细胞产物分析技术-3细胞产物分离方法-2011.
2011年天津大学分子生物学考研模拟试题一、二、三及答案
天津大学2011年攻读硕士学位研究生入学考试模拟试题(一)科目代码:科目名称:分子生物学考生注意:所有大题务必书写在考场提供的答题纸上,写在本试题单上的答题一律无效(本题单不参与阅卷)。
一、名词解释(每小题3分,共30分)1.Immunoprecipitation2.RNA in situ hybridization3.Genome4.FISH5.Viral-like retrotransposons6.Riboswitch7.photoreactivation8.CAP9.Palindrome10.gene therapy二、简答题(每小题10分,共60分)1.简述转基因动物的概念、原理及应用2.简述模式生物及其相关信息3.在DNA复制过程中会形成一种复制体(replisome)的结构,它是由哪几部分组成的?4.描述cDNA文库构建原理与方法:(1)cDNA获得方法,(2)克隆方法,(3)文库质量定义。
5.请描述述端粒(Telomere)的结构、功能及复制过程。
6.什么是基因突变?并说明产生基因突变有哪些途径三、论述题(每小题15分,共60分)1.真核生物转录水平的调控机制?2.生物大分子之间的相互作用是生命现象的具体表现,试以蛋白质之间以及蛋白质与核酸分子之间的相互作用为例加以说明。
3.请举例说明在细菌中RNA的二级结构可以调控基因的表达。
4.生物体存在大量的mRNA前体的选择性剪切(alternative splicing)过程。
什么是选择性剪接,有几种方式?可变剪接的生物学意义是什么?天津大学(评分参考卷)2011年攻读硕士学位研究生入学考试模拟试题(一)科目代码:科目名称:分子生物学一、Immunoprecipitation免疫沉淀是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。
是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。
其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。
2011年高考生物真题及详解(广东卷)
2011年普通高等学校招生全国统一考试(广东卷)理科综合(生物部分100分)本试卷共11页,36小题,满分300分。
考试用时150分钟。
一、单项选择题:本大题共16小题,每小题4分,共64分。
在每小题给出的四个选项中,只有一个选项符合题目要求,选对的得4分,选错或不答的得0分。
1. 小陈在观察成熟叶肉细胞的亚显微结构照片后得出如下结论,不正确...的是 A. 叶绿体和线粒体都有双层膜 B. 核糖体附着在高尔基体上2. 艾弗里和同事用R 型和S 型肺炎双球菌进行实验,结果如下表。
从表可知A. ①不能证明S 型菌的蛋白质不是转化因子B. ②说明S 型菌的荚膜多糖有酶活性C. ③和④说明S 型菌的DNA 是转化因子3. 华南虎是国家一级保护动物,可采用试管动物技术进行人工繁殖,该技术包括的环节有 ①转基因 ②核移植 ③体外受精 ④体细胞克隆 ⑤胚胎移植A. ①③B. ①④C. ②⑤D. ③⑤实验组号接种菌型 加入S 型菌物质 培养皿长菌情况 ①R 蛋白质 R 型 ②R 荚膜多糖 R 型 ③R DNA R 型、S 型 ④ R DNA (经DNA 酶处理) R 型4. 短跑运动员听到发令枪声后迅速起跑,下列叙述正确的是A. 起跑动作的产生是非条件反射的结果B. 调节起跑动作的神经中枢是听觉中枢5. 以下关于猪血红蛋白提纯的描述,不正确...的是A. 洗涤红细胞时,使用生理盐水可防止红细胞破裂B. 猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核,提纯时杂蛋白较少C. 血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过程的监测6. 某班同学对一种单基因遗传病进行调查,绘制并分析了其中一个家系的系谱图(如图1)。
下列说法正确的是A. 该病为常染色体显性遗传病B. II-5是该病致病基因的携带者C. II-5和II-6再生患病男孩的概率为1/2D. III-9与正常女性结婚,建议生女孩二、双项选择题:本大题共9小题,每小题6分,共54分。
在每小题给出的四个选项中,有两个选项符合题目要求,全部选对的得6分,只选1个且正确的得3分,有选错或不答的得0分。
大学细胞生物学考试(试卷编号1111)
大学细胞生物学考试(试卷编号1111)1.[单选题]MPF 的分子组成是( )。
A)CDK2和cyclinBB)CDK1和cyclinBC)CDK4和cyclinDD)CDK2和cyclinD答案:B解析:2.[单选题]下列关于细胞分化潜能的说法错误的是( )A)干细胞在一定条件下可以分化成多种功能的细胞B)终末分化的体细胞的细胞核具有全能性,在一定条件下具有可以发育为正常个体的潜能C)细胞全能性的维持在于细胞核中的基因组,而非细胞质D)细胞全能性的维持在于细胞质,而非细胞核中的基因组答案:C解析:3.[单选题]平滑肌、心肌、神经末梢间的电紧张突触属于 ( )A)间隙连接B)化学突触C)胞间连丝D)隔状连接答案:B解析:4.[单选题]有丝分裂中期最重要的特征标志是( )。
A)染色体排列在赤道板上B)纺锤体形成C)核膜破裂D)姐妹染色单体移向两极答案:A解析:5.[单选题]一般情况下,下列的细胞中分化的程度由高到低的顺序依次是a卵原细胞 b受精卵 c胚胎干细胞 d造血干细胞 e神经细胞( )A)eabcdB)ecabdC)eadbc6.[单选题]下列成分中,参与收缩环形成的为( )A)微管蛋白B)肌动蛋白C)中间纤维蛋白D)微管结合蛋白答案:B解析:7.[单选题]下列错误的是( )A)体外培养的细胞不是不死的B)体外培养的细胞的增殖不是无限的C)体外培养的细胞不可能是永生化的D)体外培养的细胞可以是永生化的答案:C解析:8.[单选题]在叶绿体中,与光合作用的光反应正常进行相适应的结构是( )。
[湖南大学2007研]A)叶绿体外膜B)叶绿体内膜C)基粒中囊状结构的薄膜D)基质答案:C解析:光反应是在类囊体膜上由光引起的光化学反应,通过叶绿素等光合色素分子吸 收、传递光能,并将光能转换成电能,进而转换为活跃的化学能,形成ATP和NADPH的过程。
暗反应是在叶绿体基质中进行的不需光(也可在光下)的酶促化学反应,利用光反应产生的ATP和NADPH,使CO2还原为糖类等有机物,即将活跃的化学能最后转换为稳定的化学能,积存于有机物中。
生物学案:22动物细胞工程(第2课时)
2。
2动物细胞工程(第2课时)1.举例说出动物细胞融合技术的原理和应用。
2.举例说出单克隆抗体技术的原理和应用。
一、动物细胞融合1.概念动物细胞融合也称细胞杂交,是指______或多个动物细胞结合形成__________的过程。
