干扰素常见问题回答及效价测定方法 (1)
干扰素生物活性两种测定方法的比较研究
干扰素生物活性两种测定方法的比较研究目的:摸索改进的结晶紫染色法与噻唑蓝(MTT)比色法中哪一种方法能够提高干扰素的生物学活性测定(细胞病变抑制法)结果的准确性。
方法:比较在干扰素的生物学活性测定后期,采用先结晶紫染色乙醇脱色然后比色的方法(方法一)和采用加入MTT后裂解比色的方法(方法二),经过多次比较证明哪一种方法测定结果的准确性更高。
结果:采用方法二测得的多次结果之间产生的偏差较小,单次结果的可信度较高,单次测定结果的相关系数r值较大。
结论:采用MTT比色法比改进的结晶紫染色法更适合应用于干扰素的生物学活性测定,可提高结果的准确性。
[Abstract] Objective: To improve the accuracy of bioactivity detection (cytopathic effect inhibitory method) of interferon by comparing the crystal violet staining and MTT colorimetry. Methods: In the late stage of bioactivity detection, the first method (first staining by crystal violet, then discoloring by alcohol, at last colorimetry) and the second method (first adding MTT solution, then adding cell lysis solution, at last colorimetry) were compared by experiments for many times to investigate which method had a higher accuracy in the detection results. Results: Compared with the first method, the outcome bias of the second method was smaller, the reliability was better, and the related coefficient (r) of single experiment was higher. Conclusion: MTT colorimetry is better than the crystal violet staining in applying to detect bioactivity of interferon.[Key words] Interferon; Bioactivity; Crystal violet staining; MTT colorimetry; WISH cells干扰素(interferon,IFN)是第一个被发现的细胞因子,也是第一个应用于临床的基因工程产品。
干扰素的质量分析
R-CH-COOH NH2
+
2 O
OH OH
-CO2，-RCHO -3H2O
OH O N O O
O
H O N O
互变异构
O
紫色
干扰素（蛋白质）的颜色反应
• 2.双缩脲反应：碱性溶液中与Cu2+产生紫 红色。可用于蛋白质的定性和定量分析， 及检查蛋白质的水解程度。
干扰素（蛋白质）的颜色反应
• 3.酚试剂反应：蛋白质中酪氨酸、色氨酸 与酚试剂反应显蓝色。 福林-酚试剂法（Lowry法）: • 碱性+Cu2++磷钼酸-磷钨酸→蓝色 • 范围:25-250μg(Tyr,Trp的反应)
（二）干扰素的杂质检查
2. 肽图检查：胰蛋白酶解+RP-HPLC 肽图分析可作为与天然产品或参考品的蛋 白质一级结构做精密比较的手段。与氨基 酸组成和序列分析合并研究，可作为蛋白 质一级结构的精确鉴别。
（二）干扰素的杂质检查
3. 等电点测定：等点聚焦电泳 在两性电解质存在下,电泳胶形成一个pH 梯度,蛋白质根据其等电点不同进行分离, 泳移至等电点pH位置上时净电荷为零而停 止泳动,形成区带,用银染或考马斯亮蓝进 行染色。
3.等电点的测定(等电聚焦电泳)
（二）干扰素的杂质检查
4. 紫外吸收：紫外光普扫描 对于某种蛋白质或多肽来说，它的最大吸 收波长是固定的。紫外吸收光谱是检查蛋 白质的一个重要的指标。
（二）干扰素的杂质检查
5. 纯度：SDS-PAGE和HPLC 蛋白质的纯度一般是指是否含有其它杂蛋 白，而不包括盐、缓冲液离子、SDS等小 分子在内。
应，将氨基酸降解后，逐一进行测定。
Edman降解法测定氨基酸序列
异 硫 氰 酸 苯 酯
干扰素生物活性两种测定方法的比较研究
干扰素生物活性两种测定方法的比较研究
赵鸿
【期刊名称】《中国医药导报》
【年(卷),期】2010(7)10
【摘要】目的:摸索改进的结晶紫染色法与噻唑蓝(MTT)比色法中哪一种方法能够提高干扰素的生物学活性测定(细胞病变抑制法)结果的准确性.方法:比较在干扰素的生物学活性测定后期,采用先结晶紫染色乙醇脱色然后比色的方法(方法一)和采用加入MTT后裂解比色的方法(方法二),经过多次比较证明哪一种方法测定结果的准确性更高.结果:采用方法二测得的多次结果之间产生的偏差较小,单次结果的可信度较高,单次测定结果的相关系数r值较大.结论:采用MTT比色法比改进的结晶紫染色法更适合应用于干扰素的生物学活性测定,可提高结果的准确性.
【总页数】3页(P36-38)
【作者】赵鸿
【作者单位】北京双鹭药业股份有限公司,北京,100041
【正文语种】中文
【中图分类】R-331
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效价的测定
二、免疫血清（浆）的效价测定—溶血法实验原理该方法的基本原理是根据补体的经典激活途径，即当抗原抗体复合物存在时，补体系统被激活，最后形成的攻复合体可使细胞性抗原溶解。
当实验中抗原和补体的量固定不变，且对于抗体相对过量时，则随着抗体量的不同，被溶解的细胞性抗原的量也不同，两者成正比关系，因此根据溶解的抗原的多少就可以判断出抗体的量。
