机能学实验-药物半数致死量测定要点
药物半数致死量(LD50)的测定
实验 药物半数致死量（LD50）的 测定——序贯法
实验目的
1. 掌握测定药物LD50的药理学意义、序贯法 的实验方法和计算方法；
2.熟悉盐酸普鲁卡因的毒性作用。
实验动物与实验器材
1. 实验动物： 小白鼠（18-22g），雌雄各半 2.实验器材：
仪器：注射器、鼠笼、函数型计算器 药品：2％普鲁卡因、苦味酸溶液
实验步骤
1. 实验前按表3-6拟定实验的药物剂量，相邻两剂 量按等比安排。相邻两剂量对数差为0.046。
2.每实验组取取小鼠10只，雌雄各半，称重后用 苦味酸标记；
浓度
剂量D （mg/kg）
r＝ 0.046
2.22 ％
2％
1.8 ％
1.62 ％
1.45 ％
合计
表3-6 小鼠半数致死量实验结果
4. 实验结果的计算与表达 LD50=log－1（C/N）mg/kg
式中： C＝∑（R·logD） R＝剂量组的动物只数
logD＝剂量D的对数值； N＝实验动物总数＝∑R
注意事项
1. 对实验动物进行随机化分组； 2.各组药物浓度不能混淆； 3.给药剂量及部位要准确,进针的深浅一致；
教师：康白
药理学实验
一、实验目的： 二、注意事项：1.分组，组长负责，穿隔离衣，轮流操作； 2.预习指导做到心中有数，注意观察结果；3.节约药品动物， 爱护仪器，不要大声喧哗，结束后清点仪器，打扫卫生；4. 轮流值日，拿送动物。 三、实验设计：（P11）对照、随机、重复的原则。 四、报告的书写：目的、器材、方法、结果、讨论、结论 五、成绩分配：理论80%，实验20%（报告5%、设计5%、 实验测验10%）
LogD
实验结果
R
R·log D
实验普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定
DJY
2
测定LD50的方法很多 本实验用的是简化机率单位法
y = a+bx
机 率 单 位 y
对数剂量x
DJY 3
药物的剂量与效应关系
死 亡 数 累 积 死 亡 率
剂量
累 积 死 亡 率 对数剂量
DJY
剂量 机 率 单 位 对数剂量
4
测定药物LD50的设计方法 1.预实验：摸索接近100%和0%死亡的剂量 2.按比例设5-7个剂量组（0.65~0.90） 3.随机分组，动物数不少于10只（小鼠） 4.实验条件均应相等
【注意事项】
1.动物应随机分组
2.各小组的动物标记要统一
3.剂量由小到大，注射量要准。
DJY
9
思考题
1.什么是LD50?
2.测定LD50的根据和意义何在?
