转基因动物流程

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人教版高中生物选修三流程图

人教版高中生物选修三流程图work Information Technology Company.2020YEAR选修三流程图一、基因工程流程图1、转基因植物的培育流程：2、转基因动物的培育流程：1、基因工程的操作工具有：。

2、基因工程的操作流程是：（1）；（2）；（3）；（4）。

其中核心步骤是：。

3、获取目的基因的方法有：；为了获得更多的目的基因，可以用技术使目的基因在生物体外大量扩增。

4、构建基因表达载体需要的工具酶有；构建基因表达载体的目的是：。

5、将目的基因导入植物细胞常用的方法是；导入动物细胞的常用的方法是。

一般选用受精卵作为目的基因的受体细胞，原因是。

6、基因表达载体的组成：。

其中启动子的作用是；标记基因的作用是。

7、检测目的基因是否成功表达的方法是：（1）分子水平的检测：用放射性同位素标记的片段做探针进行分子杂交，检测目的基因是否成功转录出mRNA 或用技术检测目的基因是否翻译出相应的蛋白质。

（2）个体水平的检测：。

二、蛋白质工程流程图：1、工程是蛋白质工程的基础，从本质上看蛋白质工程是通过改造，从而达到改造的目的。

三、植物组织培养流程图：1、植物组织培养的理论依据是：。

2、植物细胞表现出全能性的条件：。

3、植物组织培养的核心技术：。

4、愈伤组织的结构特点是：。

5、植物组织培养的培养基中除各种营养物质外，还需要添加，目的是。

同时在培养过程中，除必要的温度、光照和氧气等外界条件外，操作过程中还必须保证。

6、植物组织培养技术有哪些应用？（写出三种）7、若要制作人工种子，应进行到哪一阶段？。

若用紫杉细胞生产治疗癌症的紫杉醇，应进行到哪一阶段？。

四、植物体细胞杂交流程图： 1、如何去除细胞壁？2、诱导原生质体融合常用的方法有。

植物细胞杂交的原理是：。

3、植物原生质体融合完成的标志是。

4、由杂种细胞培养成杂种植株的技术是：。

5、植物体细胞杂交培育新品种的优点是。

转基因小鼠制备方法

转基因小鼠制备方法一、引言转基因小鼠是指通过基因工程技术将外源基因导入小鼠基因组中，使其表达或缺乏特定基因，从而研究基因功能、疾病模型等方面的动物模型。

转基因小鼠制备方法是实现转基因小鼠研究的重要步骤之一，本文将详细介绍转基因小鼠制备的一般步骤和常用技术。

二、转基因小鼠制备的一般步骤1. 选择目标基因和载体转基因小鼠制备的第一步是选择目标基因和适当的载体。

目标基因可以是外源基因、特定基因的突变体或基因敲除。

载体通常是带有选择标记（如抗生素抗性基因）和目标基因的质粒。

2. DNA构建在DNA构建过程中，首先需要将目标基因和选择标记基因插入到载体的适当位点上。

这可以通过限制性内切酶切割和连接、PCR扩增等方法实现。

构建完成后，需要进行酶切鉴定和测序确认。

3. 体外培养胚胎干细胞（ES细胞）转基因小鼠制备中常用的方法是利用ES细胞技术。

首先，从小鼠胚胎中获得内源性干细胞（ES细胞），并进行体外培养。

然后，将构建好的转基因载体导入ES细胞中，通过抗生素筛选获得带有目标基因的转基因ES细胞克隆。

4. 转基因小鼠制备转基因ES细胞的制备完成后，可以进行转基因小鼠的制备。

这一步骤通常有两种方法：内源性重组和外源性重组。

内源性重组是将转基因ES细胞注射到小鼠早期胚胎中，使其整合到小鼠的生殖细胞中，从而获得转基因小鼠。

外源性重组是将转基因ES细胞直接注射到小鼠的细胞团中，形成转基因胚胎，再将转基因胚胎移植到雌性小鼠子宫中，使其发育成为转基因小鼠。

5. 转基因小鼠鉴定转基因小鼠制备完成后，需要对其进行鉴定。

通常采用PCR、Southern blotting、Western blotting等分子生物学方法，检测转基因小鼠是否成功表达目标基因。

三、常用技术1. CRISPR/Cas9技术CRISPR/Cas9是一种新兴的基因编辑技术，可以实现高效、精确地对基因组进行编辑。

通过CRISPR/Cas9技术，可以直接在小鼠胚胎中进行基因编辑，从而制备转基因小鼠。

利用基因编辑技术制备转基因动物的步骤详解

利用基因编辑技术制备转基因动物的步骤详解基因编辑技术是一种革命性的生物技术，可以针对动植物基因组进行精确的改造和编辑。

利用基因编辑技术制备转基因动物的过程可以分为以下几个步骤。

第一步：选择基因编辑工具基因编辑技术最常用的工具是CRISPR-Cas9系统。

CRISPR是一种天然存在于细菌中的防御机制，通过引入Cas9蛋白和合适的RNA序列，可以将Cas9蛋白导向到特定的目标位点上，由Cas9蛋白的核酸切割活性引发基因组的突变。