实验材料1. 待测免疫血清（浆）2. 20%SRBC3. 补体4. 生理盐水5. 试管实验方法1. 将前面获得的小鼠抗 SRBC 免疫血浆首先稀释 10 倍，成为 1:10 免疫血浆。
2. 取3个试管,分别编号为A、B、C,用于对1:10免疫血浆的3倍、4倍和5倍稀释，即A号管内为1:30的免疫血浆;B号管为1:40 的免疫血浆；C号管为1:50的免疫血浆。
3. 取 15 支试管，分为A、B、C三列，每列5只，先给每管中加入生理盐水0.5ml,再从A、B、C号管中分别吸取0.5ml血浆加入相应各列的第一个管中,然后各列再进行倍比稀释,血清稀释度如下表：管号 1 2 3 4 5A 列1:60 1:120 1:240 1:480 1:960B 列1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280C 列1:100 1:200 1:400 1:800 1:1600注意每列的最后一管应该弃去0.5ml液体。
4. 向每个试管中分别加入SRBC0.25ml和补体0.25ml 。
5. 混均各管中的液体,置37°C水浴30~40分钟。
结果判定以发生完全溶血的最高血清稀释度管为效价判定管，其血清稀释度即为免疫血清的效价。
注意事项1. 动物免疫时注意确保SRBC被注射到了腹腔中,要避免注入其他脏器（如肠、膀胱）内。
2. 稀释血清时尽量做到精确，注意用于不同列的吸管不要混用。
思考题1. 影响免疫血清质量的因素有那些？2. 各种检测抗体效价的方法相比有什么优缺点？返回。
干扰素的制备及检定
干扰素的制备及检定干扰素的制备及检定(一) 原理干抗素是干扰素诱生剂作用于有关生物细胞所产生的一类高活性、多功能蛋白质。
它从细胞产生和释放出来以后，又作用于相应的其它同种细胞，使其获得抗病毒及抗肿瘤等多方面的免疫力。
所谓干扰素诱生剂，是指能诱导有关生物细胞产生干扰素的一类物质。
能诱导有关生物细胞产生α和β干扰素者称甲类干扰素诱生剂，如各种动物病毒、细胞内寄生的微生物等；可诱导T细胞产生γ干扰素的称为乙类干扰素诱生剂，如脂多糖、链球菌毒素、肠毒素A等。
在实际工作中，制备干扰素多采用两种方法。
一是用干扰素诱生剂诱导某些生物细胞产生干扰素，经提取纯化并检定合格后即可使用。
该法所用的细胞多为外周血白细胞。
二是采用基因工程法进行生产，即将干扰素基因导入大肠杆菌内，通过培养大肠杆菌来生产干扰素。
目前，大规模生产干扰素主要采用基因工程法。
下面仅以用干扰素诱生剂制备人白细胞干扰素为例介绍干扰素的制备方法。
(二) 材料和方法1 材料细胞培养设备(如培养瓶、多孔培养板、温箱、显微镜、旋转培养器等)、水浴箱等。
2 方法(1) 制备诱生剂：采用NDVF系弱毒株，以鸡胚尿囊液形式保存于－20℃，其血凝滴度稳定在1∶640～1∶1 280之间。
大量繁殖时，用05%水解乳蛋白稀释100～1 000倍，接种于9日龄鸡胚尿囊腔，置37℃培养72h后，收获尿囊液，效价测定应大于1∶640，无菌检查应合格。
(2) 制备诱生细胞：无菌采取人外周血(多用人脐带血，或血库贮藏血)，置于含肝素（抗凝血）的无菌瓶内，于4℃保存不超过24h，诱生细胞(白细胞)不单独提取，以全血代替。
(3) 制备粗制干扰素：①加诱生剂，按1ml抗凝全血加0.2ml诱生剂(即NDVF系尿囊液，其血凝滴度不低于1∶640)；②加温吸附，将加有诱生剂的抗凝全血置37℃水浴中1h，每隔15min晃动一次，使NDVF吸附于白细胞上。
然后以1000r/min离心20min，弃上清，留沉淀物；③加营养液孵育诱生，按抗凝全血的1～2倍量加Eagle营养液于上述沉淀物中，混匀，置35～36℃温箱内旋转培养18～20h；④离心及酸处理，将上述培养物以2000r/min离心30min，取上清，以6mol/L 盐酸将其pH值调至20，置4℃冰箱5天灭活NDV；⑤中性化，经5天酸化后，再用6mol/L氢氧化钠将pH值调至72～74，即为粗制干扰素。
疫苗效价测定方法[001]
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疫苗效价测定方法疫苗效价测定是评估疫苗质量和有效性的重要指标之一。
通过准确测定疫苗中的有效成分，可以确定疫苗的效力。
本文将详细介绍疫苗效价测定的方法及其步骤，旨在帮助读者了解和应用这一重要的测定方法。
一、疫苗效价测定方法的基本原理疫苗效价测定是通过实验方法测定疫苗中有效免疫物质的含量，进而评估疫苗的免疫力。
一般来说，疫苗效价的测定主要分为两种方法：生物学方法和化学物理方法。
生物学方法是通过动物实验来评估疫苗效力，如活病毒疫苗的TCID50法、灭活疫苗的保护性实验法等。
化学物理方法则是通过测定特定成分的含量来评估疫苗效力，如疫苗抗原含量的酶标法、蛋白质含量的比色法等。
1. 建立实验流程：首先，需要确定实验目的和所需测定的疫苗成分，然后制定实验方案和操作流程，确保实验的可重复性和准确性。
2. 样品制备：样品制备是疫苗效价测定的关键步骤之一。
根据实验方案，选择适当的方法提取和纯化疫苗中的有效成分。
具体方法可以根据疫苗类型和测定对象的不同而有所区别。
3. 样品检测：将制备好的样品进行检测，可以选择合适的化学物理方法或生物学方法进行测定。
比如通过酶标法检测疫苗中的抗原含量，或通过保护性实验评估疫苗的免疫力。
4. 数据处理和分析：根据实验结果，进行数据处理和统计分析，计算出疫苗中有效成分的含量，并评估疫苗的效力。
在此过程中，需要根据实验设计和原理进行相应的计算和判断。
三、疫苗效价测定方法的举例说明以灭活疫苗的抗体测定为例，介绍疫苗效价测定的具体步骤：1. 实验目的：评估灭活疫苗中免疫抗体的含量，以确定疫苗的效力。
2. 实验方案：按照标准操作要求，严格控制所有实验条件，包括实验设备、试剂和动物模型的选取。
3. 样品制备：将灭活疫苗经过特定处理提取出相关免疫抗体。
方法可以采用比色法、酶标法等。
4. 样品检测：选取合适的生物学方法，如酶联免疫吸附试验(ELISA)，进行免疫抗体的定量测定。
5. 数据处理和分析：根据测定结果，计算出免疫抗体的含量，并进行统计分析。
抗体效价检测步骤
