第八章病原学诊断与防治
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第八章病原学诊断与防治
二 病毒的分离培养与鉴定（virus isolation and determination）
（一）病毒的分离
方法
动物接种 选择易感动物及接种部位，观察发病情况 鸡胚培养 不同病毒选择不同接种部位（绒毛尿囊膜，
尿囊腔，羊膜腔，卵黄囊），分离流感病毒最常用。
细胞培养：分离病毒最常用的方法
标本
直接镜检
分离培养
动物实验 皮肤超敏反应
角质标 本
不染色 标本
10%K OH
深部标
沙氏培养基
（致病性真菌）
本 菌落观察
接种
染色标
本
类型 大小 颜色 皱摺观察发病情况 G染色
快速诊断
血清学实验 核酸检测 真菌毒素检 测
观察菌 丝、孢 子
G+圆形 大小不 均
有芽生 孢子
鉴定
死亡后取标本 进一步鉴定
第四节 特异性预防与治疗
➢ 重组载体疫苗
二、 人工被动免疫
人工被动免疫(artificial passtive immunity)：注射 含有特异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白， 或细胞因子等免疫制剂，使机体即刻获得特异性 免疫，因而作用及时。但这些免疫物质不是病人 自己产生的，故维持时间短。主要用于治疗或紧 急预防。
三、细菌感染的治疗
抗菌药物种类（抗生素及人工合成化学制剂）
主要作用机制
影响细胞壁合成 影响细胞膜功能 影响细菌蛋白合成 影响细菌核酸合成
四、病毒感染的治疗
药物治疗
核苷类药物——抑制病毒基因复制 ——抑制病毒基因转录
蛋白酶抑制剂 天然药物（中草药） 其他药物（金刚烷胺）
干扰素及干扰素诱生剂治疗
（1）原代细胞—来源于动物、鸡胚、人胚组织细胞， 对多种病毒敏感，但只能传2-3代。
（2）二倍体细胞—在体外分裂50-100代后仍保持2倍 体染色体数目的单层细胞。
（3）传代细胞—能在体外无限传代的细胞多由癌细胞 或二倍体细胞突变而来。
病毒在培养细胞中增殖的指标
细胞的变化
（1）出现细胞病变效应（CPE）：即某些病毒在 细胞内增殖引起的特有的细胞病变（细胞变圆、聚 集、坏死、脱落等）
（2）形成细胞融合（多巨核细胞） （3）形成包涵体：某些病毒在细胞浆或核内增殖
后形成的嗜酸或嗜碱性的团块状结构。（病毒增殖 场所）
红细胞吸附 干扰现象 细胞代谢改变（pH）
正常细胞
病变细胞
（二）病毒的数量与感染性测定
（三）新分离病毒的鉴定
核酸类型、理化性状、形态、血清学鉴定、 基因测序和生物对比。
三、病毒感染的血清学诊断
用已知病毒抗原检测病人血清中相应抗体 以诊断病毒性疾病（中和实验、补体结合实验、 血凝抑制实验、凝胶免疫扩散等）
四、 病毒感染的快速诊断
(一) 形态学 电镜和免疫电镜——直接观察病毒 光镜—— 大病毒 和包涵体
（二）检测病毒蛋白抗原
用已知特异性抗体直接检测病毒蛋白抗原（简便、 敏感、特异）
➢ 抗毒素 ➢ 抗菌血清 ➢ 胎盘球蛋白、丙种球蛋白 ➢ 细胞免疫制剂
两种人工免疫的比较
区别要点
人工主动免疫
人工被动免疫
免疫物质
抗原
抗体或细胞因子等
接种次数
1-3次
1次
免疫出现时间 慢（注射后2-4W） 快（注射后立刻出 现）
免疫维持时间 长（数月~数年） 短（2-3W）
用途
多用于预防
Βιβλιοθήκη Baidu
多用于治疗或应急 预防
2 核酸扩增
聚合酶链反应 （polymerase chain reaction，PCR DNA）
连接酶链反应（ligase chain reaction，LCR） 反转录PCR（Reverse transcrptase PCR，RT—PCR
(RNA)
3 基因芯片技术（gene chip）
第三节 真菌学诊断
基因治疗（反义寡核苷酸、抑制病毒复制） 免疫治疗（特异性抗体、免疫调节剂、治疗性疫苗等。
感谢观赏Thanks
常用方法：免疫荧光技术（IF） 固相放射免疫测定（SPRIT） 酶免疫技术（EIA）等。
（三） 检测病毒特异性IgM抗体
检测病毒特异性IgM抗体可诊断急性感染 或证明病毒复制。
（四） 检测病毒核酸
1 核酸杂交
斑点杂交（dot hybridization） 原位杂交（in site hybridization） DNA印迹杂交（Southern blot） RNA印迹杂交 （northern blot）
一、人工主动免疫(artificial active immunity)：将 疫苗(vaccine)或类毒素接种于人体，使机体产生
获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施，主
要用于预防。 ➢ 死疫苗
➢合成疫苗
➢ 活疫苗
➢亚单位疫苗
