基因型鉴定 protocol知识分享
基因型鉴定原理
基因型鉴定原理一、引言基因型鉴定是指通过检测个体所携带的基因型，来确定其遗传信息的一种方法。
基因型是指个体所拥有的基因的组合，它决定了个体的遗传特征和表型表达。
基因型鉴定的原理是通过分析个体所携带的DNA序列，确定其基因型。
二、基因型鉴定方法1. PCR法PCR法是一种常用的基因型鉴定方法，它通过扩增DNA片段来分析个体的基因型。
PCR法需要设计一对引物，使其能够特异性地结合到目标序列上，并使用DNA聚合酶进行扩增。
通过PCR扩增后的产物，可以通过电泳分析进行分型。
2. 串联重复序列分析法串联重复序列是指在基因组中重复出现的短序列片段，其重复次数在不同个体间存在差异。
通过分析个体所携带的串联重复序列的重复次数，可以确定其基因型。
例如，STR（short tandem repeat）是一种常用的串联重复序列，通过扩增STR区域，并通过电泳分析不同长度的产物，可以确定个体的基因型。
3. 单核苷酸多态性分析法单核苷酸多态性是指基因组中存在的单个核苷酸的变异。
通过分析个体所携带的单核苷酸多态性位点的变异情况，可以确定其基因型。
例如，SNP（single nucleotide polymorphism）是一种常见的单核苷酸多态性，通过PCR扩增SNP位点，并通过测序分析不同的碱基，可以确定个体的基因型。
三、基因型鉴定的应用1. 亲子鉴定基因型鉴定可以通过比较父母和子女之间的基因型，确定亲子关系的真实性。
通过分析共同的基因型，可以确定子女是否来自于指定的父母。
2. 犯罪侦查基因型鉴定可以通过分析犯罪现场留下的DNA，与嫌疑人的DNA进行比对，从而确定嫌疑人是否与犯罪现场有关。
3. 遗传病筛查基因型鉴定可以通过分析个体所携带的遗传病相关基因的变异情况，来确定其是否患有某种遗传病。
这对于遗传病的早期筛查和预防具有重要意义。
四、基因型鉴定的局限性基因型鉴定虽然具有很高的准确性，但仍存在一些局限性。
首先，基因型鉴定需要一定的样本量和质量，如果样本质量不好或者样本量不足，可能会影响鉴定结果的准确性。
基因型鉴定——精选推荐
小鼠组织DNA的取材及抽提1 蛋白酶K储存液的配制用超纯水彻底溶解蛋白酶K粉剂，使终浓度为10mg/ml，每管1ml分装，-20度保存备用。
2 裂解液配制尿素4M（240.24g/1000ml）EDTA-2Na-2H2O 10mM ( 3.722g/1000ml)Sarkosyl 0.5% ( 5g/1000ml)Tris/HCl ( 1M, PH 8.0 ) 0.1M ( 100ml/1000ml )NaCl 0.2M ( 11.688g/1000ml )H2O 补足至1000ml1000ml3 小鼠组织取材使用乙醇擦拭的手术剪刀剪少许鼠耳尖部组织，半个火柴头大小足够；或取小鼠尾部组织2-3mm即可。
每次取材需用乙醇重新擦拭，如有条件可更换手术器械。
4 小鼠组织DNA抽提将取材完毕的组织置于1.5ml 离心管中，加500ul 裂解液其中含有50ul蛋白酶K储存液，使用1ml移液器反复吹打后封管置于56℃水浴过夜，或期间反复拿出震荡。
次日样本于室温12000rpm离心10min，转移上清于1.5ml 离心管中，加1ml无水乙醇，盖后振摇可见絮状沉淀。
12000rpm 4℃离心20min。
弃上清，加入预冷的70%乙醇洗涤，摇晃后12000rpm 4℃离心10min。
重复洗涤步骤。
完全弃去上清，通风橱内待乙醇挥发，加500ul纯水吹打溶解（看DNA沉淀的量，300ul亦可。
）取1- 2ul做PCR。
5 小鼠基因型的PCR鉴定反应体系：10×Taq buffer 1.0μldNTP (10mM) 0.2μlMgCl2(25mM) 1.0μlPrimer 1（10nM）0.5μlPrimer 2（10nM）0.5μlPrimer 3（10nM）0.5μlTissue DNA 1.0μlTaq polymerase 0.3μlddH2O 5.0μl10.0μl 反应条件：Step 1：94℃5minStep 2：94℃1min58℃30sec72℃1min重复Step 2 35个循环Step 3：72℃10minStep 4：4℃Hold。
基因型鉴定方法
基因型鉴定方法基因型(genotype)是指一个生物体内细胞DNA所包含的与某个性状相关的基因类型。
主要通过PCR和Southern blotting分析来鉴定基因修饰动物的基因型。
