骨髓细胞学检查

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3、临床意义：
主要用于Aucte Leukemia的鉴别诊断。 急粒POX（＋＋＋） 急单POX（＋）或（－） 急淋POX（－）
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二、非特异性酯酶染色 （non specific esterase
1、原理：
NSE）
血细胞中的NSE将基质液中的α －醋酸 萘酚水解，萘酚再与重氮染料偶联生成不 溶性的有色沉淀。
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5.细胞涂片检查时，吸取的骨髓液滴在载玻
片上（要有斜度）应迅速推片，避免凝固。 推片数目应根据检查需要决定。 6.骨髓液涂片时，涂膜应厚薄适宜，细胞分 布均匀，同时应在玻片一端标记患者姓名
及日期，以防差错。
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二、骨髓涂片细胞学检查内容
1.骨髓有核细胞的增生程度，低倍镜下 检查。根据成熟红细胞与有核细胞的
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一、过氧化物酶染色 （Peroxidase stain
1、原理：
POX）
血细胞中的Peroxidase能分解试剂中的底物 过氧化氢，释出新生态氧，使联苯胺氧化为联苯 胺蓝。后者与亚硝基铁氰化钠结合，形成暗蓝色 的颗粒定位与胞浆中。
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2、结果：
胞浆中无蓝色颗粒者为（－） 出现蓝色颗粒者为（＋） 颗粒细小，分布稀疏者为（＋＋） 颗粒粗大而密集者为（＋＋＋）
1.LMSC的生物学特性：
高度自我复制能力
高度自我更新能力
具有分化成熟能力
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2.LSCM存在的部位：
骨髓、脾、肝、外周血液
3.调控因子：
EPO、GM-CSF、G-CSF、
MEG-CSF、TPO（thrombopoietin）
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二、骨髓血细胞的命名
粒细胞
白细胞
单核细胞
淋巴细胞
1.血细胞
骨 髓 细 胞 学 检 查 的 临 床 应 用
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一.骨髓细胞学检查的临床目的
1、诊断造血系统疾病，如：Acute leukemia
（AL）、Aplastic Anemia（AA）、 Multiple myeloma (MM)、Idiopathic thrombocytopenic purpura(ITP)等。 同时定期检查骨髓对分析疗效，判断疾 病预后亦有帮助。
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研究血细胞形态的方法有多种。如：相差显
微镜，显微电影术，扫描和透射电镜观察血细胞
表面和内部超微结构，同位素放射自显影技术研
究DNA合成等。但在临床上最常用的研究方法仍是
普通光镜下Wright染色法。本讲内容是：普通光
镜下Wright染色法血细胞形态特点及常见血液病
的血液学改变。
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5
第 一 节
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（二）巨核细胞计数与分类
巨核细胞数正常值为每张涂片 （1.5×3.5cm）7-35个 巨核细胞数量增多或正常且伴有成熟障碍：见于 特发性血小板减少性紫癜 巨核细胞数量减少：见于再生障碍性贫血
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原幼巨核细胞增多：见于白血病、骨髓纤维化、
急性ITP
颗粒型巨核细胞增加而产生血小板型减少：见于
细胞浆及核浆发育不平衡等异常，均对疾病的诊
断有重要价值。若在骨髓涂片中发现转移性肿瘤
细胞或寄生虫（疟原虫、杜氏小体等）则有确定
诊断的作用。
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第四节
常用的血细胞化学染色
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细胞化学染色是以形态学为基础， 应用特殊染色方法，以观察单个细胞 内在的生化特性。有助于了解这些细 胞的化学组成及病理生理改变。对于 白血病的诊断和鉴别诊断有参考价值。 介绍几种临床最常用的组化染色。
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2、结果：
胞浆中出现灰色到棕黑色沉淀者为 （＋）。 NAP染色阳性反应主要见于粒系成熟阶 段的细胞（核状核及分叶核），反应 结果以阳性率和积分值报告。
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三、糖原染色 （Periodic acid-schiff PAS）
1、原理：
过碘酸将血细胞内的糖原氧化生成醛基， 醛基进而与Schiff液反应，使无色品红变 成紫红色化合物定位于细胞浆中。
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2、结果：胞浆中出现红色物质者为（＋） 3、临床意义：
急粒时原始及幼稚粒细胞PAS染色呈（－） 急淋时原淋及幼淋细胞常呈（＋）阳性反应物成 颗粒状或块状 急单时原单及幼单细胞多呈强（＋）阳性反应物 呈弥漫性 故PAS有助于三种急性白血病类型的鉴别。
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3）颗粒：从无到有。
淋巴细胞、单核细胞发育至幼稚阶 段时出现少量非特异性嗜苯胺蓝颗粒。
从非特异性颗粒到特异性颗粒。