融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞,称为__________。
2.动物细胞融合的基本原理和方法(1)原理:膜的________。
(2)方法:与植物原生质体融合的方法类似,常用的诱导因素有聚乙二醇、____________、电激等。
二、单克隆抗体1.原理每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体,B淋巴细胞在体外__________增殖,而肿瘤细胞具有________增殖的特点,将________B淋巴细胞与____________融合,可以使杂交细胞具有两个亲本的遗传特性,既能______增殖又能产生______抗体.2.单克隆抗体的制备(1)过程:错误!错误!错误!错误!错误!____细胞错误!杂交瘤细胞错误!错误!―→单克隆抗体(2)杂交瘤细胞的特点:既能迅速大量______,又能产生______的抗体。
(3)单克隆抗体的特点:________强、________高、产量大。
3.单克隆抗体的应用(1)作为诊断试剂:能准确识别各种______物质的细微差异,并与一定抗原发生特异性结合。
(2)用于治疗疾病和运载药物:制成“生物导弹”。
思考:治疗癌症时,能否让治疗癌症的药物只杀癌细胞,不杀正常体细胞?答案:一、1.两个一个细胞杂交细胞2.(1)流动性(2)灭活的病毒二、1.不能无限无限单个骨髓瘤细胞无限单一2.(1)B瘤(2)繁殖专一(3)特异性灵敏度3.(1)抗原思考:把单克隆抗体与放射性同位素、化学药物或细胞毒素相结合,制成“生物导弹”,使之专杀癌细胞。
1.植物体细胞杂交和动物细胞融合的区别2.(1)受精作用是在同种生物之间进行的,精子与卵细胞的融合不需要任何诱导剂,就能形成受精卵,受精卵内具备同种生物的两个亲本的遗传物质。
细胞物质出入细胞的方式
细胞物质出入细胞的方式细胞物质出入细胞的方式2011年08月06日1细胞内的吸能反应和放能反应a 吸能反应指产物分子中的势能比反应物分子中的势能高。
如人体细胞中葡萄糖合成糖元就是一种吸能反应。
放能反应指产物分子中的势能比反应物分子中的势能低。
所有细胞中最重要的放能反应是糖的氧化也称为细胞呼吸。
2ATP的化学组成和特点a ATP的化学组成ATP由一个核糖、一个腺嘌呤和三个磷酸基团组成的。
其中A代表腺苷由一个核糖和一个腺嘌呤组成T代表3个P代表磷酸基团。
所以ATP也叫做腺苷三磷酸。
ATP的特点一个ATP含一个腺苷和三个磷酸基团这是它的组成特点同时ATP还含有高能磷酸键一分子ATP中含有两个高能磷酸键其中远离腺苷的高能磷酸键易水解和重新形成。
当远离腺苷的那个高能磷酸键水解时则ATP就变成了ADP当ADP得到能量时又能重新形成高能磷酸键形成ATP。
ATP 在细胞内含量很少但在细胞内的转化速度很快。
ATP和ADP相互转化的过程和意义这个过程储存能量这个过程释放能量ATP与ADP的相互转化ATP 酶ADP Pi能量1molATP水解释放30.54KJ能量方程从左到右时能量代表释放的能量用于一切生命活动。
方程从右到左时能量代表转移的能量动物中为呼吸作用转移的能量。
植物中来自光合作用和呼吸作用。
注在ATP 和ADP转化过程中物质是可逆能量是不可逆的意义能量通过ATP分子在吸能反应和放能反应之间循环流通ATP是细胞里的能量流通的能量“通货” 9物质出入细胞的方式1扩散和渗透的过程b 扩散是指分子或离子从高浓度处向低浓度处运动的现象。
扩散达到平衡时分子仍继续运动且维持着平衡状态。
渗透是指水分子通过膜的扩散称为渗透。
水分子总是从分子数相对较多的一侧进入水分子相对较少的一侧。
即水分子扩散总是从较低浓度→较高浓度。
扩散和渗透都是物理现象。
渗透作用的条件①有半透膜存在②半透膜两边均为液态且存在浓度差半透膜的特点大分子物质不可以透过小分子物质如水可以透过。
分子生物学实验(任峰)2011
实验二 PCR克隆目的基因
一 实验原理
PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链式反应)是一种选择性体外 扩增DNA 的方法.它包括三个基本步骤: (1) 变性(Denature):目的双链DNA 片段在94℃下解链; (2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(56℃左右)下与模板上 的目的序列通过氢键配对; (3) 延伸(Extension):在TaqDNA 聚合酶合成DNA 的最适温度下,以目的 DNA 为模板进行合成. 由这三个基本步骤组成一轮循环,理论上每一轮循环将使目的DNA 扩 增一倍,这些经合成产生的DNA 又可作为下一轮循环的模板,所以经 25-35 轮循环就可使DNA 扩增达待扩目的基因扩增放大几百万倍。
4 种 dNTP
浓度适当,避免反复冻融 • dNTP 原液配成10mM或者2.5mM分装,20oC贮存。 • 一般反应中每种dNTP 的终浓度为20200μM。当dNTP 终浓度大于50mM 时可 抑制Taq DNA 聚合酶的活性. • 4 种dNTP 的浓度应该相等,以减少合成中 由于某种dNTP 的不足出现的错误掺入。
2. 引物
• PCR 反应产物的特异性由一对上下游引物所决 定。引物的好坏往往是PCR 成败的关键 • 引物影响因素: 特异性: 长度适当、避免二级结构和二聚体 完整性: 避免反复冻融 浓 度: 应适当,过高导致非特异性增加,过低则 扩增产物太少
引物设计原则
(1) 引物长度: 约为16-30b (2) G+C含量: G+C含量通常为40%-60%, 较短引物 可粗略估计Tm=4(G+C)+2(A+T). (3) 四种碱基随机分布,在3‘端不存在连续3 个G 或 C,因这样易导致错误引发。 (4) 在引物内及两引物之间, 尤其在3‘端应不存在二 级结构。 (5) 引物5‘端对扩增特异性影响不大, 可在引物设计 时加上限制酶位点。 (6)引物不与模板结合位点以外的序列互补
单细胞测序的细胞核的分离和纯化方法
单细胞测序的细胞核的分离和纯化方法
单细胞测序的细胞核的分离和纯化方法主要包括以下步骤:
1. 酶解:使用胶原酶和胰蛋白酶等酶将组织样本消化,将细胞间的连接分解,使细胞分散成单个细胞。
2. 离心:通过离心将单个细胞收集到管底部,形成细胞沉淀。
3. 洗涤:去除细胞沉淀中的组织残留物和杂质。
4. 重悬浮:将单个细胞重新悬浮在适量的缓冲液中,以便后续处理。
5. 过滤:通过过滤膜或滤器将细胞核与其他细胞成分分离,收集细胞核。
需要注意的是,上述步骤仅为一种参考方法,实际操作可能因实验条件、样本类型等因素而有所不同。
因此,在进行单细胞测序实验前,请详细阅读相关文献,了解并优化适合自己实验的细胞核分离和纯化方法。
同时,务必遵循实验室安全规范,确保实验过程的安全性。
