SDS-PAGE所有详细试剂配方
SDS-PAGE配制方法
10%（W/V, g/ml）过硫酸铵（APs）的配制：（100 ml）1. 称取10g过硫酸铵；2. 加入100 ml的去离子水，将固体粉末彻底溶解；3. 贮存于4℃。
注意：10%过硫酸铵最好现配现用，配好的溶液在4℃保存可使用2周左右，过期会失去催化效果。
5×Tris-Glycine电泳缓冲液的配制：（1 L）1. 称取Tris粉末15.1 g、Glycine（甘氨酸）94 g、SDS 5.0 g；2. 加入约800 ml的去离子水，搅拌溶解；3. 加去离子水定容至1 L，室温保存。
注意：加水时应让水延着壁缓缓流下，以避免由于SDS的原因产生很多泡沫。
5×SDS-PAGE Loading Buffer的配制（方案一）：（5 ml）（本方案摘自Takara网站）组分：Tris-HCl pH6.8（250 mM）；SDS （10%）；溴酚兰（0.5%）；甘油（5 0%）；β-巯基乙醇（5%）配制过程：1. 量取1M Tris-HCl （pH6.8） 1.25 ml；甘油2.5 ml；称取SDS固体粉末0.5 g；溴酚兰25 mg；2. 加入去离子水溶解后定容至5 ml；3. 小份（500 μl）分装后，于室温保存。
4. 使用前将25 μl的β-巯基乙醇加入到每小份中去。
5. 加入β-巯基乙醇的上样Buffer可以在室温下保存一个月左右。
5×SDS-PAGE Loading Buffer的配制（方案二）：（10 ml）（本方案摘自《蛋白质技术手册》汪家政、范明）组分：Tris-HCl pH6.8（60 mM）；SDS （2%）；溴酚兰（0.1%）；甘油（25%）；β-巯基乙醇（14.4 mM）配制过程：1. 量取1M Tris-HCl （pH6.8） 0.6 ml；50%的甘油5 ml；10%的SDS溶液2 m l；1%的溴酚兰1 ml；2. 加入去离子水定容至10 ml；3. 分装；4. 在4℃可保存数周，-20℃可保存数月之久。
SDS-PAGE 配方
Minigels•migration buffer 500ml12.14 mM Tris 100 ml 5 x stock134.2 mM Glycin0.1% SDS 5 ml 10% SDS1 mM EDTA 1 ml 0.5 M EDTA pH 8394 ml Millipore water• 5 X stock migration buffer 1l60.7 mM Tris 15g Tris671 mM Glycin 72g GlycinMillipore water to 1 Liter•2xSDS buffer 4 ml125 mM Tris-HCl pH 6.8 1ml 0.5 M Tris-HCl pH 6.820% Glycerol 0.8 ml 100% Glycerol4% SDS 1.6 ml 10% SDS10% •-Mercaptoethanol 0.4 ml •-Mercaptoethanol0.005% Bromphenolblau 0.2 ml 0.1% Bromphenolblau•5xSDS buffer 4 ml225 mM Tris-HCl pH 6.8 0.45 ml 2 M Tris-HCl pH 6.8 50% Glycerol 1.55 ml 100% Glycerol5% SDS 1 ml 20% SDS10% •-Mercaptoethanol 1 ml •-MercaptoethanolSpatule tip bromphenol blueSolutions (calculated for 4 minigels)•separating gel (10%) 20ml9.6ml Millipore Water |375mM Tris-HCl pH 8.8 5ml 1.5M Tris-HCl pH 8.8 |0.1% SDS200µl 10% SDS |10% Acrylamid 5 ml 40% Acrylamid- degase -1 mg/ml ammonium persulfate 200µl APS (100mg/ml)0.04% TEMED 8µl TEMED•separating gel (11%) 20ml9.1 ml Millipore Water |375mM Tris-HCl pH 8.8 5ml 1.5M Tris-HCl pH 8.8 |0.1% SDS200µl 10% SDS |11% Acrylamid 5.5 ml 40% Acrylamid- degase -1mg/ml ammonium persulfate 200µl APS (100mg/ml)0.04% TEMED 8µl TEMED•separating gel (12%) 20ml8.6 ml Millipore Water |375mM Tris-HCl pH 8.8 5 ml 1.5M Tris-HCl pH 8.8 |0.1% SDS200µl 10% SDS |12% Acrylamid 6 ml 40% Acrylamid- degase -1mg/ml ammonium persulfate 200µl APS (100mg/ml)0.04% TEMED 8µl TEMED•separating gel (12.5 %) 20ml8.35ml Millipore Water |375mM Tris-HCl pH 8.8 5ml 1.5M Tris-HCl pH 8.8 |0.1% SDS200µl 10% SDS |12.5% Acrylamid 6.25 ml 40% Acrylamid- degase -1mg/ml ammonium persulfate 200µl APS (100mg/ml)0.04% TEMED 8µl TEMED•separating gel (15%) 20ml7.1 ml Millipore Water |375mM Tris-HCl pH 8.8 5ml 1.5M Tris-HCl pH 8.8 |0.1% SDS200µl 10% SDS |15% Acrylamid 7.5 ml 40% Acrylamid- degase -1mg/ml ammonium persulfate 200µl APS (100mg/ml)0.04% TEMED 8µl TEMED•stacking gel (4%) 10ml6.3ml Millipore Water |125mM