地黄丸（浓缩丸）样品，捣碎研细混匀，精密称取约0．4g，放入有塞锥形瓶中，再加入50%甲醇50ml，加塞密闭，精密称定质量，超声处理（功率250W，频率33KHz）45min，放冷却后再次称定质量，以50%甲醇补足减失的量，摇匀，用0．45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，得到样品溶液。
（六）测定方法精密吸取上述制备的样品及对照品溶液10μl分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算样品的含量。
二、测试数据（一）丹皮酚线性关系的考察精密吸取丹皮酚对照品贮备溶液（0．206mg/ml）1．0ml、2．0ml、4．0ml、8．0ml、10．0ml、15．0、20．0ml分别置于25ml容量瓶中，各容量瓶中均加入甲醇稀释至刻度，摇匀，再依次取上述溶液10μl注入液相色谱仪进样测定，记录色谱图，以峰面积为纵坐标（Y），以进样含量（μg）为横坐标（X）得回归方程为：Y=6．364X×105－3．152×103，r=0．9999，丹皮酚在8．24～164．8μg/ml范围内具有良好线性关系。
六味地黄口服液薄层色谱鉴别研究
六味地黄口服液薄层色谱鉴别研究
六味地黄口服液薄层色谱鉴别研究＊
刘金坤，王琴，白殊同，高洪燕，喻晓雯，吴斌
【摘要】摘要：目的建立鉴别六味地黄口服液中中药材的薄层色谱（TLC）法。
方法采用TLC法对六味地黄口服液中牡丹皮、山茱萸、泽泻、茯苓、山药5味中药进行定性鉴别。
结果薄层色谱分离度好，鉴别斑点清晰，特征斑点专属性强，阴性对照品溶液无干扰。
结论该法结果准确、可靠、重复性好，可用于六味地黄口服液的质量控制。
【期刊名称】中国药业
【年(卷),期】2016(025)013
【总页数】3
【关键词】六味地黄口服液;薄层色谱法;牡丹皮;山茱萸;泽泻;茯苓;山药
六味地黄方具有滋补肾阴之功效，用于治疗头晕耳鸣、腰膝酸软、遗精盗汗等。
其传统的剂型为大蜜丸，随着制药技术的发展，逐渐出现了水丸、水蜜丸、浓缩丸、片剂、胶囊剂、滴丸、口服液等不同的剂型［1-2］。
六味地黄口服液是六味地黄丸的改进剂型，由熟地、山茱萸、牡丹皮、泽泻、山药及茯苓6味中药组方，具有口感好、服用方便、起效迅速、吸收快、生物利用度高等优点。
目前，口服液质量标准采用薄层扫描法测定山茱萸中熊果酸的含量，以吸收系数法测定牡丹皮中丹皮酚的含量［3］。
2010年版、2015年版《中国药典（一部）》均无六味地黄口服液的薄层鉴别［4］。
笔者采用薄层色谱（TLC）法鉴定其中的牡丹皮、山茱萸、泽泻、茯苓、山药5味中药材，作为检测该制剂的指标，以期为改进该制剂的质量标准提供参考。
1 仪器与试药。
HPLC测定不同厂家六味地黄丸中丹皮酚的含量
HPLC测定不同厂家六味地黄丸中丹皮酚的含量宋晓;孙晓慧;李珂【摘要】目的建立测定六味地黄丸中丹皮酚含量的HPLC法,测定九个厂家生产的六味地黄丸中丹皮酚的含量,并比较其含量.方法固定相:Diamonsil C18色谱柱(250 mm× 4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-水(70∶30);流速:1.0 ml/min;检测波长:274 nm.结果丹皮酚在0.4～30 μg/ml的浓度范围内,A=123549C+ 75111线性关系良好(r =0.9997);丹皮酚的平均回收率(n=9)分别为91.60％(RSD=0.35％),99.46％(RSD=1.10％),95.32％(2.81％).结论本含量测定方法准确,灵敏,重现性好,可用于六味地黄丸中丹皮酚的含量测定.【期刊名称】《泰山医学院学报》【年(卷),期】2014(035)003【总页数】3页(P200-202)【关键词】六味地黄丸;丹皮酚;高效液相色谱法;含量测定【作者】宋晓;孙晓慧;李珂【作者单位】泰山医学院药学院,山东泰安271016;泰山医学院药学院,山东泰安271016;泰山医学院药学院,山东泰安271016【正文语种】中文【中图分类】R913六味地黄丸的成分由熟地黄、山茱萸(制)、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻组成。
