高效液相色谱同时测定食品中苯甲酸_山梨酸和糖精钠方法的探讨

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液相色谱法检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解

液相色谱法检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解1、苯甲酸、山梨酸、糖精钠是衡量食品卫生质量的重要指标，苯甲酸、山梨酸的检测参照GB/T5009.29-2021，糖精钠的检测参照GB/T5009.28-2021，即可开展试验。

苯甲酸、山梨酸、糖精钠虽是较常见的检测项目，但是要得到一个精确牢靠的结果，也存在肯定的难度，很多新手常消失因对方法理解发生偏差而检测出错的事故。

笔者依据自己多年该方面工作的实际阅历动身，以苯甲酸、山梨酸为着重点，从样品前处理、检测仪器的选择、超标时的推断等几个易出问题的方面，进行了具体的阐述。

2、样品前处理的留意事项GB/T5009.28-2021和GB/T5009.29-2021在文字结构上有缺陷，在涉及用仪器法测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠时，只叙述了液体样品的前处理方法，没有涉及对固体样品的前处理。

食品样品往往含有大量的油脂、蛋白质，对提取极为不利；如处理不洁净也会污染色谱柱，影响检测工作。

这类样品处理的关键在于如何找到一种较抱负的沉淀剂，尽量排解待测样品中的油脂、蛋白质，且不影响待测物组分的回收率。

GB/T5009.29-2021使用5%硫酸铜溶液沉淀蛋白，对于蛋白质含量较低的食品尚可，对于豆粉、奶粉、月饼等高油脂、高蛋白样品则沉淀效果不抱负。

如用10%钨酸钠溶液作为沉淀剂，效果好些；如用10%亚铁氰化钾溶液和20%醋酸锌溶液则效果更抱负(这是笔者目前用过最抱负的沉淀剂)。

详细操作步骤如下：取肯定量样品，捣碎，利用四分法原理称取样品5.0克于50ml比色管中，加水20ml，浸泡、振荡匀称，加入氢氧化钠溶液(1mol/L)1.0ml，加入9.5mL10%亚铁氰化钾溶液，9.50mL20%乙酸锌溶液，定容，振荡使其充分混匀后,用滤纸初滤除去沉淀物,初滤液过0.45m微孔滤膜,收集滤液于样品瓶中，样品处理液和标准有溶液各进样5uL测定。

用这种方法简洁易行，接触有机试剂少，重复性和回收率都令人满足；缺点是肯定要用液相色谱法检测，有肯定局限。

高效液相色谱法测定糕点中苯甲酸.山梨酸.糖精钠含量的研究

高效液相色谱法测定糕点中苯甲酸.山梨酸.糖精钠含量的研究摘要本文对国标法进行改进,建立了用HPLC测定糕点中的苯甲酸、山梨酸、糖精钠的前处理方法。

结果表明,该方法平均回收率均达到92.8%以上,符合试验要求。

关键词HPLC;糕点;苯甲酸;山梨酸;糖精钠;前处理苯甲酸、山梨酸是有机化学防腐剂,可以防止食品腐败变质,延长食品保存期,抑制食品中微生物繁殖;糖精钠是一种人工合成甜味剂,其糖度为蔗糖的500倍,且价格低廉。

上述3种添加剂在食品加工过程中被广泛使用,但过量食用会对人体会产生一定影响,因此对食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的含量进行检测有重要意义。

目前,国标法(GB/T 5009-2003)[1]使用高效液相色谱法检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠只适用于汽水、果汁、配制酒等液体食品,但在实际工作中,经常遇到固体食品(如糕点)需要检测。

由于糕点类食品含有蛋白质、淀粉类大分子,以及油脂,直接进样会堵塞、损伤色谱柱;而采用有机溶剂提取,操作过程繁琐,对操作者健康的损害大。

为此,笔者对国标法进行改进,探讨出针对糕点样品的HPLC前处理方法,进行糕点样品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的含量测定,获得了良好的效果。

1 试验原理糖精钠是易溶于水的盐类,样品中的苯甲酸、山梨酸经氢氧化钠溶液(1.0 mol/L)浸泡后,转化为易溶于水的苯甲酸钠、山梨酸钠,经沉淀蛋白质、过滤等处理后,3种被测组分滞留于水相中与杂质分离,经流动相带进色谱柱后进行分离,以保留时间定性,以峰面积定量。

2 材料与方法2.1 材料2.1.1 仪器1)高效液相色谱仪;2)快速扫描紫外分光检测器;3)超声波清洗器;4)0.45μm微孔滤膜过滤器;5)台式低速大容量离心机;6)样品粉碎机。

2.1.2 试剂1)甲醇,色谱纯;2)0.02 mol/L的乙酸铵溶液;3)1.0 mol/L氢氧化钠溶液;4)6 mol/L盐酸溶液;5)106 g/L的亚铁氰化钾溶液;6)220 g/L的乙酸锌溶液;7)50 g/L饱和硼砂溶液;8)纯水,2次重蒸水。

211133768_高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的基质干扰分析及定性确证

高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的基质干扰分析及定性确证丁　梅（梅河口市食品药品检验检测中心，吉林梅河口 135000）摘　要：目的：分析食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠测定的基质干扰峰及定性确证。

方法：采用高效液相色谱法测定食品中的山梨酸、苯甲酸、糖精钠，当以乙酸铵溶液（20 mmol·L-1）+甲醇（95+5）为流动相出现可疑峰时，再以甲酸-乙酸铵溶液（2 mmol·L-1甲酸-20 mmol·L-1乙酸铵）+甲醇（92+8）为流动相分析可疑峰，在两种流动相（不同pH值）洗脱下，比较标液中目标峰与样品中可疑峰保留时间的一致性，定性确认样品中的可疑峰是否为目标峰。