DJY
10
【结果与统计】
对数剂量 动物数 死亡率 机率单位 死亡数 (mg/kg) (x) (n) (%) (y) 剂量 1 2 110.8 147.7 2.0445 2.1694
3 4
5
196.9 262.5
350.0
2.2942 2.4191
2.5441
y = a+bx
用直线回归法求 a, b, r
DJY 8
DJY
5
测定LD50的用药设计方法 同一浓度 不同浓度 不同剂量 同一剂量
DJY
6
【方法与步骤】
1.分组：随机分成5个剂量组，每组2只小白鼠。
2.给药：采用不同浓度,同一剂量的方法
0.20ml/10g,腹腔注射，涂上标记
3.观察：用药1小时后,观察小白鼠死亡情况,并记
录各组动物的鲁卡因半数致死量(LD50)的测定
药物半数致死量测定
士的宁半数致死量（LD50）测定操作版【目的】1．掌握药物半数致死量（LD50）测定的基本步骤；2．掌握按改良寇氏法计算LD50的方法。
【原理】半数致死量是衡量药物毒性大小的重要标志，LD50表示能使全部实验动物半数死亡的剂量，是以动物死亡或存活作为质反应指标。
LD50与毒性呈负相关。
当剂量取对数值时，曲线呈近似两端对称的S型，对称点位于LD50。
LD50处斜率最大，灵敏度最高；曲线两端平坦，在1%或100% 附近灵敏度最差，剂量不易确定。
对称点附近量效关系呈直线关系，即该段范围内效应百分率／比与对数剂量呈正比关系。
（见右图）测定LD50的方法有多种，但以改良的寇氏法计算简便，结果较准确，比较常用。
对于毒性低的药物测不到LD50，则按最高可用的浓缩浓度、以最大给药容积给药，即最大给药量，如能导致实验动物死亡，可检测其最小致死量和最大耐图质反应量效关系曲线受量，否则即以最大给药量反映其安全性。
【材料】动物：小鼠，雌雄兼用，18～22g。
药品：士的宁溶液（0.125mg／mL）。
器材：鼠笼，JY4001电子秤，1.0mL注射器，试管，试管架。
【方法】1．预实验：取小鼠8～12只，分成4～5组，腹腔注射不同浓度的士的宁，摸索出可致小鼠大多数死亡的最小剂量（D m）及大多数小鼠不致死亡的剂量（D n）。
即找出引起0％到100％死亡率剂量的所在范围。
（参考剂量：D m为0.125mg／mL，0.1mL／10g）2．正式实验：以预实验所获得的D m和D n确定正式实验组数及组间剂量比（分5个剂量组，按1：0.8组间等比）。
每组取10只小鼠，雌雄各半，随机分为5组。
药液按等比稀释，腹腔注射，给药容量都为0.1mL ／10g。
给药后观察30分钟。
（正式实验观察7～14天，并设阴性对照组）3．汇总实验结果，计算士的宁LD50及其95％可信限。
【结果】表士的宁小鼠半数致死量测定实验结果组别剂量（mg／kg）动物数（n）死亡数（n）死亡率12345LD50=log-1[X m-i×（Σp-0.5）]LD50的95％可信限=log-1（X50±1.96S X50）LD50的平均可信限=LD50±（LD50的95%可信限的高限-低限）／2S X50=i×[（Σp-Σp2）／（n-1）]1／2注：【计算中通常以“10”为底】X m为最大剂量组的对数值，i为相邻两剂量比值的对数（高剂量组作分子）；p为各组死亡率，Σp为各组死亡率总和；X50为lgLD50，S X50为X50（lgLD50）的标准误差。
药物半数致死量LD50的测定jy
(1)是衡量药物毒性大小的指标，评价药物优劣的重要参数
(2)评价药物安全性---治疗指数
(3)申报新药过程中必须提供的药理学资料
新药审批办法规定：
• 三、药理资料 • 13. 与功能主治有关的主要药效学试验资料及文献资料。 • 14. 一般药理研究的试验资料及文献资料。
• 15. 动物急性毒性试验资料及文献资料。
药物半数致死量(LD50)的测定
特殊毒性试验（致畸、致癌、 致突变） 毒性试验 长期（慢性）毒性试验
急性毒性试验：1～7d
• 半数致死量（lethal dose 50%, LD50）：是指能够
引起试验动物一半死亡的药物剂量，通常用药物致死剂量 的对数值表示。
• 测定LD50意义
TI=LD50/ED50
毒性大小的指标?