第二步：设计目标位点在制备转基因动物之前，需要确定需要编辑的目标基因和位点。

目标基因是指需要进行改造的基因，而目标位点是指基因组中需要敲除、替换或插入外源DNA 的具体位置。

通过分析目标基因的功能和调控机制，可以确定最合适的目标位点。

第三步：合成或构建基因编辑工具一旦确定了目标位点，就需要合成或构建基因编辑工具。

对于CRISPR-Cas9系统来说，需要合成目标位点特异性的RNA序列（sgRNA）并制备Cas9蛋白。

sgRNA的设计应考虑到其与目标位点的特异性配对，以及Cas9蛋白与sgRNA形成稳定复合物的效率。

第四步：基因编辑载体构建将基因编辑工具导入目标细胞需要利用载体进行传递。

载体是一种能够稳定地携带和传递基因编辑工具的DNA分子。

可以利用分子克隆技术构建适合目标细胞和目标基因编辑的载体。

第五步：转染或注射基因编辑载体将构建好的基因编辑载体转染或注射至目标细胞或受精卵。

其中转染是将载体通过化学物质或物理手段导入目标细胞，而注射则是直接将载体注入受精卵的质量或染色体。

第六步：筛选和验证编辑结果将转染或注射后的细胞或胚胎进行培养或转植至合适的宿主动物体内，随后通过对细胞或胚胎的分析，筛选出已经发生基因编辑的个体。

常用的筛选方法包括PCR、测序、蛋白质分析等。

第七步：繁殖和鉴定转基因动物成功筛选出发生基因编辑的个体后，需要进行进一步繁殖和鉴定。

通过鉴定转基因动物是否将所需编辑传递给其后代，可以确定基因编辑是否遗传稳定。

转基因技术的主要操作流程

转基因技术的主要操作流程
内容:
转基因技术的主要操作流程通常包括以下几个步骤:
1. 选择目的基因。

根据转基因的目的,从供体中选择想要的目的基因,这通常是编码某种有用蛋白质的基因。

2. 构建载体。

将选定的目的基因插入到载体分子中,例如质粒或病毒载体。

载体可以帮助目的基因进入目标生物的细胞。

3. 将重组载体导入宿主细胞。

使用微注射、电穿孔、基因枪等方法,将含有目的基因的重组载体导入目标生物的细胞中。

4. 筛选转基因细胞。

通过抗性筛选、荧光筛选等方法,从导入重组载体的细胞中筛选出真正导入了目的基因的转基因细胞。

5. 转基因细胞培养。

对转基因细胞进行培养、繁殖,获得足够数量的转基因细胞。

6. 转基因植株再生。

通过组织培养等手段,从转基因细胞中再生出完整的转基因植株。

7. 鉴定转基因植株。

通过、杂交等手段对转基因植株进行鉴定。

8. 转基因植株评价。

对转基因植株的表型进行评价,确定是否达到了转基因的预期目的。

这就是转基因技术的主要操作流程。

不同的转基因目的和对象,具体操作可能会有所调整。

转基因动物操作流程

转基因动物操作流程一、目的基因的获取。

咱得先有想要转进动物体内的基因呀。

这就像找一颗神奇的种子，要种到动物这个“小花园”里。

这个基因可以从好多地方来呢。

有时候是从其他生物身上发现了特别厉害的基因，比如说，有的植物能抗虫，那这个抗虫基因如果转到动物身上，说不定能让动物也有新本事。

获取这个基因的方法也不少，可以用基因文库筛选，就像在一个装满基因的大仓库里找宝藏一样，或者用PCR技术，这就像是用一个特别的复印机，把我们想要的基因复制出来。

二、基因表达载体的构建。

有了目的基因，还得给它造个“小房子”，也就是构建基因表达载体。

这个载体就像是一个小飞船，能带着目的基因准确地到达动物细胞里。

在这个载体里，除了目的基因，还有启动子和终止子这些重要的部件。