抗体效价检测步骤抗体效价检测是一种测定抗体的浓度及活性的方法，通常用于评估抗体的质量和效能。
以下是抗体效价检测的一般步骤，供您参考。
1. 制备样本：首先，从动物体内或培养物中收集抗体样本。
例如，可以从实验动物体内收集抗体样本，或从培养的细胞上清液中收集抗体样本。
确保样本的收集过程在符合生物安全标准的条件下进行。
2. 稀释样本：抗体样本通常会被稀释，以确保在合适的浓度范围内进行测定。
稀释倍数的选择应根据抗体的预计浓度和检测方法的灵敏度来确定。
3. 样本预处理：根据实验的需要，可能需要对样本进行一些处理。
例如，可以对样本进行加热、酶处理或亲和纯化等步骤。
4. 准备控制组：在进行抗体效价检测之前，还需要准备一些控制组。
这些控制组可以包括阴性对照、阳性对照和参考标准，用于确保检测结果的准确性和可靠性。
5. 测定方法选择：根据实验的需要和可用的设备/试剂，选择适合的抗体效价测定方法。
常见的方法包括ELISA、Western blot、免疫组化等，可根据实验目的选择不同的方法。
6. 进行测定：按照选定的方法操作，将稀释的样本和控制组加入适当的载体（如微孔板）中，与相应的检测试剂反应。
通过适当的信号检测方法，如吸光度测定、荧光测定或放射免疫测定等，测量不同样本的信号强度。
7. 数据分析：使用适当的软件或计算方法，对测定结果进行数据分析。
根据标准曲线、控制组和参考标准的结果，计算样本中抗体的浓度或抗体效价。
8. 结果解释：根据测定结果，对抗体样本的浓度或效价进行解释。
可以根据人体抗体效价的标准范围，判断抗体活性和质量的好坏。
9. 结果验证：为了确保结果的准确性，可以进行结果的验证实验。
例如，可以通过再次测定部分样本或使用其他独立的方法进行验证。
以上是抗体效价检测的一般步骤，实际操作中可能会有些差异，具体步骤可能会根据实验目的、检测方法和设备要求等因素进行调整。
在进行抗体效价检测时，一定要严格按照实验操作规程进行，确保结果的准确性和可靠性。
ELISA法检测干扰素
ELISA法检测干扰素干扰素(IFN)是一类具有广谱抗病毒活性的蛋白质，仅在同种细胞上发挥作用。
根据其来源、理化及生物学性质的不同，可分为IFN-α、IFN-β、IFN-γ3种干扰素。
其中，IFN-α主要由白细胞产生，IFN-β由成纤维细胞产生，IFN-γ主要由T细胞在免疫应答中受到抗原或丝裂原活化后分泌产生。
3种干扰素中，IFN-α、IFN-β抗病毒作用较强，IFN-丁免疫调节作用较强。
目前已可用基因重组技术制备干扰素投入临床使用。
干扰素不能直接灭活病毒，其抗病毒作用是由于它能激活细胞内抗病毒蛋白基因，制造抗病毒蛋白，抑制病毒在体内复制。
干扰素不仅可抑制已感染细胞内病毒的复制，而且还可使未感染细胞处于抗病毒状态，对中断病毒的细胞间传播有一定作用；但对病毒整合基因可能仅有暂时抑制其mRNA的转录作用，不能清除病毒基因。
干扰素的免疫调节作用表现为它是重要的巨噬细胞活化因子(macro-phageactivating factor，MAF)，活化的巨噬细胞能杀死病原微生物或杀伤肿瘤细胞。
干扰素能增强各种细胞表达MAF分子从而有利于递呈抗原或利于T细胞对靶细胞的识别和杀伤；还能促进T、B细胞的分化，活化NK细胞和中性粒细胞，从而有助于加强免疫应答。
由于干扰素不是一种淋巴细胞的生长因子，故常抑制淋巴细胞(特别是B 细胞)的增殖。
IFN抗病毒活性的特点如下：①仅仅是抑制作用，IFN消失后病毒将重新复制，因此必须足量反复应用；②有相对的种属特异性，IFN-γ较IFN-α、IFN-β严格；③IFN不直接灭活病毒，而是通过细胞基因组产生另一些蛋白因子来发挥效能，因此不同细胞对IFN的敏感性不同；④不同感染状态的病毒-细胞系统对IFN 的敏感性不同，病毒大量复制、引起细胞炎症应答时，IFN易产生效应；对完整细胞中的整合型病毒无作用。
[检测方法] ELISA法[方法学原理] 抗人IFN抗体包被在微孔反应板上，待测标本和标准品中的IFN会与抗人IFN抗体结合，游离的成分被洗去，同时加入生物素化的抗人IFN抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。
生物药物检测技术
第二章生物药物的检测法一、选择题（一）单项选择题1. 药物纯度符合要求是指（）A. 含量符合药典的规定B. 药物中的杂质不超过限量规定C. 不存在杂质D. 对患者无不良作用2. 药物中氯化物杂质检测的原理是：利用酸性溶液中杂质与硝酸银试液生成氯化银浑浊。
所用的酸是（）A. 硫酸B. 硝酸C. 盐酸D. 醋酸3. 在药物的金属检测中，溶液的酸碱性通常是（）A. 强酸性B. 弱酸性C. 中性D. 弱碱性4. 下列哪一种药物无需无菌检查是（）A. 注射剂及输液剂B. 眼科外伤用药C. 口服药物D. 大面积烧伤创面外用制剂5. 微生物限度检查法师针对下列哪种药物的（）A. 粉末片剂B. 丸剂C. 动物脏器制剂D. 以上均是6. 注射剂及输液剂应采用的微生物检查项目为（）A. 微生物限度检查B. 无菌检查C. 活螨D. 控制菌7. 口服制剂应采用的微生物检查项目为（）A. 控制菌B. 染菌数量C. 活螨D. 以上均是8. 深部腔道及黏膜用剂应采用的微生物检查项目为（）A. 微生物限度检查B. 无菌检查C. 活螨D. 控制菌9. 目前检查生物药品中残留外源性DNA的常用方法有（）A. 分子杂交技术B. 基于DNA结合蛋白分析系统C. 实时定量PCR方法D. 以上均是10. 《中国药典》（2005年版）三部规定的微生物限度检查的指标菌包括（）A. 大肠埃希菌B. 金黄色葡萄球菌C. 铜绿假单胞菌D. 以上均是11. 下列哪种生物制品在进行安全检定时，需要进行解毒试验（）A. 抗毒素B. 类毒素C. 病毒类疫苗D. 血液制品12. 单克隆抗体制品中小鼠骨髓瘤细胞DNA残留量用（）法进行检定A. 电泳法B. 高效液相色谱C. 中和法D. DNA分子杂交13. 热源质试验以（）试验法作为基准方法A. 豚鼠B. 小鼠C. 家兔D. 以上均是14. 在安全检定时，以上那项实验不属于一般安全性试验（）A. 安全试验B. 热源质试验C. 无菌试验D. 防腐剂试验15. 生物制品在制造过程中，常加入（）试剂作为防腐剂或灭活剂A. 硫柳汞B. 甲醛C. 