结果：基质复杂的样品，单一以一种流动相的保留时间定性，容易出现假阳性情况，而以两种流动相保留时间综合定性验证，才能使样品检测结果更可靠。

结论：采用两种流动相洗脱下的保留时间进行综合定性分析，可有效避免样品基质干扰出现假阳性样品。

关键词：高效液相色谱法；山梨酸；苯甲酸；糖精钠；基质干扰峰；定性确证Analysis and Qualitative Confirmation of Matrix Interference in the Determination of Sorbic Acid, Benzoic Acid, and Saccharin Sodium in Foods by High Performance LiquidChromatographyDING Mei(Meihekou Food and Drug Testing Center, Meihekou 135000, China)Abstract: Objective: To analyze the matrix interference peaks in the determination of sorbic acid, benzoic acid and saccharin sodium in foods and to qualitatively confirm them. Method: The sorbic acid, benzoic acid and saccharin sodium in foods were determined by HPLC. When the suspicious peak appeared in the mobile phase of ammonium acetate solution (20 mmol·L-1)+methanol (95+5), and then the mobile phase of formic acid-ammonium acetate solution (2 mmol·L-1 formic acid-20 mmol·L-1 ammonium acetate)+methanol (92+8) was used to analyze the suspicious peak. Compare the consistency of retention time between the target peak in the standard solution and the suspicious peak in the sample, and qualitatively confirm whether the suspicious peak in the sample is the target peak. Result: For samples with complex matrix, the retention time of one mobile phase alone can easily lead to false positive. However, the comprehensive qualitative verification of the retention time of two mobile phases can make the sample test results more reliable. Conclusion: Using the retention time under the elution of two mobile phases for comprehensive qualitative analysis can effectively avoid the false positive sample caused by sample matrix interference.Keywords: high performance liquid chromatography; sorbic acid; benzoic acid; sodium saccharin; matrix interference peak; qualitative confirmation苯甲酸、山梨酸、糖精钠是食品中应用最广泛、最常见的食品添加剂，在《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》（GB 2760—2014）[1]中明确规定了其使用范围和限量，被国家食品安全监管部门列作者简介：丁梅（1970—），女，吉林梅河口人，大专，高级工程师。

教案3 食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的测定

项目五用高效液相色谱法检测物质任务一食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的测定（液相色谱法）单元一液相色谱分离原理和液相色谱仪的基本组成教学内容苯甲酸和山梨酸是我国目前最常用的食品防腐剂，广泛应用于各种果汁饮料中，以防止其变质。

但如果防腐剂的含量超过标准限度，或者长期饮用含有防腐剂的饮料，则会对人体健康造成不得影响，因此检测果汁中的苯甲酸和山梨酸含量是非常有必要的。

表GB2760-2007国家食品添加剂使用卫生标准抑制物质腐败的药剂。

即对以腐败物质为代谢底物的微生物的生长具有持续的抑制作用。

重要的是它能在不同情况下抑制最易发生的腐败作用，特别是在一般灭菌作用不充分时仍具有持续性的效果。

对纤维和木材的防腐用矿油、煤焦油、丹宁，对生物标本用甲醛、升汞、甲苯、对羟基苯甲酸丁酯、硝基糠腙衍生物或香脂类树脂。

在食品中使用防腐剂受到限制，因此多靠干燥、腌制等一些物理的方法。

特殊的防腐剂有乙酸等有机酸、以油酸脂为成分的植物油、芥子等特殊的精油成分。

对于生物体的局部（如人体表面或消化道），可以根据具体条件采用各种防腐剂（如碘仿、水杨酸苯酯、苯胺染料或吖啶类色素等）。

我国规定使用的防腐剂有苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、丙酸钙等25种。

防腐剂应具备的几个条件：1、性质较稳定：加入到食品中后在一定的时期内有效，在食品中有很好的稳定性2、低浓度下具有较强的抑菌作用3、本身不应具有刺激气味和异味4、不应阻碍消化酶的作用，不应影响肠道内有益菌的作用5、价格合理，使用较方便。

防腐剂的作用机理：1、能使微生物的蛋白质凝固或变性，从而干扰其生长和繁殖。

2、防腐剂对微生物细胞壁、细胞膜产生作用。

由于能破坏或损伤细胞壁，或能干扰细胞壁合成的机理，致使胞内物质外泄，或影响与膜有关的呼吸链电子传递系统，从而具有抗微生物的作用。

3、作用于遗传物质或遗传微粒结构，进而影响到遗传物质的复制、转录、蛋白质的翻译等。

4、作用于微生物体内的酶系，抑制酶的活性，干扰其正常代谢。

高效液相色谱法同时检测碳酸饮料中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠含量

高效液相色谱法同时检测碳酸饮料中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠含量摘要: 采用高效液相色谱法同时检测饮料中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠。

样品经除乙醇（如果含有乙醇），氨水调pH至中性，定容，过水相微孔滤膜，以 C18 （6 × 250mm）色谱柱分离，用配紫外检测器的高效液相色谱仪进行检测。

结果显示安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠浓度在 1.0mg/ L ～ 100. 0mg/ L 范围内呈线性关系，回收率在87% ～ 98% 之间，相对标准偏差在 1%以下，最低检测限0.5mg/kg，适用于同时检测碳酸饮料中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠的含量。