Tris-HCl pH 6.8 2.5ml 0.5M Tris-HCl pH 6.8 |0.1% SDS 100µl 10% SDS |4% Acrylamid 1ml 40% Acrylamid- degase -1mg/ml ammonium persulfate 100µl APS (100µg/ml)0.1% TEMED 10µl TEMED•Tricine separating gel (16%) 10ml1 M Tris-HCl pH 8.45 3.35ml 3M Tris-HCl pH 8.450.1% SDS100µl 10% SDS16% Acrylamid 4 ml 40% Acrylamid10% Glycerol 1 ml glycerol1.5 ml H2O0.5 mg/ml ammonium persulfate 50µl APS (100mg/ml)0.05 % TEMED 5µl TEMED0Western blot buffer2L:400ml EtOH12.12 g Tris28.83 g Glycine1.6 L H2OCoomassie Stain Solution:1L:1.6 g CBB R-250400 ml EtOH80 ml Acetic acidDestain Solution :10L :2 L EtOH0.7 L Acetic acid7.3 L H2O•2xSDS loading buffer 4 ml125 mM Tris-HCl pH 6.8 1ml 0.5 M Tris-HCl pH 6.820% Glycerol 0.8 ml 100% Glycerol (甘油)4% SDS 1.6 ml 10% SDS10% •-Mercaptoethanol 0.4 ml •-Mercaptoethanol（巯基乙醇）0.005% Bromphenolblau 0.2 ml 0.1% Bromphenolblau（溴酚蓝）。
SDS-PAGE试剂配方
SDS-PAGE试剂配方SDS-PAGE电泳所用溶液:30 %聚丙烯酰胺溶液 (100 mL)丙烯酰胺 (Arc) 29 gN,N’-亚甲双丙烯酰胺 (Bis) 1 g用双蒸水定容至100mL，过滤备用，4?存放丙稀酰胺29.2g，N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g，加入去离子水定容至100mL，pH 值不能超过7.0，过滤于棕色玻璃瓶中4?贮存。
5×Tris-甘氨酸缓冲液 (1 L)Tris碱 15.1 g甘氨酸(电泳级) 94 g10 %SDS 50 mL使用时稀释5倍使用2×SDS凝胶加样缓冲液(10mL)0.5 mol/L Tris-Cl (pH 6.8) 2 mL10,(W/V)SDS 4 mL甘油 2 mLβ-巯基乙醇 1.0 mL(DTT(二硫苏糖醇) 0.31g)溴酚兰 0.02g双蒸水 0.5 mL室温存放备用考马斯亮蓝染色液考马斯亮蓝R-250 (G-250) 1.0 g甲醇 450 mL冰醋酸 100 mLddHO 450 mL 20.2g考马斯亮蓝R250+84mL 95,乙醇+20mL冰醋酸，定容至200mL，过滤备用考马斯亮蓝脱色液(甲醇脱色液效果好，但有毒性)甲醇 100 mL冰醋酸 100 mLddHO 800 mL 2医用酒精:冰醋酸:水=4.5:0.5:5(V:V:V)SDS-PAGE所需溶液:A液——30,丙稀酰胺(W/V):丙稀酰胺29.2g，N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g，加入去离子水定容至100mL，pH值不能超过7.0，过滤于棕色玻璃瓶中4?贮存。
B液——1.5mol/L Tris?HCl，pH8.8:18.17g(9.09g)Tirs碱，溶于80mL(40mL)去离子水中，加入约3mL(1.5mL)以上的浓盐酸调节pH值至8.8，定容至100mL(50mL)。
C液——1.5mol/L Tris?HCl，pH6.8:12.1g(6.05g)Tirs碱，溶于80mL(40mL)去离子水中，加入约7mL(3.5mL)以上的浓盐酸调节pH值至6.8，定容至100mL(50mL)。
sdspage电泳试剂配制
SDS-PAGE电泳试剂1)30%储备胶溶液：丙烯酰胺（Acr）29.0g，亚甲基双丙烯酰（Bis）1.0g，混匀后加ddH2O，37O C溶解,定容至100 mL,棕色瓶存于4O C；2) 1.5M Tris-HCl(pH 8.8)：Tris 18.17g加ddH2O溶解,浓盐酸调pH至8.0,定容至100mL；3) 1M Tris-HCl(pH 6.8)：Tris 12.11g加ddH2O溶解,浓盐酸调pH至6.8,定容至100 mL；4) 4⨯分离胶缓冲液：0.4gSDS溶于1.5M Tris-HCl(pH 8.8)，定容至100mL；5) 4⨯浓缩胶缓冲液：0.4gSDS溶于1M Tris-HCl(pH 6.8)，定容至100mL；6) 10⨯电泳缓冲液(pH 8.3)：Tris 3.029g，甘氨酸14.415g，SDS 1g加ddH2O 溶解,定容至100mL；7) 10%过硫酸铵（Aps,现配）：1g AP加ddH2O至10mL；8) 2⨯SDS电泳上样缓冲液：1M Tris-HCl(pH 6.8)2.5mL，β-巯基乙醇1.0mL，SDS 0.6g，甘油2.0 mL，0.1%溴酚兰1.0 mL，ddH2O 3.5mL；9) 考马斯亮兰染色液：考马斯亮兰R2501.25g，甲醇225 mL，冰醋酸50 mL，ddH2O 225mL；10) 脱色液: 甲醇、冰醋酸、ddH2O以2∶1∶7配制而成；11) 分离胶(12.5%): ddH2O 4mL，30%储备胶5 mL，4⨯分离胶缓冲液3mL, 10% Aps 0.1mL(现配)，TEMED(N,N,N’,N’-四甲基乙二胺)10μL；12) 浓缩胶（5％）：ddH2O 2.65mL，30%储备胶0.85mL，4⨯浓缩胶缓冲液1.25mL，10%Aps 50μL，TEMED 5μL。
Tricine（三羟甲基氨基甘氨酸）- SDS - PAGE蛋白质电泳1 Tricine - SDS - PAGE蛋白质电泳溶液准备1）正极缓冲液(10 ×)：14g Tris 溶于400mL 重蒸水,用1. 0M HCl 调至pH8. 9 ,定容至500mL。
SDSPAGE所有详细试剂配方精修订