实验结束
各组将实验台和实验器材刷洗干净
D2= D1·r ,…，Dn= Dn-1·r, Dm
3．配制等比稀释溶液：要求各小鼠给药容积一样，一般0.1ml/10g，
按下列公式计算浓度：
C母
D 等容注射量
药液配制的具体步骤：
预试中Dm=344mg/kg， Dn=141mg/kg，算出r=1.25，小鼠的 平均体重为20g，每组10只，用药量为0.1ml/10g=10ml/kg
• LD50的测定方法有很多。如：目测机率单位法、 加权机率单位法(Bliss 法)、寇氏法、序贯法等。
• Bliss 法是目前推荐使用的方法。此法对剂量分组 无严格要求，不需要剂量组有0%和100%死亡率， 是目前公认最准确的测定方法。但本法计算繁琐， 故现多采用计算机程序计算。
• 我国卫生部规定，Bliss法是作为新药LD50测定评 定必须采用的方法。
药物半数致死量(有效量)测定_图文
均衡随机法分组：先按易控制的因素（性别、年龄 、体重等）均衡分档。 然后在每一档随机取出等量的动 物分配到各组，使难控制的因素（活泼程度、饥饱、疲 劳程度等）得到随机安排。
作业：
实验测定的戊巴比妥钠ED50以及上 述例子LD50有关数据求出：
治疗指数 TI ＝ LD50/ED50 ＝ 安全指数 SI ＝ LD5/ED95 ＝
40
LD50 /ED50
20
0
ED50
LD50
质反应的量效曲线
剂量
Fig.2-3 The frequency curve and cumulative frequency curve of a drug action in a quantal-effect experiment.
质反应量效关系曲线
分工合作，统一计算
分组及给药
取小鼠50只（ 18～22克 ）， 雌雄各半， 不同性别动物按体重随机分成五组。每组 各动物称重，标记后分别按设计的容积和 浓度腹腔注射给药。ＬＤ50（或ＥＤ50 ）测 定时是否要设对照组，应视药物性质等情 况而定。
必须注意：正式实验如单人操作时宜从浓 度偏高的剂量组开始给药！起效快和对后 续实验有重要提示作用。思考！
正式实验：在此剂量范围内安排５～６个对数剂 量实验组，便于用对数剂量对死亡数百分率作图 和计算数据。
本实验备有：50, 40 ,32, 25.6 ,20.5,16.4 五个剂量 组(组间公比=0.8)；昆明小鼠120只雌雄各半。
每个同学做4～5个连续的浓度，每浓度一只小鼠 。
实施：规范操作，观察计时；
【实验要求】
1、掌握小白鼠半数致死量或半数有效量 测定的基本方法。
敌百虫半数致死量
组别 动物数 剂量 对数剂量 死亡率 P 2 其他数据 (n) (X, mg/kg) （lgX） （P）
1 2 3 4 5
∑P=
【结果处理】
按改良寇氏P-0.5）] ····················(公式1) 说明：① Xm：最大剂量组剂量对数值
【注意事项】
1.本实验为定量药物效应测定，精确性要求高，在实验的过程中， 各个环节均须精确无误。
2. 小鼠捉拿宜熟练掌握，避免抓伤咬伤。 3. 给药：一次性给药，PH值及渗透压均在生理范围内，给药与
注射速度保持一致。腹腔注射选择小鼠左下腹，减少首关效应。
【思考题】
1. 测定LD50的意义是什么？ 2. 为什么选择LD50作为急性毒性的指标？ 3. 用LD50评价药物的安全性有何缺点？ 4. 评价药物的安全性的指标还有哪些？
2、正式试验:
（1）取小鼠50只，♀♂各半，随机分为5组， 10只/组，称重，编号。
（2）剂量:按等比级数增减，相邻两剂量比 值为1:0.8，设5个剂量组。
（3）给药方式: 灌胃给予敌百虫，0.2 ml / 10 g。
（4）结果观察：观察动物的中毒表现，记 录各组死亡动物数量。
【实验结果】（填入下表1）
【思考题】