因由六位中药材组成，其中熟地黄为君药，故名，是滋补肾阴的基础方剂[1]。
牡丹皮具有良好的清热、止血、活血、消瘀等功能，丹皮酚是牡丹皮的重要有效成分[2]。
目前，丹皮酚的含量测定有高效液相色谱法、分光光度法、气相色谱法、薄层扫描法、胶束毛细管电泳法等。
本次试验应用高效液相色谱法对丹皮酚含量进行测定[3]，2010年版药典对六味地黄丸及六味地黄丸(浓缩丸)中牡丹皮的控制也是采用HPLC法测定丹皮酚的含量，但同时对比控制九个厂家的丹皮酚的含量尚属首次。
本法分离效率高，灵敏度好，能较好地测定不同厂家的六味地黄丸中丹皮酚的含量，从而为厂家优化处方含量以及患者选药提供依据。
三个不同厂家浓缩六味地黄丸中丹皮酚含量分析
三个不同厂家浓缩六味地黄丸中丹皮酚含量分析背景介绍浓缩六味地黄丸是中药材制剂，其中丹皮酚是其中的有效成分之一。
丹皮酚是一种天然的酚类化合物，具有抗氧化、抗炎等多种药理活性，同时也是中药材中常见的活性成分之一。
本文旨在分析三个不同厂家生产的浓缩六味地黄丸中丹皮酚含量是否存在差异。
方法本文使用高效液相色谱-紫外检测（HPLC-UV）法，对三个不同厂家生产的浓缩六味地黄丸中丹皮酚含量进行分析。
具体实验步骤如下：1.样品制备：取每个厂家生产的浓缩六味地黄丸各两袋，共六个样品。
将样品研磨成粉末，并过滤掉粗颗粒。
2.色谱条件：采用Agilent 1260系列高效液相色谱仪进行分析，使用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）。
流动相为甲酸（0.1%）-乙腈，在10 min内从0%到50%逐渐升高，再在10 min内从50%到100%逐渐升高，最后维持100%乙腈流动6 min。
检测波长为275 nm，流速为1.0 mL/min。
3.标准曲线：取纯丹皮酚按10、20、40、80、160 mg/L浓度进行稀释，通过HPLC-UV法测定其吸光度，并绘制标准曲线。
4.样品测定：将制备好的样品溶于甲醇中，过滤，然后进行HPLC-UV测定。
分析结果采用上述方法，对三个不同厂家生产的浓缩六味地黄丸中丹皮酚含量进行了分析，结果如下表所示：厂家样品编号丹皮酚含量（mg/g）A A1-A2 3.28B B1-B2 3.12C C1-C2 2.85从表中可以看出，三个不同厂家生产的浓缩六味地黄丸中，丹皮酚含量存在差异。
其中，A厂家的浓缩六味地黄丸中丹皮酚含量最高，为3.28 mg/g，B厂家次之，为3.12 mg/g，C厂家最低，为2.85 mg/g。
结论本文采用HPLC-UV法对三个不同厂家生产的浓缩六味地黄丸中丹皮酚含量进行了分析，结果表明其含量存在差异，其中A厂家的浓缩六味地黄丸中丹皮酚含量最高，C厂家最低。
六味地黄丸常用质量控制方法 刘军
┃2010.03（下）┃首都医药 CAPITAL MEDICINE53摘要:目的 概述六味地黄丸常用的质量控制方法。
方法 查阅资料，选取有代表性的文献进行概述。
结果 叙述六味地黄丸在含量测定上的研究进展。
结论 六味地黄丸的质量将得到更有效、更全面地控制。
关键词：六味地黄丸；质量控制；HPLC法2000 年版药典采用分光光度法测定六味地黄丸中牡丹皮中的丹皮酚含量和薄层扫描法测定山茱萸中的熊果酸含量。
由于分光光度法和薄层色谱扫描法在定量上的缺陷，2005年版药典采用高效液相色谱法分别测定牡丹皮中丹皮酚的含量和山茱萸中的马钱苷的含量。
近几年对六味地黄丸单味指标成分的定量报道较多，分析方法多采用高效液相色谱法，主要的指标成分有熊果酸、丹皮酚及马钱苷等。
本文对六味地黄丸近几年的含量测定研究文献作一简单概述，希望为以后的研究提供一些借鉴。
1 以熊果酸为指标熊果酸是六味地黄丸配方中山茱萸的主要成分，是六味地黄丸质量检测的常用指标。
其研究进展如下：刘爱敏[1]等测定六味地黄丸（浓缩丸）中熊果酸的含量，采用HPLC法。
色谱柱：Kromasi 1100-5 C 18 柱（250mm×4.6mm，5um）；流动相：乙腈-水（90:10）；柱温：室温；流速：1ml/min；检测波长：206nm。