SDSPAGE所有详细试■ 剂配方SANY 标准化小组#QS8QHH-HHGX8Q8-GNHHJ8-HHMHGN# 称S181.7gTrisfi«溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解.加浓HCL调节所需耍的pH值=8・&将洛液定容至ILt 高温高压灭菌后.室温保存。
(1. 5mmol/LTris"HCL(pH8. 8) : 18. 15gTris 和48mllmol/LHCL 混合.加水稀释到100ml 终体积。
过滤后4七保存。
)【保存条件】室温保存【注意事项】应使溶液冷却至室温后再调定pH值，I大I为Tris溶液的pH值随温度的变化差界很大.温度每升商1°C,溶液称取2g高纯度的SDS迓于100、200ml烧杯中，加入约16ml的去离子水.689加热溶解.滴加浓盐酸调节PH 至7・2・定容至20ml后，室温保存【保存条件】室温保存【注意事项】对人体有害•请注总:防护。
io%过硫酸鞍溶液------ io%(w G AP称取O・lg过硫酸钱宜于l・5ml离心管•加ImL去离子水吹打溶解.JC保存【保存条件】49保存【注意事项】10%过疏酸钱溶液在49保存时•可使用2周左右•超过期限会失去催化作用5XTris-酸电泳缓冲液------------ oXTris-Clycinebuffer (SDS-PAGE 电泳缓冲液)【组分浓度】称取15. IgTris, 91. 0g甘氮酸(glycine) , 5. OgSDS,用800ml蒸馅水或去离子水溶解.充分搅拌溶解•定容至1000ml,室温保存。
得0・125mol/LTris7 25mol/L甘氨酸电极缓冲液。
临用前稀释5倍。
【保存条件】室温保存•两年有效。
【注意事项】配制好的电泳液使用时间不宜超过两周。
电泳缓冲液可以回收.回收后可再使用「2次.但为了取得最佳的电泳效果,应使用新电泳液°0. 25MTris-HCL (pH6. 8)：10%(W/V)SDS：0. 5%(W/V)BPB(^酚蓝):50%(V/V)廿油：5%(W/V) 0-筑基乙醇(2-ME)【配制方法】fit取1.25mLlMTris-HCL (pH6・8) , 0・5gSDS, 25mgBPB・2・5mL甘油,宜于lOmL塑料离心管中■加去离子水溶解后•定容至5mL,小份(0・5mL/份)分装，于室温保存。
SDS-PAGE分离胶-浓缩胶配方
SDS-PAGE1、SDS-PAGE :聚丙烯酰胺凝胶电泳2、Acr :丙烯酰胺；配胶时用30%Acr （质量比Acr ：Bis=29:1）3、Bis ：甲叉双丙烯酰胺4、DDW :超轻水5、SDS ：十二烷基硫酸/磺酸钠，阴离子去污剂（配胶时用10%）6、APS ：过硫酸铵NH 4S 2O 4配胶时用10%7、TEMED :四甲基乙二胺，促凝剂8、Tris-Hcl ：3羟基氨基甲烷盐酸缓冲液，配胶时（分离胶ph=8.8,浓缩胶ph=6.8） 9、DTT ：二硫苏糖醇，DTT 也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。
10、IMA ：碘乙酰胺，碘代乙酰胺用于有机合成，在蛋白组学中组氨酸和半胱氨酸的烷基化试剂，用于多肽测序以及酶抑制剂等，蛋白组学级试剂。
CH>2ICONH>2,是和碘乙酸一样，可通过下列反应不可逆地抑制SH 酶类的物质。
5酣TO mlmt 20ml30祝4Qmd50ml6%Bd叫匸2.6 5.3 7.9 10.6 132 15.9 21.2 26.5 30%Atiylamde10 2.0 3.0 4.0 50 60 ao 10.0 15M Trls-HCl (pHS.Sl 1.3 2.5 33 5,0 6.3 7.5 100 125 lO^iSDSC05 01 015 0.2 025 03 04 0.5 10%过谦酸霰 CQ5 01 015 12 025 03 04 05 TEMED CO3400080G123.0160020C240032 004 8%姑2.3 4S S.93.3 11.5 13.S 18.5 232 30%Acrylamde 13 2.7 40 5.3 S.7 a.o 107 13^ 15M Trls-HCII'pHS S'I 1.3 2.5 38 5.0 63 75 100 1£.5 ItPiSDSC.05 0.1 0.16 X 0.25 0.3 0.4 0.5 彳贰过砺酸鞍COS QJ 0.S5 0.2 Q25 03 04 05 TEMEO C00300060W9D.01200t50G18 0024003 io^GelHiO19 4,0 5.9 7.9 &9 11S 159 19S Acryiamde 17 33 6.0 S.7 a.a too 13J 167 15M Trls-HCIipHsB) 13 25 3.8 5.0 63 7.5 W.O 1?5 I^SDSC.05 0.1 0.15 3.2 0.25 0.3 0.4 0.5 1贰■过硫股牧 C0501 0.15 £1.2 025 03 04 05 TEMED C(X)20034 0006 3.0C® 0.01 0012 0016 002 12%GalH J O16 33 49 5.e &2 $= 132 165 30陽3.0 40 SO B.O 100 12Q 160 20£l 1.5M Tris-HCI(pHS 印 13 25 30 5.0 6-3 75 100 1^5It^iSDSC.05 0.1 0.36 J 总 0.25 0.3 0.4 0.5 过硫鞭较C05 0.1 0.15 tl.2 025 03 Q4 05 TEMED CO320004 ooosO.OCf i0.01 0C12 0016 002 15%*l甌11 23 34 4-a 6 37 6.& 9? 11.5 30%A trylamde 2S SO 7.S 1U.0 125 150 2Q0 25a 15Ml Tris-HCIipHs 印 13 2.5 3.8 5.0 S3 7.5 100 125 10%SDSC.05 0.1 0.15 3.2 0.25 0.3 0.4 0.5 过盘盤钮COS 01 015 0.2 025 0.3 04 05 TEMEDCO^0004OOOSO.OCfl0010C12001E0.021）根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度，再按照下面的表格配制SDS-PAGE 的分离胶（即下层胶）：Sap QFS f/cD时爭尸。
sds-page 试剂配制