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4.胞核与胞浆体积之比：一般由大变小
生理情况下：各种血细胞成熟过程中
具有明显的阶段性和平 行性。即其胞浆胞核变 化是相互平行彼此适应
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病理情况下：可见发育紊乱现象。
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大致比例将骨髓增生程度分为五级。
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骨髓增生程度分级
骨髓 增生程度
增生极度活跃 增生明显活跃
增生活跃 增生减低
成熟红细胞： 有核细胞% 有核细胞
1:1 10:1
20:1 50:1
常见原因
各类型白血病 各类型白血病 增生性贫血、ITP 正常骨髓、某些贫血 再生障碍性贫血 （慢性型） 粒细胞减少症或缺乏症 典型的再生障碍性贫 血（急性型）
红细胞
血小板
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2.成熟过程： 原始阶段，幼稚阶段，成熟阶段。
粒、红细胞的幼稚阶段又分为：
早幼、中幼、晚幼。
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三、骨髓血细胞发育过程中 形态变化的一般规律
1.细胞大小及外形 大小：大→小 巨核细胞则相反，越成熟胞体则越大 外形：圆形、椭圆形、不规则形
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2.细胞核 1）大小：大→小 成熟RBC无核。 2）核形：圆形渐变为不规则形 粒系最后呈分叶状 淋巴及浆细胞则核形变化不大。 3）核染色质： 由细致疏松→粗糙密集，着色随 着DNA含量↑而加深。
50%以上 10%以上
5%左右 1%以下
增生极度减低
300:1
0.5%以下
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2.巨核细胞计数与分类。
3.有核细胞分类：计数200个有核细胞，进行 分类计算百分数。 4.细胞形态观察。
5.有无特殊细胞与寄生虫。
6.计算粒系细胞与红系有核细胞的比值。
7.其他，如有丝分裂细胞计数，红系成熟比 值计算，粒系成熟比值计算等。
例如：核发育明显落后于
胞浆，见于巨幼贫。核尚
大而染色质浓集，核成熟 但有核仁，见于白血病。
四.骨髓血细胞的形态学特点
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第三节
骨髓细胞学检查的 内容和结果分析
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一、骨髓液吸取和涂片注意事项
ITP、脾功能亢进
病态巨核细胞和小巨核细胞：见于恶性血液病，
如：慢性髓细胞白血病，MDS，急性巨核细胞白血
病等
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（三）粒／红比值 （Myeloid:Erythoid M:E）
正常值2-4:1（2.76±0.87:1）
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1.比值增高见于：
（1）粒系细胞明显增多时，如：
粒细胞白血病
感染
类白血病反应等 （2）红系细胞严重减少时如： 纯红细胞再生障碍性贫血。
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三、骨髓细胞学检查的临床意义
骨髓细胞学检查应结合外周血象来 进行分析
（一）骨髓有核细胞增生程度，是反映
骨髓造血旺盛与否的指标。 增生程度分五级。
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增生极度活跃者：常见于各类型白血病
增生明显活跃者：常见于各类型白血病
增生性贫血 增生活跃者：常见于正常骨髓与某些贫血 增生减低者：可见于再生障碍性贫血 粒细胞减少症等 增生极度减低者：见于再生障碍性贫血 （重型）
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5、浆细胞
正常＜1%，且见不到幼稚浆细胞。
浆细胞增多见于：
MM、浆细胞白血病 各种原因引起的反应性浆细胞增多等。
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6、巨噬细胞
正常＜1% 增多者见于各种原因引起的反应性增多 若伴有活跃的吞噬血细胞现象，为噬血细
胞综合症
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（五）细胞形态变化
包括细胞的毒性变，细胞大小异常，细胞核、
骨髓穿刺：Bone marrow puncture
骨髓活检：Bone marrow biopsy
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骨髓穿刺的部位：
常选用的部位有： 髂前上棘、髂后上棘、 胸骨、腰椎棘突 骨髓穿刺的方法：
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骨髓穿刺的禁忌症：
1、血友病等凝血因子重度缺陷的疾 病。
2、穿刺部位局部有炎症，畸形及其
他病变时应避开或更换部位。
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2.比值减低见于 ： （1）红系细胞增多时，如各种增生性贫血 （2）粒系细胞减少时，如粒细胞缺乏症
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3.比值正常见于：
（1）正常骨髓象 （2）粒红两系以外的造血系统疾病 （3）粒、红两系平行减少或增多时如： 再生障碍性贫血 脾功能亢进 红白血病等
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（四）细胞数量分析 1、粒系细胞 占骨髓有核细胞的50%-65% 粒系细胞增多见于：粒细胞白血病 感染