样品用乙醚回流提取。
刘东辉[2]等测定六味地黄丸中熊果酸的含量采用HPLC法。
色谱柱：NUCLEODUR C 18 Gravity（250mm×4.6mm，5um）；流动相：乙腈-甲醇-水-醋酸铵（68:12：20：0.5）；柱温：室温；流速：1m l /min；检测波长：220nm。
样品用乙醚回流提取。
丁晴等测定六味地黄丸及六味地黄胶囊中齐墩果酸、熊果酸的含量采用HPLC法。
色谱柱：Shim-Pack C 18 柱（4.6mm×150mm,5μm）；流动相：乙腈-甲醇-水-乙酸胺（70：16：14：0.5）；流速：1ml/min；检测波长：215nm；柱温：室温。
六味地黄丸中丹皮酚含量的测定高锦红
表 1 丹皮酚含量测定结果
吸光度 0． 421 0． 42 0． 424 平均
检出量（ μg / mL） 5． 166 5． 154 5． 200 5． 173
注： 丹皮酚含量为 9． 238 mg / g。
表 2 稳定性试验
时间（ h） 0 2 4 6 8 10
平均值
注： RSD = 0． 21% 。
1 材料与方法
1． 1 材料 仪器： UV － 2000 紫外分光光度计，莱伯泰科有限公司；
电子天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司； HH － 2 数显恒
收稿日期： 2012 － 05 － 30 基金项目： 陕西省教育厅科研项目（ 编号： 12JK0832 ） ； 渭南师范学院
一般项目（ 编号： 12YKS028） 。 作者简介： 高锦红（ 1974—） ，女，硕士，副教授，研究方向为化学计量
江苏农业科学 2013 年第 41 卷第 1 期
高锦红． 六味地黄丸中丹皮酚含量的测定［J］． 江苏农业科学，2013，41（ 1） ： 293 － 294．
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六味地黄丸中丹皮酚含量的测定
高锦红
（ 渭南师范学院化学与生命科学学院，陕西渭南 714000）
摘要： 采用紫外分光光度法测定六味地黄丸中丹皮酚含量。结果显示： 六味地黄丸中丹皮酚平均检出量分别为 5. 173 μg / mL，平均回收率分别为 101． 6% （ RSD = 1． 9% ） ，丹皮酚平均含量分别为 9． 221 μg / g。该测定方法简便、可 靠、准确，可用于该中成药的质量控制。
取已知含量的样品 3 份，分别置 25 mL 量瓶中，加入丹皮 酚对照品适量，按供试品溶液的制备方法处理，再按“2． 3． 2” 节 的 方 法 测 定 含 量，计 算 回 收 率，回 收 率 的 平 均 值 为 101. 6% ，RSD = 1． 9% （ 表 3） 。说明方法的回收率较好，达到 了 基 本 要 求，该 方 法 可 以 用 于 六 味 地 黄 丸 中 丹 皮 酚 含 量 的 检测。
六味地黄丸成份测定
论文摘要：文章分析了六味地黄丸（浓缩丸）中测定丹皮酚、马钱苷含量的高效液相色谱方法。
主题词：六味地黄丸成份测定中图分类号：tq421.1六味地黄丸（浓缩丸）质量标准收载于部颁标准第11册。
该方出于宋代?钱乙《小儿药证直诀?卷下》，系中医补肾的经典方，为滋阴补肾之著名方剂。
笔者参考《中国药典》对该产品进行研究，在原部颁标准的基础上，对质量标准进行整理提高，用hplc法测定牡丹皮中丹皮酚及山茱萸中马钱苷的含量，并进行了方法学考察。
现将结果报道如下。
1 仪器与材料1.2 试剂甲醇、乙腈为色谱纯（中国上海陆都试剂厂），乙醚、乙醇、磷酸、四氢呋喃等均为分析醇，水为高纯水。
1.3 对照品丹皮酚对照品（中国药品生物制品检定所，110708-9704），马钱苷对照品（中国药品生物制品检定所，111640-200401）1.4 样品六味地黄丸（浓缩丸）为苏州长甲药业有限公司生产。
2 方法与结果2.1 牡丹皮的含量测定2.1.1 色谱条件c18柱（依利特；250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相：甲醇-水（6：4），流速1.0 ml?min-1，柱温30℃，检测波长为274 nm。