➢ 类毒素 ➢ 新型活疫苗 ➢ 基因工程疫苗
➢DNA疫苗 ➢转基因植物疫苗 ➢治疗性疫苗
二 病毒的分离培养与鉴定（virus isolation and determination）
（一）病毒的分离
方法
动物接种 选择易感动物及接种部位，观察发病情况 鸡胚培养 不同病毒选择不同接种部位（绒毛尿囊膜，
尿囊腔，羊膜腔，卵黄囊），分离流感病毒最常用。
细胞培养：分离病毒最常用的方法
标本
直接镜检
分离培养
动物实验 皮肤超敏反应
角质标 本
不染色 标本
10%K OH
深部标
沙氏培养基
（致病性真菌）
本 菌落观察
接种
染色标
本
类型 大小 颜色 皱摺观察发病情况 G染色
快速诊断
血清学实验 核酸检测 真菌毒素检 测
观察菌 丝、孢 子
G+圆形 大小不 均
有芽生 孢子
鉴定
死亡后取标本 进一步鉴定
第四节 特异性预防与治疗
➢ 重组载体疫苗
二、 人工被动免疫
人工被动免疫(artificial passtive immunity)：注射 含有特异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白， 或细胞因子等免疫制剂，使机体即刻获得特异性 免疫，因而作用及时。但这些免疫物质不是病人 自己产生的，故维持时间短。主要用于治疗或紧 急预防。
三、细菌感染的治疗
抗菌药物种类（抗生素及人工合成化学制剂）
主要作用机制
影响细胞壁合成 影响细胞膜功能 影响细菌蛋白合成 影响细菌核酸合成
四、病毒感染的治疗
药物治疗
核苷类药物——抑制病毒基因复制 ——抑制病毒基因转录
蛋白酶抑制剂 天然药物（中草药） 其他药物（金刚烷胺）
干扰素及干扰素诱生剂治疗
（1）原代细胞—来源于动物、鸡胚、人胚组织细胞， 对多种病毒敏感，但只能传2-3代。
（2）二倍体细胞—在体外分裂50-100代后仍保持2倍 体染色体数目的单层细胞。
（3）传代细胞—能在体外无限传代的细胞多由癌细胞 或二倍体细胞突变而来。
病毒在培养细胞中增殖的指标
细胞的变化
（1）出现细胞病变效应（CPE）：即某些病毒在 细胞内增殖引起的特有的细胞病变（细胞变圆、聚 集、坏死、脱落等）
（2）形成细胞融合（多巨核细胞） （3）形成包涵体：某些病毒在细胞浆或核内增殖
后形成的嗜酸或嗜碱性的团块状结构。（病毒增殖 场所）
红细胞吸附 干扰现象 细胞代谢改变（pH）
正常细胞
病变细胞
（二）病毒的数量与感染性测定
（三）新分离病毒的鉴定
核酸类型、理化性状、形态、血清学鉴定、 基因测序和生物对比。
三、病毒感染的血清学诊断
用已知病毒抗原检测病人血清中相应抗体 以诊断病毒性疾病（中和实验、补体结合实验、 血凝抑制实验、凝胶免疫扩散等）
四、 病毒感染的快速诊断
(一) 形态学 电镜和免疫电镜——直接观察病毒 光镜—— 大病毒 和包涵体
（二）检测病毒蛋白抗原
用已知特异性抗体直接检测病毒蛋白抗原（简便、 敏感、特异）
➢ 抗毒素 ➢ 抗菌血清 ➢ 胎盘球蛋白、丙种球蛋白 ➢ 细胞免疫制剂
两种人工免疫的比较
区别要点
人工主动免疫
人工被动免疫
免疫物质
抗原
抗体或细胞因子等
接种次数
1-3次
1次
免疫出现时间 慢（注射后2-4W） 快（注射后立刻出 现）
免疫维持时间 长（数月~数年） 短（2-3W）
用途
多用于预防
Βιβλιοθήκη Baidu
多用于治疗或应急 预防
2 核酸扩增
聚合酶链反应 （polymerase chain reaction，PCR DNA）
连接酶链反应（ligase chain reaction，LCR） 反转录PCR（Reverse transcrptase PCR，RT—PCR
(RNA)
3 基因芯片技术（gene chip）
第三节 真菌学诊断
基因治疗（反义寡核苷酸、抑制病毒复制） 免疫治疗（特异性抗体、免疫调节剂、治疗性疫苗等。
感谢观赏Thanks
常用方法：免疫荧光技术（IF） 固相放射免疫测定（SPRIT） 酶免疫技术（EIA）等。
（三） 检测病毒特异性IgM抗体
检测病毒特异性IgM抗体可诊断急性感染 或证明病毒复制。
（四） 检测病毒核酸
1 核酸杂交
斑点杂交（dot hybridization） 原位杂交（in site hybridization） DNA印迹杂交（Southern blot） RNA印迹杂交 （northern blot）
一、人工主动免疫(artificial active immunity)：将 疫苗(vaccine)或类毒素接种于人体，使机体产生
获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施，主
要用于预防。 ➢ 死疫苗
➢合成疫苗
➢ 活疫苗
➢亚单位疫苗
➢ 类毒素 ➢ 新型活疫苗 ➢ 基因工程疫苗
➢DNA疫苗 ➢转基因植物疫苗 ➢治疗性疫苗