大肠菌群得计数实验

大肠菌群计数实验

MPN计数法

一、设备与材料

250ML锥形瓶3个 100ML烧杯1个

250ML量筒1个 1000ML烧杯1个

15*150mm试管3个 1ML刻度吸管4个

18*180mm试管20个杜氏小管

玻璃棒1个接种环1个

剪刀1把药匙2个

均质器天平(感量0、1g)

电炉洗耳球

二、实验准备

1、配制培养基:

LST培养基得配制:

用天平称取17、8gLST培养基于锥形瓶中

加入500ML蒸馏水

加热煮沸至完全溶解

分装于装有杜氏小管得大试管中,每管10ML,共10管高温灭菌备用

BGLB培养基得配制:

用天平称取20gBGLB培养基于锥形瓶中

加入500ML蒸馏水

加热煮沸至完全溶解

分装于装有杜氏小管得大试管中,每管10ML,高温灭菌备用

2、生理盐水

取4、25g氯化钠于大烧杯中

加入500ML蒸馏水溶解

取225ML生理盐水于锥形瓶中

分别取9ML生理盐水于3只小试管中

将分装好得生理盐水进行高温灭菌

3、灭菌:将均质杯、100ML烧杯、刻度吸管、剪刀、接种环、洗耳球高温灭菌备用

三、取样

在提交得产品中随机抽取三箱,从每箱中随机抽取未打开包装得产品1袋~3袋,抽取不低于250g得样品作为微生物指标检验试样。

四、检验程序

36℃±1℃ 48h±2h

五、操作步骤

初发酵试验

1、称取25g 样品,放人盛有225m生理盐水得无菌均质杯内,8 00or/min-10 000r/min 均质1 min-2 min ,制成1:10 得样品匀液。

2、用1ml无菌吸管吸取1:10 样品匀液1ml,沿管壁缓缓注人9ml生理盐水得无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管,使其混合均匀,制成1:100 得样品匀液。

3、换一只新得1ml无菌吸管吸取1:100样品匀液1ml,沿管壁缓缓注人9ml生理盐水得无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管,使其混合均匀,制成1:1000 得样品匀液。

4、将三个连续稀释梯度得样品原液在进行10倍递增稀释时,吸取1 ml 样品匀液于LST肉汤,每个稀释度接种三管。

5、同时做一组空白,在一支LST肉汤中接种1ml生理盐水。

6、 36℃±1℃培养24h±2h ,观察倒管内就是否有气泡产生,如未产气则继续培养至48h±2h 。记录在24h 与48h 内产气得LST 肉汤

管数。未产气者为大肠菌群阴性,产气者则进行复发酵试验。

复发酵试验

用接种环从所有48h±2h 内发酵产气得LST 肉汤管中分别取培养物l环,移种于( BGLB)肉汤管中,36℃±1℃培养48h±2h ,观察产气情况。产气者,计为大肠菌群阳性管。

大肠菌群最可能数(MPN )得报告

根据大肠菌群阳性管数,检索MPN 表,报告每克(或毫升)样品中大肠菌群得MPN 值。

大肠菌群最可能数(MPN)检索表