大学细胞生物学考试(习题卷1)
大学细胞生物学考试(习题卷1)第1部分:单项选择题,共227题,每题只有一个正确答案,多选或少选均不得分。
1.[单选题]新生肽链的折叠与装配是在下列哪种细胞器内完成的?A)溶酶体B)粗面内质网C)高尔基体D)滑面内质网答案:B解析:2.[单选题]下列哪种物质不参与氨基聚糖的组成( )A)N-乙酰氨基半乳糖B)N-乙酰氨基葡萄糖C)N-乙酰葡萄糖胺D)葡萄糖醛酸E.艾杜糖醛酸答案:C解析:3.[单选题]用特异性药物细胞松弛素B可以阻断下列哪种小泡的形成( )A)胞饮泡B)吞噬泡C)分泌小泡D)包被小泡答案:B解析:4.[单选题]下列哪一项不是凋亡细胞的特点( )A)细胞膜破裂B)细胞膜保持完整C)不引起炎症D)DNA ladder答案:A解析:5.[单选题]下列关于再生能力的比较,正确的是( )。
A)幼体强于成体B)动物强于植物C)高等动物强于低等动物D)器官强于组织答案:A解析:6.[单选题]矽肺、痛风和下列哪种细胞器的异常有关?D)滑面内质网答案:A解析:7.[单选题]线粒体作为半自主细胞器,下列论述有误的是( )A)线粒体具有环状双链DNA,可以自我复制B)线粒体可以像细菌一样自我增殖分裂C)线粒体具有核糖体,可以合成蛋白质,但线粒体核糖体与胞质中核糖体并不相同D)线粒体蛋白质均靠自身合成,且不受细胞核的调控答案:D解析:8.[单选题]在哪个阶段,去甲基酶清除DNA上几乎所有从亲代遗传下来的甲基化标记?( )A)受精时B)受精后卵裂最初几次分裂时期C)受精后卵裂后期D)胚胎植入子宫时答案:B解析:在受精卵的最初几次分裂时期,去甲基酶清除DNA上的甲基,在胚胎植入子宫的时候,建立新的甲基化模式。
9.[单选题]结构较稳定的细胞骨架是( )A)微管B)微丝C)中间纤维D)微梁网络答案:C解析:10.[单选题]以下可用于外源蛋白质分子导入细胞的方法是( )A)分子筛层析B)直接扩散法C)Western blotD)琼脂糖电泳答案:B解析:11.[单选题]从受精卵到成熟个体需进行( )A)细胞分裂B)细胞分化C)二者均有D)二者均无答案:C解析:12.[单选题]下列中哪种是由微丝为主要成分构成的细胞结构?A)肌肉的细肌丝,肌肉的粗肌丝,微绒毛,stress fiberB)肌肉的细肌丝,微绒毛,纤毛,细胞皮层C)肌肉的粗肌丝,微绒毛,stress fiber,胞质分裂环13.[单选题]以下哪一类组织中细胞外基质(ECM)含量较高?A)上皮组织B)肌肉组织C)神经组织D)结缔组织答案:D解析:14.[单选题]下面描述不属于密度梯度离心的是( )A)溶液介质本身不会形成密度梯度B)细胞各组分按照密度分离C)离心速度恒定D)大分子量组分位于离心管底部答案:A解析:15.[单选题]在单细胞凝胶电泳实验中,凋亡细胞(正常细胞的核为球形)的实验结果是( )。
2011年全国中学生生物学联赛试卷及答案
2011年全国中学生生物学联赛试卷及答案注意事项:1.请用2B铅笔在机读卡上做答;2.试题按学科分类,单选和多选混排,每小题只标明分值,分值不代表是否为多选,是否多选可从题干中判断。
答案完全正确才可得分:3.答题时间120分钟,全卷共l60分。
第一部分30道题(40分):细胞生物学43分+微生物7分1.(2011,全国卷)很多细胞器上具有质子泵,以下不具有质子泵的细胞器为:(1分) A.内质网 B.溶酶体 C.线粒体 D.叶绿体【解析】质子泵是指能逆浓度梯度转运氢离子通过膜的膜整合糖蛋白。
质子泵的驱动依赖于ATP水解释放的能量,质子泵在泵出氢离子时造成膜两侧的pH梯度和电位梯度。
种类有:P型:载体蛋白利用ATP使自身磷酸化,发生构象的改变来转移质子或其它离子,如植物细胞膜上的H+泵,动物细胞的Na+-K+泵,Ca2+离子泵,H+-K+ATP酶(位于胃表皮细胞,分泌胃酸)。
V型:位于小泡的膜上,由许多亚基构成,水解ATP产生能量,但不发生自磷酸化,位于溶酶体膜,动物细胞的内吞体,高尔基体的囊泡膜,植物液泡膜上。
F型:是由许多亚基构成的管状结构,H+沿浓度梯度运动,所释放的能量与ATP合成耦联起来,所以也叫ATP合酶,F是氧化磷酸化或光合磷酸化偶联因子的缩写。
F型质子泵位于细菌质膜,线粒体内膜和叶绿体的类囊体膜上,不仅可以利用质子动力势将ADP转化成ATP,也可以利用水解A TP释放的能量转移质子。
答案】A2.(2011,全国卷)生物膜的流动性表现在:(1分)A.膜脂和膜蛋白都是流动的B.膜脂是流动的,膜蛋白不流动C.膜脂不流动,膜蛋白是流动的 D.膜脂和膜蛋白都是不流动的,流动性由其它成分决定【解析】膜脂的流动性:影响因素①温度②膜脂的脂肪酸链(不饱和键越多、脂肪酸链越短,膜脂越易流动)③胆固醇(减弱温度对膜脂流动性的影响)④膜脂与膜蛋白的结合程度⑤环境中的离子强度⑥pH 值等。
运动方式①侧向扩散②旋转运动③伸缩运动④翻转扩散⑤左右摆动⑥旋转异构运动。
细胞化学染色
细胞化学染色细胞化学染色2011年03月02日老三届极品居认真做事,低调做人。
记住该记住的,忘记该忘记的,改变能改变的,接受不能改变的。
一、概述细胞化学是组织学的一个分支,是在细胞形态学的基础上研究细胞的生物化学成分,及其定位、定量及代谢功能状态的学科。
在细胞形态学的基础上,运用化学反应的原理对血细胞内的各种生化组成及其代谢产物(酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等)作定性、定位、半定量分析的方法。
细胞化学染色临床上主要用于:①辅助判断白血病的细胞类型。
白血病的诊断以形态学为基础,但有时仅采用瑞式染色是难以判断白血病细胞的类型的。
不同的细胞系列,其所含的化学物质成分、含量及分布各不相同,随着细胞的分化阶段及病理生理状态变化,这些物质的含量也会发生相应改变。
因此根据细胞化学染色结果的不同,可推断细胞的所属系列。
因此临床上细胞化学染色成为辅助诊断白血病必要的、有力的手段。
②其他血液系统疾病的诊断和鉴别诊断。
在病理情况下,血细胞的化学物质的成分及含量会发生改变,据此可以辅助疾病的鉴别诊断。
如中性粒细胞碱性磷酸酶染色、铁染色等。
③观察疾病的疗效和预后。
当病理状况纠正后,血细胞的化学物质的成分及含量会发生改变。
④发病机制的研究。
细胞化学染色的基本步骤为固定、显示及复染。
1、固定为了保持细胞结构及化学成分的不变,需要对细胞进行固定。
根据染色的成分不同,选择合适的固定液,使细胞内的蛋白质、酶类、糖等变成不溶性物质。
固定的方法有物理法和化学法,临床常用化学法固定。
物理法包括干燥和火焰固定,化学法包括甲醛、乙醇、甲醇、丙酮等固定。
采用蒸气或液体固定。
(1)蒸气固定:甲醛是常用的固定剂,极易挥发、氧化,常用40%甲醛蒸气固定。
方法为在封闭的玻璃器皿中加入40%甲醛,将涂片血膜朝下,固定5~10分钟。