三氯甲烷D. 以上均是（二）多项选择题1. 在药物的一般杂质检查中必须严格控制限量的是（）A. 氯化物B. 铁盐C. 砷盐D. 以铅为代表的重金属E. 硫酸盐2. 古蔡法检查砷盐时，酸性氯化亚锡的作用是（）A. 使正五价的砷转化成三价B. 除去硫化氢C. 使生成的碘转化成碘离子D. 形成锌-锡齐E. 除去其他杂质3. 药物的干燥失重检查时常用的干燥机是（）A. 五氧化二磷B. 硫酸C. 变色硅胶D. 无水氯化钙E. 无水硫酸钠第三章生物制品的质量监控一、选择题（一）单项选择题1. 冻干制品应进行真空度检查，凡有真空度者瓶内应出现（）色辉光A. 蓝紫B. 红C. 黄D. 绿2. 下列哪类制品需要检查外源性DNA残留量（）A. 细菌类疫苗B. 血液制品C. 重组DNA制品D抗生素3. 下列哪类生物制品在进行安全检定时，需要进行脱毒检查（）A. 抗生素B. 类毒素C. 病毒类疫苗D. 血液制品4. 活菌苗的效力测定可以用（）表示A. 活菌数B病毒滴度 C. 絮状单位 D. 抗毒素单位5. 活疫苗的效力测定可以用（）表示A. 活菌数B病毒滴度 C. 絮状单位 D. 抗毒素单位6. 类毒素效价以（）表示A. 活菌数B病毒滴度 C. 絮状单位 D. 抗毒素单位7. 抗毒素效力常用（）法测定A. 活菌数B. 病毒滴度C. 中和法D. 絮状单位8. 单克隆抗体制品中小鼠骨髓瘤细胞DNA残留量用（）法进行检定A. 电泳法B. 高效液相色谱C. 中和法D. 絮状单位9. 血液制品中残余乙醇含量采用（）法测定A. 康卫皿扩散法B. 免疫双扩散法C. 免疫电泳法D. 挥发法10. 热源质试验以（）试验作为基准方法A. 豚鼠B. 小鼠C. 家兔D. 猴（二）多项选择题1. 在进行理化检定时，测定蛋白质含量的方法有（）A. 凯氏定氮法B. 双缩脲法C. Lowry法D. 紫外吸收法E. 免疫电泳法2. 下列哪些方法可用于测定蛋白质分子量（）A. 凝胶层析B. 还原型SDS-PAGE.C. 超速离心分析D. 免疫电泳E. 紫外吸收法3. 鼠源性单克隆抗体的腹水检定项目包括（）A. 效价测定B. 鼠源性病毒检查C. 支原体检查D. 化学检定E. 物理检查4. 生物制品在制造过程中，常加入（）作为防腐剂或灭活菌A. 苯酚B. 甲醛C. 三氯甲烷D. 硫柳汞E. 乙醇5. 效力检定时，免疫力试验常采用的方法有（）A. 定量免疫定量攻击B. 定量免疫变量攻击C. 变量免疫定量攻击D. 变量免疫变量攻击E. 被动保护测定6. 理化检定时，冻干制剂应进行下列哪些项目检查（）A. 水分B. 真空度C. 溶解度D. 外观E. 装量7. 在安全检定项目中，灭活病毒疫苗需要进行（）A. 病毒灭活验证试验B. 牛血清含量测定C. 支原体检查D. 脱毒检查E. 杀菌检查8. 注射用重组人干扰γ需要进行（）A. 无菌检查B. 牛血清含量测定C. 宿主菌蛋白残留检查D. 支原体检查E. 外源性DNA残留检查第四章抗生素类药物的分析一、选择题（一）单项选择题1. 抗生素类药物的常规检查项目中不包括（）A. 鉴别试验B. 异常毒性试验C. 热源试验D. 水分测定E. 降压试验2. 下列说法不正确的是（）A. 标准品系指用于生物检定、抗生素或生化药品中含量或效价测定的标准物质B. 抗生素国际标准由各国指定检定机构或药厂协作标定后决定C. 凡是国际上已制备的国际标准品的品种，在制备国家标准品时，均与国际标准品比较而定出效价D. 每当中检所下发新批标准品后，原有批号的标准品则自动作废E. 标准品必须能久贮不变质3. 下列关于管碟法的特点叙述不正确的是（）A. 影响因素多B. 操作繁琐C. 专属性差D. 样品用量多E. 灵敏度高4. 下列哪个不是影响抗生素效价测定的因素（）A. 抑菌圈的大小B. 抑菌圈的形状C. 抑菌圈边缘清晰度D. 标准品与供试品的同质性E. 高、低剂量供试液滴加的顺序5. 可靠性检验的方法（）A. t检验B. P检验C. F检验D. K检验E. M检验（二）多项选择题1. 抗生素类药物的检测项目包括（）A. 鉴别B. 检查C. 含量（效价）测定D. 生产批号E. 外包装2. 由于抗生素药物的检测项目包括（）A. 微生物检定法B. 化学方法C. 物理方法D. 物理化学方法E. 生化方法3. 抗生素效价单位的表示方法有（）A. 质量单位B. 重量单位C. 类似质量单位D. 特定单位E. 质量折算单位4. 《中国药典》收载微生物检定法包括（）A. 一剂量法B. 二级量法C. 三剂量法D. 浊度法E. 管碟法5. 根据试验设计不同，管碟法可分为（）A. 浊度法B. 一剂量法C. 二剂量法D. 管碟法E. 三剂量法第五章蛋白质类药物的分析一、选择题（一）单项选择题1. 下列说法正确的是（）A. 所有α氨基酸都具有立体异构体B. 蛋白质与碱共热水解时通常可得到L型氨基酸C. 比旋光度是鉴别各种氨基酸的重要根据D. 参比蛋白质合成的二十多种氨基酸在紫外区均有最大吸收峰2. 下列（）不是氨基酸所具有的特征反应A. 岇三酮反应B. Sanger反应C. Edman反应D. 双缩脲反应3. 氨基酸与蛋白质类药物的鉴别中都可采用（）A. 岇三酮反应B. 福林酚反应C. 双缩脲反应D. 纸层析4. 对基因工程类药物的检查项目不包括（）A. 肽图B. N-端氨基酸序列C. 外源DNAD. 蛋白质含量5. N-端氨基酸序列分析的基本原理是（）A. Sange r反应B. 岇三酮反应C. Edman反应D. 双缩脲反应6. 蛋白质类药物含量测定方法不包括（）A. 凯氏定氮法B. 甲醛滴定发C. 福林酚法D. 紫外吸收法7. 下列关于多肽、蛋白质类药物效价测定的说法错误的是（）A. 蛋白质类激素的效价测定多采用动物试验法B. 白喉疫苗的效价测定可采用小鼠-V ero细胞法C. 多数抗毒素及免疫血清的效价测定可采用动物中和试验法D. 人红细胞生成素的效价测定可采用MTT比色法8. 对干扰素的效价测定可采用（）A. Wish细胞病变抑制法B. 全自动网织红细胞法C. MTT比色法D. 凝固时法9. 关于MTT比色法错误的是（）A. 白介素、表皮生长因子都可采用此法进行效价测定B. 活细胞的线粒体脱氢酶能将染料MTT转变为不溶的紫色甲弹颗粒，后者的生成量与细胞数目或细胞活性呈负相关C. 