启动子就像是小飞船的发动机启动按钮，它能告诉细胞什么时候开始让目的基因发挥作用。

终止子呢，就像是刹车，告诉细胞什么时候这个基因的工作该停止了。

而且这个载体里还可能会有标记基因，这就像是小飞船上的信号灯，方便我们之后去识别哪些细胞成功地接纳了这个带有目的基因的载体。

三、受体细胞的选择。

接下来就是要选一个合适的“家”来接纳这个带着目的基因的载体啦，也就是受体细胞。

对于转基因动物来说，最常用的受体细胞就是受精卵。

受精卵就像是一个充满无限可能的小魔法球，它还没有开始分化，就像一张白纸，有很大的潜力。

把我们构建好的基因表达载体转进受精卵里，就像给这个小魔法球注入了新的魔法力量，然后这个受精卵就有可能发育成一个带有新基因的动物。

四、基因导入受体细胞。

那怎么把基因表达载体弄进受体细胞呢？这里有好几种办法呢。

比如说显微注射法，这就像是用一根超级超级细的针，把基因表达载体直接注射到受精卵里面，这可是个技术活，就像在给小蚂蚁打针一样精细。

还有病毒介导法，利用病毒这个小“快递员”，让它把基因表达载体送到细胞里面，不过这个小“快递员”有时候也会调皮捣蛋，可能会带来一些其他的小麻烦。

五、胚胎移植。

转基因技术——动植物转基因方法ppt(共22张PPT)

【DAWN_ZX】
•优点:不依赖组织培养人工再生植株，技术简单，
不需要装备精良的实验室，常规育种工作者易于掌握
。
转基因
技术
【DAWN_ZX】
动物转基因方法
原核显微注射法胚胎干细胞介导法
逆转录病毒载体法精子介导的基因转移
核移植转基因法
体细胞核移植法
线粒体介导法
转基因
技术
【DAWN_ZX】
动物转基因方法
原核显微注射法（最常用）
【启动子】是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因
转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。【终止子】也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。
【DAWN_ZX】
转基因技术的步骤
STEP3：将目的基因导入受体细胞
（1）导入植物细胞一般用农杆菌转化法，也可用基因枪法或花粉管通道法。（2）导入动物细胞一般用显微注射法。（3）导入微生物细胞一般用感受态细胞吸收DNA 分子的方法。
转基因
技术
【DAWN_ZX】
转基因技术的步骤
STEP4：目的基因的检测和表达
1.检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因
。
方法：采用DNA分子杂交技术。 2.检测目的基因是否转录出了mRNA。
方法：采用用标记的目的基因作探针与 mRNA杂交。 3.最后检测目的基因是否翻译成蛋白质。
方法：从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原－抗体杂交。 4. 进行个体生物学水平的鉴定。
•根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒，其上有一段T-DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中。因此，农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。 •近年来，农杆菌介导转化在一些单子叶植物（尤其是水稻）中得到了广泛应用。