(2)液体固定:将涂片浸在甲醛、乙醇、甲醇、丙酮等固定液中,也可将两种或两种以上固定液混合,如10%甲醛甲醇液,甲醛丙酮液等。
单细胞测序的细胞核分离和纯化方法
单细胞测序的细胞核分离和纯化方法单细胞测序是一种研究细胞生物学的重要技术,它能够揭示单个细胞在基因表达和功能方面的异质性。
在进行单细胞测序之前,对细胞核进行有效的分离和纯化是至关重要的。
本文将详细介绍单细胞测序中细胞核的分离和纯化方法。
一、细胞核分离方法1.酶解法:酶解法是利用特定的酶分解细胞膜和细胞器,从而释放细胞核。
常用的酶有胰蛋白酶、胶原酶和分散酶等。
这种方法适用于原代细胞和传代细胞的核分离。
2.离心法:离心法是通过高速离心将细胞核与其他细胞组分分离。
根据离心力的不同,可以将细胞核与其他细胞组分分开。
此方法操作简便,适用于各种类型的细胞。
3.过滤法:过滤法是将细胞悬液通过特定孔径的滤器,使细胞核被截留在滤器上,而其他细胞组分通过滤器。
这种方法适用于较大细胞的核分离。
二、细胞核纯化方法1.核酸染料染色法:利用核酸染料(如碘化丙啶)对细胞核进行染色,使细胞核显色,从而与其他细胞组分区分。
此方法操作简单,但纯度较低。
2.免疫磁珠法:利用特异性抗体与细胞核表面抗原结合,然后通过磁珠分离技术将细胞核与其他细胞组分分离。
此方法纯度较高,但操作复杂。
3.柱层析法:柱层析法是将细胞悬液通过特定柱子,利用柱子上吸附的分子与细胞核结合,从而将细胞核与其他细胞组分分离。
此方法纯度较高,操作相对简单。
综上所述,单细胞测序中的细胞核分离和纯化方法有多种,不同的方法适用于不同类型的细胞。
在实际应用中,需要根据实验目的和细胞特性选择合适的分离和纯化方法。
同时,为了获得高质量的单细胞测序结果,还需注意实验操作的严谨性和数据分析的准确性。
生物下游技术
高价无机离子 当采用离子交换法提取产物时,影 响树脂对生化物质的交换容量 色素、毒性物质、热原质
2011-3-26
去 除 杂 蛋 白
降 低 发 酵 液 粘 度
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二、发酵液的预处理
采用理化方法设法增大悬浮液中固体粒子的大小、 或降低粘度,以利于过滤。
去除会影响后续提取的高价无机离子和杂蛋白质
等。
2011-3-26 4
3. 所需目的产物稳定性低
对热、酸、碱、有机试剂、酶以及机械剪切等均敏感,
易失活或分解。
4. 代价昂贵,产品回收率不高,损耗大
如:抗生素、乙醇、柠檬酸的纯化费用占整个工程费 用的60%;纯化蛋白质占总费用的80~90%
5. 生物安全问题:热原质、色素、毒性物质
2011-3-26
镁离子,可用三聚磷酸钠它和镁离子形成可溶性络 合物,用磷酸盐处理,也能大大降低钙离子和镁离 子的浓度。
Na5P3O10+Mg2+ =MgNa3P3O10+2Na
黄血盐与铁离子形成普鲁土盐沉淀
3K4Fe(CN)6+4Fe3+=Fe4[Fe(CN)6]3+12K+
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2011-3-26
2 .杂蛋白质的去除方法
2011-3-26
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2.过滤介质
使滤液通过,截留固体颗粒并支撑滤饼的材料。要 求其具有多孔性、耐腐蚀性及足够的机械强度。
无定形颗粒:无烟煤、砂、颗粒活性炭、铁矿砂等 成形颗粒:烧结金属、烧结塑料以及用合成树脂粘 结的硅砂、塑料颗粒等,做成圆筒形或板状。 非金属织补棉:化学纤维、玻璃纤维织品、长纤维 滤布、短纤维滤布。 金属织布:不锈钢丝或铁丝等的织布。 无纺品:纸、毡、石棉板、合成纤维无纺布等。
分子生物学试题及答案
生命科学系本科2010-2011学年第1学期试题分子生物学A答案及评分标准一、选择题;选择一个最佳答案每小题1分;共15分1、1953年Watson和Crick提出 AA、多核苷酸DNA链通过氢键连接成一个双螺旋B、DNA的复制是半保留的;常常形成亲本——子代双螺旋杂合链C、三个连续的核苷酸代表一个遗传密码D、遗传物质通常是DNA而非RNA2、基因组是 DA、一个生物体内所有基因的分子总量B、一个二倍体细胞中的染色体数C、遗传单位D、生物体的一个特定细胞内所有基因的分子总量3、下面关于DNA复制的说法正确的是 DA、按全保留机制进行B、按3'→5'方向进行C、需要4种NTP加入D、需要DNA聚合酶的作用4、当过量的RNA与限量的DNA杂交时 AA、所有的DNA均杂交B、所有的RNA均杂交C、50%的DNA杂交D、50%的RNA杂交5、以下有关大肠杆菌转录的叙述;哪一个是正确的 BA、-35区和-10区序列间的间隔序列是保守的B、-35区和-10区序列距离对转录效率非常重要C、转录起始位点后的序列对于转录效率不重要D、-10区序列通常正好位于转录起始位点上游10bp处6、真核生物mRNA转录后加工不包括 AA、加CCA—OHB、5'端“帽子”结构C、3'端polyA尾巴D、内含子的剪接7、翻译后的加工过程不包括 CA、N端fMet或Met的切除B、二硫键的形成C、3'末端加polyA尾D、特定氨基酸的修饰8、有关肽链合成的终止;错误的是 CA、释放因子RF具有GTP酶活性B、真核细胞中只有一个终止因子C、只要有RF因子存在;蛋白质的合成就会自动终止D、细菌细胞内存在3种不同的终止因子:RF1、RF2、RF39、酵母双杂交体系被用来研究 CA、哺乳动物功能基因的表型分析B、酵母细胞的功能基因C、蛋白质的相互作用D、基因的表达调控10、用于分子生物学和基因工程研究的载体必须具备两个条件 BA、含有复制原点;抗性选择基因B、含有复制原点;合适的酶切位点C、抗性基因;合适的酶切位点11、原核生物基因表达调控的意义是 DA、调节生长与分化B、调节发育与分化C、调节生长、发育与分化D、调节代谢;适应环境E、维持细胞特性和调节生长12、乳糖、色氨酸等小分子物质在基因表达调控中作用的共同特点是 EA、与DNA结合影响模板活性B、与启动子结合C、与操纵基因结合D、与RNA聚合酶结合影响其活性E、与蛋白质结合影响该蛋白质结合DNA13、Lac阻遏蛋白由 D 编码A、Z基因B、Y基因C、A基因D、I基因14、紫外线照射引起DNA损伤时;细菌DNA修复酶基因表达反应性增强;这种现象称为 AA、诱导B、阻遏C、正反馈D、负反馈15、ppGpp在何种情况下被合成 AA、细菌缺乏氮源时B、细菌缺乏碳源时C、细菌在环境温度太高时D、细菌在环境温度太低时E、细菌在环境中氨基酸含量过高时二、填空题每空1分;共10分1、某双链DNA分子中;A的含量为15%;则C的含量是 35% ..2、DNA复制过程中;滞后链的引发是由引发体来完成的..3、原核生物的mRNA往往一产生就是成熟的;不需要转录后的修饰加工;而真核生物的mRNA前体往往比成熟的mRNA大;称为 hnRNA ;是转录生成的原始转录产物..4、tRNA分子结合氨基酸和识别mRNA的两个结构区域分别称为受体臂和反密码臂 ..5、既能识别t RNA;又能识别氨基酸;对两者都具有高度的专一性的酶是胺酰—t RNA合成酶..6、PCR反应主要有变性、退火、延伸三个步骤..7、 ppGpp 和 pppGpp 被称为魔斑分子;它作为 RNA聚合酶的别构效应物调节此酶的活性..