酚红可干扰实实验结果D. 加酸化得异丙醇要在一小时内测定10. 下列方法中（）不能用于蛋白质类药物的分子量检查A. 沉降法B. 考马斯亮蓝G-250染色法C. SDS-PAGE法D. 凝胶过滤法（二）多项选择题1. 对于基因重组多肽类药物的鉴别中可采用（）A. SDS-PAGE.B. HPLCC. 免疫印迹法D. 紫外吸收法E. Edman反应2. 白介素的检测项目包括（）A. 等电点B. 外源性DNA残留C. 红外光谱扫描D. 乙腈残留量E. 热源质3. 干扰素的检测项目包括（）A. SDS-PAGE. 纯度B. 宿主蛋白质残留量C. N-端氨基酸序列D. 残余抗生素活性E. 水分4. SDS-PAGE. 法可用于（）A. 基因重组多肽药物的鉴别B. 蛋白质类药物的纯度检查C. 蛋白质类药物的分子量测定D. 蛋白质类药物的含量测定E. .蛋白质类药物的等电点测定5. 氨基酸类药物的鉴别可用（）A. 红外光谱B. 旋光度测定C. 紫外光谱D. 层析法E. 气相色谱第六章酶类药物的分析一、单项选择题1. 酶的基本组成单位是（）A. 氨基酸B. 核苷酸C. 氨基酸或核苷酸D. 甘油和脂肪酸2. 有关酶活性测定与酶活性单位的描述，错误的是（）A. 测定酶活性大小可用单位时间内底物的减少量来表示B. 测定酶活性大小可用单位时间内产物的生成量来表示C. “单位”越大，表示酶的活性越大或酶的含量越高D. 同一种酶来说，比活力愈高，酶愈纯3. 影响酶促反应速度的因素不包括（）A. 底物浓度B. 酶的浓度C. 反应环境的pHD. 反应温度4. 下列关于酶的国际单位的论述哪一个是正确的（）A. 一个UI单位是指在最合适的条件下，每分钟催化1μmol底物转化所需的酶量B. 一个UI单位是指在最合适的条件下，每秒钟催化1mol产物生成所需的酶量C. 一个UI单位是指在最合适的条件下，每分钟催化1mol底物转化所需的酶量D. 一个UI单位是指在最合适的条件下，每秒钟催化1μmol底物转化所需的酶量5. 测定酶活性时要测定酶促反应的初速度，其目的是为了（）A. 节约底物B. 使酶促反应速度与酶浓度成正比C. 尽快完成测定工作D. 使反应不受温度的影响6. 下列对酶活力测定的描述哪项是错误的（）A. 酶的反应速度可通过测定产物的生成量或测定底物的减少量来完成B. 需在最合适pH条件下进行C. 按国际酶学委员会统一标准温度都采用25℃D. 要求[S] << [E]7. 酶的比活力是指（）A. 以某种酶的活力作为1来表示其他酶的相对活力B. 每毫克蛋白的酶活力单位数C. 任何纯酶的活力与其粗酶的活力比D. 每毫升反应混合液的活力单位8. 酶偶联测定法测定酶活力时，对偶联工具酶的要求以下不符合的是（）A. 纯度好B. 底物专一性C. 使酶促反应速度和酶浓度间有线性关系D. 用量与被测酶量用量相当9. 2005年版《中国药典》中对每毫克蛋白中尿激酶活力规定是多少（）A. 不得少于14万单位B. 不得少于10万单位C. 不得少于12万单位D. 不得少于8万单位10. 2005年版《中国药典》对天门冬酰胺酶蛋白质含量测定选择的方法是（）A. 双缩脲法B. 凯氏定氮法C. Folin-酚试剂法D. 紫外吸收检测法第七章维生素及辅助类药物的分析一、选择题（一）单项选择题1. 维生素C能与硝酸银试液反应生成去氢抗坏血酸和金属银黑色沉淀，是因为分子中含有（）A. 环己烯基B. 伯醇基C. 仲醇基D. 二烯醇基2. 某药物在三氯醋酸存在下水解，脱酸，生成戊糖，再失水，转变为糠醛，加入吡啶，加热至50℃产生蓝色。
细胞病变抑制法测定干扰素效价标准操作规程
细胞病变抑制法测定干扰素效价标准操作规程（编号：015）1、目的及适用范围运用细胞病变抑制法测定干扰素效价，该SOP 适用于其他能抑制病毒复制的细胞因子的效价测定。
2、主要仪器倒置显微镜、酶标仪、细胞培养箱、微量移液器3、试剂及配制方法DMEM 细胞培养液、小牛血清、0.1M PBS 、胰酶、染色液、脱色液4、操作步骤4.1 细胞制备：取生长良好的MDBK 细胞，按常规方法消化，运用10%FBS DMEM 制备细胞悬液；对细胞进行计数，调整细胞浓度为1×10 个/mL 的悬液，然后加入到96 孔细胞培养板上，100µL/孔。
37℃，5%CO 培养8~10h 使其成为单层细胞。
524.2 加入干扰素处理细胞：取待测干扰素样本，运用10% FBS DMEM 预稀释成终浓度为0.001mg/mL ，然后运用10% FBS DMEM 进行4倍梯度稀释，稀释6~8个梯度；将培养8~10h 的单层细胞中的培养液吸出，加入4倍倍比稀释的干扰素稀释液，每孔100μL ，每个梯度三个重复，同时取6孔分别标为病毒阳性对照和病毒毒阴性对照，并在各孔中加入等量细胞培养液；培养12~15h 。
4.3 病毒感染：取VSV 病毒，运用无血清DMEM 稀释成终浓度为1000 TCID /mL ；在阳性对照和干扰素处理细胞各孔中加入100μL 病毒稀释液，在阴性对照孔中加入无血清DMEM 培养液；培养24h 。
504.4 结晶紫染色：弃细胞培养液，于每孔中加入结晶紫染色液100μL ，室温放置30min 。
4.5 脱色：弃染料，并用自来水或双蒸水冲洗未着色染料，然后在每孔中加入脱色液100μL ，室温放置10min 。
4.6 运用酶标仪测定OD570值并记录。
4.7 数据处理，以能抑制50%细胞病变的干扰素含量定义为一个活性单位，运用Reed-Muench 法计算干扰素效价，即能抑制50%细胞病变的稀释倍数，方法见表1。
干扰素效价测定方法
干扰素效价测定（细胞病变抑制法）1．试验材料：所用试剂均需分析纯或指定产品1)MEM或IMDM2)牛血清：应符合《中国生物制品主要原辅材质控制标准》3)完全培养液：10%牛血清MEM4)测定培养液：7%牛血清MEM5)攻毒培养液：3%牛血清MEM6)消化液：EDTA（WISH细胞）或胰酶，根据细胞选择EDTA：乙二胺四乙酸二钠0.2gNaCl 8gKCl 0.2gNa2HPO4 1.152gKH2PO40.2g用蒸馏水配成1000mL 121℃/15min高压除菌或是0.2um过滤除菌及残渣。
7)染色液：取50mg结晶紫加入到20mL无水乙醇中溶解，用馏水定容到100mL8)脱色液：50%乙醇，50%蒸馏水，0.1%乙酸（50mL乙醇＋50mL蒸馏水＋0.1mL乙酸）。