修改转基因动物

正负筛选示意图
正选择
如果发生正确的同源重组而整合，那么
HSV-tk就不会整合到基因组，只有转入基因及neor基因整合进去。用G418来筛选转染细胞，没有整合neor基因的细胞将全部死亡，整合了外源基因的细胞可以存活下来，这就是正选择。
负选择
质粒载体pUC19：

大小2686bp，带有pRB322的复制起始点，一个氨苄青霉素抗性基因一个大肠杆菌乳糖操纵子β-半乳糖苷酶基因（lacZ’）的调节基因片段，一个调节lacZ’基因表达的阻遏蛋白的基因 lacⅠ，多个单克隆位点。
λ噬菌体载体
由质粒和噬菌体的粘性末端构建而成，具有质粒载体和噬菌体二者的优点。 λ噬菌体载体的容量受到一定的限制，最大插入片段不能超过23kb。 1978年Colli s和Hohn发展了新载体——粘粒（即柯斯质粒），其基因组由以下几部分构成：质粒复制起始位点， 1个或多个限制性内切酶位点，抗药性标记和带有粘性末端的DNA片段。粘粒载体大小为4～6kb，而插入片段为29～45kb，可克隆携带40kb大小的DNA片段，在大肠杆菌中复制保存，适用于作基因簇和大基因克隆。

DNA微注射法

超常排卵：供体雌鼠注射怀孕母马的血清 48h再注射人的绒毛膜促性腺激素使其母马超量排卵处理的雌鼠一次可以产生大约35个卵细胞（而正常的雌鼠只能产生5～10个卵细胞）注射：雌鼠交配后杀死小心从输卵管中取出受精卵将外源基因注射进受精卵中。 DNA微注射要在精前核时期注射才能有效。移植：将25～40个受精卵用显微外科手术移植到假孕雌鼠的子宫内制造雌鼠假孕让它与切除了输精管的不育雄鼠交配（缺乏精子所以雌鼠卵细胞无法受精）培养：将受精卵移入代孕母鼠子宫中，大约3周以后，接受过注射的受精卵发育生长成为幼鼠，由代孕母鼠产下。检测：提取DNA进行Southern杂交或PCR检测，或通过与另一只鼠杂交来确定转入基因是否在其生殖系中。筛选：对子代进行杂交产生纯合转基因鼠。

转基因克隆动物的流程

转基因克隆动物的流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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转基因小鼠的制备

转基因小鼠的制备显微注射法这一方法的实验程序如下：⑴准备假孕母鼠（养母）：将可育雌鼠与输精管结扎后绝育的雄鼠交配，剌激雌鼠发生一系列妊娠变化而得到假孕母鼠作为受精卵转基因后的养母；⑵受精卵的准备：可育雌鼠注射孕马血清与绒毛膜促性腺激素（hcg）促使超排卵。

处理后与可育雄鼠交配。

次日从输卵管内收集受精卵备用；⑶基因导入：用显微注射装置将目的基因溶液导入受精卵雄性原核内；⑷胚胎移植：将已转入基因的受精卵自背部植入假孕母鼠的输卵管内，使胚胎在养母体内发育成熟；⑸对幼鼠的鉴定：①幼鼠发生断乳后自尾部提取DNA，与目的基因探针作分子杂交，鉴定外源基因是否整合，有整合的鼠称为首建鼠（founder）；②建立鼠系，将带有外源基因的小鼠与未经转基因的小鼠交配、传代后，后代有50%机率带有整合的基因供实验用。