PCR反应为常规方法，转基因动物有时需要用Southern blotting验证转基因拷贝数。
用Southern blotting还可以确定转基因是否发生重排或删除。
基因发生重排时，会导致酶切位点发生变化，产生不同的酶切图谱。
用实时定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)可快速确定转基因mRNA表达量。
转基因随机插入动物基因组，如果转基因动物没有异常，通常不需要确定转基因整合位置；如需测定，可以通过荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)在显微镜下直接观察整合位置和局部染色体结构。
这项技术还可以用于检测转基因插入部位的染色体重排以及由Cre重组酶诱导的局部染色体删除。
PCR反应基因型鉴定的原理是首先设计能与引入的外源基因结合的特异性引物，扩增原本不存在于动物基因组中的DNA序列。
引物的设计很关键，转基因动物基因型分析的引物通常位于转基因内，一般选择特异性的DNA序列作为引物以确定转基因是否存在。
在多数情况下，转基因的插入位点是未知的，难以设计引物以确定转基因是否为纯合子或杂合子。
对于基因敲除和基因敲入动物，由于明确知道基因修饰的位置，因此，可以设计野生型和突变型的引物以确定基因型是否为纯合子或杂合子。
突变型引物对：一个引物位于同源重组短臂外；另一个位于引入的外源基因，如Neo基因内。
野生型引物通常位于要敲除的DNA序列。
突变型和野生型PCR产物的大小应不同，在100～700bp之间，足以用凝胶电泳区别鉴定。
引物的GC比例约为50％(40％～60％)。
基因型分析时还要注意设立对照组。
PCR反应阳性对照：可选内源性看家基因如β-actin，以确定DNA质量和正确的扩增反应体系。
基因型鉴定方法范文
基因型鉴定方法范文首先，进行DNA提取是基因型鉴定的关键步骤之一、DNA提取的方法有很多种，常用的有酚氯仿法和离心管法。
其中，酚氯仿法是一种经典的提取方法，通过使用酚和氯仿溶液，可以将DNA从细胞中提取出来。
离心管法则是利用离心机的旋转力，将细胞组织离心沉淀，然后采用特定的溶液提取DNA。
DNA提取的目的是获得足够高质量的DNA样本，以确保后续步骤的准确性。
其次，目标序列扩增是基因型鉴定的核心步骤之一扩增目标序列常采用的方法是聚合酶链反应（PCR）。
PCR是一种体外DNA扩增技术，利用DNA聚合酶酶和双链DNA模板，通过一系列的循环反应，在体外扩大目标DNA序列的数量。
PCR的原理是将DNA模板加热至90-95℃，使其双链DNA解链，然后降温至50-60℃，将引物与目标序列互相结合，最后将温度升高至72℃，DNA聚合酶与dNTPs进行DNA链合。
通过多次循环反应，可以扩增出足够数量的目标DNA序列。
最后，进行测序分析是确定基因型的关键步骤。
测序分析主要分为传统测序和新一代测序两种方法。
传统测序方法是利用二进制编码和限制酶去鉴定DNA序列，通过几个测序反应，逐个测出DNA序列中的每个核苷酸，然后通过比对和比较进行测序分析。
这种方法相对来说比较简单，但耗时较长，适用于小规模的基因型鉴定。
新一代测序技术则是一种高通量测序技术，可以在短时间内获得大量的DNA序列信息。
通过并行测序和高通量测序平台，可以同时测序多个DNA片段，从而加速DNA序列的获取。
这种方法具有高速、高效、高通量的特点，适用于大规模的基因型鉴定。
综上所述，基因型鉴定方法是通过对DNA序列进行分析，确定个体的基因型。
其主要步骤包括DNA提取、目标序列扩增和测序分析。
随着技术的不断进步，以及新一代测序技术的应用，基因型鉴定的效率和准确性得到了极大的提高，将为生物医学和农业领域提供更多有益的信息。
基因型鉴定技术的发展对于疾病诊断、个体定制治疗和种质改良等方面具有重要的意义，有望为人类社会带来更多的福祉。
细胞基因型鉴定
细胞基因型鉴定细胞基因型鉴定是一种通过分析细胞的基因组来确定个体基因型的技术手段。
细胞基因型鉴定在医学、生物学研究和法医学等领域有着重要的应用价值。
本文将介绍细胞基因型鉴定的原理、方法和应用。
一、细胞基因型鉴定的原理细胞基因型鉴定的原理基于DNA的序列差异。
DNA是构成基因的分子，不同个体的DNA序列存在差异，这些差异可以通过分子生物学技术进行检测和分析。
细胞基因型鉴定主要通过PCR扩增和DNA测序等方法来鉴定个体的基因型。
二、细胞基因型鉴定的方法1. PCR扩增：PCR是一种常用的DNA扩增技术，通过引物将目标DNA序列扩增为足够数量的DNA片段，为后续的分析提供充足的模板。