关键词:碳酸饮料；安赛蜜；苯甲酸; 山梨酸; 糖精钠; 高效液相色谱仪防腐剂能抑制微生物生长繁殖，在食品中应用普遍，我国到目前为止已批准了32种使用的食物防腐剂，其中最常用的有苯甲酸钠、山梨酸钾等经常用于食品防腐，苯甲酸钠价格低廉，主要用于碳酸饮料和果汁饮料。

糖精钠及安赛蜜作为甜味剂应用于食品中调整食品口味，它们属于高倍甜味剂。

这些产品的甜度都比蔗糖高，现在糖精钠的使用得越来越少，而安赛蜜普遍添加到饮料中。

但过量使用会对人体产生毒副作用，甚至引发癌症。

因而对各类食品进行安全质量控制尤为重要。

现有的国家标准方法中，只有同时测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠的方法。

由于碳酸饮料中一般添加安赛蜜比较普遍，很少添加糖精钠，在日常工作中，为节约时间提高分析效率，就要求检测人员研究出适合食品中普遍存在的多种添加剂同时测定的检测方法。

1 材料与方法1. 1 仪器（1）赛默飞世尔高效液相色谱仪U3000带紫外检测器；（2）C18 ( 4.6× 250mm) 色谱柱；(3)万分之一电子天平；（4）无油真空抽滤装置 (5)水浴锅（6）刻度吸管10mL,移液管5mL,容量瓶50mL(7)0.22μm水相微孔滤膜1.2 试剂：（1）盐酸（优级纯）；（2）氨水 ( 优级纯) ; （3）甲醇 ( 色谱纯 ) ;（4）醋酸铵(20mmol/L)：称取1.54g优级纯醋酸铵，加入少量水溶解后，转入1000mL的容量瓶中，加水定容到刻度，经0.22μm水相微孔滤膜用真空抽滤装置抽滤后备用。

高效液相色谱法测定食品中山梨酸

高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠样品前处理方法探讨高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的样品前处理方法。

方法不同样品用不同前处理方法，用二极管阵列管检测品(HPLC-DAD）分析测定，外标法定量。

结果该前处理方法线性关系良好，相对标准偏差分别为山梨酸3.18%、苯甲酸2.74%、糖精钠2.15%，加标回收率均在90%~100%之间。

结论该方法稳定性好、准确可靠、简单快速，适用于食品添加剂的测定。

高效液相色谱法可以同时测定山梨酸、苯甲酸、糖精钠，方便简单快捷。

各类食品的前处理方法方面虽然有了新规定，但是还不够便捷。

因此对部分不同种类的食品前处理方法进行摸索，主要改善是在各类样品处理之前加入适量氢氧化钠，在碱性条件下提取钾盐或者钠盐更为简单，其方法准确可靠，简便快速，便于推广。

并对南充市内3区的市场、超市中部分产品中防腐剂和糖精钠进行检测。

1 材料与方法1.1仪器与试剂1.1.1 仪器戴安U-3000高效液相色谱仪，水浴锅，超声清洗器。

1.1.2 试剂色谱纯甲醇；超纯水；分析纯正己烷；分析纯乙醚；分析纯乙酸铵；0.1mol/L氢氧化钠；10.6％亚铁氰化钾；22％乙酸锌；pH7.2磷酸盐缓冲溶液。

1.0 mg/m1山梨酸、苯甲酸、糖精钠标准溶液(国家标准物质中心)。

1.1.3 色谱条件色谱柱：Agela-Cl8柱(250 mm×4.6mm×5um)；柱温：30℃；紫外检测波长：230 nm；流动相：甲醇：0.02 mol/L乙酸铵(5:95)；流速：1.0mL/min；进样体积：10μL 。

1.2 前处理方法汽水、果汁、风味饮料类液体样品取样10.0 g于50ml容量瓶中，加入20～30ml纯水后超声脱气10 min，用1+1氨水调pH=7，稀释至刻度，经0.45μm滤膜过滤后上机。

[1，2]配制酒、葡萄酒、果酒类称取10.00g样品，放入小烧杯中，水浴加热出去乙醇，用氨水（1+1）调pH约7，加水定容至50.0ml，经0.45μm滤膜过滤后上机。

液相色谱法测定食品中的糖精钠、安赛蜜、苯甲酸、山梨酸

134 食品安全导刊 2020年9月Tlogy科技分析与检测食品很容易因为温湿度、环境等出现变质，给企业带来巨大经济损失，也会制约食品行业发展。

防腐剂的添加很好地延长了食品的保质期，因此被广泛添加到食品中。

目前常添加的有苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、丙酸及其盐、脱氢乙酸等。

甜味剂能够改善口感进而增加食欲，常用的甜味剂有糖精钠、安赛蜜、阿斯巴甜、纽甜与阿力甜等[1]。

近些年的研究表明食品添加剂超量使用也会危害人体健康，食品安全国家标准对防腐剂和甜味剂的添加量作出明确规定，以保证食品安全[2]。

本文采用液相色谱法同时测定食品中所添加的苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、糖精钠和安赛蜜。

1　试验部分1.1　仪器与试剂Waters allianc acquity e2695液相色谱仪；涡旋混合器；HR/T20 MM 立式高速冷冻离心机；KH-250DB 数控型超声波清洗器。

甲醇（HPLC 纯）；乙酸铵、亚铁氰化钾、乙酸锌均为分析纯；标准试剂：山梨酸、安赛蜜、苯甲酸、糖精钠纯度均＞99%。

1.2　色谱条件色谱柱：C 18柱（4.6 mm×250 mm， 5 μm）；流动相：甲醇+乙酸铵溶液=8+92；柱温：35 ℃；进样量：10 μL，检测波长：230 nm；流速：1 mL/min。