2.1.3 对照品溶液的制备精密称取对照品适量，加甲醇制成每毫升含16 μg的溶液，作为对照品溶液。
2.1.4 空白对照实验按处方去牡丹皮制成空白制剂，取空白对照样品0.44 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100 ml，与供试品制备相同方法制得缺牡丹皮空白溶液。
分别取出对照品溶液、样品供试液、空白对照溶液依法进样检验。
结果显示空白对照无干扰。
2.1.5 线性关系的考察精密称取丹皮酚对照品适量，加甲醇稀释至54.1 μg/ml，摇匀。
分别精密吸取丹皮酚对照品溶液1，2，3，4，5 ml，加甲醇稀释至10 ml，摇匀，分别得浓度为5.41，10.82，16.23，21.64，27.05 μg/ml的丹皮酚溶液。
照高效液相色谱法，进样10 μl，测定其峰面积。
气相色谱法测定六味地黄颗粒中丹皮酚的含量
气 相 色谱 法测 定 六 味地 黄颗 粒 中丹 皮酚 的含 量
昊 虹 吴 ， 健
（ ． 徽 中 医 学 院 药 学 系 ， 徽 台 肥 ２ ０ ３ ；．中 国科 学 技 术 大 学 一 系 。 徽 合 肥 ２ ０ ５ ） １安 安 ３０８２ 安 ３ ０ ２
摘要 ： 目的 果 曩 定 六 味地 黄 颗 粒 中丹 皮 酚 的 舍 量 方 涪 『 采 用 毛 知 管 气相 屯谱 法 ， 以正 十 六 炕 为 内标 结 谊
经 反 复 实 验 ， 柴 胡 冲 剂 选 用 聚 酰 胺 薄 膜 检 出 ， 得 小 能
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六味地黄丸中丹皮酚含量测定实验研究
六味地黄丸中丹皮酚含量测定实验研究宋飞【摘要】六味地黄丸是最常用的中成药之一，具有滋阴利水之功，尤对阴虚湿停证更为适宜。
中医上称六味为酸苦甘辛咸淡，六味之名以此六味地黄丸中山茱萸含铬量最高，通过对此丸微量元素测定，说明对动脉粥样硬化和糖尿病有预防作用。
六味地黄丸能拮抗醋酸氢化可的松肾阳虚模型引起的脾脏重量减轻，似与中医“阳化气，阴成形”理论相关。
江扬聪研究证明六味地黄丸能控制血糖水平在正常范围内，从而使临床症状明显改善。
【期刊名称】《中国医药指南》【年(卷),期】2013(000)004【总页数】3页(P95-97)【关键词】六味地黄丸;丹皮酚含量【作者】宋飞【作者单位】广西医科大学第四附属医院，广西柳州 545005【正文语种】中文【中图分类】R284.11.1 理化性质丹皮酚为白色或微黄色有光泽的针状结晶，无色针状结晶（乙醇），熔点49～51℃，气味特殊，味微辣，易溶于乙醇和甲醇中，溶于乙醚、丙酮、苯、氯仿及二硫化碳中，稍溶于水，在热水中溶解，不溶于冷水，能随水蒸汽挥发。
丹皮酚为常用中药牡丹皮、徐长卿、芍药等的主要挥发性成分之一，具有明显的降压、镇静和镇痛等药理作用。
由于醋酸等因素导致的疼痛症状具有非常好的疗效。
由蛋清、甲醛等毒素导致的炎症都有着非常好的抑制效果。
对由于伤寒和疫苗导致的体温过高有着非常好的清热解毒的效果。
日常生活中，它可以减少我们身体中O2-自由基的增加，对我们的皮肤有着增白的效果，减少皮肤色素的沉积增加皮肤弹性。
不仅如此，在我们刷牙时如果加入少量丹皮酚有着对我们的牙龈疼痛都有着非常好的疗效。
1.2 检测方法比较①可以采用HPLC定量的方法进行丹皮酚的含量测定，以甲醇-2%冰醋酸为流动项，固定值相用HypersilODS柱，检测波长为276奈米。
②可以运用采用2005版药典规定方法对丹皮酚含量进行了比较检测。
③利用毛细管气相色谱法来进行测定，采用如下色谱条件：色谱柱，熔融弹性毛细管柱，涂布SE-300.26μm，N2流速60mL/min，H2流速50mL/min，空气流速500mL/min，柱温：180℃，汽化器、检测器：320℃。
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气相色谱-质谱法与薄层扫描法测定六
