大肠杆菌和沙门氏菌生化试验鉴定表
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案实验原理：1、大肠杆菌的性质：大肠杆菌是G--无芽孢直杆菌，在大多数培养基上表现出不同的特性。
在麦康凯琼脂平板上是凸起光滑湿润的粉红菌落，革兰氏染色镜检为红色短杆菌。
三糖铁琼脂上的反应为斜面和底部都变黄，产气，不产生硫化氢。
生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖，不发酵蔗糖。
MR试验，吲哚试验为阳性，VP试验为阴性，不产生H2S，不能利用枸椽酸盐。
半固体中沿穿刺线向四周生长。
2、沙门氏杆菌的性质：沙门氏杆菌是G-直杆菌。
在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落，三糖铁斜面下层变黄色，上层仍为红色，穿刺处为变黑产生H2S。
能发酵葡萄糖产酸产气，能利用枸椽酸盐，不发酵乳糖不利用蔗糖肌醇，MR阳性，VP阴性，不产吲哚，不分解尿素。
实验材料：含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基（琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜面培养基、麦康凯琼脂、生化培养基、SC）、器械（剪刀、记号笔、接种环、酒精灯、显微镜、试管、玻片、培养皿）、药品（消毒酒精、结晶紫、碘液、酸酒精、品红、松柏油）实验内容及操作程序：一、培养基制备：制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌培养基、生化培养基，制备方法见附1.二、标本制备：（1）取新鲜猪肝脏一小块，火焰表面消毒。
（2）用浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。
（3）用接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液，分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中，37°C恒温培养24小时。
三、细菌分离培养：（1）取出培养了24小时的麦康凯平板。
挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色镜检，看是否为红色短杆菌，若是，即疑似为大肠杆菌，则取其接种于另一麦康凯平板，37°C 恒温培养24小时。
（2）取出培养了24小时的SC增菌培养基，染色镜检，看是否有疑似沙门氏菌，有则取其中细菌画线接种于麦康凯平板上，37°C恒温培养24小时。
四、细菌的鉴定纯化：（1）检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落，染色镜检。
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案
实验原理：1、大肠杆菌的性质:大肠杆菌是G无芽抱直杆菌，在大多数培养基上表现出不同的特性。
在麦康凯琼脂平板上是凸起光滑湿润的粉红菌落，革兰氏染色镜检为红色短杆菌。
三糖铁琼脂上的反应为斜面和底部都变黄，产气，不产生硫化氢。
生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖，不发酵蔗糖。
MR试验，口引噪试验为阳性，VP试验为阴性，不产生H2S,不能利用xx酸盐。
半固体中沿穿刺线向四周生长。
2、沙门氏杆菌的性质：-沙门氏杆菌是G直杆菌。
在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落，三糖铁斜面下层变黄色，上层仍为红色，穿刺处为变黑产生H2S。
能发酵葡萄糖产酸产气，能利用枸椽酸盐，不发酵乳糖不利用蔗糖肌醇，MR阳性，VP阴性，不产呵噪，不分解尿素。
实验材料：含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基（琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜面培养基、麦康凯琼脂、生化培养基、SQ、器械（剪刀、记号笔、接种环、酒精灯、显微镜、试管、玻片、培养皿）、药品（消毒酒精、结晶紫、碘液、酸酒精、品红、松柏油）实验内容及操作程序：一、培养基制备：制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌培养基、生化培养基，制备方法见附1.二、标本制备：(1) 取新鲜猪肝脏一小块，火焰表面消毒。