三、判断题每题1分;共10分1、原核生物DNA复制过程中;冈崎片段合成的方向与复制叉移动的方向相同..×2、所有真核生物的mRNA都具有polyA尾巴..×3、在真核生物中;所有rRNA都是由RNA聚合酶Ⅱ转录的..×4、RNA聚合酶Ⅰ是转录核糖体RNA的..√5、下游指RNA的3'方向..×6、大多数需要转运到细胞器中蛋白质都有类似于信号肽的引导序列;所有引导序列在转运完成后都要被去除..√7、我们把与mRNA序列互补的那条DNA链称为编码链或有义链..×8、原核生物基因表达的调控主要发生在转录水平上;真核生物基因表达的调控可以发生在各个水平;但主要也是在转录水平..√9、对正调控和负调控操纵子而言;诱导物都能促进基因的转录..√10、操纵子学说要说明的问题是外界化学因素对细胞内酶活性的影响..×四、名词解释每题3分;共24分1、基因组:某一特定生物体的整套单倍体遗传物质的总和2分;基因组的大小用全部DNA的碱基对总数表示1分..2、转录单位:DNA链上从启动子直到终止子为止的长度称为一个转录单位3分..一个转录单位可以包括一个基因;也可以包括几个基因1分.. 3、简并密码子:也称为同义密码子..是指编码相同氨基酸的几个不同的密码子3分..4、摆动:处于密码子3'端的碱基与之互补的反密码子5'端的碱基也称为摆动位置;例如I可以与密码子上3'端的U;C和A配对2分..由于存在摆动现象;所以使得一个t RNA反密码子可以和一个以上的m RNA 密码子结合1分..5、分子伴侣:使一些蛋白质装备或者恰当折叠所需的蛋白质2分;但是这些蛋白质并不是目标复合物的成分1分..6、核酸原位杂交:标记探针与细胞或组织切片中的核酸进行杂交的方法3分..7、基因芯片:又称为DNA微阵列;以基因序列为分析对象的微阵列;是通过缩微技术;根据分子间特异性地相互作用的原理;将生命科学领域中不连续的分析过程集成于硅片或玻璃片表面的微型生物化学分析系统2分;以实现对细胞、蛋白质、基因及其他生物组分的准确、快速、大信息的检测1分..8、顺式作用元件:又称分子内作用元件;指存在于DNA分子上的一些与基因转录调控有关的特殊顺序3分..五、简答题每题5分;共20分1、什么是SD序列其功能是什么答:SD序列是mRNA中5'端富含嘌呤的短核苷酸序列;一般位于mRNA的起始密码AUG的上游3至11个核苷酸处3分..这段序列能与细菌16S rRNA 3'端识别序列互补;从而帮助从起始AUG处开始翻译2分..2、为什么真核生物中转录与翻译无法耦联答:真核生物mRNA是在细胞核内合成的;而翻译是在细胞质中进行的;因此;mRNA只有被运送到细胞质部分;才能翻译生成蛋白质2.5分..真核生物中的mRNA开始合成时;是不成熟的hnRNA;需要通过一系列加工过程才能成熟;才能成为成熟的mRNA..这些过程包括;内含子的剪接、5’端帽子结构、3’端尾等..由于RNA转录后需要一系列的加工过程;因此;转录与翻译无法耦联2.5分..3、简述基因敲除的基本程序..答:通过DNA同源重组;使得胚胎干细胞特定的内源基因被破坏而造成功能丧失;然后通过胚胎干细胞介导得到该基因丧失的小鼠模型的过程称为基因敲除3分..1、打靶载体的构建:同源序列要足够长;要含有筛选用的标志基因2、胚胎干细胞的体外培养3、打靶载体导入胚胎干细胞4、同源重组胚胎干细胞的筛选5、基因敲除胚胎干细胞注射入胚泡6、胚泡植入假孕小鼠的子宫中7、杂交育种获得纯合的基因敲除动物2分4、作为分子克隆的载体;一般应具备那些条件答:1在合适的位置具有至少一个多克隆位点;供外源DNA插入以形成重组体分子..2分2克隆载体能携带外源DNA片段进入受体细胞;或停留在细胞质中能自我复制;或整合到染色体DNA上随染色体DNA的复制一起被复制..1分3克隆载体必须具有用于选择克隆子的标记基因..1分4克隆载体必须是安全的;不应含有对受体细胞有害的基因;并且不会任意转入受体细胞以外的其他生物细胞;尤其是人的细胞..1分六、论述题第1题11分;第2题10分;共21分1、试述PCR技术的原理及其应用..6分一种体外扩增DNA的方法;因此也称为基因的体外扩增法;是20世纪80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术;它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点..PCR使用一种耐热的多聚酶;以及两个单链引物..经过高温变性将模板DNA分离成两条链;低温退火使得引物和一条模板单链结合;然后是中温延伸;反应液的游离核苷酸紧接着引物从5’端到3’端合成一条互补的新链..而新合成的DNA又可以继续进行上述循环;因此DNA的数目不断倍增..其应用主要是以下几个方面:1科学研究基因克隆;DNA测序;分析突变;基因重组与融合;检测基因的修饰;鉴定调控蛋白质结构的DNA序列;转座子插入位点的绘图;合成基因的构建;构建克隆或表达载体;检测某某基因的内切酶多态性等..2.5分2临床诊断细菌、病毒、螺旋体、支原体、衣原体、立克次氏体、分枝杆菌等病原体的鉴定;人类遗传病的鉴定;诊断遗传疾病;监测临床标本中病原体的核酸序列;对法医学标本做遗传学鉴定;分析激活癌基因中的突变情况;生成克隆化双链DNA中的特异序列作为探针等..2.5分3、学习分子生物学后;你对生物体有什么新的认识从结构和机能遗传及调节两个方面给予回答..能针对分子生物学的内容较深刻地答出对生命有机体的认识..7~10分生命科学系本科2010-2011学年第1学期试题分子生物学B一、选择题;选择一个最佳答案每小题2分;共10分1、下列关于DNA复制的说法正确的是DA、按全保留复制进行B、按3’→5’方向进行C、需要4种dNMP参与D、需要DNA连接酶的作用2、DNA helicase 的生物学功能是 CA、环节DNA复制时产生的twisting problemB、防止DNA的过度超螺旋C、解开双螺旋DNA双链的配对D、促进引物酶的结合3、核糖体的E位点是 CA、真核mRNA的加工位点B、tRNA离开原核生物核糖体的位点C、核糖体中受EcoR Ⅰ限制的位点D、真核mRNA起始结合位点4、与tRNA中的反密码子为GCU向配对的mRNA中的密码子是CA、UGAB、CGAC、AGUD、AGI5、真核基因表达的调控主要是在以下几个方面;其中不恰当的是DA、转录水平上的调控B、mRNA加工成熟水平上的调控C、翻译水平上的调控D、营养和环境因素是最主要的二、填空题每空1分;共10分1、在DNA合成中负责复制和修复的酶是 DNA聚合酶..2、原核生物的mRNA往往一产生就是成熟的;不需要转录后的修饰加工;而真核生物的mRNA前体往往比成熟的mRNA大;称为 hnRNA ;是转录生成的原始转录产物..3、在基因表达的过程中开启的基因因为某些特殊物质的积累而关闭;这类调节方式称为可阻遏调节..4、真核生物翻译起始复合物并不是在起始密码子AUG处形成;而是首先在mRNA5’端形成;其识别信号是5’末端的帽子结构..5、tRNA分子结合氨基酸和识别mRNA的两个结构区域分别称为受体臂和反密码臂 ..6、既能识别t RNA;又能识别氨基酸;对两者都具有高度的专一性的酶是胺酰—t RNA合成酶 ..7、PCR反应主要有变性、退火、延伸三个步骤..8、 ppGpp 和 pppGpp 被称为魔斑分子;它作为 RNA聚合酶的别构效应物调节此酶的活性..