样品采集保存和运输

基因芯片样品的采集、保存和运输
基因芯片实验、microRNA芯片实验、
PCR芯片实验和实时定量PCR实验的样品准备
一、动物组织样品保存与运输（每张芯片需50-100mg组织）
1、新鲜组织样品的保存与运输
A、使用RNA later试剂
→取新鲜组织（注：生物体死亡后尽快在10分钟内取材），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，所用组织必须切至厚度在
0.5 cm以下（长宽不限），然后放入装有5倍体积RNA later的离心管（或冻存管）中。

→4℃孵育过夜，此时样品管需要横置以便组织块充分接触到RNA later，然后转入- 20℃中保存。

样品在- 20℃不会冻结，但是溶液中可能有一些晶体出现，这并不影响后续的RNA抽提。

冻存样品也可以反复冻溶，其RNA含量和完整性不受影响。

→RNAlater处理的标本可用常规冰袋4℃低温运输（无需使用干冰- 70℃运输）。

B、使用Trizol试剂
Trizol试剂可抑制RNA酶活性，破坏细胞膜结构以裂解细胞释放出RNA。

→取新鲜组织（注：生物体死亡后1分钟内取材料并保存好），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，每50~100 mg组织加1 ml Trizol溶液匀浆裂解组织样品，操作最好在冰上进行。

→匀浆的裂解液4℃短期保存（1个月），-20度或- 70℃长期保存。

干冰运输，短期（5天以内）冷藏（4℃）运输亦可。

2、冻存组织的保存与运输
生物体死亡后尽快（最好在10分钟内）切取新鲜组织，以PBS或生理盐水清洗干净切为小块，立刻放入液氮中冷冻2-3小时后可转入-70℃冰箱保存或着一直保存在液氮中。

冻存组织可放入干冰中直接运输，或者以Trizol 4℃下匀浆：冻存的组织块以液氮研磨后加Trizol或直接加Trizol以电动匀浆器匀浆，匀浆的裂解液干冰运输或短期（5天以内）冷藏（4℃）运输。

二、哺乳动物培养细胞样品采集、保存与运输——使用Trizol试剂（不建议使用RNAlater）
1、悬浮细胞
→悬浮细胞培养液倒入离心管中，离心沉淀细胞，弃去上清液。

→细胞沉淀（1×107个细胞）中加入1 ml的Trizol裂解液。

→反复吸打几次后，目视可见细胞层溶解完全。

- 70℃保存或干冰运输。

注：Trizol处理的标本冷藏（4℃）运输，短期（5天以内）亦可。

2、贴壁细胞
→从培养容器中吸出并弃去培养液。

→培养瓶中直接加入Trizol试剂，Trizol用量与细胞贴壁面积有关，约15 cm2细胞贴壁面积加入1 ml Trizol。

→反复吸打几次后，目视可见细胞层溶解完全。

- 70℃保存或干冰运输。

注：Trizol处理的标本冷藏（4℃）运输，短期（5天以内）亦可。

注：
1、上海市内细胞样品也可以直接常温运送，运送时在培养瓶中装满培养液并以封口膜封口，然而某些实验条件中包含时间限制，建议以Trizol处理。

2、所使用的1.5 ml冻存管或离心管、枪头等必须高温灭菌，装好样品后管口需要以封口膜封好。

3、如需干冰，快递运输所用干冰量至少为8公斤，且运输用泡沫箱需用封箱带密封。

植物组织样品准备
组织需要量：
100mg - 1g，根据植物不同部位的组织决定组织需要量（尽可能量多些，但不必超过1g）
保存和运输方法：
准确取得所需新鲜组织后，如有必要可用PBS清洗干净，将所用组织切碎，装入冻存管中或者用锡箔包裹好，立即投入液氮中保存。