味地黄丸丹皮酚含量的差异对比
【摘要】目的：对气相色谱-质谱法与薄层扫描法测定六味地黄丸丹皮酚含量的差异进行对比。
方法：选取六味地黄丸（河南省宛西制药股份有限公司）作为样品，样品粉碎后待测,分别采用气相色谱-质谱法与薄层扫描法测定丹皮酚含量，对比两种方法鉴定中丹皮酚含量差异。
结果：气相色谱-质谱法检测六味地黄丸中丹皮酚平均含量分别为0.173、0.144、0.204，薄层扫描法检测六味地黄丸中丹皮酚含量范围为0.172、0.140、0.205；两种方法检测加样回收率分别为104.0%、105.1%。
结论：气相色谱-质谱法与薄层扫描法测定六味地黄丸丹皮酚含量差异不明显，结果准确，具有一致性。
【关键词】气相色谱-质谱法；薄层扫描法；六味地黄丸；丹皮酚；差异
六味地黄丸为《中国药典》收载品种，为我国传统医学中用于滋补肝肾之阴的代表药物[1]，方剂由熟地黄、山茱萸、丹皮、山药、茯苓和泽泻组成，现代药理试验发现药物同时具有保护肝脏、调节肾功能、抗衰老、降血压、抗肿瘤、免疫调节等药理作用[2]。
丹皮为牡丹的甘草根皮，主要成分为丹皮酚，是六味地黄丸质量标准规定的重要监测指标，丹皮含量测定方法主要有直接蒸馏-UV法、薄层扫描法、高压液相色谱法等，而不同检测方法在丹皮酚含量鉴定中的差异则无相应研究。
本研究采用气相色谱-质谱法、薄层扫描法对六味地黄丸中的丹皮酚进行测定，旨在探索六味地黄丸生产过程中的无损定量检测途径，具体如下。
1.仪器与试药
1.仪器
薄层扫描法：仪器为KH-3000型全能型薄层色谱扫描仪（上海科哲生化科技有限公司），定量毛细管由日本岛津仪器有限公司生产，全自动薄层铺板器TD-II（北京同德创业科技有限公司），硅胶G（上海研生生化试剂有限公司），SKF-24超声波清洗器（上海隆拓仪器设备有限公司）。
气相色谱-质谱法与薄层扫描法：色质联用仪（上海精密仪器仪表有限公司），THD-M1智能超声波发生器（深圳市太和达科技有限公司），CR-8A色谱数
据处理器（日本岛津仪器有限公司）。
1.2试药
六味地黄丸（河南省宛西制药股份有限公司；Z41021968；批号为020921、021101、021012），丹皮酚对照品以及内标正十六烷由中国药品生物制品检验所
提供，其余试剂均为分析纯。
1.方法
2.1薄层扫描法
取六味地黄丸粉碎为直径<2mm的碎块，取50mg，取丹皮酚对照品50mg,置入50ml容量瓶内，采用无水乙醇溶解并稀释至刻度，对照品溶液浓度稀释浓
度至1mg/ml，作为标准品溶液；取牡丹皮药材粉末2g左右，精密称定，按照样
品溶液方法制备为10mg牡丹皮药材作为对照液，以精密仪器取丹皮酚对照品溶
液1、2、3、4、5μl点样在同一硅胶板上，反射法锯齿扫描，波长λR=365nm，
λs=274nm，扫描速度为20mm/min,狭缝1.25×1.25mm，线性校正：Sx=3，灵敏度
为X2。
层析方法：20×20cm硅胶G板，厚度为0.4mm，在105℃下活化30min，
展开溶剂，环乙烷-氯仿-无水乙醇配比为（7:3:1），斑点观察，紫外灯下检识
定位，获得峰面积积分值，外标法对丹皮酚含量进行测定。
2.2气相色谱-质谱法
准确称取六味地黄丸粉碎剂及对照品适量，分别置入10ml量瓶中，无
水乙醇溶解并定容，充分震荡后配为1mg/ml的储备液，取样品置入锥形瓶内，
加入乙醇溶液，超声提取30min，移入50ml量瓶并定容，使用时充分摇匀，静置，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，即得，使用色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），梯度洗脱程度：0-10min时为33%B，19min时为60%B，19.01min至结束时为
80%B，柱温25℃，流速0.8mL/min，进样量10μL。
测定完成后开展干扰性试验,
取样品溶液、对品溶液以及阴性空白样品溶液在上述色谱条件下,观察丹皮酚对
照品溶液与阴性空白样品溶液在相同保留时间内是否出现明显色谱,结果显示无
明显色谱峰出现,表明被测组分离良好,无干扰.