(2) 用浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。
(3) 用接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液，分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中，37 C恒温培养24小时。
三、细菌分离培养：(1) 取出培养了24小时的麦康凯平板。
挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色镜检，看是否为红色短杆菌，若是，即疑似为大肠杆菌，则取其接种于另一麦康凯平板，37 C恒温培养24小时。
(2) 取出培养了24小时的SC增菌培养基，染色镜检，看是否有疑似沙门氏菌，有则取其中细菌画线接种于麦康凯平板上，37 C恒温培养24小时。
四、细菌的鉴定纯化：(1) 检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落，染色镜检。
实验五大肠杆菌与沙门氏菌
实验六 细菌生化特性试验
扬州大学兽医学院
2019年10月3日星期四
实验原理
各种细菌在其新陈代谢中，由于利用营养 物质的能力有所差异，排泄的代谢产物亦 不同，所以利用这点进行生化试验，可达 到鉴定细菌种的目的，尤其在鉴定肠道杆 菌时，生化试验是极其常用的一种方法。
5. 吲哚、M.R、V-P试验结果
大肠杆菌
沙门氏菌
吲 M.R V-P 哚试 试 试验 验 验
吲 M.R V-P 哚试 试 试验 验 验
六、思考题
大肠杆菌与沙门氏菌：
1. 革兰氏染色特性与形态特点？ 2. 在麦康凯平板上的生长表现？ 3. 在三糖铁琼脂上的生长表现？ 4. 常规糖发酵情况？ 5. IMViC试验结果？
0.02g 60mL 40mL
• V-P试剂
甲液：α萘酚酒精溶液 （α萘酚5g无水乙醇100mL）
乙液：KOH溶液 （KOH 40g，水100ml）
将甲液和乙液分装棕色瓶中，于4-10℃保存。
五、结果观察
1. 大肠杆菌的生长表现
普通琼脂：形成圆形、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落， 直径约2~3mm；
一、目的要求
1. 学习常用的生化实验方法； 2. 掌握大肠杆菌与沙门氏菌的主要生化特点。
二、背景知识介绍
1. 大肠杆菌
G－
个体为杆状 散在或成对
① 大肠埃希氏菌是这个菌群的代表成原；
② 与广泛的兽医临床病征有关，如：
• 犊牛的肠道感中染和等水大泻小；
实训二十三 大肠杆菌、沙门菌属生化反应试验
四、结果分析
1、1、2、3、4号菌分别用接种针接种一套肠
编码
鸟 赖 葡 纤 山 侧 鼠 木 蔗 丙 甘 氨 氨 磷 维 梨 金 李 糖 糖 二 露 酸 酸 胨 二 醇 盏 糖 酸 醇 水 糖 花 盐 醇 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 1 0 1 4 2 1 4 2 1 4 2 1 阿 拉 伯 糖 蛋 七 半 氨 白 叶 固 基 胨 苷 体 酸 水 对 照 1 13 14 15 2 4 2 1
4 2 1
－
+ 3
+
－
+ 2
－ －
+ 2
－ － + + 3
+
+ 7+来自 该菌序号为32237
2、鸟氨酸、赖氨酸、氨基酸对照需要加石蜡
封口（氨基酸对照不能变色，如不变色，鸟 氨酸与氨对同色，为阴性；不同色，为阳 性）； 3、1、2、3、4号菌分别用接种针接种一支 KIA； 4、放置温箱37度24h培养后观察结果。
实验十一、大肠杆菌、沙门菌属 生化反应试验
一、目的：
1、掌握肠道杆菌鉴定方法和原则； 2、掌握肠道杆菌生化反应（肠编码）名称、
试验原理。
二、内容：
1、观察记录上次试验结果－画图、描述菌落
特点、颜色； 2、挑取可疑单个菌落接种生化反应培养基； 3、记录生化培养基初始颜色。
三、操作：
沙门菌检验
科玛嘉 显色培 养基
菌落为紫红色
接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养 基的同时，可直接接种蛋白胨水 (供做靛基 质试验)、尿素琼脂 (pH7.2)、氰化钾 (KCN) 培养基，也可在初步判断结果后从营养琼 脂平板上挑取可疑菌落接种。于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h, 必要时可延长至48 h。
分别用接种环取增菌液1环, 划线接种于一 个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE 琼脂平板或显色培养基平板）。于36 ℃±1 ℃分别培养18 h～24 h (XLD琼脂平板、HE 琼脂平板、显色培养基平板) 或40 h～48 h (BS琼脂平板)，观察各个平板上生长的菌落。
沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的 菌落特征
甲型副伤寒沙门氏菌(要求血清 学鉴定结果) 沙门氏菌Ⅳ或Ⅴ(要求符合本群 生化特性) 沙门氏菌个别变体(要求血清学 鉴定结果)
反应序号2：补做甘露醇和山梨醇试验，沙门菌靛基质阳性变体两项结 果均为阳性；
反应序号3：补做ONPG，ONPG阴性，同时赖氨酸脱羧酶阳性为沙门菌； 但甲型副伤寒沙门菌赖氨酸脱羧酶为阴性。
沙门菌检验
沙门菌概况
沙门菌是1885年由Salmon氏等在猪霍乱流行 时，分离出的猪霍乱沙门菌，由于Salmon氏 对本属细菌的发现贡献卓越，故定名为沙门 菌属。
沙门菌属是肠杆菌科中最重要的病原菌。它 是一群抗原结构、生化特性相似的革兰氏阴 性杆菌。血清型繁多，目前已发现的沙氏菌 有2500多个血清型和变种。我国自1911年至 90年代初已有255个血清型。
沙门菌的分离培养基
亚硫酸铋琼脂（BS）：含有煌绿、亚硫酸铋 能抑制大肠杆菌、变形杆菌和革兰氏阳性菌的 生长，但对伤寒、副伤寒等沙门菌的生长无影 响。伤寒杆菌及其他沙门菌能利用葡萄糖将亚 硫酸铋还原成硫酸铋，形成黑色菌落周围绕有 黑色和棕色的环，对光观察可见有金属光泽。 该培养基制备过程不宜过分加热，以免降低其 选择性，应在临用时配制，超过48h不宜使用。
沙门氏菌检验原始记录
D
E
阳性
报告
检验员： 审核员：
4.分别划线BS和沙门氏显色培养基；于36℃±1℃培养40～48h（BS）或18～24h（沙门氏显色培养基）观察典型菌落；
5.据生化鉴定试剂盒要求做沙门氏菌生化鉴定；据生化鉴定结果做沙门氏菌血清学鉴定；
样品
观察结果
项目
是否典型菌落
血清学鉴定
三糖铁琼脂
靛基质
尿素
KCN
赖氨酸
ONPG
甘露醇
山梨醇
抗原O
抗原H
□液体样品：吸取25mL于样品置于盛有225mLBPW的无菌均质袋内,振荡混匀。
检验程序
1.实验采集抽样方案来自GB4789.1；
2.上述样品匀液于36℃±1℃培养8～18h；
3.移取1mL转种于10mLTTB内42℃±1℃培养18～24h；移取1mL转种于10mLSC内36℃±1℃培养18～24h；
沙门氏菌检验原始记录表
样品名称
样品编号
检验项目
沙门氏菌检验
检验日期
检验地点
BSL-2实验室
温湿度（℃，RH%）
检验依据
GB 4789.4—2016
判定依据
检验仪器
生化培养箱均质器电子天平
生物安全柜
检验试剂
BPW，TTB、SC增菌液，BS平板，沙门氏显色平板，生化鉴定试剂盒，诊断血清等
样品制备
□固体和半固体样品：无菌称取25g样品，置于盛有225mLBPW的无菌均质袋内，拍击式均质器均质1min～2min。
大肠菌群、沙门氏菌GBT23780检测原始记录
大肠菌群、沙门氏菌GB/T23780检测原始记录1.样品名称：样品编号：洁净室编号：温度: ℃ 湿度: %2.检测标准：GB/T 23780-2009附录A A.23.检测仪器：恒温水浴锅KJ-E-WSW-025-18恒温培养箱□KJ-E-WSW-001-17 □KJ-E-WSW-002-17 □ KJ-E-WSW-044-18□KJ-E-WSW-023-17 □KJ-E-WSW-041-18 □ KJ-E-WSW-048-19□KJ-E-WSW-101-20□KJ-E-WSW-102-204.培养基：LST肉汤BPW肉汤TTB增菌液SC增菌液BS琼脂沙门显色琼脂XLD琼脂培养基5.检测项目及步骤：采样方法：□涂抹法将经过灭菌的方框（框内面积为50cm2）放在待测面上，用经过灭菌的镊子取无菌医用棉拭子，蘸上无菌生理盐水擦拭方框中间部分后，将棉球投人盛有50mL无菌生理盐水的三角瓶中送检。
贴纸法将无菌规格纸（5X5cm2，纸质要薄而软）用无菌生理盐水泡湿后，用经过灭菌的镊子取两张分别贴合于待测面后，取下放人盛有50mL无菌生理盐水的三角瓶中送检。
大肠菌群：检测步骤：采样生理盐水即为待测原液，选取2个～3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种3管LST肉汤，每管1 mL至与LST 肉汤中，36 ℃培养( )。
沙门氏菌：检测步骤：取取样生理盐水25mL到225mL BPW中于36℃培养( ~ )；移取1mL前增菌培养液，转种于10mL TTB内，于42℃培养，同时另取1mL，转种于10mL SC内，于36℃培养( ~ )；分别用接种环取增菌培养液1环，划线接种BS琼脂平板和沙显琼脂平板。
挑取平板上5个可疑菌落进行鉴定。
检测员/日期：复核人/日期：。
肠杆菌生化鉴定表