SDS-PAGE 试剂配制
凝胶脱色染色方法：
溶液1：无水乙醇250mL，冰醋酸50mL，水200mL；
溶液2：无水乙醇50mL，冰醋酸37.5mL，水437.5mL；
溶液3：0.25g考马斯亮蓝R-250 溶于100mL 95%乙醇中，滤纸过滤，待用。
电泳结束，取出胶放在胶盒中，加约50mL溶液1，微波炉加热1min，摇床摇10-20nin；倒掉溶液1，加入溶液2，再加1mL溶液3，混匀，微波炉加热1min，摇床摇，直至条带染色清晰为止。
上样缓冲液（5×）：（5×loading buffer）有
10%（W/V,g/ml）过硫酸铵（APs）的配制：（1ml）
1.称取0.1g过硫酸铵；
2.加入1ml的去离子水，将固体粉末彻底溶解；
3.贮存于4℃。
注意：10%过硫酸铵最好现配现用，配好的溶液在4℃保存可使用2周左右，过期会失去催化效果。
5×Tris-Glycine电泳缓冲液的配制：（1L）
1.称取Tris粉末15.1g、Glycine（甘氨酸）94g、SDS5.0g；
2.加入约800ml的去离子水，搅拌溶解；
3.加去离子水定容至1L，室温保存。
注意：加水时应让水延着壁缓缓流下，以避免由于SDS的原因产生很多泡沫。
SDS-PAGE原理、试剂配制和注意事项
SDS是阴离子去污剂，能断裂分子内和分子间的氢键，破坏蛋白分子的二、三级结构。
作用有四：去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠。
而强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇能使绊胱氨酸残基间的二硫键断裂。
在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS 胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。
SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统，浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶，凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HC1。
分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶，凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HC1。
电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液。
2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性，这是样品浓缩的主要因素。
当样品液和浓缩胶选TRIS/HCL缓冲液，电极液选TRIS/甘氨酸。
电泳开始后，HCL解离成氯离子，甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。
蛋白质带负电荷，因此一起向正极移动，其中氯离子最快，甘氨酸根离子最慢，蛋白居中。
电泳开始时氯离子泳动率最大，超过蛋白，因此在后面形成低电导区，而电场强度与低电导区成反比，因而产生较高的电场强度，使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动，形成以稳定的界面，使蛋白聚集在移动界面附近，浓缩成一中间层。
过硫酸铵（AP）为催化剂，四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂。
在聚合过程中，TEMED 催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。
当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。
sds-page配方
SDS-PAGE 电泳8%分离胶5ml 7.5ml 10mlH2O 2300（微升，下面都一样）3450 460030%Acrylamide 1300 2025 27001.5M Tris-HCl (Ph8.8) 1300 1875 250010%SDS 50 75 10010%过硫酸铵50 75 100TEMED 3 4.5 612%分离胶5ml 7.5ml 10mlH2O 1600 2475 330030%Acrylamide 2000 3000 40001.5M Tris-HCl (Ph8.8) 1300 1875 250010%SDS 50 75 10010%过硫酸铵50 75 100TEMED 2 3 4浓缩胶5ml 7.5mlH2O 1700 340030%Acrylamide 415 8301.5M Tris-HCl (Ph8.8) 315 63010%SDS 25 5010%过硫酸铵25 50TEMED 2.5 51.将以上溶液混合均匀，用1ml枪吹打几下2.现配分离胶，将配制好的胶慢慢打入，胶里不能有气泡。
3.分离胶加入到2/3处，再加入去离子水，压胶，保持分离胶水平4.待分离胶凝固后，将水倒出来，用滤纸吸干，差不多就可以~5.配制浓缩胶，插梳子（用蒸馏水洗干净）6加入电泳缓冲液，倒个一半左右？7点样的时候慢慢点，因为点样速度快了，容易冒出来8跑胶的时候，先用80V跑，等样品跑完浓缩胶，就换电压，换到120V得跑个2h左右吧~ （不用那么仔细，你配的胶你估摸着差不多就行）,跑完浓缩胶，蛋白和marker都是呈一条细线这时候你就可以换电压了~9跑完的胶，拿出来用蒸馏水冲几次，放入平皿，加染色液，能覆盖胶就行，摇7,8h，摇完了把染色液倒出来（可以回收，但是效果不怎么好），用蒸馏水冲几次，加入脱色液，再摇摇到你能看见条带，目的蛋白就可以~要是你闲时间太长，加染色液放微波炉，打个两三分钟，脱色的时候加脱色液放微波炉，打2,3分钟，据说这个方法也可以，但是效果不好，而且我没有试过，要不你试试？建议你买个SDS-PAGE的试剂盒吧，要不然配试剂得配个一天。
SDS-PAGE电泳试剂配制