PCR扩增可以选择性地扩增目标基因片段，从而实现基因型鉴定。
2. DNA测序：DNA测序是确定DNA序列的方法，通过测序仪将PCR扩增得到的DNA片段进行测序，可以得到DNA序列信息。
根据DNA序列的差异，可以判断个体的基因型。
三、细胞基因型鉴定的应用1. 医学领域：细胞基因型鉴定可以用于遗传病的筛查和诊断。
一些遗传病是由特定基因突变引起的，通过细胞基因型鉴定可以检测个体是否携带这些突变基因，从而提前预防和治疗。
2. 生物学研究：细胞基因型鉴定可以用于物种鉴定和亲缘关系分析。
通过比较不同个体的基因型，可以判断它们是否属于同一物种，以及它们之间的亲缘关系。
3. 法医学：细胞基因型鉴定在刑事侦查和亲子鉴定中有着重要的应用。
通过比对被鉴定个体的DNA序列与现场留下的DNA样本进行比对，可以确定个体的身份和亲子关系。
细胞基因型鉴定技术的发展为医学、生物学研究和法医学等领域提供了强有力的工具。
随着技术的不断进步，细胞基因型鉴定的精确性和灵敏度将进一步提高，为人类的健康和社会稳定做出更大的贡献。
基因型鉴定protocol
一、基因型鉴定p r o t o c o l
1、剪尾取样及编号
从鼠房取出需要基因型鉴定的小鼠（由于小鼠一般在21天时已经断奶，故小鼠剪尾的时间应不小于三周），查看鼠箱上的基因信息，根据基因信息从编号笔记本上找出相应编号，续编。
其置于混合仪上消化，55℃（此温度下DNA在水中的溶解度最高，即最为稳定），3h。
②向消化后的样品中加入400微升异丙醇，反复颠倒，一般可见絮状分层（个别样品看不到）。
之后放至离心机13000r，10min。
③去上清，加入750微升70%乙醇，13000r，10min。
重复此操作一
次。
④去上清，将EP管倒置于吸水纸上或置于空气中晾干。
(最好晾干，倒置在吸水纸上有可能会使一部分DNA流失)
3、PCR(例，三转小鼠，做三次PCR，每次PCR针对的基因不同，所
94℃预热 ~ 4min
94℃变性 ~ 1min
61℃ 退火 ~ 1min 30个循环
72℃ 延伸 ~ 1min
72℃ ~ 7min
4℃ ~ hold
注意盖子盖紧。
4、琼脂糖电泳
①配胶，根据规格来配，如80ml规格，称量0.8000g琼脂糖，加入80ml 0.5*TBE buffer。
加热至沸腾
EB.。
全基因敲除小鼠基因型鉴定原理及方法
全基因敲除小鼠基因型鉴定原理及方法下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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新生小鼠genotypingprotocol
新生小鼠genotypingprotocol从小鼠合笼到基因分型一，小鼠合笼：1，准备需要合笼的老鼠（要求为性成熟老鼠：8—10周龄），记录老鼠基本信息，包括编号，性别，出生日期，基因型。
2，挑选需要合笼的公鼠，每笼放一只，记录笼号和卡片流水号，并在卡片上标记该老鼠的基本信息（编号，基因型）。
3，挑选需要合笼的母鼠，每笼只，同样在卡片上标记母鼠的基本信息（编号，基因型），注意，同一笼中母鼠的耳号不能相同。
4，合笼时间的选择（具体情况具体分析）。
5，母鼠验栓。
合笼次日晨8:00验栓，有阴栓的母鼠更换到仅放有受孕母鼠笼中，在卡片上标记好母鼠信息（包括与该母鼠交配的公鼠的编号），在原鼠笼的卡片上划掉该母鼠信息。
6，重复步骤5连续三天，将仍未受孕的母鼠统一分装到不含有公鼠的笼中，标记相应信息卡片，至此合笼结束。
二，新生小鼠基因分型1，新生小鼠从出生时P0开始计数，到4周龄p28时需要对其进行基因分型且进行分笼。
2，对小鼠耳号的编号方式见下图：背部3，按照一窝新生老鼠8只（3只Male, 5只Female）为例，按上图耳号的位置打耳号，编号方式为（Male）1-1, 1-2, 1-3, (Female)2-1, 2-2, 2-3, 2-4, 2-5, 做好分笼，将打耳号时产生的ear punch biopsy放于对应编号的PCR管中，管上做对应编号。
4，Add 40μl Sol Ⅰ，Heat to 95℃15min，Add 40μl Sol Ⅱ5，2μl for PCR reaction.6，PCR结果凝胶电泳，电泳结果拍照并打印，清晰标记每个泳道的对应小鼠编号。
7，按照小鼠编号和电泳结果，在分笼后鼠笼卡片上标记对应小鼠编号的基因型。