1、半数致死量（LD50）测定的目的意 义如何？
2、半数致死量（LD50）常用的计算方 法有哪些？
【模拟计算】
如果20%、16%、12.8%、10.24%和 8.192%剂量组的小鼠死亡数分别为8、5、 3、2、0只，求敌百虫的LD50。
20%浓度的敌百虫的剂量为每100 ml溶液中含敌百虫20 g 每10 g给药0.2 ml，通过换算得：4 g/kg(即4000mg/kg)
半数致死量_实验报告
一、实验目的1. 了解药物半数致死量（LD50）的定义及其在药理学中的意义。
2. 掌握LD50的测定方法及计算过程。
3. 通过实验，了解药物剂量与毒性反应之间的关系。
二、实验原理半数致死量（LD50）是指在特定条件下，能够引起实验动物一半死亡的药物剂量。
LD50是衡量药物毒性的重要指标，对于新药筛选、临床安全用药及药物不良反应的监测具有重要意义。
本实验采用寇氏法（Karber法）测定药物LD50。
三、实验材料1. 实验动物：小白鼠100只，体重18-22g，雌雄各半。
2. 实验药品：待测药物（如普鲁卡因）。
3. 实验器材：电子秤、注射器、灌胃针（16号）、注射器（0.25、1、2、5ml）、吸管（0.1、0.2、0.5、1、2、10ml）、容量瓶（10、25、50ml）、烧杯（10、25、50ml）、滴管、外科剪、镊子等。
四、实验方法与步骤1. 实验动物的选择：选用初成年的小白鼠，体重18-22g，雌雄各半。
实验前对动物进行检疫，确保健康。
2. 剂量设计：根据预实验结果，将待测药物配制成不同浓度的溶液，设定4-5个剂量组，相邻两组剂量高剂量与低剂量之比的对数（相邻两组对数剂量的差值）为1:0.6～0.9。
3. 实验分组：将小白鼠随机分为5组，每组10只，雌雄各半。
4. 灌胃给药：按照预定剂量，用灌胃针将药物溶液灌胃给予小鼠，观察7天，记录不同剂量组小鼠的死亡情况。
5. 数据处理：计算每组小鼠的死亡率，根据寇氏法计算LD50。
五、实验结果1. 各剂量组小鼠的死亡率如下：剂量组 | 剂量（mg/kg） | 死亡率（%）-------|--------------|-----------1 | 0.06 | 202 | 0.12 | 403 | 0.24 | 604 | 0.48 | 805 | 0.96 | 1002. 根据寇氏法计算LD50：LD50 = 0.48 × 2 × (1 - 0.2) / (0.8 - 0.2) = 0.32 mg/kg六、实验讨论1. 本实验采用寇氏法测定药物LD50，结果表明待测药物的LD50为0.32 mg/kg，说明该药物具有一定的毒性。
药物半数致死量的测定实验报告
药物半数致死量的测定实验报告摘要：
本实验通过对小白鼠进行药物半数致死量的测定，得出该药物
的LD50值为Xmg/kg，进而评估该药物的毒性和安全使用范围。
实验结果表明，本药物可达到治疗效果且安全使用。
引言：
药物毒性评价是新药开发的重要环节。
药物的毒性评价能够帮
助我们了解药物的毒性情况并确定安全使用范围，为药物的进一
步发展提供支持和保证。
LD50值是表明药物毒性的重要指标之一，是用来测量半数小白鼠死亡剂量的药物浓度，本实验旨在通过测
定药物的LD50值来评估药物的毒性。
材料与方法：
本实验使用小白鼠进行实验。
将小白鼠随机分成多次实验的不
同浓度组（mg/kg），每组分别注射药物。
注射完药物后，每组实
验小白鼠的死亡数和存活数记入实验记录表格中。
根据实验结果
绘制药物剂量-死亡率图，并计算出药物的LD50值。
结果：
在本实验中，我们测定出该药物的LD50值为Xmg/kg。
根据药物剂量-死亡率图可得出，当药物浓度为Xmg/kg时，小白鼠的死亡率达到50%。
讨论：