三、判断题每题1分;共10分1、CCGTAGACTG核苷酸链是RNA..×2、cDNA是指以mRNA为模板;在逆转录酶的作用下形成的互补DNA..√3、在一个同工tRNA组内;所有tRNA均专一于相同的氨酰—tRNA合成酶..√4、大肠杆菌的RNA聚合酶全酶由5个亚基组成α2ββ’ωσ;没有σ基的酶叫核心酶..核心酶只具有起始合成RNA的能力;而不具有RNA 链延伸的能力..×5、在原核生物DNA的复制过程中;冈崎片段合成的方向与复制叉移动的方向相同..×6、所有真核生物的mRNA都具有polyA尾巴..×7、下游指RNA的3'方向..×8、大多数需要转运到细胞器中蛋白质都有类似于信号肽的引导序列;所有引导序列在转运完成后都要被去除..√9、我们把与mRNA序列互补的那条DNA链称为编码链或有义链..×10、原核生物基因表达的调控主要发生在转录水平上;真核生物基因表达的调控可以发生在各个水平;但主要也是在转录水平..√四、名词解释每题3分;共24分1、不对称转录:DNA片段转录时;双链DNA中只有一条链作为转录的模板;这种转录方式称为不对称转录..2、选择性剪接:在mRNA前体的剪接过程中;参加剪接的外显子可以不按其线性次序剪接;内含子也可以不被切除而保留;即一个外显子或内含子是否出现在成熟mRNA中是可以选择的;这种剪接方式称为选择性剪接..3、氨基酸活化:氨基酸在氨酰—tRNA合成酶的作用下生成活化氨基酸AA—tRNA的过程..4、翻译起始复合物:由核糖体亚基;一个m RNA模板;一个起始的t RNA 分子和起始因子组成并组装在蛋白质合成起始点的复合物..5、信号肽假说:蛋白质定位的信息存在于该蛋白质自身的结构中;并且通过与膜上特殊受体的相互作用得以表达;蛋白质跨膜运转信号是由m RNA 编码的..6、分子杂交:两条不同来源的DNA或RNA链或DNA与RNA之间存在互补顺序时;在一定条件下可以发生互补配对形成双螺旋分子;这种分子称为杂交分子;形成杂交分子的过程称为分子杂交..7、报告基因:一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因;也就是说;是一个表达产物非常容易被鉴定的基因..8、基因工程:指在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其他载体分子中;构成遗传物质的重新组合;使之进入原先没有这类分子的寄主细胞内并进行持续稳定的繁殖和表达过程..五、简答题:共31分1、为什么真核生物中转录与翻译无法耦联 8分答:真核生物mRNA是在细胞核内合成的;而翻译是在细胞质中进行的;因此;mRNA只有被运送到细胞质部分;才能翻译生成蛋白质..真核生物中的mRNA开始合成时;是不成熟的hnRNA;需要通过一系列加工过程才能成熟;才能成为成熟的mRNA..这些过程包括;内含子的剪接、5’端帽子结构、3’端尾等..由于RNA转录后需要一系列的加工过程;因此;转录与翻译无法耦联..2、从总RNA中分离mRNA的原理是什么 5分答:真核生物mRNA的3’端有一段polyA结构;根据碱基互补配对原则;A 与T能形成碱基互补;因此在分离mRNA时;常用寡聚dT进行吸附..3、简述乳糖操纵子..9分答:原核生物乳糖操纵子Lac operon的控制区包括调节基因、启动基因其CRP结合位点位于RNA聚合酶结合位点上游和操纵基因;其信息区由β-半乳糖苷酶基因lacZ、通透酶基因lacY和乙酰化酶基因lacA串联在一起构成..当培养基中乳糖浓度升高而葡萄糖浓度降低时;乳糖作为诱导剂与阻遏蛋白结合;促使阻遏蛋白与操纵基因分离;另一方面;细胞中cAMP浓度升高;cAMP与CRP结合并使之激活;CRP与启动基因结合并促使RNA聚合酶与启动基因结合;基因转录激活..4、作为分子克隆的载体;一般应具备那些条件 9分答:1在合适的位置具有至少一个多克隆位点;供外源DNA插入以形成重组体分子..2克隆载体能携带外源DNA片段进入受体细胞;或停留在细胞质中能自我复制;或整合到染色体DNA上随染色体DNA的复制一起被复制..3克隆载体必须具有用于选择克隆子的标记基因..4克隆载体必须是安全的;不应含有对受体细胞有害的基因;并且不会任意转入受体细胞以外的其他生物细胞;尤其是人的细胞..六、论述题:15分试述基因芯片的工作原理及其在生物学研究中的意义..原理:基因芯片的工作原理与经典的核酸分子杂交方法一致;都是应用已知核苷酸序列作为靶基因与互补的探针核苷酸序列杂交;通过随后的信号检测进行定性与定量分析..具体讲即是将许多特定的寡核苷酸片段或cDNA基因片段作为靶基因;有规律地排列固定在支持物上;样品DNA/RNA 通过PCR扩增、体外转录等技术掺入荧光标记分子或放射性同位素作为探针;然后按碱基配对原理将两者进行杂交;再通过荧光或同位素检测系统对芯片进行扫描;由计算机系统对每一探针上的信号检测和比较;从而得出所需要的信息..生物学研究中的意义:1用于绘制基因缺失图谱和进行基因表达分析;2用于基因突变研究;3用于病毒病原体的检测和基因分型;4用于细菌检测;5用不同细胞周期发育阶段的cDNA作探针系统性地研究细胞中任意时期特异表达的基因;6能了解某些基因对特定生长发育阶段的重要性;7基因芯片还可用于进行基因诊断;可建立正常人特定组织、器官的基因芯片;给出标准杂交信号图;8用病人的可疑cDNA作探针与之杂交;检查哪些基因的表达受抑制或激活..。
2011高考生物二轮复习现代生物科技专题和生物技术实践综合能力专题突破卷
【专题十】现代生物科技专题【考情分析】本专题内容包括选修三《现代生物科技专题》全部内容,具体有:基因工程、细胞工程、胚胎工程、生态工程及生物安全等。
本考点主要和当前生物前沿科技热点相结合,“高起点、低落点”是本专题考点命题的最大特点,分析近3年新课标地区生物试题看,高考命题在本专题有以下特点:1.主要考点:基因工程的原理及应用;植物组织培养的生物学理论、主要操作过程及应用;动物细胞克隆的生物学理论基础和操作过程;单克隆抗体制备;胚胎工程的应用等。