肠杆菌生化鉴定表引言肠杆菌是一种常见的细菌，广泛存在于自然界中，包括土壤、水体和动植物的肠道中。
肠杆菌在人体中有益和有害的作用，可以发酵食物残渣，帮助消化吸收，也可以引起多种感染性疾病。
为了准确鉴定肠杆菌的种类和性质，科学家们开发了肠杆菌生化鉴定表，用于对肠杆菌进行鉴定和分类。
概述肠杆菌属于革兰氏阴性菌的一类，形态特征为细长的棒状。
肠杆菌的生化特性具有一定的差异，这为其鉴定提供了依据。
肠杆菌生化鉴定表是通过对肠杆菌在不同生化反应中的表现进行观察和比较，从而确定其种类和性质的一种方法。
理论基础肠杆菌生化鉴定的理论基础是肠杆菌对不同物质的代谢方式的差异。
根据肠杆菌在不同生化反应中产生的酶的活性和产物的产生情况，可以确定其在鉴定表中的位置。
肠杆菌生化鉴定表中列出了常见的生化反应和产物，通过观察菌株在这些反应中的表现，可以确定其属于何种类型的肠杆菌。
肠杆菌生化鉴定表的组成肠杆菌生化鉴定表主要包括以下几个方面的内容：1. 嗜氧和厌氧反应嗜氧和厌氧反应是肠杆菌生化鉴定中的重要指标之一。
肠杆菌可以通过观察其在氧气氛下和无氧气氛下的生长情况来确定其嗜氧和厌氧特性。
2. 糖类代谢反应糖类是肠杆菌常见的营养来源之一，肠杆菌对不同种类的糖类的代谢能力也有所差异。
肠杆菌生化鉴定表中列出了常见的糖类，如葡萄糖、乳糖、麦芽糖等，通过观察菌株对这些糖类的发酵情况，可以确定其种类和特性。
3. 酮酸和气体的产生肠杆菌在代谢过程中产生的酮酸和气体也是鉴定中的重要指标之一。
肠杆菌生化鉴定表中列出了常见的酮酸和气体的产生情况，通过观察菌株在代谢过程中产生的酮酸和气体的情况，可以确定其种类和特性。
4. 其他生化特性除了上述的参数外，肠杆菌生化鉴定表还包括一些其他的生化特性，如蛋白质的降解和产生硫化氢等。
这些特性也可以帮助我们进一步鉴定和分类肠杆菌。
肠杆菌生化鉴定的步骤进行肠杆菌生化鉴定的步骤一般包括以下几个方面：1. 菌种培养首先需要从样品中分离出肠杆菌，并进行纯化培养，以获取纯种菌株用于后续的实验。
实训二十四 大肠杆菌、沙门菌属血清学鉴定
4 2 1
－
+ 3
+
－
+ 2
－ －
+ 2
－ － + + 3
+
+ 7
+
该菌序号为32237 2、玻片凝集实验（需作阴性对照） 先多价血清，若阳性再作单价因子血清（先0
单价血清，再H单价血清） 3、放置温箱37度24h培养后观察结果。
四、结果分析
甲型副伤寒沙门菌－O2+Ha； 乙型副伤寒沙门菌－O4+Hb； 伤寒沙门菌――――O9+Hd。
实验十二、大肠杆菌、沙门菌属 血清学鉴定
一、目的：
1、掌握肠道杆菌生化反应判定方法（肠编
码）； 2、掌握肠道杆记录1、2、3、4号菌各套肠编码结果； 2、从双糖铁培养基挑取细菌作血清学鉴定；
三、操作：
1、记录颜色判断肠编码结果 鸟 赖 葡 纤 山 侧 鼠 木 蔗 丙 甘 氨 氨 磷 维 梨 金 李 糖 糖 二 露 酸 酸 胨 二 醇 盏 糖 酸 醇 水 糖 花 盐 醇 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 1 0 1 4 2 1 4 2 1 4 2 1 阿 拉 伯 糖 蛋 七 半 氨 白 叶 固 基 胨 苷 体 酸 水 对 照 1 13 14 15 2 4 2 1
大肠杆菌与沙门氏菌鉴定
大肠杆菌与沙门氏菌的鉴定08动检1班：魏静翟阿官李盼盼尚延丽田方方崔亚婷一、实验目的与要求1、通过本实验了解大肠杆菌及沙门氏菌的主要生化特性与培养特性2、掌握大肠杆菌与沙门氏菌的鉴别方法二、实验器材及试剂温箱、显微镜、载玻片、营养琼脂、接种环、灭菌平皿、麦康凯培养基、无菌试管、伊红美兰培养基、三糖铁培养基、革兰氏染色剂、棉签、火柴等三、实验内容1、直接镜检法：1）操作步骤：a）用棉签沾取适量样液直接涂在载玻片上b）用革兰氏染色剂染色c）显微镜下观察2）预期实验结果：a）大肠杆菌：大肠杆菌为革兰氏阴性菌，中等大小，两端略圆的短粗杆菌，成单个存在，也有成双排列；周身鞭毛，能运动，有时两端着色较浓，要注意与巴氏杆菌区分开来。
b）沙门氏菌：沙门氏菌也为革兰氏阴性菌，无芽孢，大小通常为0.7~1.5um*2.0~5.0um，菌端钝圆，散在，偶有短丝状，无荚膜，除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外均有周身鞭毛，能运动，绝大多数菌株有菌毛。
2、分离培养法：将样液分别划线接种在麦康凯培养基、伊红美兰培养基上，温箱培养24h后观察生长情况，根据菌落的形态、颜色、大小等方面的差异来鉴别大肠杆菌和沙门氏菌。
1）麦康凯培养基（预期实验结果）：a）大肠杆菌：鲜桃红色或微红色，菌落中心呈深桃红色，圆形，扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润；b）沙门氏菌：无色至浅橙色，透明或半透明，菌落中心有时为暗色。