SDS-PAGE电泳试剂1)30%贮备胶溶液：丙烯酰胺（ Acr）29.0g，亚甲基双丙烯酰（ Bis）1.0g，混匀后加 ddH2O，37OC溶解 ,定容至 100 mL,棕色瓶存于 4OC；2)1.5M Tris-HCl(pH：Tris 18.17g加 ddH2O 溶解 ,浓盐酸调 pH 至,定容至 100mL；3)1M Tris-HCl(pH：Tris 12.11g加ddH2O 溶解 ,浓盐酸调 pH 至,定容至 100 mL；4)4 分别胶缓冲液：溶于 1.5M Tris-HCl(pH，定容至 100mL；5)4浓缩胶缓冲液：溶于1M Tris-HCl(pH，定容至 100mL；6)10电泳缓冲液(pH：Tris 3.029g，甘氨酸14.415g，SDS 1g加ddH2O 溶解 ,定容至 100mL；7)10%过硫酸铵（ Aps,现配）： 1g AP加 ddH2O 至 10mL；8)2 SDS电泳上样缓冲液： 1M Tris-HCl(pH， -巯基乙醇， SDS 0.6g，甘油mL，%溴酚兰 mL，ddH2O；9)考 xxxx染色液：考 xxxxR2501.25g，甲醇 225 mL，冰醋酸 50 mL，ddH2O225mL；10)脱色液 :甲醇、冰醋酸、 ddH2O 以 2∶1∶7 配制而成；11)分别胶 %):ddH2O 4mL，30%贮备胶 5 mL，4 分别胶缓冲液 3mL, 10% Aps 现(配 )，TEMED(N,N,N’ -,N四’甲基乙二胺 )10 μL；12)浓缩胶（ 5％）： ddH2O，30%贮备胶， 4 浓缩胶缓冲液， 10%Aps 50μL，TEMED5μL。
Tricine（三羟甲基氨基甘氨酸） - SDS - PAGE蛋白质电泳1 Tricine - SDS - PAGE蛋白质电泳溶液准备1）正极缓冲液 (10 ×)：14g Tris溶于 400mL重蒸水 ,用 1. 0M HCl调至 pH8.9 , 定容至 500mL。
SDS-PAGE全部试剂配方
SDS-PAGE试剂配方30%凝胶贮液（150ml， 4℃保存）29.2% Acr：43.8g 0.8% Bis：1.2g将Acr完全溶解于120ml水中，再加入Bis使其完全溶解，加ddH2O定容至150ml，用滤纸过滤溶液，棕色玻璃瓶中4℃保存。
分离胶Buffer （1.5M Tris-HCl 250ml）Tris：45.4725g SDS：1g将Tris溶于200ml水中，在磁力搅拌器上不断搅动溶液使其完全溶解，用HCl调节pH 至8.8，此过程中加入HCl时浓度需逐渐降低，越接近目标pH越要小心防止pH调节过头。
加ddH2O定容至250ml，加入SDS（此时容易产生气泡，可用超声或抽气破碎气泡），抽滤或滤纸过滤，4℃保存。
浓缩胶Buffer （0.5M Tris-HCl 100ml）Tris：6.07g SDS：0.4g将Tris溶于80ml水中，后续步骤同分离胶Buffer，调节pH值至6.8（可配置200ml调pH后100ml用于添加SDS作浓缩胶Buffer，剩余100ml为Tris-HCl贮液）SDS裂解液（10ml）：0.5M Tris-HCl pH：6.8 2ml2%甘油2ml4%SDS 0.4g65mM DTT 100mg（使用时临时加入）ddH2O 6ml样品溶解液：（100ml）终浓度为50 mmol/L Tris﹒HClpH=6.8（总体积的20%=20ml），2% SDS=2g，0.1% 溴酚蓝=0.1g，10% 甘油=10ml，补ddH2O到100ml10％过硫酸铵：5g(0.5g)过硫酸铵，溶于50mL(5mL)去离子水中；现配现用或分装至0.5mL 离心％过硫酸铵：管中冷冻备用TEMED(N-N-N`-N`－四甲基乙二胺)原液，室温保存（有毒，致癌物质）。
SDSPAGE所有详细试剂配方
SDSPAGE所有详细试剂配方SDS-（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用于蛋白质分析的实验技术。
该技术通常涉及到几种试剂，如胶溶液、缓冲液、电泳缓冲液、染色溶液等。
下面是SDS-常见的试剂配方及其详细说明。
一、胶溶液配方：1. 30%（w/v）丙烯酰胺（acrylamide）溶液- 在称量瓶中称取30g丙烯酰胺，并用蒸馏水调至100ml。
搅拌溶解直至均匀。
-这是制备聚丙烯酰胺凝胶的基础溶液。
2. 响应稀释液（Response diluent）-用于稀释聚丙烯酰胺溶液以获得不同浓度的凝胶。
-可通过将聚丙烯酰胺溶液与水按1:3体积比混合来制备响应稀释液。
二、缓冲液配方：1. 离子化追踪剂（Tris-Glycine running buffer）-用于凝胶电泳盒中电解质的运行。
-配方为：3g Tris base （pH 8.8）14.4g glycine将固体溶解于1L蒸馏水中，并调整pH至8.8三、电泳缓冲液配方：1. 离子化追踪剂（Tris-Glycine SDS running buffer）-用于在电泳过程中提供离子追踪剂。
-配方为：30g Tris base144g glycine10gSDS将固体溶解于1L蒸馏水中。
2. 加速剂（stacking gel buffer）- 用于形成凝胶中的聚集堆积层（stacking layer）。
-配方为：30g Tris base （pH 6.8）144g glycine1gSDS将固体溶解于1L蒸馏水中，并调整pH至6.8四、样品处理缓冲液配方：1. 样品加载缓冲液（sample loading buffer）-用于处理蛋白样品，以便在凝胶上获得良好的分离效果。
-配方为：0.5M Tris-HCl（pH 6.8）20%（v/v）甘油10%（w/v）SDS0.05%（w/v）溴酚蓝（bromophenol blue）旋转混合并加入蛋白样品。
五、凝胶染色溶液配方：1. 吸附性染色剂（Coomassie blue staining solution）-用于染色聚丙烯酰胺凝胶上分离的蛋白质。
SDS-PAGE所有详细试剂配方
SDS-PAGE30%聚丙烯酰胺溶液-----30%（w/v ）Acrylamide 【组分浓度】【配制方法】将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml 温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml 。
µm 微孔滤膜过滤除菌和杂质，储于棕色瓶，4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存。
严格核实PH 不得超过，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。