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2、诊断某些代谢障碍性疾病。如：高雪氏病 （Gaucher）、尼曼匹克病（Niemannpick）。 3、诊断某些原虫感染。如：疟疾、黑热病 等。 4、诊断原发性及转移癌。如：肺癌、胃癌、 前列腺癌等。 5、干细胞培养和染色体核型检查：研究遗传 病病因和干细胞移植。
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二、骨髓细胞学检查方法：
骨髓取材方式有两种：
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嗜碱粒细胞一般＜1%，大于1%为增多 可见于：慢性髓细胞白血病 嗜碱粒细胞白血病 真性红细胞增多症等
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2.有核红细胞
正常骨髓象有核红细胞占20%-30%。 ＜15%为红系增生减低，见于： 纯红细胞再生障碍性贫血 再生障碍性贫血 骨髓纤维化 各种原因引起的粒系细胞造血亢进
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>30%为红系造血旺盛，见于： 各类增生性贫血
红白血病
溶血性贫血等
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3、单核细胞：
正常骨髓象中幼稚单核细胞不见或偶见。 ＞4%为增多。 单核细胞增多见于： MDS、感染、单核细胞白血病 粒单核细胞白血病 传染性单核细胞增多症等
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4、淋巴细胞
正常约占20%-40%
正常骨髓象中见不到幼稚淋巴细胞
淋巴细胞增多见于：
淋巴细胞白血病、传染性单核细胞增多症 传染性淋巴细胞增多症、流行性出血热 异形淋巴细胞增多见于病毒感染 骨髓中一旦见到幼稚淋巴细胞则为异常
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四、中性粒细胞碱性磷酸酶染色 （Neutrophil alkaline phosphatase stain NAP）
1、原理：
NAP在OH -环境下，经Mg2＋激活后使磷酸酯 水解为磷酸钠和甘油。磷酸钠再与氯化钙、硝酸 钴、硫化铵发生一系列化学反应，最后生成棕黑 色的硫化钴定位于胞浆中。
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2、结果：
胞浆中出现有色沉淀者为阳性反应。NSE是单核细
胞的标记酶。
单核系细胞NSE染色一般是强阳性反应。
粒系细胞一般为阴性或弱阳性反应。
淋巴细胞系一般呈阴性反应。
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3、临床意义：
急单时呈强（＋）但酶活性能被氟化钠抑制
急粒时呈阴性或弱阳性，但酶活性不被氟化钠 抑制 主要用于鉴别急单与急粒
骨髓细胞学检查
Bone Marrow Examination
北京大学血液病研究所 北京大学人民医院
张耀臣
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骨髓是人体的造血组织，分布于 骨松质小梁的腔隙中，由海绵状的支
架组织，骨髓血管系统及散布在支架
网眼内的游离细胞成分所组成。
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研究血细胞数量和形态的变化， 可以了解骨髓造血功能及其病理变化， 对血液病的诊断和治疗有十分重要的 意义。
1.吸取骨髓液时应用力适当，不可用力
过猛。
2.若未能吸出骨髓液应插上针芯，调整
穿刺针后再行抽吸。
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3.首先吸取骨髓液0.1-0.2ml，涂片进行细胞 学检查，切勿抽吸过多以免稀释影响骨髓 增生程度的判定。 4.需要骨髓细胞培养或细菌培养等检查时， 应在骨髓细胞学检查的标本留取后再吸取 骨髓液5-10ml。
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4）核膜：由不明显到明显。
原始淋巴细胞 原始粒细胞 核膜最厚 核膜最薄
原始单核细胞
核膜较薄
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5）核仁：由有到无。核仁是原始细胞的
重要标识，Wright染色为淡蓝 色。
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3.细胞浆 1）量：一般由少到多。
淋巴细胞变化不明显。
2）颜色：由深蓝到浅蓝。 成熟粒细胞和RBC因RNA完全 消失而转为粉红色和淡红色。
类白血病反应等
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粒系细胞相对增多见于： 纯红细胞再生障碍性贫血等
粒系细胞减少见于：再生障碍性贫血
重症感染 放射病 化疗引起骨髓抑制等 粒系细胞相对减少见于：增生性贫血
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嗜酸粒细胞＞4%为增多
增多者见于：寄生虫病、过敏反应、哮喘 特发性嗜酸粒细胞增多症 嗜酸粒细胞白血病等 减少者：一般无临床意义
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第二节
骨髓血细胞的 生成，发育规律及形态特点
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一、血细胞的生成
经体外培养和动物实验证实人体内存 在着多能造血干细胞“Stem cell”又称全 能干细胞（Totipotential Stem cell TSC）、淋髓干细胞（Lymphoidmyeloid Stem cell LMSC）
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