1.3　样品前处理取2.5 g 左右样品于50 mL 离心管中，加入25 mL 水涡旋振荡，加入2 mL 10.6%的亚铁氰化钾溶液涡旋20 s 混匀，再加入2 mL 22%的乙酸锌溶液涡旋1 min 后定容至刻度线，超声30 min，于10 000 r/min 离心10 min，上清液转移至50 mL 容量瓶中，残渣再加水混匀后离心提取一次，上清液合并至原容量瓶中，用水定容至刻度线混匀，取上清液2 mL 过 0.22 μm 滤膜，供液相色谱上机检测。

2　结果与讨论2.1　流动相条件的选择参照GB 5009.28-2016《食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》检测标准，通过改变甲醇的比例[1]对比验证标准品目标峰的分离和出峰时间，最后确定流动相条件为：甲醇+乙酸铵溶液=8+92。

高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的方法验证

066苯甲酸、山梨酸、糖精钠是常用的食品添加剂，也是衡量食品卫生质量的重要指标。

苯甲酸、山梨酸具有防腐保鲜的作用，糖精钠是合成甜味剂，甜度比蔗糖甜300－500倍。

GB2760－2016《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》对这三者的添加范围和限量都有明确的规定，超范围或者超限量使用都是违法的。

GB5009.28－2016《食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》对其检测方法做了规定，有高效液相色谱法和高效气相色谱法，其中高效液相色谱法为第一法仲裁法被广泛应用。

国标方法在使用前要进行方法验证，核查实验室能否满足检测方法的要求。

本研究针对高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的适用性、线性、检出限、定量限、加标回收率等进行了一一验证，均能够满足检测方法的要求。

一、仪器与试剂1.仪器。

高效液相色谱仪（紫外检测器，Y001），岛津LC－20AT；电子分析天平（Y033），BSA623S－CW，d ＝0.001g。

2.试剂。

苯甲酸钠标准品（唯一性标识3422003，纯度100.0％），北京坛墨质检科技有限公司；山梨酸标准品（唯一性标识3192003，纯度99.9％），北京坛墨质检科技有限公司；糖精钠标准品（唯一性标识3212005，纯度99.5％），北京坛墨质检科技有限公司；甲醇（色谱级），Aigma－Aldrich；乙酸铵（色谱级），aladdin；亚铁氰化钾、乙酸锌（分析纯），天津市天力化学试剂有限公司；实验室用水为自制超纯水。

二、实验与方法1.色谱条件。

（1）色谱柱：Diamonsil Plus 5um C 18，250×4.6mm；检测波长230nm；进样量10uL。

（2）流动相：甲醇＋乙酸铵溶液（0.02mol/L）＝5＋95；流速1mL/min。

高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的方法验证2.样品前处理。

准确称取约2g（精确到0.001g）试样于50mL具塞离心管中，加水约25mL，涡旋混匀，于50℃水浴超声20min。

高效液相色谱法测定果汁饮料中苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量

分析检测高效液相色谱法测定果汁饮料中苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量辛明彦（浮山县综合检验检测中心，山西临汾 042600）摘要：目的：建立高效液相色谱-紫外检测器测定果汁饮料中苯甲酸、山梨酸及糖精钠3种食品添加剂的分析方法。

方法：果汁饮料试样用纯水提取，经Acclaim TM 120 C18色谱柱分离，用紫外检测器测定。

结果：苯甲酸、山梨酸及糖精钠在1.00～50.00 mg/L线性良好，相关系数均大于0.999，3种添加剂的检出限均为0.005 g/kg，定量限均为0.015 g/kg，加标回收率为91.7%～109.0%，RSD为1.29%～3.36%。

结论：该方法前处理简便、分析速度快、准确度高及精密度好，可用于上述3种添加剂的定性、定量检测。

关键词：高效液相色谱；果汁饮料；食品添加剂Determination of Benzoic Acid, Sorbic Acid and Saccharin Sodium in Fruit Juice Drinks by HPLCXIN Mingyan(Fushan County General Inspection and Testing Center, Linfen 042600, China) Abstract: Objective: The method for the determination of benzoic acid, sorbic acid and saccharin sodium in fruit juice drinks by HPLC with UV detector was established. Method: Pear juice beverage samples were extracted with pure water, separated by Acclaim TM120 C18 chromatographic column and determined by UV detector. Result: The linearity of benzoic acid, sorbic acid and saccharin sodium is good at 1.00～50.00 mg/L, the correlation coefficient is greater than 0.999, the detection limit of the three additives is 0.005 g/kg, the quantitative limit is 0.015 g/kg, the recovery is 91.7%～109.0%, and the RSD is 1.29%～3.36%. Conclusion: The method has the advantages of simple pretreatment, fast analysis speed, high accuracy and good precision. It can be used for the qualitative and quantitative detection of the above three additives.Keywords: high performance liquid chromatography; fruit juice beverage; food additives随着我国社会经济发展与食品工业水平的提升，人们对饮料类食品的消费需求日益增长，果汁类饮料以其口味佳、富含维生素与矿物质等优势深受广大消费者喜爱[1-3]。

液相色谱法检测苯甲酸、山梨酸、糖

液相色谱法检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解苯甲酸、山梨酸、糖精钠是衡量食品卫生质量的重要指标，苯甲酸、山梨酸的检测参照GB/，糖精钠的检测参照GB/T，即可开展实验。