冻存组织可干冰或液氮运输。

注：
1、所使用的1.5 ml冻存管或离心管、枪头等必须高温灭菌，装好样品后管口需要以封口膜封好。

2、快递运输所用干冰量至少为8公斤，且运输用泡沫箱需用封箱带密封。

蛋白芯片实验、转录因子芯片实验和免疫印迹实验的样品准备
悬浮细胞：
→约1×107个细胞，低速离心收集，弃去培养液，加入2－5 ml PBS悬浮细胞，转入小离心管中，低速离心沉淀细胞，弃去PBS，放入- 70°C冰箱保存。

干冰运输。

贴壁细胞：
→约1 × 107个贴壁细胞，胰酶消化后加入PBS悬浮细胞，低速离心收集，弃去液体，加入2－5 ml PBS悬浮细胞，转入小离心管中，低速离心沉淀细胞，弃去PBS，放入- 70°C冰箱保存。

干冰运输。

组织：
→采集新鲜组织（注意：生物体死亡后10分钟内取材料并保存好），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，切为小块，放入液氮或- 70°C冰箱中保存，干冰运输。

血清和血浆：
→采集新鲜血液，分离血清或血浆后放入- 20°C或- 70°C冰箱保存。

干冰运输。

检测蛋白芯片血清约需要100-200ul 的量。

注：
1、本市内细胞样品也可以直接常温运送，运送时在培养瓶中装满培养液并以封口膜封口，然而某些实验条件中包含时间限制，建议冻存后运输。

2、所使用的1.5 ml冻存管或离心管、枪头等必须高温灭菌，装好样品后管口需要以封口膜封好。

3、快递运输所用干冰量至少为8公斤，且运输用泡沫箱需用封箱带密封。

ChIP-chip样本采集、保存和运输
悬浮细胞：
→约1×107个细胞，低速离心收集，弃去培养液，加入2－5 ml PBS悬浮细胞，转入小离心管中，低速离心沉淀细胞，弃去PBS，放入- 70°C冰箱保存。

干冰运输。

贴壁细胞：
→约1 × 107个贴壁细胞，胰酶消化后加入PBS悬浮细胞，低速离心收集，弃去液体，加入2－5 ml PBS悬浮细胞，转入小离心管中，低速离心沉淀细胞，弃去PBS，放入- 70°C冰箱保存。

干冰运输。

组织：
采集新鲜组织（注意：生物体死亡后10分钟内取材料并保存好），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，切为小块，放入液氮或- 70°C冰箱中保存，干冰运输。

为获得理想结果，建议根据下述方法处理、保存及运输细胞样品用于ChIP-chip实验：
悬浮细胞：
1.取107悬浮细胞低速离心，用10ml培养基将细胞沉淀重悬于50ml离心管中；
2.加入270ul 37％的甲醛（本公司可提供），轻轻混匀，室温孵育10分钟；该步骤最好在通风橱中完成；
3.加入1ml 1.25M的苷氨酸（本公司可提供），轻轻混匀，室温孵育5分钟，中和甲醛；
4.1000×g离心5分钟，弃上清，用预冷的1×PBS/EDTA洗细胞两遍；
5.1000×g离心5分钟，弃上清；
6.收集到的样品－80℃冻存，干冰运输
贴壁细胞：
1.将10cm培养皿中（107细胞）旧的培养基吸掉，添加10ml新鲜培养基；
2.加入270ul 37％的甲醛（本公司可提供），轻轻混匀，室温孵育10分钟；该步骤最好在通风橱中完成；
3.加入1ml 1.25M的苷氨酸（本公司可提供），轻轻混匀，室温孵育5分钟，中和甲醛；
4.将皿中的混合液吸掉，用预冷的1×PBS/EDTA洗细胞两遍，加入1ml含有1×protease inhibitor cocktail
的1×PBS，用细胞刮将皿底的细胞刮下，收集到1.5ml离心管中；
5.1000×g离心5分钟，弃上清；
6.收集到的样品－80℃冻存，干冰运输
注：
1、所使用的1.5 ml冻存管或离心管、枪头等必须高温灭菌，装好样品后管口需要以封口膜封好。

2、快递运输所用干冰量至少为8公斤，且运输用泡沫箱需用封箱带密封。

注：特殊样本（如：石蜡包埋样本、全血样本等）请来电咨询。