也可将合适的组织进行细胞培养建立细胞系；③自小鼠内脏提取rna，与目的基因探针做分子杂交，比鉴定外源基因的表达和表达的组织特异性。

表达产物可以测定活性的，也可直接自血液或组织测定活性蛋白质，常用的方法如酶联免疫吸附试验（elisa）或放射免疫测定（ria）等。

亦可取胚胎进行分析。

显微注射法简化的实验过程如图23-2所示。

我国已有少数实验室（如中国医学科学院基础医学研究所）应用此法进行载脂蛋白tgm研究。

基因打靶与基因剔除技术ES细胞是从哺乳动物早期胚胎发育产生的内胚团（inner cell mass）中分离出来的。

它本身是二倍体，能在体外培养，具有高度的全能性，可以形成包括生殖细胞在内的所有组织，并且在不同的培养条件下表现出不同的功能状态。

这种细胞有两个特点，一是它本身可以分裂、增殖，形成细胞集落；另一特点是经过发育可以形成正常的动物后代。

因此，借用ES细胞系可将人们企望的某种不完整的、无功能基因直接引入到ES细胞中，通过细胞增殖、筛选可得到丧失了某种基因功能的动物后代。

正是由于ES细胞的研究成功与广泛应用，才使得基因打靶与基因剔除技术在转基因动物中的应用成为可能而且近来取得长足发展。

《动物转基因技术》课件

生物制药与生物反应器
生物制药
利用动物转基因技术，可以生产出具有特定生物活性的蛋白质、酶等生物制品，用于治疗、诊断和预防疾病。
生物反应器
动物转基因技术还可以用于构建生物反应器，通过转基因动物的器官或组织作为生物反应器，生产出大量的生物制品，降低生产成本和提高生产效率。
动物育种与改良
动物育种
利用动物转基因技术，可以对动物的遗传物质进行改造和优化，培育出具有优良性状的新品种。例如，转基因猪、转基因牛等。
动物改良
通过转基因技术，可以改善动物的生长性能、繁殖性能、抗病性能等性状，提高动物的产量和品质，为畜牧业的发展提供有力支持。
05
动物转基因技术的安全性问题
转基因动物的安全性评估
01
02
03
转基因动物的安全性评估是确保转基因技术应用的重要环节，需要从多个方面进行综合评估，包括遗传稳定性、生物学特性、生态影响等方面。
详细描述
转基因猪的实验研究主要通过胚胎移植、体细胞核移植等技术手段，将外源基因导入猪的受精卵或胚胎细胞中，从而获得携带外源基因的转基因猪。这些转基因猪可用于研究外源基因的表达、功能以及对生长发育、生产性能等方面的影响。
转基因牛的实验研究
总结词
转基因牛是研究转基因技术的又一重要动物模型，具有繁殖周期长、生产性能高、经济价值大等优点，可用于提高牛的抗病能力和生产性能等方面的研究。
安全性、毒理学等方面的评估。
评估过程中需要关注转基因食品的原料来源、生产工艺、成分含量等方面的变
化，以及可能对人类健康的影响。
评估结果需经过严格的科学论证和审查，确保转基因食品的安全性和可控性。
转基因技术的伦理与法律问题

