生物制药 (完整版)

第一章绪论

1、生物技术药物：一般来说，采用DNA重组技术或其他生物技术研制的蛋白质或核酸类

药物。

2、生物药物按其功能用途可以分为三类：（1）治疗药物；（2）预防药物；（3）诊断药物。

3、生物技术药物的特性：（1）分子结构复杂；（2）具有种属特异性；（3）治疗针对性强，

疗效高；（4）稳定性差；（5）基因稳定性；（6）免疫原性；（7）体内的半衰期短；（8）受体效应；（9）多效性和网络效应；（10）检的特异性

4、生物技术制药的特性：高技术；高投入；长周期；高风险；高收益。

第二章基因工程制药

1、基因工程制药的药物都是用传统方法很难生产的珍贵稀有的药品，主要是医用活性蛋白

和多肽类，包括：(1)免疫性蛋白，各种抗原和单克隆抗体。(2)细胞因子，如各种干扰素,白细胞介素，集落刺激生长因子，表皮生长因子及凝血因子。（3）激素，如胰岛素，生长激素，心钠素。（4）酶类，如尿激酶，链激酶，葡激酶，组织型纤维蛋白溶酶原激活剂及超氧化物歧化酶等。

2、我国科学家经过8年刻苦攻关，成功地研制出世界上第一个采用中国健康人白细胞中克

隆的A1B型干扰素基因，组建杂交质粒，传染大肠杆菌使之高效表达的人A1B干扰素。

3、基因工程技术是将所要重组对象的目的基因插入载体，拼接，转入新的宿主细胞，构建

成工程菌，实现遗传物质的重新组合，并使目的基因在工程菌内进行复制和表达的技术。

4、基因工程药物制造的主要步骤：获得目的基因—组建重组质粒—构建基因工程菌—培养

工程菌—产物分离纯化—除菌过滤—半成品检定—成品检定—包装。

5、简单叙事反转录法克隆基因的主要步骤：mRNA的纯化；CDNA第一链的合成；CDNA

第二链的合成；CDNA克隆；将重组体导入宿主细胞；CDNA文库的鉴定；目的CDNA 的分离和鉴定。

6、目前克隆真核基因常用的方法：化学合成和反转录法。

7、基因表达的微生物宿主细胞分为两类：原核生物，目前常用的有大肠杆菌，枯草芽孢杆

菌，链霉菌。真核生物，常用的有酵母，丝状真菌。

8、目前使用最广泛的宿主菌是大肠杆菌和酿酒酵母。

9、影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素：（1）外源基因的剂量；（2）外源基因的表达效

率：启动子的强弱；核糖体结合位点的有效性；SD序列和起始密码的间距；密码子组成。（3）表达产物的稳定性；（4）细胞的代谢负荷；（5）工程菌的培养条件。

10、融合蛋白：融合蛋白的氨基端是原核序列，羧基端是真核序列，这样的蛋白质是由

一条短的原核多肽和真核蛋白结合在一起的。

11、非融合蛋白：是指在大肠杆菌中表达的蛋白以真核的mRNA的AUG为起始，在

其氨基端不含任何细菌多肽序列。

12、质粒的不稳定分为分裂不稳定和结构不稳定。

13、质粒的分裂不稳定：是指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒的子代菌的现象，它

主要与两个因素有关，一是含质粒菌产生不含质粒子代菌的频率，质粒丢失率与宿主菌，质粒特性和培养条件有关；二是这两种菌比生长速率差异的大小。

14、提高质粒稳定性的方法：选择合适的宿主菌；选择合适的载体；选择压力；分阶段

控制培养；控制培养条件；固定化。

15、接种量：是指移入的种子液体积和培养液的体积的比例。

16、基因工程药物的分裂纯化特点：（1）目的产物在初始物料中含量低；（2）含目的产