2）伊红美兰培养基（预期实验结果）：a）大肠杆菌：紫黑色菌落，有的有金属光泽b）沙门氏菌：形态特征与在麦康凯培养基上的相似2、三糖铁培养基穿刺试验1）操作方法：将待检样液穿刺接种于三糖铁培养基中，培养18~24h后，取出观察2）预期实验结果：a）大肠杆菌：穿刺后不变黑，表面呈黄色b）沙门氏菌：穿刺底部有气体，穿刺后变黑，中间为黄色表面为红色3、乳糖发酵试验1）操作方法：将待检样液接种于乳糖发酵管内放于温箱内培养18h后，观察结果2) 预期实验结果：a）大肠杆菌：产酸产气b）沙门氏菌：不产酸产气。
沙门氏菌
大肠杆菌和沙门氏菌的微生物学检查摘要：大肠杆菌和沙门氏菌的微生物学检查主要是了解大肠杆菌与沙门氏菌的形态与染色特性，熟悉大肠杆菌与沙门氏菌的主要培养特性，掌握大肠杆菌与沙门氏菌的常规检查方法。
通过用糖发酵、MR、VP、吲哚、硫化氢实验的方法的结果为麦康凯试验琼脂上呈现红色菌落的为大肠杆菌，糖发酵试验A组葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇变为黄色含气泡，表示该菌对此糖产酸产气。
B组葡萄糖、麦芽糖、甘露醇变为黄色，表示该菌对此糖产酸产气。
MR试验：A管为黄色，为阴性；B管为红色，为阳性。
VP试验A管为红为阳性；B管不变色，为阴性。
吲哚试验A管出现红色，为阳性反应；B管不变色，为阴性反应。
硫化氢试验A管无黑色，为阴性反应；B管出现黑色沉淀，为阳性反应。
结论为A为大肠杆菌，B 为沙门氏菌。
关键词：大肠杆菌、沙门氏菌、硫化氢、吲哚、MRVP引言：大肠杆菌是肠杆菌科中埃希氏菌属的代表种。
根据O、H、K抗原的不同，可将大肠杆菌的株分为不同的血清型。
自然界中大肠杆菌的血清型可达数万种，但致病性大肠杆菌的数量有限。
在兽医上最重要的致病性血清型有：O8、O138、O141等多见于猪，O8、O78、O101等多见于牛羊，O4、O5、O75等多见于马，O1、O2、O36、O 78等多见于鸡，O10、O85、O119等多见于兔。
沙门氏菌属是由一大群血清学相关的革兰氏阴性、兼性厌氧无牙孢组成，系肠杆菌科中重要的病原菌属之一，对人和多种动物均有致病性，可引起人的伤寒、副伤寒、肠炎和食物中毒，对动物能致多种临床表现的沙门氏菌病，亦能以继发菌出现在其他疾病中。
大肠杆菌和沙门氏菌作为肠杆菌科的成员具有一些共同的特性，如形态、染色特性等。
但一些培养特性和生化特性有差异，可作为鉴别诊断的依据，有时还需要依靠血清学方法。
1. 材料与方法1.1 材料1.1.1 菌种：大肠杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌与沙门氏菌的混合菌液1.1.2 增菌液：亚硒酸盐亮绿增菌液、四磺酸钠增菌液1.1.3 普通培养基：肉汤、普通琼脂、半固体培养基1.1.4 鉴别培养基：SS琼脂、麦康凯琼脂、三糖铁琼脂1.1.5 生化培养基：糖发酵管、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、尿素琼脂、醋酸铅琼脂1.1.6 生化试剂：MR试剂、VP试剂、吲哚试剂、乙醚、硝酸盐还原试剂等1.1.7 沙门氏菌诊断血清：A~E群多价O血清及单因子血清1.1.8 革兰氏染液、显微镜、吸管等1.2 方法1.2.1 麦康凯试验：将样液分别划线接种在麦康凯培养基上，温箱培养24小时后观察生长情况，根据菌落的大小、形态、颜色等来鉴别大肠杆菌和沙门氏菌。
食品中大肠菌群的测定附mpn检索表)
实验六食品中大肠菌群的测定一、概述(一)大肠菌群的定义及范围根据国家1994年颁布的食品卫生检验方法微生物学部分，大肠菌群(coliform bacteria)系指一群在37℃、24h能发酵乳糖，产酸、产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
大肠菌群主要是由肠杆菌科中四个菌属内的一些细菌所组成，即艾希氏菌届、拘橼酸杆菌属、克雷伯氏菌属及肠杆菌属，其生化特性分类见表5-4。
表5-4 大肠菌群生化特性分类表注：+，表示阳性；—，表示阴性；+/-，表示多数阳性，少数阴性。
由上表可以看出，大肠菌群中大肠艾希氏菌I型和Ⅲ型的特点是，对靛基质、甲基红、v-P和拘橼酸盐利用四个生化反应分别为“十十一一”，通常称为典型大肠杆菌；而其他类大肠杆菌则披称为非典型大肠杆菌。
(二)大肠菌群的测定意义1、粪便污染的指标细菌早在1892年，沙尔丁格(Schardinger)氏首先提出大肠杆菌作为水源中病原菌污染的指标菌的意见，因为大肠杆菌是存在于人和动物的肠道内的常见细菌。
