实验四.细菌芽孢染色

实验四.细菌芽孢染色

一. 目的要求：

目的：掌握细菌芽孢染色方法

内容：１．学习并掌握芽孢染色法

２．初步了解芽孢杆菌的形态特征

二. 基本原理：

芽孢壁厚，透性低，着色脱色较困难。因此先用着色力较强的孔雀绿，在加热的条件下染色，使染料不仅进入菌体也可以进入芽孢内，进入菌体内的染料经水洗脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂（如沙黄、番红、碱性复红）染色后，芽孢仍保留初染色剂的颜色，此时菌体被染成红色，芽孢呈绿色。

三. 器材

1.菌种：培养了16-20小时左右的枯草杆菌（37℃）

2.染色剂：5%的孔雀绿水溶液.0.5%番红水溶液石炭酸复红染液

0.05%碱性复红蒸馏水

3.仪器或其他用品：小试管.滴管.烧杯.试管架.载玻片.木夹子.显微镜等

二甲苯.香柏油

四. 操作步骤：

一）方法1：

1.取37℃培养了18-24小时的枯草杆菌作涂片，并干燥固定。

2.于载玻片上滴入3-5滴5%孔雀绿水溶液

3.用试管夹夹住载玻片在火焰上用微火加热，自载玻片上出现蒸汽时，开始计时约5min ,加热过程中切勿使染料蒸干，必要时可添加少许染料

4.倾去染液，待玻片冷却后，用自来水冲洗至孔雀绿不再褪色为止。

5.用0.5%的番红溶液（或0.5%沙黄水溶液或0.05%碱性复红）复染2分钟，水洗.

6.制片干燥后用油镜观察。芽孢呈绿色，菌体呈红色。

二）方法2：

1.加1-2滴自来水于小试管中，用接种环从斜面上挑取2-3环培养16—20小时的枯草杆菌于试管中，充分混匀打散，制成弄的菌悬液。

2.加5%的孔雀绿水溶液2-3滴于小试管中，用接种环搅拌使染料与菌液充分混合。

3.将此试管浸于沸水浴中，加热20-30min .

4.用接种环从试管底部挑取数环欲洁净的载玻片上，并涂布均匀，将玻片通过微火3次固定。

5.水洗至流出的水中无孔雀绿颜色为止。

6.加复染液染2-3分钟，水洗。

7.干燥后用油镜观察，芽孢绿色，菌体红色。

五.实验报告：

1.绘图：枯草杆菌的芽孢形态，芽孢的着色位置。

2.芽孢染色的操作要点？

资料介绍：

1、菌种培养：37℃、18-24小时为宜。

2、染色剂的配制：

A.5%的孔雀绿水溶液

孔雀绿 5g

蒸馏水 100ml

B.0.5%的番红水溶液

番红 0.5g

蒸馏水 100ml

C.0.05%碱性复红

碱性复红 0.05g

95%乙醇 100ml

D. 石炭酸复红染液

3、每四人一个实验台：

接种环４根，酒精灯４盏，菌种1支（枯草杆菌）

载玻片３片／人，染色液4瓶（孔雀绿等），蒸馏水１瓶，试管架２个，洗瓶４个废液缸４个，小号滤纸２盒，显微镜４台（附香柏油）

［油镜集中清洁：二甲苯１瓶，擦镜纸２个，在前台］