相关试剂配方：。
基因型鉴定原理
基因型鉴定原理基因型鉴定是通过对个体的基因组进行检测和分析，以确定其基因型的方法。
基因型是指个体在某一位点上所拥有的基因的组合形式。
基因型鉴定可以用于确定个体的遗传特征，包括疾病易感性、药物反应性等，具有广泛的应用价值。
基因型鉴定的原理基本上可以分为两种方法，一种是直接测序法，另一种是基于PCR的方法。
直接测序法是通过对个体的基因组进行测序分析，以确定其基因型。
在进行直接测序之前，首先需要提取个体的DNA，然后进行PCR 扩增，得到目标基因片段。
接下来，使用测序仪对PCR产物进行测序，获取每个碱基的信息。
最后，通过比对测序结果和参考序列，确定个体的基因型。
基于PCR的方法是通过引物的选择和设计，使得特定位点的基因型在PCR反应中表现出不同的特征，从而实现基因型的鉴定。
常用的PCR方法包括限制性片段长度多态性（RFLP）、序列特异性引物扩增（SSCP）、串联重复序列多态性（STR）等。
这些方法通过引物的选择和PCR反应条件的优化，可以在特定的温度下选择性地扩增目标位点的不同基因型，从而实现基因型的鉴定。
除了上述的直接测序法和PCR方法，还有一些其他的基因型鉴定方法，如基于芯片的方法、基于质谱法等。
这些方法能够同时检测多个位点的基因型，具有高通量和高灵敏度的特点。
基因型鉴定在医学、生物学、法医学等领域有着广泛的应用。
在医学领域，基因型鉴定可以用于确定个体的疾病易感性，帮助医生制定个体化的治疗方案。
在生物学领域，基因型鉴定可以用于研究物种的亲缘关系、种群的遗传结构等。
在法医学领域，基因型鉴定可以用于亲子鉴定、鉴定犯罪嫌疑人等。
然而，基因型鉴定也存在一些限制和挑战。
首先，基因型鉴定需要大量的基因组测序数据和参考序列，而这些数据和序列在不同个体之间存在差异，可能导致鉴定结果的误差。
其次，在进行基因型鉴定时，需要考虑样本的纯度、DNA的质量等因素，这些因素都可能影响鉴定结果的准确性。
此外，基因型鉴定需要先对目标基因进行PCR扩增，然后进行测序或分析，整个过程比较繁琐，需要一定的实验技术和设备。
基因型鉴定心得-资料
心
55℃ 杂 交炉转过
夜
第二天早上， 从杂交炉中 拿出，室温
放置1015min
5mh 即可用做
PCR模板
用50-100ul 双 蒸水(根据
DNA量确定用 水量)，
在超净台中 风干约 3-5
min
引物设计 条件摸索 常见问题 举例说明
举例：百奥赛图老师们10d剪尾—1周做检测—18d基因型鉴定完毕—分笼
DNA提取的总流程
标注序号
离心去杂质
裂解液的 配制
吸取上层 溶液
鼠尾裂解
异丙醇沉淀
离心洗涤 室温风干 水溶DNA
裂解液的配方
蛋白酶K（PK）：储存浓度：10mg/ml；终浓度100ug/m; -20℃保存。 储存液可以事先配制好，蛋白酶K要现用现配。 配制列子：10ml裂解液 Tris-HCl 1ml EDTA 100ul NaCl 667ul SDS 200ul 蛋白酶K 100ul 10000ul(10ml)-1967ul=8033ul水
PCR鉴定
引物设计
设计原则
①引物长度一般为20~24bp
②引物碱基尽可能随机分布：GC含量约60%
③引物不应有发夹结构：即不能有4bp以上的回文序列
④引物的3‘端为关键碱基：两引物间不应有大于4bp以上的 互补序列或同源序列
⑤在3’端不应有任何互补碱基 ⑥产物大小：约200~300bp ⑦Tm值：60℃左右 ⑧特异性：即无目的条带之外的多余条带 ⑨最理想的鉴定引物，一对引物即可以区分两种基因型
条件摸索
DNA模板 引物 Mg2+浓度 dNTP Mixture ddH2O 退火温度
温度梯度下如果没有条带，直接换引物吧！
农作物种质资源基因型精准鉴定
农作物种质资源基因型精准鉴定随着农业现代化的进程，农作物的种质资源变得越发重要。
种质资源是农作物品种改良的重要基础，而基因型的精准鉴定则是保证品种改良工作的关键。
本文将从基因型鉴定的概念、意义、技术方法等方面进行探讨，以期提高种质资源的利用价值和品种改良的效率。
一、基因型鉴定的概念基因型鉴定是指通过对农作物种质资源中的基因型进行分析和鉴定，从而确定该基因型的遗传性状、基因型结构及功能。
基因型鉴定可以帮助科研人员深入了解种质资源的遗传特性，为农作物品种改良提供科学依据。
基因型鉴定也能够帮助种植者选择适合当地生长条件的优良品种，提高农作物的产量和质量。
二、基因型鉴定的意义1. 为农作物品种改良提供科学依据。