一年后，塞乌博耳德“斯密斯(Theobold．Smith)氏指出，大肠杆菌因普遍存在于肠道内，若在肠道以外的环境中发现，就可以认为这是由于人或动物的粪便污染造成的；从此，就开始应用大肠杆菌作为水源中粪便污染的指标菌。
据研究发现，成人粪便中的大肠菌群的含量为：108个／g一109个／g。
若水中或食品中发现有大肠菌群，即可证实已被粪便污染，有粪便污染也就有可能有肠道病原菌存在。
根据这个理由，就可以认为这种含有大肠菌群的水或食品供食用是不安全的。
所以目前为评定食品的卫生质量而进行检验时，也都采用大肠菌群或大肠杆菌作为粪便污染的指标细菌。
当然，有粪便污染，不一定就有肠道病原菌存在，但即使无病原菌，只要被粪便污染的水或食品，也是不卫生的，不受人喜欢的。
2．粪便污染指标菌的选择作为理想的粪便污染的指标菌应具备以下几个特性，才能起到比较正确的指标作用。
①存在于肠道内持有的细菌，才能显示出指标的特异性。
微生物实习表格1
实习报告学院: 动物医学院课程: 兽医微生物学班级:学号:姓名: 韦飞指导教师: 职称: 教师实习时间2010 年6 月7 日至2010 年6 月12 日实习地点2010 年6 月13 日南京农业大学教务处制实习报告兽医微生物学实习（肠科杆菌）一、实验目的1 ．了解大肠杆菌和沙门氏菌（变形和产气）形态与染色特性以及主要培养特性；2 ．熟悉大肠杆菌和沙门氏菌（变形和产气）常规微生物学诊断法；3 ．掌握大肠杆菌和沙门氏菌（变形和产气）生化试验的方法和原理；4 ．熟悉大肠杆菌和沙门氏菌（变形和产气）在选择性和鉴别培养基上的生长表现；二、实验材料1.菌种：大肠杆菌和沙门氏菌混合液，产气肠杆菌和变形杆菌混合液2.培养基：半固体培养基 S·S平板麦康凯平板三糖铁高层斜面蛋白胨水葡萄糖蛋白胨水3. 生化管：葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、枸橼酸盐、H2S、尿素4. 生化试剂：吲哚试剂、 M. R 、 V . P 试剂三、实验内容第一天配培养基S.S培养基：50g S·S培养基+800ml蒸馏水，煮沸溶化浇平板（15ml/块平板），无需高压麦康凯培养基： 44g麦康凯培养基+800ml蒸馏水+1.6g琼脂粉，煮沸，高压15磅，15 分钟，浇平板三糖铁琼脂：30.5g三糖铁琼脂+500ml蒸馏水，煮沸溶化，装长试管50根（10ml/管），高压15磅，15分钟，做高层斜面葡萄糖蛋白胨水：1.25g蛋白胨+1.25g葡萄糖+1.25g磷酸氢二钾+250ml水，加热溶解，调pH至7.6，分装40根短试管高压（3指半高，约5-8ml）蛋白胨水：1.25g蛋白胨+0.625gNaCl+125ml水，调pH至7.6，分装40根短试管，捆扎，高压，121℃15分钟（2指高，约2-4ml）半固体：分别称取蛋白胨5g、牛肉膏2.5g、氯化钠2.5g、磷酸氢二钾0.5g、蒸馏水500ml，加热溶解，调pH7.6，过滤称琼脂粉2g+肉汤500ml,煮沸，待琼脂粉完全溶化，分装短试管（2指高，约2-4ml）SS琼脂，是强选择性培养基,呈红褐色，培养基中的煌绿、胆盐、硫代硫酸钠、柠檬酸钠抑制非肠道菌生长；不能发酵乳糖的细菌，菌落橘黄色；分解乳糖的细菌产酸，使胆盐呈胆酸析出，形成中心混浊的深红色菌落；柠檬酸铁使产生硫化氢的菌落中心呈１实习报告黑色；硫代硫酸具有缓和胆盐对细菌的有害作用及煌绿、中性红的毒性作用。
沙门菌常用生化试验
测试时使用接种针先穿刺至底部，而后于斜面作划线 接种，经培养18-24小时后，依情况判断糖类发酵情形。
观察结果：有三种类型
丙二酸盐试验 阳性（兰） 阴性（不变）
沙门菌常用生化试验
ONPG试验 阳性（黄） 空白
中华人民共和国国家标准
GB/T 4789.4-2003
微生物学检验 沙门氏菌检验
冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品
鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品
前增菌法 25g＋BPW225mL
36 ℃ ± 1 ℃ 一般4h，干蛋品18h～24h
非如左述的各种反应结果 非沙门氏菌
（一）前增菌 •前增菌：使食品加工过程中受伤的沙门菌细胞恢 复活力 •未经加工过的食品，检验前不需要前增菌
前增菌：25克（加工食品）+225毫升缓冲蛋白胨 水 37度培养4小时（干蛋品18—24小时）。
选择性增菌
含选择性抑制剂 1：1稀释液而不是1：10，提高检出率
无色半透明，产硫化氢 乳糖迟缓阳性或阴性的菌株，与沙门氏菌Ⅰ、 菌株有的菌落中心带黑色， Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ相同；乳糖阳性的菌株为粉 但不如以上培养基明显. 红色，中心黑色，但中心无黑色形成时与大
肠艾希氏菌不能区分.