本实验结果表明，该药物的LD50值为Xmg/kg，表明该药物的毒性较低且安全使用范围在其LD50值以下。
这也为该药物的临床应用提供了科学依据。
同时，我们也需要意识到药物的毒性评价是一项复杂的工作，在实际应用中还需要综合考虑其他因素，以确保药物的安全有效使用。
结论：
通过本次实验测定，我们得出该药物的LD50值为Xmg/kg，表明该药物的毒性较低且安全使用范围在其LD50值以下。
该药物可达到治疗效果且安全使用。
机能学实验-药物半数致死量测定要点
2.82
7.18
6
2.76
7.24
7
2.71
7.29
8
2.67
7.33
9
2.63
7.37
10
2.60
7.40
12
2.54
7.46
15
2.47
7.53
18
2.41
7.59
20
2.38
7.62
24
2.32
7.68
25
2.31
7.69
30
2.26
7.74
40
2.17
7.83
50
2.10
7.90
LD50计算
1. 以对数剂量为x，相应的机率单位为y， 建立直线回归方程，求得a、b、r；
2. 根据50％动物死亡时机率单位为5 （ y ），FORECAST对数剂量x （logLic index, TI): LD50 / ED50. 两者平行时 用。
测定原理
量效反应线
机率单位 （Probit unit）
Y 5 x μ σ
死亡率在10％～90％之间的机率单位 简化公式：
Y 5 1.5 log( 0.029 P ) 1.029 P
P为死亡率。
【解】 0.025 kg × 110.8 mg/kg ＝ 2.77 mg 1％溶度是指 1g/100ml = 10mg /ml 2.77 mg需药液0.277ml。
结果汇总
组别 剂量 对数剂量 动物数 死亡数 死亡率 机率单位
(mg/kg)
X
Y
1 110.8 2.0445 10
2 147.7 2.1694 10
然后每个区内动物随机分组。这样就能保证 每个剂量药物组内动物体重均衡。 • 23，23，23，23，24，24，24，24，24，25， 25，25，25，25，25，25，26，26，27，27， 28，28，29，30，30，31，32，32，33，33
药物的半数致死量
（2）计算LD50的95%平均可信限的公式：
式中∑P2为各组死亡率平方和，n为各组动物数。
例：广西成人男子95%平均可信限:165±10cm
Let’s
Go
结果（mg/kg）
LD50 改良寇氏 95%可信限 197 183
～
210
LD50
Bliss 95%可信限
198
183
～
219
LD50 （mg/kg）
药物半数致死量（LD50）的测定
药理学教研室
一、目的
1、主要目的是学习测定药物LD50的方 法和计算过程。 2、通过学习，知道测定LD50的意义。
LD50 （mg/kg）
A B
ED50 （mg/kg） 0.01
5
TI
0.1
10
改良寇氏法— 四条件
剂量组≥4 相邻剂量组等比（r）
A B
ED50 （mg/kg） 0.01
5
TI
0.1
10
D2/D1=D3/D2=D4/D3=D5/D4=r
（4）、确定各组剂量
D1=145mg/Kg
D2=163mg/Kg
D3=184mg/Kg
D4=208mg/Kg
D5=235mg/Kg
、
如果腹腔注射普鲁卡因0.1ml/10g，需要
配制的浓度是？？
浓度=剂量/溶积 =235mg/Kg / 0.1ml/10g =0.235g/1000g /0.1ml/10g =2.35g/100ml
Pm=100%,Pn=0 n相同
实验对象： 小白鼠、体重18~22g, 雌雄各半
器械与药品： 小鼠笼、注射器、天平、计算器、普鲁卡因
半数致死量的测定
［结果］
［讨论］
［结论］
注意事项：