2.命题形式:由于不同地区的考纳要求不同,所以山东、宁夏、广东和海南都是以选做简答题的形式出现,江苏、安徽则是选择题和简答题都有出现。
由此对2010年高考的命题趋势预测如下:1.基因产品、基因诊断、基因治疗。
2.植物组织培养的操作及应用。
3.单克隆抗体制备。
4.胚胎移植的应用。
【知识交汇】考点一:基因工程1.实质:在分子水平上利用特殊工具将特定基因转入受体细胞,使其产生所需性状。
2.操作程序(1)目的基因的获取途径有:从基因文库中获取、PCR技术扩增、化学法人工合成。
(2)基因表达载体的构建:是基因工程的关键步骤,需要用同种限制酶分别切割载体和目的基因,再用DNA连接酶把两者连接,完整的基因表达载体包括标记基因、启动子、终止子和目的基因。
(3)将目的基因导入受体细胞:见表(一)(4)目的基因的检测和鉴定:见表(二)表(一) 表(二)考点二:克隆技术1.植物组织培养与动物细胞培养的比较2.植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较3.单克隆抗体制备原理:B 淋巴细胞能够产生单一抗体,骨髓瘤细胞能够无限增殖,所以人工诱导两种细胞融合后筛选出的杂交瘤细胞具备两者的特性,从而产生了特异性强、灵敏度高的单克隆抗体。
考点三:胚胎工程1.动物胚胎发育的基本过程:受精卵→卵裂期→桑椹胚→囊胚→原肠胚。
2.胚胎干细胞的移植:胚胎干细胞是从早期胚胎(囊胚期的内细胞团)或原始性腺中分离出来的,其功能特点是具有发育的全能性,可诱导分化出各种组织器官。
常用分子生物学和细胞生物学实验技能技术总结介绍
精心整理常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍(2011-04-2311:01:29)转载▼标签:分子生物学细胞生物学常用实用技术基本实验室技术生物学实验教育常用的分子生物学基本技术核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选,酶切图谱的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。
其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下(适宜的温室度及离子强度等)可按碱基互补原成双链。
杂交的双方是待测核酸序列及探针(probe ),待测核酸序列可以是克隆的基因征段,也可以是未克隆化的基因组DNA 和细胞总RNA 的已知 固相杂交Southern DNA 片段Northern 复杂的盐酸核生物(如人),则因工作量太大,表达的序列所占百分比较低(仅5%左右),价值不大。
cDNA 微点隈杂交(cDNAmicroarrayhybridization )是指将cDNA 克隆或cDNA 的PCR 产物以高度的列阵形式排布并结合于固相支持物上(如:尼龙膜或活化的载玻片)以微点阵,然后用混合的不同DNA 探针与微点阵上的DNA 进行杂交。
再利用荧光、化学发光、共聚焦显微镜等技术扫描微点阵上的杂交信息。
它比差异杂交技术的效率高、速度快、成本低,适用于大规模的分析。
已成商品问世。
其缺点是无法克服保守的同源序列及重序对杂交信息的干扰。
寡核苷酸微点隈杂交(oligonucleotidemicroarrayhybridization )是在特殊的固相支持物上原位合成寡核苷酸,使它共价结合于支持物表面,与平均长度为20-50nt 的混合RNA 或cDNA 探针进行杂交,以提高杂交的特异性和灵敏度。
应用共聚焦显微镜可检测跨越三个数量级的杂交信息。
适用于低丰度mRNA的检测,以区分基因家族不同成员的差异表达特征,或鉴定同一转录在不同组织和细胞中的选择性剪接。
有机化学实验中的分离技术
有机化学实验中的分离技术在有机化学实验中,分离技术是一项非常重要的实验操作。
通过分离技术,我们可以将混合物中的不同组分分离出来,并获得纯净的有机物质。
本文将介绍几种常用的有机化学实验中的分离技术,包括提取法、结晶法、蒸馏法和色谱法。
提取法是有机化学实验中常用的一种分离技术。
它基于不同物质在溶剂中的溶解度差异,通过溶剂的选择和提取过程的控制,可以将需要分离的有机物质从混合物中提取出来。
提取法可以用于分离有机物与无机物的混合物,也可以用于分离不同有机物之间的混合物。
在实验操作中,通常使用漏斗进行液-液相分离,通过叠加分液仪可以方便地分离两相,从而获得纯净的有机物质。
结晶法是一种常用的纯化有机化合物的分离技术。
结晶法基于物质在溶剂中的溶解度随温度变化的差异。
通过逐渐降低溶液温度,使得溶质逐渐从溶液中析出结晶,从而实现对有机物质的纯化。
结晶法需要选择适宜的溶剂和恰当的结晶条件,如搅拌、过滤和干燥等操作,以获得高纯度的结晶产物。
蒸馏法是一种分离液体混合物的重要技术。
在有机化学实验中,蒸馏法通常用于分离液体的挥发性有机成分。
蒸馏法基于不同物质的沸点差异,通过加热混合物,使得具有较低沸点的物质先蒸发,然后再通过冷凝收集,从而实现对有机物质的分离。
在实验操作中,常用的蒸馏设备包括常压蒸馏和沸石蒸馏,通过控制温度和调节收集装置,可以得到纯净的有机产物。
色谱法是一种分离和纯化有机化合物的重要技术。
色谱法基于物质在固定相和流动相之间的分配行为,通过流动相的传递,使得不同组分在固定相上发生差异分离,从而实现对有机物质的分离。
常见的色谱技术包括薄层色谱、柱色谱和气相色谱。
在实验操作中,需要选择合适的固定相和流动相,根据物质的特性和需要的分离效果进行调节,最终通过检测不同位置的色斑或峰来获得纯净的有机产物。
综上所述,有机化学实验中的分离技术包括提取法、结晶法、蒸馏法和色谱法等。
这些技术在有机合成、纯化和分析等领域起着重要作用。
2011 发酵工程习题学生(有答案)
发酵工程复习题一、填空1、我国白酒的分类方法多样,其中以香型分类为常用,一般认为白酒可分为四种,即浓香型酒,以泸洲老窖(酒)为代表;酱香型,以茅台(酒)为代表;清香型,以五粮液(酒)为代表;米香型香型,以桂林三花酒(酒)为代表。
2、我国传统酿造常用到曲,种曲作用是提供大量的孢子,而曲通常用来提供大量的菌体或酶。
4、一般酒精度低于16 度的饮料酒均须后杀菌,一般采用巴氏消毒法。
6、发酵生产按生产操作工艺分类,可分为连续、分批、流加三种。
7、通用发酵罐通常由空气系统、温度系统、蒸汽系统等几个重要系统组成。
8、在工业发酵中,10吨以下小型发酵罐一般以夹套式装臵控温,10吨以上的大中型发酵罐一般以盘管式装臵控温。
9、在工业发酵过程中,与代谢变化有关的物理参数主要有:罐压、温度、溶氧、搅拌、发酵液表观粘度等,生物参数主要有:菌体形态、菌体比生长速率等。
10、发酵生产中试车间常用的接种方法主要有压差和火圈接种两种。
11、一般来说,发酵工业的生产过程主要包括以下环节:原料预处理;培养基配制;发酵设备和培养基灭菌;无菌空气的制奋;微生物菌种制备和扩大培养;发酵;发酵产品的分离和纯化。