肠道菌选择性培养基分离培养
SS平板
分离肠道致病菌的强选择培养基 SS平板组成
slant color/butt color/ gas production/hydrogen sulfide production
a. uninoculated b. little change/alkaline/-/c. alkaline/acid/-/+ d. acid/acid/+/+ e. acid/acid/+/-
大肠杆菌和沙门氏菌生化试验鉴定表
大肠杆菌和沙门是杆菌鉴定表1．糖发酵试验取纯培养物分别接种葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖发酵管，37℃培养2～3d，观察结果。
2．吲哚试验取纯培养物接种蛋白胨水，37℃培养2～3d，加入吲哚指示剂，观察结果。
3．MR试验和VP试验取纯培养物接种葡萄糖蛋白胨水，37℃培养2～3d，分别加入MR和VP指示剂，观察结果。
4．枸橼酸盐试验取纯培养物接种枸橼酸盐培养基上，37℃培养18～24h，观察结果5．硫化氢试验取纯培养物接种醋酸铅琼脂，37℃培养18～24h，观察结果。
大肠杆菌与沙门氏菌生化试验鉴别表注：⊕产酸产气、+ 阳性、- 阴性、 +/- 大多数菌株阳性/少数阴性、 v 种间有不同反应。
（四）运动性检查及在鉴别培养基上的培养特性1．运动性有周鞭毛，镜检可见呈圆周运动；半固体培养基穿刺培养使培养基呈云雾状。
2．培养特性钩取纯培养物分别接种远滕氏琼脂平板、伊红美蓝琼脂平板、SS琼脂平板，37℃温箱培养18～24ｈ，观察菌落特征。
1、给出周鞭毛菌镜下观察结果的动态图片画2、给出在半固体培养基上的结果观察图片大肠杆菌与沙门氏菌在鉴别培养基上的菌落特征由于大肠杆菌合成代谢能力强，在含无机盐、胺盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。
最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能生长，生长温度范围为15-46℃。
在普通营养琼脂上生长表现3种菌落形态：（1）光滑型：菌落边缘整齐，表面有光泽、湿润、光滑、呈灰色，在生理盐水中容易分散。
（2）粗糙型：菌落扁平、干涩、边缘不整齐，易在生理盐水中自凝。
（3）粘液型：常为含有荚膜的菌株。
此菌兼性厌氧，在有氧条件下生长良好，最适生长pH为6.8-8.0，所用培养基pH为7.0-7.5,若pH值低于6.0或高于8.0则生长缓慢。
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肠杆菌生化鉴定表
肠杆菌生化鉴定表
肠杆菌生化鉴定表是一种用于鉴定肠杆菌属中不同菌株的生化特性的工具。
肠杆菌是一类常见的革兰氏阴性杆菌，常存在于人体的肠道中，同时也是一些环境中的常见细菌。
肠杆菌生化鉴定表通常包含了一系列生化试验，这些试验可以帮助鉴定菌株的代谢特征，从而确定其属于肠杆菌属。
下面是一些常见的肠杆菌生化鉴定试验及其解释：
1. 染色试验：通过革兰氏染色法，观察菌株的细胞形态和结构，肠杆菌属通常呈现出革兰氏阴性的特征。
2. 氧气需求试验：检测菌株在氧气环境中的生长能力。
肠杆菌属通常是厌氧菌，即可以在无氧或微氧环境下生长。
3. 发酵试验：测试菌株对不同糖类的发酵能力。
肠杆菌属通常能够发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖等多种糖类。
4. 加氢硫酸钠试验：检测菌株产生硫化氢的能力。
肠杆菌属中的一些菌株可以产生硫化氢，在培养基中会形成黑色沉淀。
5. 尿素水解试验：测试菌株是否能够水解尿素。
肠杆菌属中的一些菌株具有尿素酶，可以水解尿素产生氨。
除了以上这些试验，肠杆菌生化鉴定表还可能包含其他一些试验，如产气试验、脲酶试验等，这些试验都有助于进一步鉴定菌株的特征。
在使用肠杆菌生化鉴定表时，实验人员会根据菌株在各个试验中的反应结果，将其与已知的肠杆菌特征进行对比，以确定其属于肠杆菌属的可能性。
通过综合分析各个试验结果，可以得出最终的鉴定结论。
需要注意的是，肠杆菌生化鉴定表只是鉴定肠杆菌属的一种方法之一，对于某些特殊的菌株或者鉴定要求较高的情况，可能需要结合其他的鉴定手段进行确认。
沙门氏菌鉴定检验原始记录
甘露醇
山梨醇
ONPG
结果判断
注：＋：阳性，－：阴性；结果判断：沙门氏菌或非沙门氏菌。
5.血清学鉴定：（20年月日）
玻片上划出2个约1cm×2cm的区域，挑取1环待测菌，各放1/2环于玻片上的每一区域上部，在其中一个区域下部加1滴多价菌体（O）抗血清，在另一区域下部加入1滴生理盐水，作为对照。再用无菌的接种环或针分别将两个区域内的菌落研成乳状液。将玻片倾斜摇动混合1min，并对着黑暗背景进行观察。
3.分离：（20年月日）
分别用接种环取增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板。于℃分别培养h（XLD琼脂平板）h（BS琼脂平板），观察各个平板上生长的菌落,
BS上可疑菌落形态：※菌落颜色：□黑色有金属光泽□棕褐色□灰色□灰绿色