苯甲酸、山梨酸、糖精钠虽是较常见的检测项目，但是要得到一个准确可靠的结果，也存在一定的难度，许多新手常出现因对方法理解发生偏差而检测出错的事故。

笔者根据自己多年该方面工作的实际经验出发，以苯甲酸、山梨酸为着重点，从样品前处理、检测仪器的选择、超标时的判断等几个易出问题的方面，进行了详细的阐述。

2样品前处理的注意事项GB/和GB/在文字结构上有缺陷，在涉及用仪器法测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠时，只讲述了液体样品的前处理方法，没有涉及对固体样品的前处理。

食品样品往往含有大量的油脂、蛋白质，对提取极为不利；如处理不干净也会污染色谱柱，影响检测工作。

这类样品处理的关键在于如何找到一种较理想的沉淀剂，尽量排除待测样品中的油脂、蛋白质，且不影响待测物组分的回收率。

GB/使用5％硫酸铜溶液沉淀蛋白，对于蛋白质含量较低的食品尚可，对于豆粉、奶粉、月饼等高油脂、高蛋白样品则沉淀效果不理想。

如用10％钨酸钠溶液作为沉淀剂，效果好些；如用10％亚铁氰化钾溶液和20％醋酸锌溶液则效果更理想（这是笔者目前用过最理想的沉淀剂）。

具体操作步骤如下：取一定量样品，捣碎，利用四分法原理称取样品克于50ml比色管中，加水20ml，浸泡、振荡均匀，加入氢氧化钠溶液(1mol/L) ml，加入%亚铁氰化钾溶液，20%乙酸锌溶液，定容，振荡使其充分混匀后,用滤纸初滤除去沉淀物,初滤液过μm微孔滤膜,收集滤液于样品瓶中，样品处理液和标准有溶液各进样5uL 测定。

用这种方法简单易行，接触有机试剂少，重复性和回收率都令人满意；缺点是一定要用液相色谱法检测，有一定局限。

3检测仪器的选择虽然液相色谱仪操作起来比气相色谱仪要复杂，但笔者建议如条件许可仍尽量用液相色谱法检测。

原因如下：液相色谱法所用的样品处理方法远比气相色谱法简单，且不需使用有机试剂。

食品中苯甲酸山梨酸和糖精钠的测定-标准文本(食品安全国家标准)

食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定1 范围本标准规定了食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量的测定方法。

本标准第一法适用于食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定；第二法适用于酱油、水果汁、果酱中苯甲酸、山梨酸的测定。

第一法液相色谱法2原理样品经处理后，用液相色谱分离，紫外检测器检测，外标法定量。

3试剂和材料注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

3.1 试剂3.1.1氨水（NH3•H2O）。

3.1.2氢氧化钠（NaOH）。

3.1.3硫酸（H2SO4）。

3.1.4亚铁氰化钾（K4Fe(CN)6•3H2O）。

3.1.5乙酸锌（Zn(CH3COO)2•2H2O）。

3.1.6氯化钠（NaCl）。

3.1.7酒石酸（C4H6O6）。

3.1.8硅酮树脂。

3.1.9磷酸二氢钠（NaH2PO4•12H2O）。

3.1.10磷酸二氢钾（KH2PO4）。

3.1.11中性氧化铝。

3.1.12甲醇（CH3OH）：色谱纯。

3.1.13乙酸铵（CH3COONH4）。

3.2 试剂配制3.2.1 氨水（1+1）：氨水与水等体积混合，经微孔滤膜过滤后备用。

3.2.2 氢氧化钠溶液（4 g/L）：称取4 g氢氧化钠，溶于水并稀释至1000 mL。

3.2.3硫酸溶液（0.5 mol/L）：移取30 mL浓硫酸（约70%）边搅拌边慢慢加入至500 mL水中，冷却至室温后，转移至1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。

3.2.4亚铁氰化钾溶液（92 g/L）：称取106 g亚铁氰化钾加水至1000 mL。

3.2.5 乙酸锌溶液（183 g/L）：称取220 g乙酸锌溶于少量水中，加入30 mL冰乙酸，加水稀释至1000 mL。

3.2.6 酒石酸溶液（15%）：称取15 g酒石酸，用水定容100 mL。

3.2.7的磷酸盐缓冲液（pH 7.2）：分别称取16.72 g磷酸二氢钠和2.72 g磷酸二氢钾，用水溶解后定容至1000 mL，经微孔滤膜过滤后备用。

食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定液相色谱法

食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的液相色谱法是一种常用的分析方法，由于其操作简便、分离效果好以及分析结果准确可靠而得到广泛应用。