9)标准品：国家标准品。
10)PBS：NaCl 8gKCl 0.2gNa2HPO4 1.44gKH2PO40.24g11)WISH细胞（人羊膜上皮细胞）：WISH细胞在培养基中长成单层，贴壁，每周传2次，1：3传代，用完全培养基生长。
12)VSV：－70℃中保存。
2．步骤：2.1～2.7均应无菌操作2.1铺板：弃去WISH细胞培养瓶中的培养液，用PBS洗2次后消化和收集细胞。
用完全培养配成2.5×105 ~3.5×105 个/ml 的细胞悬液，接种于96孔细胞板，每孔100ml，37℃ ,5%CO2条件下培养4~6h。
2.2 配置标准溶液：取1支标准品按说明书溶解后，用测定培养液稀释至103IU/ml。
2.3 制备样品溶液：将待检样品按说明书溶解后，用测定培养液稀释至103IU/ml。
2.4 96孔板中每孔加入150μl的测定培养液，取标准溶液50μl加入孔中，做4倍稀释，待检样品同法。
2.5 加样：取2.1制备的细胞培养板,将2.4 项制备的溶液移至该板中，每孔100μl,37℃培养18～2 4h。
5%CO22.6 制备病毒液：攻毒剂量100TCID50。
药典干扰素测定方法
供试品溶液的制备 将供试品按标示量溶解后，用测定培养液稀释成每1ml约含1000IU。在96孔细胞培养板中，做4倍系列稀释，共8个稀释度，每个稀释度做2孔。在无菌条件下操作。
（2）完全培养液 量取新生牛血清10ml，加MEM或RPMI 1640培养液90ml。4℃保存。
（3）测定培养液 量取新生牛血清7ml，加MEM或RPMI 1640培养液93ml。4℃保存。
（4）攻毒培养液 量取新生牛血清3ml，加MEM或RPMI 1640培养液97ml。4℃保存。
（5）消化液 称取乙二胺四乙酸二钠0.2g、氯化钠8.0g，氯化钾0.2g、磷酸氢二钠1.152g、磷酸二氢钾0.2g，加水溶解并稀释至1000ml，经121℃、15分钟灭菌。
标准品溶液的制备 取重组人干扰素生物学活性测定国家标准品，按说明书复溶后，用测定培养液稀释至每1ml约含10000IU。在96孔细胞培养板中，做4倍系列稀释，共8个稀释度，每个稀释度做2孔。在无菌条件下操作。
供试品溶液的制备 将供试品按标示量溶解后，用测定培养液稀释成每1ml约含10000IU。在96孔细胞培养板中，做4倍系列稀释，共8个稀释度，每个稀释度做2孔。在无菌条件下操作。
测定法 使WISH细胞在培养基中贴壁生长。按（1：2）~（1：4）传代，每周2~3次，于完全培养液中生长。取培养的细胞弃去培养液，用PBS洗2次后消化和收集细胞，用完全培养液配制成每1ml含2.5×105~3.5×105个细胞的细胞悬液，接种于96孔细胞培养板中，每孔100μl，于37℃、5%二氧化碳条件下培养4~6小时；将配制完成的标准品溶液和供试品溶液移人接种WISH细胞的培养板中，每孔加入100μl，于37℃、5%二氧化碳条件下培养18~24小时；弃去细胞培养板中的上清液，将保存的水泡性口炎病毒（VSV，-70℃保存）用攻毒培养液稀释至约100CCID50，每孔100μl，于37℃、5%二氧化碳条件下培养24小时（镜检标准品溶液的50%病变点在1IU/ml）；然后弃去细胞培养板中的上清液，每孔加入染色液50μl，室温放置30分钟后，用流水小心冲去染色液，并吸干残留水分，每孔加入脱色液100μl，室温放置3~5分钟。混匀后，用酶标仪以630nm为参比波长，在波长570nm处测定吸光度，记录测定结果。
西南大学-1168《 药品生物检定技术》20秋季 在线作业参考答案
一：解释题1.生物检定法答:生物检定法：利用药物对生物体(整体动物、离体组织、微生物等）的作用以测定其效价或生物活性的一种方法。
它以药物的药理作用为基础，统计学为工具，选用特定的实验设计，在一定的条件下比较供试品和相当的标准品所产生的特定反应，通过等反应剂量间比例的计算，从而测得供试品中活性成分的效价。
2.药品无菌检查答:药品无菌检查——用于确定要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及要求无菌的其他用品是否染有活菌的一种方法。
3.空态答: 空态：洁净室（区）在净化空气调节系统已安装完毕且功能完备的情况下，但是没有生产设备、原材料或人员的状态。
4.沉降菌答:沉降菌——用沉降法收集空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数5.异常毒性检查答:——异常毒性检查——生物制品的非特异性毒性的通用安全试验，通过给动物注射一定剂量的供试品，在规定的期限内观察动物的反应和体重生长情况，检查制品中是否污染外源性毒性物质以及是否存在意外的不安全因素。
6.比浊法——答：比浊法又称浊度测定法。
为测量透过悬浮质点介质的光强度来确定悬浮物质浓度的方法，这是一种光散射测量技术本法主要是用于测定能形成悬浮体的沉淀物质,例如微量磷、硫、氯和钙等的测定,生物碱沉淀试剂形成的混浊也可用此法测定。
这是根据悬浮体的透射光或散射光的强度以测定物质组分含量的一种分析方法。
当光线通过一混浊溶液时,因悬浮体选择地吸收了一部分光能,并且悬浮体向各个方面散射了另一部分光线,减弱了透过光线的强度。
在水质监测和管理过程中，比浊法常用于测量饮用水、工业用水、废水的透明度；也用于测量空气及其他各种气体中悬浮固体的含量，是空气和水污染研究的一种工具。
在酿造工业中，比浊法常用于各种饮料澄清过程的控制和过滤过程的监控。
在分析化学上，可通过生成悬浮沉淀的反应产物来测定某些元素的浓度,例如,通过生成硫酸钡悬浮物来测定Ba2+ 或SO2-,以及在煤、焦炭、油、橡胶中的总硫量；通过生成硫化银和氯化银悬浮物来测定Ag+或Cl-；在容量分析中,浊度测量也可用于确定滴定终点，如用钙盐滴定氟化物、用银盐滴定溴化物、用钡盐滴定硫酸盐等。
干扰素的制备
把得到的杂交阳性克隆中的重组质粒 DNA放到一个无细胞蛋白合成体系中进行 翻译，对每一个翻译体系的产物进行抗病 毒的干扰素活性检测，经过多轮筛选获得 了产生干扰素的cDNA。 最后将干扰素cDNA克隆入大肠杆菌表 达载体中，转化大肠杆菌进行高效表达。