转基因小鼠的制备流程图

转基因小鼠的制备流程图
1974年，Rudolf Jaenisch通过将SV40 病毒的DNA注射到小鼠的囊胚中，创造了第一只携带外源基因的小鼠。

后来又有研究人员把Murine leukemia病毒注射到小鼠胚胎得到了能通过生殖系统稳定遗传的小鼠，并且外源基因能在后代中稳定表达。

这些能稳定遗传且表达外源基因的小鼠即我们一般意义上所说的转基因小鼠。

转基因小鼠的制备方法
“转基因小鼠的制备技术主要有两类，DNA原核显微注射法和胚胎干细胞囊胚显微注射法。

DNA原核显微注射法通过显微操作仪将外源基因直接注入受精卵,使外源基因整合到DNA中,发育成转基因动物。

转基因小鼠的制备流程图。

【精品推荐】建立转基因动物有哪几种途径

建立转基因动物有哪几种途径
小编希望建立转基因动物有哪几种途径这篇文章对您有所帮助，如有必要请您下载收藏以便备查，接下来我们继续阅读。

本文概述：目前虽然没有食用转基因动物，转基因动物在医学上有重要作用。

人们做实验，器官移植都需要转基因动物。

那么建立转基因动物有哪几种途径呢？下面和小编一起了解下吧。

生活中虽然没有食用转基因动物，人们做实验，器官移植都需要转基因动物，转基因动物在医学上有起着重要作用。

那么建立转基因动物有哪几种途径呢?下面和小编一起了解下吧。

建立转基因动物三种常用的转基因方法：
显微注射法是直接将重组DNA分子以微注射的方式导入单细胞卵的原核中，再将它植入假孕母鼠。

大约20%的微注射胚胎能够将外源基因整合到染色体基因上组上;大多数的转基因的动物能够将整合的基因传给后代，建立起转基因鼠系。

逆转录病毒感染法是用高滴度的、携带外源基因的重组逆转录病毒感染发育早期的胚胎，再将感染病毒后的胚胎植入假孕母鼠，以产生转基因的动物。

逆转录病毒的整合并不影响宿主DNA序列的重排，感染的复数容易调整，每个卵大约有10次整合的机会。

病毒染色体还能提供一个TAG分子，加速覆盖部位的迅速克隆。

这些特征使逆转录病毒转基因法用于研究随机突变。

从ES细胞到转基因动物是从哺乳。

实验动物学考点

简答：1人类疾病的动物模型（填空简答论述）定义:人类疾病动物模型(Animal models of human diseases）是指医学研究中建立的具有人类疾病模拟表现的动物实验对象和相关材料。

意义：* 人类的替难者，避免了在人身上进行实验所带来的风险；* 可按研究者的需要获得实验材料；* 缩短研究周期；* 可控制各种实验条件，结果可比性强，重复性好；* 可提供发病率较低的疾病材料* 有助于更全面认识疾病的本质* 药物的药效学研究和安全性评价* 为教学服务，提供直观生动的教学效果设计原则：1、相似性：动物模型应与相应的人类疾病有类似之处，尽可能再现所要研究的人类疾病的病理变化。

2、重复性：理想的模型应是可重复、可标准化的。

标准的动物、标准的环境、标准的饲养管理、标准的实验器材、标准的实验操作。

3、可靠性：复制模型应特异地、可靠地反映该种疾病或某种机能、代谢、结构变化，同时应具备该种疾病的主要症状和体征，并经受一系列检测得以证实。

4、适用性：复制模型应尽量考虑今后临床能应用和便于控制其疾病的发展，动物背景资料要完整，生命史能满足实验需要。

5、易行性和经济性：动物经济而来源充足，便于转运，易于关养。

在同等条件下，优先使用标准化的实验动物。

6、安全性：动物模型应不对实验人员和其它人员的生命安全产生威胁。

按产生原因分类：1、诱发性动物模型（experimental animal model）又称为实验性动物模型，指通过使用物理、化学、生物等致病手段，人为制造的疾病模型。

* 优点：制作方法简便，实验条件比较简单，其他因素容易控制，短时间内可大量复制。

* 缺点：诱发的疾病模型与自然产生的疾病在某些方面有所不同。

而且有些人类疾病不能用人工方法诱发出来。

2、自发性动物模型（spontaneous animal model）指不加任何人工诱发，在自然条件下动物自然产生的疾病，或者由于基因突变的异常表现通过遗传育种保留下来的动物疾病模型。