下面将详细介绍该方法的原理、仪器设备、操作步骤以及常见问题及解决方法。

一、方法原理：该方法采用液相色谱法进行分析，根据待测样品中的目标化合物与色谱柱之间的相互作用来实现物质的分离和定量。

主要包括样品的预处理、色谱分离、定量检测和数据分析等步骤。

二、仪器设备：液相色谱仪是该方法的主要仪器设备，其中包括色谱柱、检测器和数据处理系统等，常用的色谱柱有C18反相色谱柱、正相色谱柱等。

常用的检测器有紫外检测器、荧光检测器等。

三、操作步骤：1. 样品的预处理：将待测食品样品取适量加入提取溶剂中，超声或搅拌混合，静置一段时间使目标化合物溶解。

然后通过滤膜过滤，以获取纯净的样品溶液。

2. 色谱分离：将样品溶液注入色谱柱中，通过不同组分在色谱固定相和流动相之间的相互作用来实现分离。

可以调整流动相的组成和流速等条件来优化分离效果。

3. 定量检测：分离后的组分进入检测器，根据目标化合物的特性进行定量检测。

常用的方法是通过比较待测样品和已知浓度的标准溶液的峰面积或峰高来确定目标化合物的含量。

4. 数据处理：将检测到的信号转化为对应的色谱图，并通过计算机数据处理系统进行数据分析和结果计算。

四、常见问题及解决方法：1. 色谱柱选择：根据目标化合物的特性选择合适的色谱柱，如苯甲酸和山梨酸可以选择C18反相色谱柱，糖精钠可以选择离子交换色谱柱。

2. 流动相的选择：合理选择流动相的组成和流速，以实现目标化合物的高效分离。

这需要根据不同化合物的极性和溶解度等参数进行优化。

3. 检测器的选择：根据不同化合物的特性选择合适的检测器，如苯甲酸和山梨酸可以选择紫外检测器进行检测，糖精钠可以选择荧光检测器进行检测。

4. 样品的提取：提取过程要注意样品的充分溶解和提取溶剂的选择，以获得准确的分析结果。

液相色谱法检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解-不能不看的精华

2 样品前处理的注意事项GB/和GB/ 在文字结构上有缺陷，在涉及用仪器法测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠时，只讲述了液体样品的前处理方法，没有涉及对固体样品的前处理。

食品样品往往含有大量的油脂、蛋白质，对提取极为不利；如处理不干净也会污染色谱柱，影响检测工作。

这类样品处理的关键在于如何找到一种较理想的沉淀剂，尽量排除待测样品中的油脂、蛋白质，且不影响待测物组分的回收率。

GB/使用5％硫酸铜溶液沉淀蛋白，对于蛋白质含量较低的食品尚可，对于豆粉、奶粉、月饼等高油脂、高蛋白样品则沉淀效果不理想。

如用10％钨酸钠溶液作为沉淀剂，效果好些；如用10％亚铁氰化钾溶液和20％醋酸锌溶液则效果更理想（这是笔者目前用过最理想的沉淀剂）。

具体操作步骤如下：取一定量样品，捣碎，利用四分法原理称取样品克于50ml比色管中，加水20ml，浸泡、振荡均匀，加入氢氧化钠溶液(1mol/L) ml，加入%亚铁氰化钾溶液， 20%乙酸锌溶液，定容，振荡使其充分混匀后,用滤纸初滤除去沉淀物, 初滤液过μm微孔滤膜,收集滤液于样品瓶中，样品处理液和标准有溶液各进样5uL测定。

用这种方法简单易行，接触有机试剂少，重复性和回收率都令人满意；缺点是一定要用液相色谱法检测，有一定局限。

3 检测仪器的选择虽然液相色谱仪操作起来比气相色谱仪要复杂，但笔者建议如条件许可仍尽量用液相色谱法检测。

高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠

将上述混合标准溶液进行测定，
根据待测物质峰面积和浓度关系绘图，
得到标准曲线回归方程。苯甲酸、山
梨酸和糖精钠在 0.2 ～ 200 mg/L 范围
内线性关系良好，苯甲酸在 0.25 mg/L
时，线性方式 y=31 991.7x，相关系数
r=0.999 7，检出限为 0.006 g/kg；山
1.2.1 配制混合标准溶液精密称取苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准物质各 4.0 mL 于 20 mL 容量瓶中，
用水配制成 200 μg/mL 的标准混合储备液，再用水稀释成 100 μg/mL、50 μg/ mL、25 μg/mL、12.5 μg/mL、2.5 μg/ mL、0.5 μg/mL、0.2 μg/mL 的系列标准工作液，由低浓度到高浓度依次进样。
梨酸在 0.20 mg/L 时，线性方式 y=60
861.2x，相关系数 r=0.999 8，检出限
为 0.005 g/kg；糖精钠在 0.50 mg/L
时，线性方式 y=21521.4x，相关系数
r=0.999 7，检出限为 0.012 5 g/kg。

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1.2.2 样品处理称取 2.0 g 果酱样品于 50 mL 比色管中，加 30 mL 水和 0.5 mol/L 的氢氧化钠溶液 1.0 mL，摇匀后置于超声清洗器中提取 15 ～ 20 min，直至被测组分完全溶解。然后再添加 0.42 mol/L 的硫酸锌溶液和 0.5 mol/L 的氢氧化铵溶液各 1.5 mL，加水定容到 50 mL 后摇匀，静置，然后用双层滤纸过滤上层清液，将最初过滤的 5 mL 液体丢弃，并采用 0.45 μm 的滤膜对滤液再次过滤，进样 5 μL 开展色谱分析。如果液体样品不包含蛋白质，则不需要蛋白质沉淀过程，直接取样后用水定容，超声提取后过滤进样即可；如果是固体样品，则需要将固体样品研磨粉碎，然后进行样品处理 [2]。 1.2.3 检测精确称取处理液和混合标准溶液各 20 μL 放置于高效液相色谱仪中进行分离，以标准溶液的固定峰值为依据，根据峰面积计算样液中的被测物质含量，计算公式为：，其中 X 表示样品中待测组分的含量，单位为 g/ kg；C 表示由标准曲线得出的样液中待测物质的量浓度，单位为 mg/mL， V 表示样品定容的体积，单位 mL；m 表示样品的质量，单位为 g。