二、基因工程干扰素的制备
制备种子液 发酵培养 提 半成品制备 半成品检定 分装 干 成品检定 成品包装 启开种子 粗 冻
1、半成品检定
（4）纯度 纯度 电泳纯度用非还原型SDS-PAGE法，银染显色应 为单一区带，经扫描仪测定纯度应在95%以上。
（ 5）相对分子量测定 ）
还原型SDS-PAGE，加样量不地域微克，同时用 已知相对分子量的蛋白标准系列做对照，以迁移率为横 坐标，相对分子量的对数为纵坐标作图，计算相对分子 量。与理论值比较，误差不得高于10%。 （6）残余外源性 ）残余外源性DNA含量测定 含量测定 用放射性核素或生物素探针法测定，每剂量中残 余外源性DNA应低于100pg。
（1）物理性状 物理性状
2、成品检定
冻干品白色或微黄色疏松体，加入注射水后 不得含有肉眼可见不溶物。 （2）鉴别试验 鉴别试验 应用ELISA或中和试验检定。 （3）水分测定 水分测定 用卡氏法，应低于3%。 （4）无菌试验 无菌试验 同半成品。
（5）热原质试验 热原质试验 同半成品检定。 （6）干扰素效价测定 干扰素效价测定 同半成品检定，效价不应低于标示量。 （7）安全试验 安全试验 取体重为350-400克豚鼠3只，每只腹侧皮下注 射量为成人每千克体重临床使用最大量的3倍，观察7 天，若豚鼠局部无红肿、坏死、总体重不下降，说明 成品合格。 取体重18-20克小鼠5只，每只尾静脉注射剂量按 人每千克体重临床使用最大量的3倍，观察7天，若动 物全部存活，说明成品合格。
r干扰素释放试验检测方法培训-2015.11.27
常见问题小结
2、斑点和PVDF膜
问题 PVDF膜背景高 潜在可能 洗板不充分 PVDF膜没有充分干燥 PBMCs洗涤不干净或破碎 可能解决方法 增加洗板次数及浸泡时间 (6次) PVDF膜彻底干燥后再进行斑点读取。 重复洗涤，吹打细胞沉淀不暴力
PBMCs细胞混有较多红细胞 采集血样后室温保存并4小时内处理， 更换淋巴细胞分离液， 必要时进行红细胞破碎处理(蒸馏水)。 显色时间过长 孔中出现空白区域 细胞分布不均匀 斑点不清晰 细胞孵育时细胞移位 实时检测显色过程，适时终止反应。 细胞培养时避免剧烈晃动或拍板； 溶液加样时避免气泡产生 细胞培养时避免培养板震动，以免斑点“拖尾”
常见问题小结1外周血处理pbmcs问题潜在可能可能解决方法细胞量少白细胞减少症增加采血量错误的血液收集不能使用含有edta的采血管采血管放置温度不是1825确保采血管放置温度是1825血液存储超过推荐时间确保血液存储在46小时内红细胞污染采血管放置温度不是1825确保采血管放置温度是1825错误的离心分离增加离心时间到30min调整离心机降速到最缓和淋巴细胞分离液效果欠佳更换淋巴细胞分离液没有明显或清楚的单个核细胞层离心速度过低增加离心速度到15001800g离心时间过短增加离心时间到30min淋巴细胞分离液效果欠佳更换淋巴细胞分离液高血脂标本采集空腹血液标本结果无效无效结果可能由许多不正确的标本处理情况引起也可能由污染引起
离心22分钟。
45度角 缓慢加入淋巴细胞分离液
1000g，22min 务必缓降
中间白膜层
第三步：收集PBMC
吸取中间白膜层并转移至无菌15ml尖底离心管，生理盐水和RPMI1640培 养基各洗涤细胞1次，弃上层液，加入0.5ml AIM-V培养基重悬细胞。取适量 混匀的细胞悬液适当稀释后进行细胞计数。
干扰素效价测定（细胞病变抑制法）
干扰素效价测定（细胞病变抑制法）干扰素效价测定（细胞病变抑制法）北京广源恒信科技发展有限公司1 试验材料所用试剂均需分析纯或与指定产品相当。
1.1 MEM培养液按说明书配制，经除菌过滤，置于玻璃或塑料瓶中，4℃保存。
使用期限不得超过产品标示有效期。
1.2 牛血清应符合《中国生物制品主要原辅材料质控标准》中牛血清的有关要求。
1.3 完全培养液MEM培养液添加10%牛血清。
1.4 测定培养液MEM培养液添加7%牛血清。
1.5 攻毒培养液MEM培养液添加3%牛血清。
1.6 消化液取0.2g乙二胺四乙酸二钠、8g氯化钠、0.2g氯化钾、1.152g磷酸氢二钠、0.2g磷酸二氢钾，用蒸馏水配成1000ml的溶液，经121℃、15分钟高压灭菌。
1.7 染色液取50mg结晶紫加入20ml乙醇溶解，用蒸馏水定容至100ml。
1.8 脱色液50%乙醇，50%蒸馏水，0.1%乙酸（ml/ml）。
1.9 标准品干扰素效价测定用国家标准品。
1.10 PBS取8g氯化钠、0.2g氯化钾、1.44g磷酸氢二钠、0.24g磷酸二氢钾用蒸馏水配成1000ml 的溶液，经121℃、15分钟高压灭菌。
1.11 WISH细胞（人羊膜细胞）WISH细胞在培养基中呈单层，贴壁生长，每周2次，1﹕4消化传代，于完全培养基中生长。
1.12 VSV（水泡性口炎病毒）-70℃保存。
2 试验步骤2.1～2.7项各步骤应于无菌条件下进行。
2.1 铺板弃去WISH细胞培养瓶中的培养液，用PBS洗2次后消化和收集细胞，用完全培养液配成2.5×105～3.5×105个细胞/ml的细胞悬液，接种于96孔细胞培养板中，每孔100μl。
37℃，5%CO2条件下培养4～6小时。
2.2 制备标准溶液取1支标准品按说明书溶解后，用测定培养液稀释至103IU/ml。
2.3 制备样品溶液将待检样品按说明书溶解后，用测定培养液稀释至103IU/ml。
2.4 于96孔细胞培养板中每孔加入150μl测定培养液。
干扰素的制备
图为：质粒pBR322
四、从大肠杆菌k12获取目的基因
由于质粒重组时有3种基本方式，即：目的基因与克 隆载体重组，目的基因片段与目的基因片段重组，克 隆载体与克隆载体重组；另外重组过程可能会发生基 因突变情况 • 流程：步骤一：将细菌涂布到含氨苄青霉素的培养基 上培养，就可得到质粒PBR322或重组质粒的细菌单菌 落。 • 步骤二：步骤一获得的每一个细菌单菌落标记 为a、b、c、d等，在每一个单菌落中挑取部分细菌转 涂到含有四环素的培养基上，不能生长的是绝大部分 含有重组质粒的细菌及少量可能发生突变的非重组质 粒的细菌单菌落。原因：因为PBR322含有抗四环素基 因，重组质粒中目的基因插在抗四环素基因中，使其 结构破坏，失去抗四环素作用。