通过基因型鉴定，科研人员可以快速、准确地了解农作物种质资源的遗传特性，为新品种的选育和育种工作提供科学依据。
2. 促进农作物遗传资源的保护和利用。
基因型鉴定可以帮助科研人员对农作物遗传资源进行评估和分类，为保护和利用农作物遗传资源提供科学依据。
3. 为农作物种植者提供优良品种选择依据。
种植者可以通过基因型鉴定了解不同农作物品种的适应性和抗逆性，选择适合当地生长条件的优良品种，提高农作物的产量和质量。
三、基因型鉴定的技术方法1. 分子标记技术。
分子标记技术是一种通过检测生物体的DNA序列差异进行鉴定的技术，包括PCR、RFLP、SSR、SNP等多种方法。
分子标记技术具有高度的敏感性、特异性和重复性，能够快速、准确地对农作物的基因型进行鉴定。
2. 基因芯片技术。
基因芯片技术是一种通过将多个基因探针固定在芯片表面，检测样品中的基因表达水平的技术。
基因芯片技术能够对农作物的基因型进行高通量、高效率的鉴定，为种质资源的利用和品种改良提供了新的途径。
3. 基因组测序技术。
基因组测序技术是一种通过对农作物DNA序列进行测序和分析，了解农作物基因型的技术。
随着基因组测序技术的不断发展，其在农作物种质资源基因型鉴定中的应用也越来越广泛。
赛业讲座：小鼠基因型鉴定的策略及常见问题
小鼠基因型鉴定一直是实验室动物模型研究中关键的一环，准确鉴定小鼠的基因型对于实验结果的解释和数据分析至关重要。
在进行小鼠基因型鉴定过程中，研究人员常常会遇到一些常见问题。
本次讲座将着重介绍小鼠基因型鉴定的策略及常见问题，帮助研究人员更好地理解和应对相关挑战。
一、小鼠基因型鉴定的策略1. 样本收集与处理在进行小鼠基因型鉴定前，首先需要收集小鼠组织样本，常见的样本来源包括尾部组织、血液、胚胎等。
收集样本后，需要进行相应的处理，如提取DNA等。
2. PCR扩增PCR扩增是鉴定小鼠基因型的关键步骤，通过PCR扩增可获得特定基因片段的DNA序列。
在进行PCR扩增时，需要设计合适的引物，并控制好反应条件和参数，以确保扩增的准确性和稳定性。
3. 凝胶电泳PCR扩增后的产物通常需要进行凝胶电泳分析，以确定所需的基因型。
凝胶电泳可以直观地呈现PCR产物的大小和纯度，帮助研究人员判断基因型。
4. DNA测序在一些情况下，为了确认基因型或确定具体的基因突变，研究人员还需要对PCR产物进行DNA测序分析。
以上是小鼠基因型鉴定的一般策略和步骤，下面将介绍在实际操作中可能遇到的一些常见问题。
二、常见问题及解决方法1. 样本处理不当导致DNA质量不佳在收集和处理小鼠样本时，如果操作不当，可能导致DNA污染或降解，影响后续的PCR扩增和凝胶电泳结果。
解决方法包括严格控制样本采集和处理的操作规范，使用适当的DNA提取试剂盒等。
2. PCR扩增失败PCR扩增失败可能是由于引物设计不当、反应条件选择不当或PCR反应体系存在问题等原因造成的。
解决方法包括重新设计和合成合适的引物，优化PCR反应条件和体系，以确保扩增成功。
3. 凝胶电泳结果不明确在进行凝胶电泳分析时，有时会出现PCR产物大小不明确或凝胶电泳图谱不清晰等情况，这可能是由于电泳条件不当或PCR产物纯度较低所致。
解决方法包括优化电泳条件和PCR产物的纯化步骤，以获得清晰的凝胶电泳结果。
基因型鉴定的方法
基因型鉴定的方法基因型鉴定听起来很专业呢，但其实也有不少有趣的办法哦。
一种常见的方法是PCR（聚合酶链式反应）。
这就像是给基因做一个超级放大。
想象一下，基因就像藏在一个超级大仓库里的小宝贝，PCR就能把这个小宝贝找出来，还把它复制好多好多份，这样就容易观察和分析啦。
通过设计特定的引物，就像给基因宝贝定制了一个专属的小钩子，只有目标基因才会被这个小钩子钩住，然后被大量复制。
这样我们就能知道这个基因是不是我们想要找的那种基因型啦。
还有基因测序呢。
这就好比给基因拍个超级详细的照片，把基因里的每一个“小零件”都看个清楚。
现在的基因测序技术可发达啦，就像有个超级精密的相机，能把基因的碱基排列顺序准确地记录下来。
然后我们根据这个顺序，就能确定基因型到底是什么样的啦。
不过这个方法可能有点小贵，就像买了个超级高级的限量版包包一样。
另外，还有一种叫限制性片段长度多态性（RFLP）的方法。
这就像是给基因玩个小拼图游戏。
不同的基因型呢，它们的基因片段就像拼图块不一样。
我们用一些特殊的酶把基因切成不同的小片段，就像把拼图打散。
然后根据这些小片段的长度和数量的不同，就能区分不同的基因型啦。
这有点像看拼图碎片的形状和数量来判断是哪一种拼图呢。
还有一种基于DNA杂交的方法。