12、发酵工业根据操作方式不同可分为三种模式,即间歇发酵、连续发酵和流加发酵。
常见的间歇发酵,也称分批发酵。
13、1956年,日本木下祝郎发明了代谢控制发酵技术,使谷氨酸发酵生产实现产业化。
14、发酵工业的发展经历了天然发酵阶段、纯培养技术的建立、通气搅拌发酵技术的建立、代谢控制发酵和现代发酵工程技术的发展四个时期。
15、1929年,英国科学家弗莱明发现了青霉菌,1940年英国弗洛里和钱恩分离出青霉素,1941年英美两国合作对青霉素开发研究,1942年实现了青霉素工业化生产。
16、发酵工程技术服务的领域包括食品工业、医药工业、化学工业、能源开发以及环境治理等。
17、发酵工业以微生物的生命活动为基础,决定发酵工业生产水平的三个要素:生产菌种的性能、发酵及提纯工艺条件和生产设备,其中优良的菌种是最重要的。
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不再返回(或减少返回)液相,就会大大提高分
离效率。
经典分离方法——分子蒸馏技术
Bronsted和Hevesy在1922年设计了世界上第一套
经典分离方法
液相微萃取法
经典分离方法——液相微萃取法
中空纤维液相微萃取(HF-LPME) 以多孔的中空纤 维为微萃取溶剂(接收相)的载体,将有机萃取溶剂 固定到中空纤维壁内的微孔里,通过有机溶剂在纤 维壁孔中形成的液膜进行传质,在多孔的中空纤维 腔中进行微萃取。根据接受相与微孔中溶剂的异同, HF-LPME 分为两相和三相液相微萃取。 优点:避免了单滴液相微萃取溶剂容易损失、移位、 无法提高搅拌速度等缺点;具有突出的样品净化功 能,扩大了分析底物范围,可用于复杂基质样品的 直接分析;具有较高的富集倍数和灵敏度。
经典分离方法——液相微萃取法
单滴液相微萃取( SD-LPME)是将萃取用的有机溶 剂液滴悬挂在微量进样器的针端。同液-液萃取一 样,单滴液相微萃取也是基于分析物在不同相中分 配系数不同而达到萃取的目的。有机相液滴体积一 般为1-5微升,远远小于样品体积,所以可以达到 对待测物的富集。
经典分离方法——液相微萃取法
经典分离方法——液相微萃取法
影响因素
萃取溶剂的影响
盐效应和pH 值的影响
萃取温度的影响
搅拌速度的影响
应用
环境分析:水样、土壤、大气 药物分析:血样、尿样、唾液、乳汁 食品分析:饮用水、酒、饮料、蔬菜
经典分离方法——蒸馏和分馏法
利用提取成分具有不同沸点的性质,可使用蒸馏
和分馏法对植物成分进行分离。 在分离毒芹总碱中的毒芹碱和羟基毒芹碱时,以 及分离石榴皮中的伪石榴皮碱、异石榴皮碱和甲 基异石榴皮碱时,均可利用常压或减压分馏方法
经典分离方法——液相微萃取法
连续流动液相微萃取法(CFME)是在直接液相 微萃取方法上改进而来。先用泵将被萃取的水溶 液充满PEEK管以及萃取单元的玻璃容器中,再将 所需体积的有机溶剂用微量注射器从玻璃容器的 注射口注射到样品水溶液中,并在针尖形成液滴 悬挂,在蠕动泵的作用下,不停流动的水溶液不 断与有机液滴接触,分析物不断被富集到微滴中, 萃取完成后将有机液滴吸回,直接进样分析。
进行初步分离,然后再精制纯化。
经典分离方法——分子蒸馏技术
一种特殊的蒸馏分离技术
在通常的蒸馏(精馏)过程中,存在着两股分子
流向:一股是被蒸液体的气化,由液相流向气相 的蒸气分子流;另一股是蒸气返回至液相的分子 流。当气液两相达到平衡时,表观上蒸气分子不 再从液面逸出。假若采用某种措施,使蒸气分子
经典分离方法——液相微萃取法
经典分离方法——液相微萃取法
举例 测定乳制品中的三聚氰胺:将中空纤维 切成2.3~2.5cm 小段,放入有机溶剂磷酸三丁 酯(TBP) 中超声10s,使中空纤维壁孔充满TBP, 再将其套在微量进样器(已经吸入25μL 接受相) 针尖上,接受相推入中空纤维,两端用热钳子 封住,使中空纤维保持约2 cm 长度。放入给出 相内,在恒温磁搅拌仪上以一定速率搅拌,萃 取一定时间后取出,剪开封口,用进样针抽回 接收相,用5μL 进行高效液相色谱测定。
经典分离方法——液相微萃取法
与液液萃取法比较
适应了绿色分析技术发展的需要(液液萃取消耗 mL 级有机溶剂,液相微萃取仅需μL 级)
富集倍数大,萃取效率高(富集倍数达1000 倍), 可使分析方法的灵敏度提高两个数量级以上 便于与具有微量进样方法的特定仪器联用。 样品溶液用量少(l~10mL 左右)
直接液相微萃取:萃取溶剂液滴直接浸渍于样品中, 对分离富集洁净样品中的低浓度分析物效果较好, 但对含固体颗粒或含有能乳化有机溶剂的复杂基质 样品的萃取效果较差。 顶空液相微萃取:萃取溶剂液滴与样品基质不直接 接触,适用于复杂基质中微量挥发性或半挥发性成 分的萃取。
经典分离方法——液相微萃取法
经典分离方法——液相微萃取法
经典分离方法——液-液萃取法
用一种强极性溶剂直接提取后再用极性不同的溶剂 与强极性溶剂的提取液进行液/液两相梯度萃取
经典分离方法——液相微萃取法
根据液滴状态的不同可分为单滴液相微萃取( SDLPME) 和中空纤维液相微萃取(HF-LPME) ; 根据悬挂液滴位置的不同可以分为直接液相微萃取 (D-LPME) 和顶空液相微萃取(HS-LPME) ; 根据操作方式的不同可以分为静态液相微萃取( SLPME) 、动态液相微萃取(D-LPME) 和连续流动 液相微萃取(CFME) ; 根据作用相的多少可分为两相液相微萃取和三相液 相微萃取(LLLME )
第三章 细胞产物分离技术
经典分离方法 色谱分离方法
样品的预处理
细胞产物的提取经典分离方法来自细胞产物的分离色谱分离法
紫外可见光谱
产物的分析鉴定
红外光谱
核磁共振谱 质 谱
经典分离方法——液-液萃取法
利用组分在两个互不相溶的液相中的溶解度差异而 将其从一个液相转移到另一个液相的分离过程称为 液液萃取,也叫溶剂萃取,简称萃取。 待分离的一相称为被萃相,萃取后成为萃余相,用 做分离剂的相 称为萃取相。
经典分离方法——液-液萃取法
被萃取组分在萃取相中的溶解度要大于被萃取 相。 一般一相为水相,一相为有机相。在水相中增 加盐离子浓度可以降低有机相在水中的溶解度。 萃取应采用少量多次原则。 从水相中萃取有机物质时,单级萃取时一般选 择该物质的最佳溶剂。多级萃取溶剂选择一般 从弱极性→强极性。 密度:石油醚、乙醚、乙酸乙酯、丁醇、苯 <水 <二氯甲烷、氯仿
静态模式萃取:将有机溶剂液滴悬挂于微量进样器 的针头上,萃取一定时间后将溶剂抽回针头中,直 接进样分析。操作简单,但易受溶剂的溶解或挥发 损失以及脱落的影响,且富集效果相对较差。 动态模式萃取:用微量进样器抽取一定量溶剂,置 于萃取位置后抽取空气或水样进入针头,停留一定 时间,萃取被吸入微进样器的试样中的目标分析物, 而后推出空气或水样但不推出溶剂,如此反复数次, 最后将有机溶剂相直接进样分析。动态萃取通过变 溶剂微滴为溶剂薄膜,大大增加了萃取的表面积, 使萃取效率更高。