使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。
如有沉淀，可以过滤。
【保存条件】4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存【注意事项】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。
称量丙烯酰胺和N,N’-亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具。
可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能含有少量未聚合材料。
1MTris-HCL （）(浓缩胶buffer) 【组分浓度】1MTris-HCL【配制方法】称量碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加>的浓HCL调节所需要的pH值（大约，大约，大约），将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。
应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH 值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。
【保存条件】室温保存。
【注意事项】对人体有刺激性，请注意适当防护。
（）(分离胶buffer)【组分浓度】【配制方法】1L称量碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加浓HCL调节所需要的pH值=，将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。
（LTris-HCL:和48ml1mol/LHCL混合，加水稀释到100ml终体积。
过滤后40C 保存。
）【保存条件】室温保存【注意事项】应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。
10%十二烷基硫酸钠SDS溶液-----10%(w/v)SDS【组分浓度】10%(w/v)SDS【配制方法】称取2g高纯度的SDS置于100~200ml烧杯中，加入约16ml的去离子水，68℃加热溶解，滴加浓盐酸调节PH至，定容至20ml后，室温保存【保存条件】室温保存【注意事项】对人体有害，请注意防护。
SDS-PAGE分离胶配方表-及其原理
SDS-PAGE电泳原理：聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称Acr) 和交联剂N，N’—亚甲基双丙烯酰胺（简称Bis）在催化剂作用下，聚合交联而成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。
聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带，如果分离纯化的样品中只含有同一种蛋白质，蛋白质样品电泳后，就应只分离出一条区带。
SDS是一种阴离子表面活性剂能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。
因此，各种蛋白质-SDS 复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，而只是棒长的函数。
这种电泳方法称为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（简称SDS—PAGE）。
由于SDS-PAGE 可设法将电泳时蛋白质电荷差异这一因素除去或减小到可以略而不计的程度，因此常用来鉴定蛋白质分离样品的纯化程度，如果被鉴定的蛋白质样品很纯，只含有一种具三级结构的蛋白质或含有相同分子量亚基的具四级结构的蛋白质，那么SDS—PAGE 后，就只出现一条蛋白质区带。
TEMED：通过催化过硫酸铵形成自由基而加速丙烯酰胺与双丙烯酰胺的聚合。
过硫酸铵（AP）：提供驱动丙烯酰胺与双丙烯酰胺所必须的自由基。
SDS—PAGE 可分为圆盘状和垂直板状、连续系统和不连续系统。
本实验采用垂直板状不连续系统。
所谓“不连续”是指电泳体系由两种或两种以上的缓冲液、pH 和凝胶孔径等所组成。
1.蛋白样品浓缩效应在不连续电泳系统中，含有上、下槽缓冲液(Tris—Gly，、浓缩胶缓冲液(Tris—HCl，、分离胶缓冲液(Tris—HCl，，两种凝胶的浓度(即孔径)也不相同。
在这种条件下，缓冲系统中的HCl 几乎全部解离成Cl－，两槽中的Gly (pI＝，pK a=只有很少部分解离成Gly 的负离子，而酸性蛋白质也可解离出负离子。
SDS-PAGE所有详细试剂配方
SDS-PAGE30%聚丙烯酰胺溶液-----30%（w/v）Acrylamide将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。
0.45µm微孔滤膜过滤除菌和杂质，储于棕色瓶，4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存。
严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。
使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。
如有沉淀，可以过滤。
【保存条件】4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存【注意事项】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。
称量丙烯酰胺和N,N’-亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具。
可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能含有少量未聚合材料。
1MTris-HCL（pH6.8）(浓缩胶buffer)称量121.1gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加>0.7mL的浓HCL调节所需要的pH 值（7.4-大约0.7mL，7.6-大约0.6mL，8.0-大约0.42mL），将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。