高效液相色谱法同时测定饮料中的抗坏血酸、糖精、苯甲酸和山梨酸

ｂｅｂｇｂＨＬ．ＴｅｃｐｎｔｗｒｅｒａｓＰＣｈｅｍｏｅｓｅｖｅｙｓｏｎｅｓａａｄａｒａＯＳｌｎｕｉｅｒｔｏｐｅｎＺｂｘｃｕｂｓｇｏＤｏｍｙｎｍｔｎｌ５Ｋ２Ｏ（：）Ｈ６ａｅａｏ０％ＨＰ４０７（＝）ｈ／３０ｐｓｍｂｅａａｄｔｔｂＵ－５ＴｅｏｉｐｓｎｄｅｅｙＶ２４ｈｌｈｅｅｃｄ，ｃｆｃｎｓｖｒｔｎｔｆｒｍｏｅｔｏｆｉｔｏａｉｉｏｈｏｃｐｎｓｅｉｅｆａｏｆｕｏｅｎｆ７ｌａｗｒａｌｓａ２，Ｔｅｏｒｒｉｓｅｌｅｔｎｅｃｐｅｌｓｈ％ｈｒｏｅｅｏｔｆｒｍｏｅｔａｄｄｔｅｖｉｆｏｃｐｎｎｄｅｔｈｃｒｓｈｕｏｅｓｏｅｂｎｂｖｒｇｒｇｆｍ％ｔ１％ｌｋｅｅａｅｒ９ａｅａｓｄｎｏ０ｏ。００
（一）仪器及试剂日本岛津ＬＣ４－Ａ高效液相色谱仪，ＳＤ－Ａ型紫外检测器，ＣＲＡＰ２Ｓ－２Ｘ数
据处理系统。
抗坏血酸为生化试剂，糖精为食品纯，苯甲酸和山梨酸均为分析纯。（二）色谱条件色谱柱：２ｃ５ｍ×４６流动相：甲０５ＫＰ４ｂ－醇／．％Ｈ２Ｏ
ｃａｎ，ｅｏＡｉａｄｂＡｉｉＢｖｒｅｈｒｅＢｎｊｃｎＳｒｃｄｅｅｇｓｉｚｃｄｏｉｃｎａｂＨｇＰｒｒａｃＬｕＣｒａｇｐＹｎｙｈｆｍｎｉｉｈｍｔｒｈａｇｉｅｏｅｄｏｏａｙｑＣｎｓｎＺｕｎＺｕｎＸａｇｉｇｇｅｇ，ｈＹａａｎｈａｄｎｐ，Ｔｓｎｅｉｇ＆ＴｃｏｏＩｓｔｔｏＺｅａｇｔｅｎｌｇｎｉｅｈｉｎｈｙｔｕｆｊＰｏｉｃＨａｇｏｒｅｖ，ｎｚｕｈＡａｔａｉｍｔｄｐｏｏｄｄｔ－ｑｎｉｔｅｈｉｒｓｆｒｅｕｔｖｅｏｓｐｅｏｅｒｍｎｎｔｔｌｃｍｏｎｓｕａｅｓｉｉｇｅｔｏｐｕｄｓｌｎｏｌｎｉｈｉｅｉｔｕｙｍ

高效液相色谱同时检测蛋白饮料中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸的前处理方法研究

高效液相色谱同时检测蛋白饮料中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸的前处理方法研究【摘要】建立了二极管阵列─反相高效液相色谱同时快速测定蛋白饮料中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸五种食品添加剂的检测技术。

本文改进的前处理方法操作简便，试验精确度和准确度良好，非常适合应用在大量蛋白饮料样品的快速检测工作中。

【关键词】高效液相色谱；蛋白饮料；安赛蜜；苯甲酸；山梨酸；糖精钠；脱氢乙酸在检测安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸等指标的前处理过程中，需要对提取液进行过滤，而蛋白饮料中蛋白质含量较高，影响过滤效率，是影响上述添加剂快速检测的主要环节。

在水中，苯甲酸和山梨酸溶解度较低，按照GB/T23495采用亚铁氰化钾和醋酸锌进行蛋白质沉淀[1]后，苯甲酸和山梨酸与杂质一起沉淀，影响测定的准确性[2，3]。

而按照GB/T21703调节pH值后，用亚铁氰化钾和醋酸锌沉淀蛋白质，再用甲醇定容[4]，则液相色谱图中组分峰出现拖尾现象，影响组分峰定量的准确性。

因此有必要针对蛋白饮料的前处理方法进行改进，论证检验方法的实用性，使得数据准确可靠，操作更为简单，便于在基层常规检测工作中推广。

1、材料与方法1.1仪器与试剂1.1.1仪器Waters e2695分离模块，Waters 2998 PDA检测器，超声清洗器。

1.1.2试剂色谱纯甲醇，超纯水，0.5mol/L氢氧化钠，0.42mol/L 硫酸锌，0.02mol/L乙酸铵，1.00mg/mL苯甲酸、山梨酸、糖精钠（国家标准物质中心），配制250mg/L的安赛蜜储备液和110mg/L的脱氢乙酸储备液（北京上立方联合化工技术研究院）。

1.1.3色谱条件色谱柱：TopsilTMC18（250mm×4.6mm×5μm）色谱柱，柱温：30℃，检测波长：230nm，流动相：甲醇：0.02mol/L的乙酸铵（8：92），流速：1.0mL/min，进样体积：20μL。

