Procleix Panther核酸检测方法学性能验证评价

Procleix Panther核酸检测方法学性能验证评价

赵倩;谢月娜;姚娜;李凤园;刘淼;李娜

【摘要】目的对Procleix Panther全自动核酸检测系统验证其分析性能及操作性能,为Panther操作系统的确认、验证研究提供帮助,并为NAT检测的质量控制和过程控制提供数据支持.方法通过测定下限、符合率、准确度、检测灵敏度、抗干扰能力、系统稳定性等这几个方面评估核酸检测系统的操作性能及检测性能.结果本实验室对定值标准物质进行不同浓度稀释后测定HBV DNA的测定下限为0.5 IU/ml、HIV RNA的测定下限为2.5 IU/ml、HCV RNA的测定下限为0.19

IU/ml.Panther与Tigris的联检鉴别符合率为100％.轻度和中度脂血、溶血对核酸联检及鉴别检测结果无影响.2017年Panther与Tigris相比无效测试率(3.08％)稍高.结论 Panther核酸检测系统的分析灵敏度与厂商声明无显著差别,通量、长时间运行下的设备状态和试剂稳定性都符合实本中心验室需求,不同设备间不存在检测性能间的差异,但Panther无效测试率稍高,主要是由于硬件故障导致,可见仪器的日常维护保养相当重要.并确认中轻度溶血、脂血等对Panther系统分析结果准确性无显著影响,可以满足本中心对标本的常规核酸检测要求.

【期刊名称】《继续医学教育》

【年(卷),期】2018(032)012

【总页数】3页(P151-153)

【关键词】ProcleixPanthersystem;核酸检测;酶联免疫吸附试验

【作者】赵倩;谢月娜;姚娜;李凤园;刘淼;李娜

【作者单位】天津市血液中心检验科,天津 300110;天津市血液中心检验科,天津300110;天津市血液中心检验科,天津 300110;天津市血液中心检验科,天津300110;天津市血液中心检验科,天津 300110;天津市血液中心检验科,天津300110

【正文语种】中文

【中图分类】R47

近年来，我国采供血机构都是采用2遍酶联免疫吸附试验（ELISA）和1遍核酸检测（nucleic acid testing，NAT）来筛查无偿献血者血液中的相关病毒的抗原/抗体和DNA/RNA，由于NAT的应用显著缩短了病毒感染的“窗口期”[1]，提高了隐匿性感染的检出率，为当前血液安全提供了有效保障。按照《血站质量管理规范》《血站实验室质量管理规范》和《血站技术操作规程（2015版）》的要求，全自动核酸检测系统这类关键设备投入使用前及应用一段时间后，应进行性能验证，证明仪器可满足实验室日常检测需要。同时增加使用第三方提供的质控品实时监控试验性能及参加卫计委指定的室间质评活动，用于监控每天试验的有效性和稳定性，以及监测系统的趋势变化。

Panther是全自动核酸检测分析系统，其各个环节易控且干扰因素少，便于实验室的过程控制和质量控制。参照国内外设备性能验证的要求，并结合本实验室实际工作的需要，对Panther系统的一系列操作性能和分析性能进行了验证。

1 材料与方法

1.1 材料

Procleix Panther全自动核酸检测系统西班牙盖立复公司。Panther所采用的试剂为Procleix Ultrio Elite Assay（盖立复）；病毒鉴别探针试剂： Procleix Ultrio

Elite HBV/HCV/ HIV，所有试剂均为批批检定合格并在效期内使用。Procleix Ultrio Elite（试剂批号167043，效期20180215）。生物安全柜（美国Thermo），低温离心机（日本久保田），去盖仪（瑞典PLUGGO）。实验过程

中的质控品及采用的核酸系列血清评价盘（分析灵敏度盘批号201706001，有效期20190613）购自北京康彻斯坦生物技术有限公司。

1.2 方法

1.2.1 测定下限。测定下限为系统能检测到的分析物的最小含量或最低浓度。选用

北京康彻思坦生物技术有限公司的分析灵敏度盘进行检测，若阳性进行稀释（如稀释到原浓度的2、4、8、16倍…）后进行检测。首次出现阴性的前一个稀释倍数

为该实验的测定下限。

1.2.2 符合率（仪器比对）和准确性确认方法。使用Panther 与本室目前正在运行的Tigris进行常规标本的平行检测。联检至少选择25份阴性标本，25份阳性标

本进行比对。鉴别比对本次选择了20份阳性标本其中7份HBV DNA阳性、6份HIV RNA阳性、7份HCV RNA阳性。标本的阴阳性尽可能随机排列，对检测结

果进行比对。通过公式计算各项性能指标，参照卫生部室间质评的通过标准，符合率≥80%以上即为确认通过。

1.2.3 干扰实验。1）脂肪血对NAT影响的确认方法：选择已知高值标本一份，用阴性的高度脂血（TG 13.81 mmol/L）血清作为梯度稀释基质，对标本进行2倍、5倍稀释，制成中度（TG 6.9 mmol/L）、低度（TG 2.76 mmol/L）脂肪血标本，用专业的平衡液对高值标本进行2倍、5倍稀释，制成中值、低值标本作对照；分别检测HBV-DNA、HCV-RNA及HIV-RNA，从而验证脂血对NAT结果是否存

在影响。

2）溶血对NAT的影响的确认方法：选择阴性新鲜全血，用滴管搅匀吹打使之重

度溶血，取血清作为梯度稀释基质。选择经试剂盒检测的阴性和阳性标本各1份，

用梯度稀释基质对标本进行1倍、10倍梯度稀释，制成中度、轻度溶血标本，分

别检测HBV-DNA、HCV-RNA及HIV-RNA，从而验证溶血对NAT结果的影响。

1.2.4 检测灵敏度。应用NAT试剂对分析灵敏度盘每个浓度的HBV/HCV/HIV样

本进行单人份检测，统计每个浓度样本的重复检出率。判定标准为高浓度样本的检出率应为100%、中浓度检出率≥95%、低浓度检出率≥50%。

1.2.5 系统稳定性评估。Panther稳定运行后，抽取其1年时间内的运行数据，统计无效工作列表率和无效检测率，评估其在较长时间内的系统稳定性。

2 结果

2.1 检测下限确认结果

本实验室对定值标准物质进行不同浓度稀释后测定下限HBV DNA为0.5 IU/ml、HIV RNA为2.5 IU/ml、HCV RNA为0.19 IU/ml。Ultrio Elite检测试剂盒提供

的分析灵敏度分别为：HIV-1 18（15.0 ～ 23.5）IU/ml，HIV-2 10.4（8.9 ～12.6）IU/ml；HCV 3（2.5 ～ 3.9）IU/ml；HBV 4.3（3.8 ～ 5.0）IU/ml，本试验满足试剂说明书要求，确认通过。

2.2 符合率（仪器比对）和准确性确认

使用Panther 与Tigris进行常规标本的平行检测。50份联检及20份鉴别样本的

两台仪器检测结果一致，通过公式计算性能指标，Panther 与Tigris的联检及鉴

别定性检测符合率为100%。参照2017原卫生部临检中心室间质评结果，准确度为100%。本实验室Panther混样联检及拆分定性检测符合《核酸检测项目性能

验证标准操作程序》中正确度性验证通过标准。

2.3 干扰实验

采用Panther对中低度脂肪血标本和中低值对照标本进行联检、HBV-DNA、HCV-RNA及HIV-RNA鉴别检测，结果一致。制成的中轻度溶血标本进行联检、鉴别检测，与经试剂盒检测的对照阴阳性标本检测结果一致，从而验证中轻度脂血、