应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
【保存条件】室温保存。
【注意事项】对人体有刺激性，请注意适当防护。
1.5MTris-HCL（pH8.8）(分离胶buffer)称量181.7gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加浓HCL调节所需要的pH值=8.8，将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。
（1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL 混合，加水稀释到100ml终体积。
过滤后40C保存。
）【保存条件】室温保存【注意事项】应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
SDS-PAGE相关试剂配制
1.30％（W/V）丙烯酰胺溶液配制名称用量备注Acrylamide 29gBIS 1g 充分搅拌溶解去离子水80ml 定容至100ml，0.45μm滤膜过滤除杂置于棕色瓶中4℃保存，（注意：丙烯酰胺具有强烈的神经毒性，可通过皮肤吸收并具有累积性。
配制时应戴手套操作）2.10％（W/V）过硫酸铵名称用量备注过硫酸铵0.1g去离子水1ml 现配现用（注意：10％过硫酸铵溶液在4℃保存能使用两周左右，过期会失去催化效果）3.5X Tris－Glycine Buffer（SDS-PAGE电泳缓冲液）名称用量备注Tris15.1gGlycine94.0gSDS 5.0g去离子水800ml 加入去离子水定容至1L后，室温保存4.1M Tris-HCL, pH=6.8 (36%的浓盐酸)名称用量备注Tris 12.1去离子水80ml浓盐酸9ml 预实验已确定去离子水加入去离子水定容至100ml后，室温保存5. 1.5M Tris-HCL, pH=8.8 (36%的浓盐酸)名称用量备注Tris 18.17去离子水80ml浓盐酸3ml 预实验已确定去离子水加入去离子水定容至100ml后，室温保存6.10%SDS名称用量备注SDS 10g去离子水80g 加入去离子水定容至100ml后，室温保存7.考马斯亮蓝R-250染色液名称用量备注考马斯亮蓝R-250 0.1g异丙醇25ml 搅拌溶解冰醋酸10ml 搅拌均匀去离子水65ml 搅拌均匀，滤纸除去颗粒物，室温保存8.考马斯亮蓝染色脱色液名称用量备注冰醋酸100ml乙醇50ml去离子水850ml 充分混匀后使用9.5×SDS-PAGE Loading Buffer：量取下列试剂，置于10ml塑料离心管中名称用量备注1MTris-HCL, pH=6.8 1.25mlSDS 0.5gBPB（溴酚蓝）25mg甘油 2.5ml去离子水至5ml 分装200ul/管2ME 10ul/100ul 使用前添加，添加后可室温保存一个月。
sds-page标准方法
SDS-PAGE标准方法如下：1.试剂：准备所需的试剂，包括2M Tris-HCl（pH8.8）、1M Tris-HCl（pH6.8）、10%SDS、50%甘油、1%溴酚蓝、10%过硫酸铵和5×电泳缓冲液等。
2.工作液：制备30%（w/v）丙烯酰胺/0.8%（w/v）双丙烯酰胺的工作液，加蒸馏水至100ml，缓慢搅拌直至丙烯酰胺粉末完全溶解，过0.45μm滤膜。
可在4℃存放数月。
3.凝胶贮液：在通风橱中，称取丙烯酰胺30g，甲叉双丙烯酰胺0.8g，加重蒸水溶解后，定容到100ml。
过滤后置棕色瓶中，4℃保存，一般可放置1个月。
4.pH8.9分离胶缓冲液：Tris 36.3g ，加1mol/l HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH8.9，定容至100ml，4℃保存。
5.pH6.7浓缩胶缓冲液：Tris 5.98g ，加1mol/l HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH6.7，定容至100ml，4℃保存。
6.TEMED（四乙基乙二胺）原液。
7.10%过硫酸铵（用重蒸水新鲜配制）。
8.考马斯亮蓝G250染色液：称100mg考马斯亮蓝G250，溶于200ml蒸馏水中，慢慢加入7.5ml 70%的过氯酸，最后补足水到250ml，搅拌1小时，小孔滤纸过滤。
9.操作步骤：制备凝胶贮液、分离胶缓冲液、浓缩胶缓冲液等；按照所需比例配制丙烯酰胺和双丙烯酰胺工作液；加蒸馏水至所需体积；将工作液和Tris碱混合并冷却至室温；加入SDS和TEMED；倒入制胶模具中并插入样品梳；放入电泳槽中加入电极缓冲液；连接电源开始电泳；电泳结束后取下凝胶；用考马斯亮蓝染色液染色；脱色并观察结果。
请注意，具体操作方法可能因实验室条件和需求而有所不同。
如有任何疑问或需要进一步了解SDS-PAGE标准方法的具体细节，建议咨询专业技术人员或查阅相关文献资料。
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S D S-P A G E 30%聚丙烯酰胺溶液-----30%（w/v）Acrylamide
【组分浓度】
各种组分名称配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g)
30%Acr-Bis(29:1) 1000ml 100ml
29%Acrylamide(丙烯酰胺) 290g 29g
1%BIS(N,N’-亚甲丙烯酰胺) 10g 1g
【配制方法】
将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。
0.45μm微孔滤膜过滤除菌和杂质，储于棕色瓶，4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存。
严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。
使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。
如有沉淀，可以过滤。
【保存条件】
4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存
【注意事项】
丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。