转基因技术的方法

转基因技术的方法
转基因技术通常通过以下几个步骤实现：
1. 选择目标基因：首先确定需要转移至目标生物的基因，可通过基因克隆、基因测序等手段进行。

2. 插入目标基因：通常采用基因枪、电穿孔、化学方法等将目标基因转移至宿主细胞中，使其整合至宿主基因组。

3. 筛选转基因细胞：经过转基因后，需要筛选出正常整合并表达的转基因细胞，可通过多种方法进行，如PCR检测、蛋白表达检测等。

4. 生殖传递：确保转基因细胞的表达和功能能够传递至后代细胞，可通过培养、动物模型等方法进行验证。

5. 应用：最后，根据所需的目的，将有效的转基因材料应用于农业、医学、环保等领域。

转基因动物

二、向受精卵雄性原核注入DNA溶液
受精卵中，有分别来自卵子和精子的两个原核，通常来自精子的雄性原核较大，能容纳更多的外源DNA，因此一般都是向雄性原核注入DNA溶液；另外，要导入的基因DNA还必须先用琼脂糖凝胶电泳法测定其纯度。
胚胎干细胞（ES细胞）是指从囊胚期的内细胞团中分离出来的尚未分化的胚胎细胞，具有发育全能性，能进行体外培养<；扩增、转化和制作遗传突变型等遗传操作。本法以整合有外源基因的ES细胞作为供体细胞，大致过程如下：
（5）将注射过的胚胎，经培养后筛选无发育缺损的囊胚，移植到交配第3天的假孕受体动物子宫内，培育出转基因动物。本法外源基因整合率高，植入囊胚前筛选合适的转化的ES细胞，克服了以前只能在子代选择的缺点，并能充分利用分子生物学发展起来的各种先进方法，是很有前途的技术。缺点是不易建立ES细胞系。并且由于通过嵌合体途径，所以实验周期长。
（2）乙型肝炎病毒携带者模型：乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）携带者的肝癌发生率为正常人的100~200倍，但尚缺乏有效的治疗方法。HBV只感染人或大猩猩，尚未研究出其他适宜的动物模型。通常认为，对HBV的免疫应答是受基因支配的，其免疫应答不充分者则成为慢性肝炎；肝癌的发生机制并不是单一的，由慢性肝炎的存在引起的肝细胞坏死和再生之问存在种种的遗传变异并出现癌变。HBV基因组是含有部分单链区的环状双链DNA分子，两条单链长度不一，长链为负链（3.2kb），短链为正链，约为负链的50%～80%。因此，如果使 l．2HB-BS的DNA成为两端重复的线状DNA用于转导，可实现全基因组的表达。另一方面，当仅要求HBS抗原表达时，仅需要导入1.2HB-BS基因即可。将添加了l.2HB-BS的HBV DNA导人C57BL/6J小鼠，在肝复制HBV，在血中释放病毒粒子。基因的表达在胚胎期发生，但对这些病毒抗原表现免疫宽容（钝化状态），不表现任何病理学变化，因此可作为人HBV携带者的模型。导人基因的小鼠与人一样，临床表现没有任何异常。

转基因动物及克隆动物

关于逆转录病毒
1、Retrovirus是只有一条单链RNA的病毒类的总称。
2、逆转录病毒在逆转录酶（RT）的作用下可以将本身的单链RNA作为模板进行复制和遗传信息的传递。
3、逆转录病毒通过病毒中膜糖蛋白和宿主细胞表面的受体相互作用而进入宿主细胞。
原理
1、逆转录病毒具有高效感染和在宿主细胞DNA上高度整合的特性。
1980年，Gordon等首次采用受精卵原核显微注射法，首次将疱疹病毒和SV40 的DNA片段导入小鼠基因组，成功制作转基因小鼠，开创了转基因动物的新纪元。
1982年 Palmiter-“超级巨鼠”
华盛顿大学的Palmiter将大鼠的生长激素基因注射到小鼠受精卵内, 培育出体型明显大于正常小鼠的超级鼠, 成果轰动一时。
第二部分克隆动物
克隆（Clone）
WHO:遗传上同一的机体或细胞系（株）的无性生殖。
克隆动物（clonal animal）
是指用人工方法得到无性繁殖的在遗传上与亲本动物完全相同的动物
动物克隆方法
➢一、胚胎分割
➢二、细胞核移植 —— 胚胎细胞核移植 —— 体细胞核移植
一、胚胎分割法
原理
将未着床的早期胚胎经显微手术后，分割为二、四、六若干等份，给每个受体内植入一部分胚胎而妊娠产仔，这样由一个胚胎可以克隆出多个遗传性能完全一样的后代个体。
▪ 800余种人为改造小鼠产生
其中开发最成功的是转基因小鼠
HBV转基因动物树鼩
3.基因治疗（gene therapy）
指将外源功能性目的基因导入病人体内，通过调控目的基因表达，抑制、替代或补偿缺陷基因，从而恢复受累细胞、组织或器官的生理功能，达到疾病治疗目的的一种方法。

