气相色谱内标标准曲线法测定白酒中四种酯类

气相色谱内标标准曲线法测定白酒中四种酯类

白酒在生产过程中，酸与醇发酵生成各种酯，酯类在形成各类香型白酒的风味特征中起着极其重要作用，不同的酒，其含量要求也不一致。由于各种酯类的不同和含量的多少决定了白酒的香气和风格，它对白酒香型的确定起主导作用。而年代越长的酒，酯类的含量越高，酒就越香，品质就越好。所以对酒中酯类物质气相色谱的测定有助于酒的品质的鉴定。国产酒中酯类的成分和含量差异较大，故通过分析国产名酒的特征峰的分布和含量，也是可以达到鉴别假冒名酒的目的。本文以乙酸正戊酯作为内标物，建立了测定酒中多种酯类含量的气相色谱内标标准曲线分析方法。

1 材料与方法

1.1 仪器

Agilent 7890气相色谱仪；氢火焰离子化检测器(FID)；色谱柱：FFAP毛细管色谱柱（30m×0.25mm ×1.0μm）。

1.2 色谱条件

柱温：60℃(5min)→10℃/min→110℃→20℃/min→200℃；进样口温度：220℃，进样量：1μL，分流比：20 ：1；FID温度：220℃；载气为高纯氮气，流速：1mL/min。

1.3 试剂与材料

1.3.1 标准物

乙酸乙酯、己酸乙酯、乳酸乙酯、丁酸乙酯均为色谱纯；内标物：乙酸正戊酯（色谱纯）；60%（v/v）乙醇（色谱纯）水溶液。

1.3.2 内标标准曲线的配制

1.3.

2.1 内标溶液的配制

准确吸取2mL乙酸正戊酯（色谱纯）于100mL容量瓶中，用60%（v/v）乙醇溶液定容至刻度，使乙酸正戊酯浓度为17.6g/L。

1.3.

2.2 标准使用液的配制

分别准确吸取色谱纯乙酸乙酯、己酸乙酯、乳酸乙酯及丁酸乙酯2mL于100mL容量瓶中，用60%（v/v）乙醇溶液定容至刻度，，使其成为含乙酸乙酯、己酸乙酯、乳酸乙酯及丁酸乙酯分别为18.0g/L，17.6g/L，20.8g/L，17.6g/L的混合标准溶液。

1.3.

2.3 溶液标准曲线的配制

取6个100mL容量瓶依次加入标准使用液0.10、0.50、1.00、5.00、10.0、20.0mL，再在每个容量瓶中加入1mL内标溶液，用60%（v/v）乙醇溶液定容至刻度摇匀后进行气相色谱分析。

1.4 酒样的配制

取适量茅台酒样品于100mL容量瓶中，加入1mL内标溶液，用酒样定容至刻度，混匀后在相同色谱条件下进样分析。重复测定六次并记录结果。另取五粮液酒样进行相同条件的分析。

1.5 测定方法

在选定的相同分析条件下，标准曲线溶液和样品溶液进样分析，以保留时间定性，以待测物的峰面积与乙酸正戊酯峰面积之比为纵坐标Y，相应浓度为横坐标X，进行线性回归定量分析。

2 结果与讨论

2.1 色谱柱的选择

用同一份白酒样品分别使用不同极性的色谱柱(DB - 1、DB - 5、DB - 17、FFAP)测试后发现，各待测物在非极性至中极性的柱子上虽也能分离，但峰形较差，影响定量结果的准确性；而在强极性柱FFAP上，各峰峰形尖锐，可获得满意的分离较果。故选用FFAP毛细管柱

2.2 分流比的选择

选择适当的分流比可改善峰形，特别是可显著改善甲醇的峰形，设置分流比分别为1: 1、5: 1、10: 1、20: 1、30:1，进样后发现随着分流比的增加，几种待测物色谱峰拖尾现象明显好转，但分流比较大时，检测器响应信号也变低，综合考虑后，选择分流比为20: 1。标准品谱图如图1。

2.3 内标物的选择

酒中乙酸乙酯、己酸乙酯等的分析，一般选择具有相似性质但又不影响酒样分析的物质，我们对乙酸正戊酯和乙酸正丁酯进行进样测定，结果显示乙酸正丁酯与酒样中某物质峰形有重叠，故不能作为内标物进行分析，而乙酸正戊酯不影响酒样的测定，所以选择乙酸正戊酯作为内标进行分析。

2.4 标准曲线

配制6个不同浓度的酒标准浓度，按以上条件进行测定，以各待测物的浓度为横坐标X，以待测物峰面积与内标（乙酸正戊酯）峰面积之比为纵坐标Y，进行线性回归定量分析。测定结果见表1

结果表明标准系列测定结果与配制浓度之间有良好的线性关系。

2.5 加标回收率测定结果

在上述操作条件下，以50%五粮液+50%蒸馏水作为本底，进行低、中、高三个浓度的加标回收实验，分别测定本底与加标样品中各组分含量，每个加标水平重复进样3 次，计算回收率，测定结果见表2

本方法的回收率均在94.4%~107.7%之间，说明该实验测定结果准确，可满足酒样日常测定的需要。2.6 精密度试验测定结果

待色谱仪基线稳定后，用微量进样器吸取1μL含有内标物的五粮液酒样（1.4）注入气相色谱仪，依据各待测物峰高与内标物峰高之比，利用标准曲线计算各组分浓度，连续测定6次，四种待测物相对标准偏差（RSD）结果见表3

表3 精密度试验结果

2.7 样品测定

用上述方法对市场上几种白酒进行检测，乙酸乙酯含量在0.78～2.16g/L之间，丁酸乙酯含量在0.05～1.93g/L之间，乳酸乙酯含量在0.54～1.23 g/L之间，己酸乙酯含量在0.05～2.10g/L之间，结果表明该方法在实际样品测定中的应用令人满意。

3 讨论

根据以上各项实验结果本文用FFAP毛细管柱测定白酒中的多种酯类组分，分离效果好，几种化合物的检测一次性完成，大大节约了分析时间。检测用内标法定量，一定程度上消除了操作条件等的变化所引起的误差，测定结果干扰少。方法灵敏、准确、快速。且酒样无需处理，直接进样，因此乙酸乙酯、己酯乙酯、乳酸乙酯、丁酸乙酯的实测结果即为最终报告结果。本方法可为鉴定白酒真伪，及白酒的香型分类提供了检测依据。

参考文献：（略）