※周围培养基：□呈黑色或棕色□不变□
※□其它：
XLD上可疑菌落形态：□粉红色□黄色□黑色中心□全部黑色的菌落□其它：
血清凝集结果：（+或-）
7.结果：（20年月日）
沙门氏菌。
检验者：复核者：检毕日期：20 年 月 日
沙门氏菌
1.前增菌：（20年月日）
取检样加入含BPW225mL的均质杯中，以r/min均质min，转入锥形瓶℃培养h；
2.增菌：（20年月日）
轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1 mL，转种于10 mL TTB内，于℃培养h。同时，另取1 mL，转种于10 mL SC内，于℃培养h；
4.生化试验：（20年月日）
自选择性琼脂平板上分别挑取个典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再于底层穿刺；接种针不要灭菌,直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基、蛋白胨水（供做靛基质试验）、尿素琼脂（pH7.2）、氰化钾（KCN）培养基和营养琼脂平板，于℃培养h，将已挑菌落的平板储存于室温保留24 h，以备必要时复查。反应结果见年月日
细菌检验表格整理(球菌、肠杆菌、弧菌)
肠外无菌部位——增菌——BAP；
混有其他污染菌——MAC、EMB——抑制其他革兰阳性菌及少数革兰阴性菌；
粪便标本——BAP、MAC、SS；
鉴定：
（科间鉴别）氧化酶、O/F实验
（属间鉴别）
KIA：分解葡——产酸/产酸产气；
分解乳糖——鉴别致病菌与非致病菌
MIU：U——大肠阴性为黄、变形阳性为红；
MAC：发酵乳糖产酸，形成较大黏液型、红色菌落；
在科玛嘉定位显色培养基呈绿色菌落
BAP、MAC培养基分离培养——挑选可疑菌落；
属间鉴别：
MIU（- - +）I除了产酸克雷伯菌，都为阴
KIA（发酵葡萄糖/发酵乳糖）
志贺菌属
4个血清群：A、B、C、D群
致病与侵袭力、内毒素、外毒素有关；
引起人类细菌性痢疾即菌痢，粪口传播；
生化：
发酵葡萄糖（产酸或产酸产气）、触酶+、氧化酶-、硝酸盐还原+；
抗原构造：
主要包括菌体O抗原（脂多糖）、鞭毛H抗原（蛋白质）、表面抗原（多糖）；
O抗原与H抗原是肠杆菌科血清型分群和分型的依据
抵抗力：
不强，高温即可被杀死
标本采集：
只有肠外感染标本做直接镜检（除血液）；
肠道感染标本（粪便、脓血、粘液）；
分类
（1）肠杆菌科：
革兰阴性杆菌，多为肠道的正常菌群；
（2）KIA：克氏双糖铁培养基，为肠杆菌科细菌常用的鉴别培养基
（3）迁徙现象：普通变形杆菌和奇异变形杆菌的大多数菌种在普通琼脂平板上生长时可蔓延成波纹状，布满整个培养基表面
形态：
革兰阴性杆状或球杆状，无芽孢，多有鞭毛，能运动，致病性的菌株多有菌毛；兼性厌氧，营养要求不高，在BAP和MAC上生长良好；
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大肠杆菌和沙门是杆菌鉴定表
1．糖发酵试验取纯培养物分别接种葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖发酵管，37℃培养2～3d，观察结果。
2．吲哚试验取纯培养物接种蛋白胨水，37℃培养2～3d，加入吲哚指示剂，观察结果。
3．MR试验和VP试验取纯培养物接种葡萄糖蛋白胨水，37℃培养2～3d，分别加入MR和VP指示剂，观察结果。
4．枸橼酸盐试验取纯培养物接种枸橼酸盐培养基上，37℃培养18～24h，观察结果
5．硫化氢试验取纯培养物接种醋酸铅琼脂，37℃培养18～24h，观察结果。
大肠杆菌与沙门氏菌生化试验鉴别表
注：⊕产酸产气、+ 阳性、- 阴性、+/- 大多数菌株阳性/少数阴性、v 种间有不同反应。
（四）运动性检查及在鉴别培养基上的培养特性
1．运动性有周鞭毛，镜检可见呈圆周运动；半固体培养基穿刺培养使培养基呈云雾状。
2．培养特性钩取纯培养物分别接种远滕氏琼脂平板、伊红美蓝琼脂平板、SS琼脂平板，37℃温箱培养18～24ｈ，观察菌落特征。
1、给出周鞭毛菌镜下观察结果的动态图片画
2、给出在半固体培养基上的结果观察图片
大肠杆菌与沙门氏菌在鉴别培养基上的菌落特征
由于大肠杆菌合成代谢能力强，在含无机盐、胺盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。
最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能生长，生长温度范围为15-46℃。
在普通营养琼脂上生长表现3种菌落形态：（1）光滑型：菌落边缘整齐，表面有光泽、湿润、光滑、呈灰色，在生理盐水中容易分散。
（2）粗糙型：菌落扁平、干涩、边缘不整齐，易在生理盐水中自凝。
（3）粘液型：常为含有荚膜的菌株。
此菌兼性厌氧，在有氧条件下生长良好，最适生长pH为，所用培养基pH为若pH值低于或高于则生长缓慢。
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