α 干扰素又依其结构分为 α 1b、α 2a、α 2b等亚型。 其区别在于个别氨基酸 的差异上，早期干扰素是 用病毒诱导人白血球产生 的，产量低、价格昂贵， 不能满足需要，现在可利 用基因工程技术并在大肠 杆菌中发酵、表达来进行 生产。
基因工程菌的制备
• 目的基因的分离 克隆载体
目的基因与克隆 载体的体外重组
七、对重组质粒的检测与目的基因提 取
• 目的基因获取 • 对获得的质粒进行双酶切，获得目的基因与PBR322 质粒片段，通过琼脂糖凝胶电泳，由于目的基因与 PBR322质粒片段相对分子量不同，在电泳过程中产 生不同的条带，通过与已知基因长度的对比，我们可 以选出相应的目的基因，接着利用Qiagen纯化柱回 收纯化DNA。具体：用3倍体积的特殊高盐溶液于 55°融化带有目的基因的DNA片段的琼脂糖凝胶块， 将DNA释放到水溶液中。然后将其通过Qiagen纯化 柱，经过如图结合—洗涤—洗脱步骤，直接得到纯化 的DNA样品。 • 利用核酸探针杂交法鉴定目的基因
应用结晶紫染色法测定干扰素效价
应用结晶紫染色法测定干扰素效价
刘长暖;刘兰;王军志;郭莹;丁锡申
【期刊名称】《中国生物制品学杂志》
【年(卷),期】1999(12)1
【摘要】根据活细胞能吸收结晶紫染料的原理 ,建立了测定干扰素效价的结晶紫染色法 ,并用线平行线定量法计算干扰素含量。
经试验测定 ,该方法与用常规法测得的结果有很好的相关性 (r =0 .9387,P >0 .0 5 ) ,且重复性较好 ,用 A值表示细胞的病变程度比打分法能够更准确地反应细胞的状态 ,因此所得结果更精确、客观 ,表明该方法可用于干扰素类制品的效价测定。
【总页数】3页(P36-38)
【关键词】干扰素;效价;结晶紫染色法
【作者】刘长暖;刘兰;王军志;郭莹;丁锡申
【作者单位】中国药品生物制品检定所生物技术产品检定及标准化重点实验室【正文语种】中文
【中图分类】TQ460.72;TQ929.1
【相关文献】
1.大鼠睾丸间质细胞中结晶紫染色法半薄切片技术应用 [J], 潘贵君;龚林;袁峰
2.结晶紫染色法显示弹力纤维的应用 [J], 苏庆
3.结晶紫染色测定法在抗肿瘤药物筛选中的应用 [J], 陈军;战洪生
4.测定脊髓灰质炎病毒滴度的结晶紫染色法的建立及验证 [J], 刘悦越; 赵岩; 张韵
祺; 赵荣荣
5.高效液相色谱法测定水产品中结晶紫和隐色结晶紫残留量 [J], 金雁;姚家彪;刘宁;姜莉;赵颖
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基因工程复合干扰素与传统的白细胞干扰素有什么区别？
白细胞干扰素是通过诱导动物血液中的白细胞获得的，该类产品中的干扰素含量低，活性不稳定；另外，由于该类产品来自动物血液，具有一定的生物安全风险，易导致交叉感染。
而基因工程干扰素是采用先进的分子生物学技术，将干扰素基因客隆入大肠杆菌表达系统，利用大肠杆菌发酵的方式获得的高纯度，高活性干扰素；该类干扰素由于采用发酵生产，所以活性稳定且批次之间差异较小；另外由于来源于无害的大肠杆菌，杜绝了交叉感染的可能。
目前，广泛应用于人类医用干扰素均采用基因工程的方法生产，其，高活性，低毒副作用的特点已被广泛认可。
本产品的基因工程复合干扰素与市场上的同类干扰素有什么区别？
本产品将禽α和γ两种干扰素亚型进行了最优配比混合使用，使得本产品既可以用于禽病的预防，提高机体免疫力，也可以用于禽病的早期治疗。
而市场上的的同类产品往往只含有一种亚型的干扰素，无法同时实现预防和早期治疗。
为什么本产品是水针剂，而其他公司产品是冻干粉？
干扰素作为一种蛋白制剂，其不够稳定，极易失活的缺点限制了其运输和使用，于是很多企业选择了冻干以提高其稳定性的方法。
但是冻干技术同样存在一系列的缺点；首先干扰素在冻干和复溶的过程中不可避免的会活性下降，直接影响使用效果。
其次，使用干扰素动感制剂需要加水复溶，这不近增加了使用人员的工作量，而且增加了被污染的概率。
考虑到冻干制剂的这些缺点，我们对干扰素进行了分子改造，提高了其稳定性，并采用先进的制剂配方开发了一种稳定的蛋白保护剂，使得本产品的稳定性优于同类冻干产品。
本产品在2~8℃条件可保存两年，活性不会发生明显变化，而同类冻干产品复溶后最多能保存两周。
另外，水针制剂大大的简化了操作人员的工作程序，减少了被污染的概率，用药剂量也更准确。
本产品的基因工程复合干扰素可否与替他药物一起使用？
可以一起使用，如果伴有继发性感染，建议与抗生素联合使用。
禽病毒性感染为什么必须使用干扰素？
干扰素是目前所知道的发挥抗病毒作用最快的防御体系，可增强自然杀伤细胞的杀伤能力和激活T细胞免疫，在短时间内就能使机体处于抗病毒状态，使机体在1-3周内对病毒重复感染具有抗御作用。
迄今为止，最有效而且应用最抗广泛的生物制品抗病毒制剂就是干扰素。
干扰素通过抑制病毒在细胞内的复制而达到抗病毒的目的，是病毒病早起治疗和预防的首选生物制品。
本产品的基因工程复合干扰素可否用于动物免疫功能低下的治疗？
可以，干扰素是提高动物免疫力最有效的药物之一，其提高免疫增强的效果要优于黄芪多糖和胸腺肽。
本产品的基因工程复合干扰素和灭活疫苗一起使用后可起到什么作用？
疫苗必须在健康的状况下免疫，若有隐性感染则会引起较强的应激反应，严重的可引起动物死亡；灭活疫苗引起的免疫应答比较迟缓，有免疫空白期，容易在此期间发生感染。
有些灭活疫苗效果不理想，不能产生足够的抗体。
而与复合干扰素联合使用之后，能弥补免疫空白期，缓解疫苗应激反应，增强免疫效果。
干扰素是不是抗生素？
干扰素不是抗生素，是一种细胞因子。
干扰素是一种具有多功能活性的蛋白质，是由单核细胞和淋巴细胞产生的细胞因子，它们是迄今为止发现的最好的具有抗病毒和免疫增强功能的的生物制品之一。
干扰素使用后有无残留？
无任何残留。
由于干扰素是动物体内自身存在的一种抗病毒和免疫增强蛋白，当动物被病毒感染时可起到清除病毒的作用，但是很多病毒感染动物后会抑制动物自身干扰素的分泌从而导致发病。
本产品中的基因工程复合干扰素与动物体内的天然干扰素具有完全相同的结构和功能，就如同自己体内的干扰素一样，在清除动物体内病毒后，被动物机体降解和吸收，不存在任何残留现象。
附:干扰素效价测定方法。