把我们要检测的DNA和已知的DNA探针放在一起，如果它们能完美地结合，就像两个小磁铁紧紧吸在一起，那就说明是我们想要的基因型啦。
这就像是在找基因的小搭档，找到了合适的搭档，就确定了基因型。
基因型鉴定的这些方法各有各的妙处，就像不同的魔法工具，帮助我们在基因的神秘世界里探索，找到我们想要了解的基因型。
不管是哪种方法，都是科学家们探索基因奥秘的得力助手呢。
基因敲除小鼠基因型鉴定--鼠尾血压测量实验前准备2017.2.6
鼠尾基因型鉴定及血压测量前需要准备：1、耳钉（对每一只鼠进行标号）需要购买，耳钉上有编号便于对鼠进行标记；2、我们还需要四个笼位对鼠进行分笼；3、目前第一代小鼠（最早一批有8只到2017.2.11有8周龄）陆续可以进行鉴定，所以我们可以先暂时不让原代雌雄鼠进行交配；4、鼠尾基因型鉴定时需要鼠尾裂解液需要购买，剪鼠尾的剪刀需要购买。
耳钉标、手术剪、饭盒、裂解液试剂盒已购买（2017.2.6）GALNT4基因敲除小鼠子代基因型鉴定1、整理好基因型鉴定方法2、鼠尾血压测定方法。
间接法，即尾动脉容积法：也就是常说的尾压法（Tail-cuff法）。
将传感器套在老鼠尾部，通过充气、放气对尾动脉加压和释压的同时监测血流信号，得出血压值。
原理类似于袖带测压法此方法简单无创，但是测量前要对小鼠加温加压，易引起小鼠燥烦不安，导致血压反射性增高，因此需要在正式实验前训练小鼠3天左右使其适应这一应激状态。
优点：①无创，不需手术，需要测量的时候，把老鼠固定在特定装置里，套上传感器，3分钟就出结果。
尤其适用于需要重复测量的情况。
②相对于直接测量法，成本低，而且操作起来容易。
不足：①测量的是某个时间点的血压，不能得到连续的血压曲线，无法监测血压微小的变化②舒张压的准确度有待商榷。
有文献报道，将间接法和直接法比较，74%的舒张压误差大于5mmHg。
注意了，所有的间接法都有这个问题，跟设备无关。
对舒张压准确度要求非常高的话，请选用直接法。
鼠尾基因型鉴定Protocol1、用耳钉标对P1代每一只小鼠进行区分标记1、高压手术剪、饭盒，耳钉标，手术盘，实验前一天或半天拿到动物房紫外消毒2、准备1.5ml 离心管16个（每只鼠两个离心管，可以多准备几个），离心管置于冰上3、剪鼠尾cm置于冰上的离心管中，如不能及时开始鼠尾的裂解，可以将放入-20℃冰箱中4、匀浆机将鼠尾组织绞碎（四楼有匀浆机），然后加入ul鼠尾裂解液（看试剂盒说明），封口膜封好5、放入55℃的（杂交炉中旋转），孵育过夜6、取出，室温静置10-15min，使样品温度降至室温，将离心管颠倒混匀后13000rpm，室温离心15min，吸取400ul上清至另一新的离心管中7、加入等体积的异丙醇，立即温和的上下翻转，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀，室温下12000rpm离心10min，弃上清8、往离心管中加700ul冰冷的75%乙醇漂洗温和的上下翻转，12000rpm，室温离心5min，将上清液全部吸除9、在超净台中风干约3-5min10、用50-100ul GIBCO纯水（根据DNA量确定用水量）重悬，55℃溶解2h11、检测DNA的浓度，取100-200ng的DNA用作PCR模板。
基因分析知识点归纳总结
基因分析知识点归纳总结一、基因分析的技术原理1.1基因分析的样本采集和DNA提取基因分析的样本可以包括血液、唾液、组织等，其中血液是应用最为广泛的样本类型。
DNA提取是基因分析的第一步，通过将样本中的细胞进行裂解并提取其中的DNA分子，可以得到用于后续分析的纯净DNA。
1.2基因分析的PCR扩增PCR（聚合酶链式反应）是一种通过酶的作用在体外扩增DNA片段的技术。
在基因分析中，PCR可以将目标基因的特定片段扩增成百万甚至亿级别，为后续的测序和分析提供充足的原始材料。
1.3基因分析的基因测序基因测序是基因分析的核心技术之一，它可以揭示样本DNA中的碱基序列信息。
随着测序技术的不断进步，目前常用的测序方法包括Sanger测序、测序和下一代测序。
这些测序技术的不断成熟和普及，使得基因分析能够更精准地解读基因组信息。
1.4基因分析的数据分析基因分析产生的测序数据需要进行大量的处理和分析，包括数据清洗、比对、变异分析等步骤。
生物信息学工具和数据库的不断发展和更新，使得基因分析的数据分析变得更为高效和精准。
二、基因分析在医学中的应用2.1基因分析与遗传疾病基因分析可以帮助诊断、预测和预防遗传疾病。