转基因动物的流程

转基因动物的流程
转基因技术已经广泛应用于农业生物的研究与应用中。

将外源基因导入动物体内,使之获得某种新的性状或功能,这就是所谓的“转基因”过程。

一般来说,把外源基因插入动物细胞的流程如下:
1.选择基因载体和基因。

研究者会选择某种外来基因作为插入目标,这个基因能够使动物获得需要的新性质或功能。

同时选择一种载体将此基因包裹和输送进入细胞。

2.基因连接与重组。

利用分子生物学技术,研究者将选定的基因连接到基因载体上,形成重组质粒。

3.转染动物细胞。

利用电穿孔或病毒介导等方法,将重组质粒导入目标动物细胞中。

4.筛选生出转基因细胞。

利用生物学标记技术筛选出转基因成功的细胞株。

5.生成转基因动物个体。

从转基因细胞中恢复整个动物个体,经过进一步鉴定确定插入基因已成为其遗传物质的一部分。

6.产出转基因动物后代。

经过繁殖,转基因动物能正常繁殖下去,形成稳定表达外源基因的个体群。

以上大致描述了转基因技术将外源基因成功导入动物体内的主要步骤。

实际操作过程往往需要重复多个实验,才能得到期望的转基因动
物结果。

转基因动物原理技术

嵌合体动物：只有部分组织细胞的基因组中整合有外源基因的动物。

转基因动物：如果动物所有的细胞均整合有外源基因，则具有将外源基因遗传给子代的能力，通常把这类动物称为转基因动物。

转基因动物技术包括显微注射法，逆转录病毒法，胚胎干细胞法及精子载体法等。

转基因动物的基本原理是将改建后的目的基因（或基因组片段）用显微注射等方法注入实验动物的受精卵（或着床前胚胎细胞），然后将此受精卵（或着床前胚胎细胞）再植入受体动物的输卵管（或子宫）中，使其发育成携带有外源基因的转基因动物，人们可以通过分析转基因和动物表型的关系，从而揭示外源基因的功能；也可以通过转入外源基因培育品种优良的工程动物等。

原核生物的基因转移：①细菌经0℃及CaCl2低渗溶液处理，再进行短时间的热冲击处理②电穿孔法真核生物的基因转移：①磷酸钙共沉淀②DEAE-葡聚糖介导的转染技术③聚乙二醇介导的细菌原生质体与哺乳动物细胞融合④电穿孔⑤脂质体转染技术⑥致密性脂多胺阳离子层将DNA包被起来，促进DNA与细胞膜的结合⑦受体介导的胞饮作用⑧显微注射技术动物的转基因技术：①显微注射技术显微注射技术系采用显微注射仪对受精卵进行注射的一种技术，其主要仪器部分包括倒置显微镜和微操纵臂，附属设备主要包括拉针仪等。

②逆转录病毒载体技术利用逆转录病毒载体进行基因转移，一般是将去掉透明带的早期胚胎（8细胞胚）和可产生病毒的成纤维细胞共培养，感染一定时间后，再移植给养母完成发育过程。

③胚胎干细胞（ES细胞）技术④精子载体技术⑤其他转基因的外源基因至少应包括两部分：含调控元件的旁侧序列和可表达的结构基因序列。

调控元件的选择: ①选用具有较高表达活性的强启动子②选用目的基因的天然启动子序列目的基因的选择：①选用目的基因的基因组片段②选用目的基因的cDNA序列③选用报告基因为目的基因报告基因或报告序列的选择，在转基因研究中，，由于转基因和內源基因的同源性较高，给转基因的检测带来困难。