物的初始物料组成复杂；（3）目的产物的稳定性差；（4）种类繁多；（5）应用面广。17、分离纯化的基本过程的5个步骤：包括细胞破碎，固液分离，浓缩与初步纯化，高

度纯化直至得到纯品，成品加工。

18、产品的保存：（1）液态保存：低温保存；在稳定PH条件下保存；高浓度保存；加

保护剂保存。（2）固态保存：干粉或结晶。

19、叙述干扰素的生理功能及基因工程干扰素的制备工艺流程？干扰素是人体细胞分

泌的一种活性蛋白质，具有广泛的抗病毒，抗肿瘤和免疫调节活性，是人体防御系统的重要组成部分。干扰素工艺流程：启开种子—制备种子液—发酵培养—粗提—精提—半成品制备—半成品检定—分装—冻干—成品检定—成品包装。

第二章动物细胞工程制药

1、细胞工程：是以细胞为单位，应用

细胞生物学，分子生物学等理论和技术，有目的地进行精心设计，精心操作，使细胞的某些遗传性发生改变，从而达到改良或产生新品种的目的，以及使细胞增加或重新获得产生某种特定产物的能力，从而在离体条件下进行大量培养，增值，并提出对人类有用的产品。

2、贴壁细胞：这类细胞的生长必须有可以贴附的支持物表面，细胞依靠自身分泌的或培养

基中提供的贴附因子才能在该表面上生长，增值。（分为两种形态，即成纤维样细胞型或上皮样细胞型。

3、悬浮细胞：这类细胞的生长不依赖支持物表面，可在培养液中呈悬浮状态生长。 4

4、兼性贴壁细胞：有些细胞并不严格地依赖支持物，它们既可以贴附于支持物表面生长，

但在一定的条件下，它们还可以在培养基中呈悬浮状态良好地生长。

5、动物细胞的生理和生长特点？答：（1）细胞的分裂周期长；（2）细胞生长需贴附于基质，

并有接触抑制现象；（3）正常二倍体细胞的生长寿命是有限的；（4）动物细胞对周围环境十分敏感；（5）动物细胞对培养基的要求高；（6）动物细胞对蛋白质的合成途径和修饰功能与细菌不同。

6、DNA导入动物细胞的常用方法？答：（1）融合法：细胞融合法；脂质体介导法；原生

质体融合法；微细胞介导法；（2）化学法：DNA—磷酸钙沉淀法；DEAE—葡聚糖法；

染色体介导法；（3）物理法：电穿孔法；显微注射法；基因枪法；（4）病毒法：重组反转录病毒介导法；重组DNA病毒介导法。

7、原代细胞：是直接取自动物细胞组织，器官，经过粉碎，消化而获得的细胞悬液。

8、二倍体细胞系：原代细胞经过传代，筛选，克隆，从而从多种细胞成分的组织中挑选并

纯化出某种具有一定特征的细胞株。

9、载体有两类：（1）病毒载体；（2）质粒载体，穿梭质粒载体。

10、无血清培养基的优点？答：（1）提高了细胞培养的可重复性,避免了由于血清批次

之间差异的影响；（2）减小了由血清带来病毒，真菌和支原体等微生物污染的危险；（3）供应充足，稳定。（4）细胞产品易于纯化；（5）避免了血清中某些因素对有些细胞的毒性。（6）减小了血清中蛋白对某些生物测定的干扰，便于对实验结果的分析。

11、悬浮培养：即让细胞自由地悬浮于培养基内生长增值。它适用于一切种类的非贴壁

依赖细胞，也适用于兼性贴壁细胞。

12、贴壁培养：是必须让细胞贴附在某种基质上繁殖的培养方法。绝大部分是贴壁细胞，

它适用于一切贴附依赖性细胞，也适用于兼性贴壁细胞。

13、动物细胞培养的操作方式：分批式操作，流加式操作，半连续式操作连续式操作，

灌流式操作。

14、组织工程：即通过对细胞的大量培养，并用细胞直接作为一种治疗手段用于临床，

或用培养的细胞进一步加工构成一种组织，人造皮肤，人造肝脏，人造姨腺，人造骨和人造血管，并用于临床治疗。、