基因分析可以发现患有遗传疾病的个体的致病基因变异，并为早期干预和治疗提供依据。
此外，基因分析还可以帮助了解遗传性疾病的发病机制，加深对遗传疾病的认识。
2.2基因分析与癌症基因分析在癌症预防、诊断和治疗中扮演着重要的角色。
通过分析肿瘤组织的基因组信息，可以了解癌症的驱动基因和致病机制，为个体化的治疗和精准医学提供依据。
2.3基因分析与药物反应个体对药物的反应受其基因型的影响。
基因分析可以帮助了解个体对药物的代谢和药效的差异，从而实现个体化的用药方案。
2.4基因分析与遗传咨询基因分析在遗传咨询中有广泛的应用，可以帮助家庭或个体了解携带遗传病风险、遗传疾病的遗传模式以及遗传咨询的相关建议。
2.5基因分析与个体健康管理基因分析可以帮助个体了解自己的遗传特征，从而进行个体化的健康管理。
基因型鉴定
基因型鉴定PCRprotocol1.剪取2mm趾甲或尾端放入离心管中。
2.裂解鼠尾a.鼠尾裂解法：每个样品中加入200μl鼠尾裂解液+5μl蛋白酶，56℃过夜，实验前98℃金属浴10min，立即放入冰盒中冷却。
（鼠尾裂解液：0.5％SDS、0.1MNaCl、0.05MEDTA、0.01MTris.C1(pH8.0)）b.强碱裂解法：向样品中加入100μl50mMNaOH，96℃金属浴10min，在金属浴中冷却至40℃左右（增加裂解效率），然后自然冷却至室温；向裂解液中加入20μl1MTris(PH8.0)5mMEDTA后涡旋5sec，中和强碱。
3.WT和KO鼠PCR体系（20μl）Mix10μl（使用EasyTapPCRmix）R/FPrimer各0.4μlSample2μlddHO27.2μl注备：由于分样时损失，先配制2n+2管量的（Mix+ddHO2），均匀分为两份，分别加入n+1的R和F引物，在分配到8连管中（17.9μl/孔），然后加入样品。
或使用10μl反应体系，各种试剂使用量减半。
4.PCR反应程序Syt7（Public–SYT7）：变性：94℃2min变性：94退火：60Sty1（Sty1—genotyping）变性：95℃3min变性：95℃30sec退火：55℃30sec28个循延伸：72℃35sec72℃10min5.跑胶鉴定向TBST中加入1%琼脂糖，混匀后，在微波炉中加热约2min。
（大板需要配胶60ml，小板25ml）。
冷却后，加入EB（按1：10万加），混匀后倒胶，室温下冷却后，放入电泳槽中，点样，10μl/孔。
打开电泳仪电源，接好电极（红对红，黑对黑），电压设置约165V，跑胶15分钟左右。
在凝胶仪中照胶，鉴定基因型。
验证基因型最佳方法
验证基因型最佳方法验证基因型是一个重要的过程，它可以帮助确定一个人的遗传特征。
这些遗传特征可能包括疾病风险、药物敏感性和其他生物学特性。
本文将介绍一些常见的验证基因型的方法。
1. PCR聚合酶链式反应（PCR）是一种常见的验证基因型的方法。
PCR允许科学家从少量DNA 样本中复制特定的DNA序列，从而确定目标基因的特定变异。
PCR是一种有效和可靠的方法，因为它可以检测到单个基因变异，并且可以在较短的时间内进行。
2. 胶体滤泡法胶体滤泡法是一种基于生物技术的验证基因型的方法，它可以用于检测单个核苷酸多态性（SNP）或小片段的DNA。
该方法使用具有特殊标记的探针检测目标基因中的变异。
这些标记允许诊断带有目标变异的等位基因。
胶体滤泡法速度较快且成本较低，但需要专业知识和特殊设备进行。
3. 基因芯片基因芯片是一种高通量验证基因型的方法。
它可以同时检测数千甚至数百万个SNP和其他基因变异。
基因芯片使用微电子阵列检测DNA序列的变异，并且可以帮助科学家分析大量数据来识别与特定特征（如疾病风险）相关的基因。
基因芯片需要专门的设备，但可以在短时间内实现大规模分析。
4. 测序技术新一代测序技术（NGS）已成为验证基因型的有力工具。
NGS可以检测单个核苷酸变异（SNP）以及其他大小的DNA变异，可以在较短的时间内分析大量数据。
使用NGS技术，科学家可以确定基因组DNA序列中的所有变异，并分析这些变异与各种生物学特性之间的关系。
5. 生物芯片在验证基因型时，最佳方法将取决于具体实验的目的和可用资源。
不同的方法将具有不同的优点和局限性。
科学家应该选择适合其实验需求的最佳方法，并在分析前认真优化实验过程。
种质基因型鉴定
种质基因型鉴定1. 引言种质基因型鉴定是一项重要的遗传学研究技术，用于确定生物体的基因组成。
通过对种质材料进行基因型鉴定，可以帮助我们了解物种的遗传多样性和遗传结构，为种质资源的保护、利用和改良提供科学依据。