2.3加样回收率试验
精密量取对照品溶液1.0mg、2.0mg、3.0mg各3份，置入10ml量瓶内，精密加入1.0ml样品溶液，以内标溶液稀释至刻度，气相色谱分析或薄层扫描法，获取平均回收率。
1.结果
3.1丹皮酚检出浓度
薄层扫描法:将丹皮酚与内标峰面积之比(As/Ai)作为响应值,以丹皮酚量(x)
作为变量,得到回归方程:As/Ai=0.218×(μg)-0.308,相关系数为0.9995.气相色
谱-质谱法:以对照品面积为纵坐标,以样品浓度为横坐标,进行线性回归,丹皮酚
回归方程为y=145635x-107,相关系数为0.9991,不同方法丹皮酚检出含量见表1.
表1 薄层扫描法与气相色谱-质谱法检出丹皮酚含量
方法产生批
号含量(%)平均含量
(%)
变异系数
(%)
薄层扫描
法
0209210.1750.172 4.0
0211010.1440.140 3.9
0210120.2100.205 3.1
气相色谱-
质谱法
0209210.1760.173 3.9
0211010.1460.144 4.1
0210120.2110.204 3.2
3.2回收率
气相色谱-质谱法、薄层扫描法加样回收率分别为104.0%、105.1%，RSD分别为1.51%、2.4%。
1.讨论
中药的复方制剂由多种药材组成,成分比较复杂,而实现药物质量控制,主要通过对其中一种或多种主要活性成分含量进行测定.六味地黄丸源自《小儿药证直诀》,具有滋阴补肾功效,用于头晕耳鸣、肾阴亏虚、骨蒸潮热、腰膝酸软、消渴等症,在中成药中具有重要地位[3],因此六味地黄丸的质量控制尤为重要.
中国药典在2000版中以水蒸气蒸馏,274nm测定其吸收度的方法对丹皮酚含量进行测量,有学者[4]采用薄层扫描法对不同厂家六味地黄丸中成药中丹皮酚含量进行测定,以氯仿回流提取,点样在薄层硅胶GF254预制板上,根据环乙烷-乙酸乙酯(9.5:0.5)展开剂展开,之后测定波长λs=274mm、参比波长λR=400mm,以双波长反射法线性扫描测定,结果显示不同六味地黄丸中成药的回收率均在95%以上,分离效果理想.六味地黄丸因为内含蜂蜜,因此在溶解、提取时难度较大,提取容积的选择尤为重要,在对甲醇、无水乙醇、50%甲醇以及稀乙醇进行对比,并选择无水乙醇作为提取溶剂,薄层扫描法中,以反射法锯齿扫描，波长λr=365nm，
λs=274nm，方法简单,重复性良好.气相色谱-质谱法在中药质量控制中运用时间较短,但是其优势已经被临床研究所证实[5-6],在六味地黄丸丹皮酚的测定中,对照品不易获得,单独采用气相色谱分析其成分定性难度较大,而以质谱法作为气相色谱法检测器,能够给出色谱峰丰富的碎片信息,从而更好的完成识别、定量[7-8],本次研究中气相色谱-质谱法检出丹皮酚平均含量分别为0.173、0.144、0.204,且干扰性试验显示抗干扰性良好.
但是本次研究中仅选用1个厂家的六味地黄丸作为样品研究,而实际情况下药材质量不同,丹皮酚含量相差不大,因此研究存在一定的片面性,需要在后续研究中进一步优化.
参考文献:
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[3]王有鹏,刘璐佳,景伟超,等.基于数据挖掘的《小儿药证直诀》治疗儿科疾病用药配伍规律研究[J].现代中西医结合杂志,2020, 29(11):1189-1192.
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[8]罗葵,宋学英.超高效液相色谱串联质谱法测定豆类食品中的游离神经递质类氨基酸[J].食品工业科技, 2021,42(18):317-325.。