称量丙烯酰胺和N,N’-亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具。
可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能含有少量未聚合材料。
1MTris-HCL（pH6.8）(浓缩胶buffer)
【组分浓度】1MTris-HCL
名称用量备注
Tris 12.1g
去离子水80ml
浓盐酸9ml (36%的浓盐酸)预实验已确定
去离子水加入去离子水定容至100ml后，室温保存
【配制方法】
称量121.1gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加>0.7mL的浓HCL调节所需要的pH 值（7.4-大约0.7mL，7.6-大约0.6mL，8.0-大约0.42mL），将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。
应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
【保存条件】
室温保存。
【注意事项】
对人体有刺激性，请注意适当防护。
1.5MTris-HCL（pH8.8）(分离胶buffer)
【组分浓度】1.5MTris-HCL
名称用量备注
Tris 18.17g
去离子水80ml
浓盐酸3ml (36%的浓盐酸)预实验已确定
去离子水加入去离子水定容至100ml后，室温保存
【配制方法】1L
称量181.7gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加浓HCL调节所需要的pH值=8.8，将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。
（1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL 混合，加水稀释到100ml终体积。
过滤后40C保存。
）
【保存条件】
室温保存
【注意事项】
应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
10%十二烷基硫酸钠SDS溶液-----10%(w/v)SDS
【组分浓度】10%(w/v)SDS
名称用量备注
SDS 10g
去离子水80ml 加入去离子水定容至100ml后，室温保存
【配制方法】
称取2g高纯度的SDS置于100~200ml烧杯中，加入约16ml的去离子水，68℃加热溶解，滴加浓盐酸调节PH至7.2，定容至20ml后，室温保存
【保存条件】
室温保存
【注意事项】
对人体有害，请注意防护。
10%过硫酸铵溶液-----10%(w/v)AP
【组分浓度】10%(w/v)过硫酸铵
名称用量备注
过硫酸铵0.1g
现配现用
去离子水1ml
【配制方法】
称取0.1g过硫酸铵置于1.5ml离心管，加1mL去离子水吹打溶解，4℃保存
【保存条件】
4℃保存
【注意事项】
10%过硫酸铵溶液在4℃保存时，可使用2周左右，超过期限会失去催化作用
5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液-----?5×Tris-Glycinebuffer（SDS-PAGE电泳缓冲液）【组分浓度】
各种组分名称配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g)
1000ml 500ml
0.125MTris 15.1g
1.25Mglycine(甘氨酸) 94.0g
0.5%(W/V)SDS 5.0g
【配制方法】
称取15.1gTris，94.0g甘氨酸（glycine），5.0gSDS，用800ml蒸馏水或去离子水溶解，充分搅拌溶解，定容至1000ml，室温保存。
得0.125mol/LTris-1.25mol/L甘氨酸电极缓冲液。
临用前稀释5倍。
【保存条件】
室温保存，两年有效。
【注意事项】
配制好的电泳液使用时间不宜超过两周。
电泳缓冲液可以回收，回收后可再使用1-2次，但为了取得最佳的电泳效果，应使用新电泳液。
?5×SDS-PAGE加样缓冲液-----?5×SDS-PAGELoadingBuffer
【组分浓度】0.25MTris-HCL(pH6.8)；
10%(W/V)SDS；
0.5%(W/V)BPB(溴酚蓝)；
50%(V/V)甘油；
5%(W/V)β-巯基乙醇(2-ME)
各种组分名称配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g)
5ml 3ml
1MTris-HCL(pH6.8) 1.25ml
SDS 0.5g
BPB(溴酚蓝) 25mg
甘油 2.5ml
（0.5mL/份）分装，室温保存，使用前加25μL2-ME/小份，保存一个月左右。
β-巯基乙醇(2-ME) 0.25ml
【配制方法】
量取1.25mL1MTris-HCL（pH6.8），0.5gSDS，25mgBPB，2.5mL甘油，置于10mL塑料离心管中，加去离子水溶解后，定容至5mL，小份（0.5mL/份）分装，于室温保存。
使用前将25μL的2-ME加入到每小份中。
加入2-ME的LoadingBuffer可在室温下保存一个月左右。
【保存条件】
-20℃保存，至少一年有效。
【注意事项】
SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)中含少量DTT和巯基乙醇，有轻微刺激性气味，必须完全溶解后再使用。
摘自Takara商品目录--实验室常规试剂配制方法
TEMED原液直接使用
考马斯亮蓝R-250染色液
【组分浓度】0.1%(w/v)考马斯亮蓝R-250，25%(v/v)异丙醇，10%(v/v)冰醋酸
各种组分名称配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g)
1000ml 400ml 备注
考马斯亮蓝R-250 1.0g0.4g
异丙醇250ml100ml 搅拌溶解，可用甲醇替代
冰醋酸100ml40ml 搅拌均匀
去离子水650ml260ml 搅拌均匀，滤纸除去颗粒物，室温保存
考马斯亮蓝染色脱色液
【组分浓度】10%(v/v)醋酸，5%(v/v)乙醇
名称用量备注
冰醋酸100ml
乙醇50ml
去离子水850ml 充分混匀后使用。