本文将介绍种质基因型鉴定的原理、方法和应用。
2. 基因型鉴定的原理基因型是指个体在基因位点上的基因组合，包括等位基因的类型和数量。
基因型鉴定的原理是通过分析个体在特定基因位点上的等位基因，确定其基因型。
常用的基因型鉴定方法包括DNA序列分析、PCR扩增和测序、SNP分析等。
3. 基因型鉴定的方法3.1 DNA序列分析DNA序列分析是一种直接测定DNA序列的方法。
通过对目标基因的PCR扩增，得到DNA片段后，使用测序技术对其进行测序。
通过比对测序结果和已知的DNA序列，可以确定个体的基因型。
3.2 PCR扩增和测序PCR扩增和测序是一种常用的基因型鉴定方法。
首先，通过PCR扩增特定基因的片段，然后将扩增产物进行测序。
通过比对测序结果和已知的DNA序列，可以确定个体的基因型。
3.3 SNP分析SNP是指单核苷酸多态性，是个体间常见的遗传变异形式。
SNP分析是一种通过检测个体在特定基因位点上的SNP类型，来确定其基因型的方法。
常用的SNP分析方法包括基于PCR的RFLP分析、TaqMan SNP Genotyping Assay等。
4. 基因型鉴定的应用4.1 种质资源的保护和利用种质基因型鉴定可以帮助我们了解物种的遗传多样性和遗传结构，为种质资源的保护和利用提供科学依据。
通过对不同种质资源的基因型鉴定，可以确定其遗传多样性水平，为物种的保护和遗传改良提供重要信息。
4.2 品种鉴定和纯度检测基因型鉴定可以用于品种鉴定和纯度检测。
通过对不同品种的基因型进行比对，可以确定品种的身份和纯度。
这对于农作物种子生产和贸易具有重要意义，可以保证种子的品质和市场竞争力。
4.3 遗传疾病的诊断和预测基因型鉴定在遗传疾病的诊断和预测方面也有广泛的应用。
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基因型鉴定p r o t o c o l
一、基因型鉴定protocol
1、剪尾取样及编号
从鼠房取出需要基因型鉴定的小鼠（由于小鼠一般在21天时已经断奶，故小鼠剪尾的时间应不小于三周），查看鼠箱上的基因信息，根据基因信息从编号笔记本上找出相应编号，续编。
①在EP管上预先写明小鼠编号
②从鼠箱中取出老鼠（戴上手套后用手抓住小鼠尾部向上提出，提住鼠尾不放，将小鼠慢慢放至实验台上，此时小鼠会向前爬动，用另一只手从背侧捏住小鼠背部皮肤，要注意捏的位置尽量靠近颈的上部，防止小鼠的头部扭动），从小鼠尾端用剪刀剪下3mm左右鼠尾（不可超过5mm,会使小鼠受伤），将剪下的样品放入对应编号的EP管内，用电烙铁烫及小鼠尾部剪口处，一定要使伤口烫合，防止其流血不止。
然后对小鼠进行鼠耳编号。
（注意：编号时要记录小鼠的性别）
2、DNA提取
①向每只含样品的EP管内加入400微升消化液（含蛋白酶K），将其置于混合仪上消化，55℃（此温度下DNA在水中的溶解度最高，即最为稳定），3h。
②向消化后的样品中加入400微升异丙醇，反复颠倒，一般可见絮状分层（个别样品看不到）。
之后放至离心机13000r，10min。
③去上清，加入750微升70%乙醇，13000r，10min。
重复此操作一次。
④去上清，将EP管倒置于吸水纸上或置于空气中晾干。
(最好晾干，倒置在吸水纸上有可能会使一部分DNA流失)
3、PCR(例，三转小鼠，做三次PCR，每次PCR针对的基因不同，所用引物不同，每次PCR做样品数+3（空对照：不加模板；正对照：突变型小鼠的样品；负对照：野生型小鼠的样品）个体系)。
单个体系如下：
ddW 18
10*buffer （含Mg2+） 2.5 dNTP(2.5mM) 2.5 Primer R(20µM) 0.25 Primer F(20µM) 0.25 Taq酶 0.5 Template 1
程序：
94℃预热 ~ 4min
94℃变性 ~ 1min
61℃ 退火 ~ 1min 30个循环
72℃ 延伸 ~ 1min
72℃ ~ 7min
4℃ ~ hold
注意盖子盖紧。
4、琼脂糖电泳
①配胶，根据规格来配，如80ml规格，称量0.8000g琼脂糖，加入80ml 0.5*TBE buffer。
加热至沸腾
（80ml~90s;40ml~90s;20ml~30s）,待冷却至60℃时加0.001%的EB.倒至插有梳子的胶板上，待用。
②上样
6*loading buffer ~ 5µl
样品或对照 ~ 25µl
③电泳，140V
④凝胶成像分析系统，将结果填入信息卡，并在卡上注明日期。