黄酮含量的测定

三、吸光分析仪的基本构造
0.575
光源
参比 I0
单色器
吸收池
检测器
显示
A Kcb
请注意与定义比较 未考虑吸收池和溶剂对光子的作用
样品
It 入射光 I0
透射光 It
单波长单光束分光光度计
0.575
光源
单色器
吸收池
检测器
显示
单波长双光束分光光度计
光束分裂器
光源 单色器
比值
吸收池
检测器
显示
实验二 黄酮类物质含量的测定
（2）标准曲线的绘制： 准确吸取芦丁标准溶液0、0.50、1.00、2.00、 3.00、⒋00ml（相当于芦丁0、75、150、300、450、 600ug），移入10ml刻度比色管中，加入30％乙醇溶 液至5ml，各加5％亚硝酸钠溶液0.3ml，振摇后放置 5min，加入10％硝酸铝溶液0.3ml摇匀后放置 6min，加1.0mol／L氢氧化钠溶液2ml，用30％乙醇 定容至刻度。摇匀，放置15min，于510nm波长处测 定吸光度，以零管为空白，以芦丁含量（ug）为横 坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线，计算相关 系数（r）。
一 原理提要 黄酮类化合物是具有苯并吡喃环结构的一类天然化合物的总
称，一般都具有4位羰基，且呈现黄色。黄酮类化合物的3—羟基、 4—羟基或5—羟基、4－羰基或邻二位酚羟基，与铝盐进行络合 反应，在碱性条件下生成红色的络合物。 本方法对样品中黄酮类化合物进行提取纯化后，用分光光度 法于510nm波长下测定其吸光度，与芦丁标准品比较，进行待测 物中总黄酮的定量测定。
（3）样品测定：
根据样品中总黄酮含量高低，取适宜体积待测
液，按标准曲线制备操作步骤于510nm处进行吸光度
的测定（样液如有沉淀，应过滤后测定）。
4.结果计算
根据标准工作曲线，求出相当于样品吸光度的芦
丁含量。
物质对光 的吸收
h 光作用于物质时，物质吸收了可见光， 而显示出特征的颜色，这一过程与物质的 性质及光的性质有关。
S3 S2
S1 S0
E3 E2 E1 E0
h E2 E0
物质对光的吸收满足Plank 条件
hc E E2 E0 h

吸收光谱 Absorption Spectrum
A C
增 大
二、溶液的吸光定律
透光率 （透射比） 透光率定义： 入射光 I0 透射光 It
It T I0
T 取值为0.0 % ~ 100.0 % 全部吸收 全部透射 T = 0.0 % T = 100.0 %
Lambert – Beer Law:
A Βιβλιοθήκη Baiducb
物质的性质
lg T Kcb A
3．操作步骤
（1）样品处理 1）固体样品： 称取1～2g干燥的固体样品，用滤纸包紧，置于索氏提取器 中，加入50～100ml70％乙醇溶液浸润后，在80℃水浴下回流 3h，至提取液无色为止。粗提液冷却后，减压抽滤，并用少量 25％乙醇溶液洗涤滤渣，合并滤液。在50℃下减压蒸馏，除去 其中的乙醇，直至索氏提取器内溶液呈无醇味。倒出容器内溶 液，用30ml热水分3次洗涤，抽滤后，将滤液倒入分液漏斗 中，以75ml 氯仿分3次萃取脱脂，待完全分层后，收集各次下 层水溶液并定容至50ml。 2）液体样品： 准确吸取1.0ml样品，定容至50ml后，直接以75ml 氯仿分3 次萃取脱脂，其余步骤同上。
入射光波长 温度
K：吸光系数
吸收定律与吸收光谱的关系
吸 光 定 律 A 吸 收 光 谱 C
A或

A

max C
吸光度的加合性
多组分体系中，如果各组分之间无相互作用，其吸光 度具有加合性，即
A
Ai ibci b i ci
i i i
对吸收定律偏离
A
主要原因
非单色光 吸光质点的相互作用 C
《仪器分析实验》
黄酮含量的测定
吸光光度法 是基于被测物质的分子 对光 具
有选择吸收 的特性而建立的分析方法。
光的电磁波性质
10-2 nm 10 nm
射 线 x 射 线
102 nm 104 nm
紫 外 光 红 外 光
0.1 cm 10cm
微 波
103 cm
105 cm
无 线 电 波
可
见
光
一、物质对光的吸收与吸收光谱
h S3 S2 S1 S0 E3 E2 E1 E0
A
纯电子能态间跃迁 S2
h S1 S0 分子内电子跃迁 A
锐线光谱
带状光谱

定性分析与定量分析的基础
A B A
定性分析基础
物质对光 的选择吸收
max ( A) max ( B)
定量分析基础 在一定的实验 条件下，物质对 光的吸收与物质 的浓度成正比。