高效液相色谱同时测定食品中苯甲酸_山梨酸和糖精钠方法的探讨

[作者简介]　吴燕(1976-),女,大学本科,主管技师,主要从事食品理化检验研究。

【化学测定方法】高效液相色谱同时测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠方法的探讨吴　燕(上海市疾病预防控制中心,上海　200336)[摘要]　目的:探讨高效液相色谱同时测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的方法。

方法:样品经去蛋白、调节酸碱度、超声提取、过滤等处理,采用HP LC测定。

结果:方法的检出限均为110mg/kg;相对标准偏差为0184%～1120%;平均回收率为9211%～9719%。

结论:方法准确可靠、简便快速、易于掌握、便于推广。

[关键词]　高效液相色谱;食品;苯甲酸;山梨酸;糖精钠[中图分类号]　O65717+2 [文献标识码]　A [文章编号]　1004-8685(2007)03-0465-03S i m ult aneous determ i n a ti on of benzo i c ac i d,sorb i c ac i d and s acchar i n sod i u m s a lt i n foodsW u Yan(ShanghaiMunici pal Center f or D isease Contr ol and Preventi on,Shanghai200336,China)[Abstract]　O bjecti ve:To discuss a method of detecti on for benzoic acid,s orbic acid and saccharin s odiu m salt in f oods by HP LC1M ethods:food sa mp les were dep r oteinized,adjusted pH,ultras onic extracted,filtered and analyzed by HP LC1Results: The detecti on li m its were110mg/kg1The relative standard deviati on range of sa mp les added standard substance was0184%～1120%1The average recovery rate was9211%～9719%1Conclusi on:The method is si m p le,rap id,reliable and accurate1So that, it is suitable for wide-range app licati on1[Key words]　H igh perf or mance liquid chr o mat ography;Food;Benzoic acid;Sorbic acid;Saccharin s odiu m salt 目前,我国批准使用的食品添加剂中,苯甲酸和山梨酸作为防腐剂,糖精钠作为甜味剂被广泛使用于食品中。

高效液相色谱法测定山楂制品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠

食品科技
ＦＯＯＤＳＥＮＣＥ＆ＴＣＩＥＣＨＮＯＬＯＧＹ
高效液相色谱法测定山楂制品中苯甲酸＼山梨酸＼糖精钠
宗万里。杨元萍
（威海市产品质量监督检验所，山东威海２４０）６２９
摘要：液相色谱法测定山楂片中苯甲酸、梨酸、对山糖精钠进行了方法优化．色谱条件进行了调整。用对采
２结果与讨论２１色谱图．
片样品中添加ｌＯ／ＯｍｇＬ苯甲酸、山梨酸、精钠标准溶液糖１ｍ，．Ｌ即样品加标量为１ｍ／ｇ２２ｇｋ。按上述提取步骤进行提
重复４次。按１色谱条件进行测定，．２精密度和回收率在１．谱条件下。得到苯甲酸、２色山梨酸、精钠标取，糖，采准样品、白样品、白加标样品的色谱图，如图１示，计算结果列于表２由表２数据可知，用本方法苯甲酸、空空所
地将山楂制品中的果胶较好的沉淀。从而使样品处理液得到很好的过滤，且提高了样品的提取率，并在确保了实验准确度的同时，快了工作速度，高了工作效率。加提
１实验部分
检测器：外检测器．紫波长２０ｍ。３ｎ１溶液配制．３
≥９％，生物有抑制作用，因而被广泛用做食品防腐剂。苯甲酸的准品：９国家标准物质中心；
代谢产物结构稳定，人体中难以分解，量摄人会对人在过

食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定液相色谱法

食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定液相色谱法食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定液相色谱法是一种常用的分析方法。

本文将从原理、方法及操作步骤等方面进行详细解析。

首先，液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种基于物质在固定相和移动相的作用下，依据其在两相间分配不同的速度和平衡常数进行分离和测定的方法。

液相色谱法在分析食品中的添加剂，如苯甲酸、山梨酸和糖精钠等方面具有广泛应用。

其次，对于食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定，可以通过液相色谱法进行定性和定量分析。

液相色谱法主要分为正相液相色谱法和反相液相色谱法。

正相液相色谱法使用非极性固定相，极性移动相；反相液相色谱法则相反。

由于苯甲酸为非极性物质，山梨酸为极性物质，糖精钠为离子物质，所以在测定食品中的苯甲酸、山梨酸和糖精钠时，一般采用反相液相色谱法。

操作步骤如下：1. 准备样品：将待测食品样品称量并取样，可选择适当的提取方法进行提取。

一般采用乙酸乙酯等有机溶剂进行提取。

2. 进样操作：将提取的样品溶液通过滤膜滤过，除去悬浮物和杂质，得到清晰的样品溶液。

将溶液用微量注射器吸取一定体积后，注入进样器中。

3. 色谱条件设置：选择适当的色谱柱，一般使用反相色谱柱。

设置好流速、柱温和检测波长等参数。

常用的固定相可以是C18、C8等，移动相可以是甲醇和水的混合液。

4. 开始分析：通入移动相以开始分离分析过程。

根据样品中目标物的特性，优化流速、温度等参数，使其尽快分离并得到良好的色谱峰。

5. 数据处理：通过检测波长进行测定，根据标准曲线计算出样品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的含量。

总结起来，食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定液相色谱法是一种快速、准确的分析方法。

通过选择适当的色谱柱和优化色谱条件，可以对食品中的目标物进行定性和定量分析。

这种方法在食品安全监测和质量控制中具有重要意义。

然而，需要注意的是，为了获得更准确的结果，实验人员还应定期校准仪器，制备标准品并建立标准曲线，以确保测定结果的准确性和可靠性。