1、根据每次实验动物体重进行计算。 2、配制药液时要精确，尽量减少人为 因素对实验结果的影响。 3、给药后注意不要喧哗，刺激动物， 以免动物消耗过大死亡。
5组
6组 8组
5-6组
7-8组 9-10组
7-8组
9组 10组
9组
10组 -
-
-
14倍左右 6-7组 7组
8-9组
10组
-
-
-
-
查表n=6(分6组）
K＝0.85
三、配制等比稀释药液 1、一号药液浓度＝Dm/给药量 =0.01g/10g/0.2ml/10g=5% 2、每组药液量＝每组动物总数X小鼠平 均体重X给药量 ＝ 0.2ml/10g＊30g＊10＝6ml 3、一号药液需要量 ＝每组药液量／（1－K） ＝6ml／（1－0.85）＝40ml
药理学实验课
药理教研室
半数致死量（LD50）测定 [Bliss法]
[目的] 1.掌握药物半数致死量（LD50）测定的基本步骤 2.掌握用Bliss法计算药物的半数致死量。 [原理] 将一定浓度的药物按一定剂量比值给小鼠腹 腔注射，记录小鼠的死亡情况，计算药物的半数 致死量。
[材料]
动物：小鼠，体重18－22g ，雌雄各半 药物：25%尼克刹米、生理盐水 器材：注射器、量筒、烧杯、鼠笼0.65
0.7
0.75
0.8
0.85
0.88
0.9
最高 和最 低致 死量 相差 的倍 数 (Dm/ Dn)
2倍左右 3倍左右 -
3-4组
4组
3-4组 4-5组
4组 5组
5-6组 6-8组
6-7组 9组
药物急性毒性实验
药物急性毒性实验实验⼀药物急性半数致死量（LD50）的测定【⽬的】了解药物半数致死量(LD50)测定的意义、原理，掌握半数致死量的测定⽅法和计算过程。
【原理】LD50是指在⼀群动物中能使半数动物死亡的剂量。
由于实验动物的抽样误差，药物的致死量对数值⼤多在50％质反应的上下呈正态分布。
在这样的质反应中药物剂量和质反应间呈S型曲线，S型曲线的两端处较平，⽽在50％质反应处曲线斜率最⼤，因此这⾥的药物剂量稍有变动，则动物的死或活的反应出现明显差异，所以测定半数致死量能⽐较准确地反映药物毒性的⼤⼩。
【实验材料】1、动物：⼩⽩⿏，体重18-24g，雌、雄各半，实验前禁⾷12⼩时，不禁⽔。
2、药品：盐酸普鲁卡因，苦味酸。
3、器械：⼩⿏笼，天平，注射器（1mL），电⼦计算器。
【⽅法和步骤】（⼀）预备实验1、探索剂量范围：先找出100%及0%死亡的剂量，此即上下限剂量（D m及D n）。
⽅法是先取出⼩⿏9-12只，每组3只，按估计量（根据经验或⽂献资料定出）给药，如3只⼩⿏全死则降低剂量⼀半，如全不死则增加剂量⼀倍，如部分死亡，则按2：1的⽐例向上、向下调整剂量，由此找出上下限剂量。
2、确定组数，计算各组剂量：确定组数（G）：可根据适宜的组距确定组数，⼀般分5-8个剂量组。
计算各组剂量：要求各组剂量按等⽐级数排列，在找出D m及D n和确定组数后，可按下列公式求出公⽐r：r再按公⽐计算各组剂量D1,D2,D3,D4,D5……D m，其中D1=D n=最⼩剂量，D2=D1?r; D3=D2?r; D4=D3?r; D5=D4?r; ……D G=D G-1?r。
r值⼀般以1.7~1.15之间为宜。
计算举例：已知某药在致死毒性实验中，Dm=187.5 mg/kg; Dn=76.8 mg/kg, 确定组数G=5，求r及各组剂量。
先代⼊公式求r=1.25，再计算各组剂量D1=Dn=76.8 mg/kg,D2=76.8?1.25=96 mg/kg, 依次计算D3，D4，及D G(D5)分别为120，150，187.5 mg/kg。
半数致死量的测定实验
半数致死量的测定实验
半数致死量（LD50）是药物、毒物及病原微生物等毒力水平的一个标志。
它表示能使全部实验对象死亡半数的剂量或浓度。
由于生物间存在个体差异性，因此LD50 需用一批相当数量的实验对象进行实验方能测得，并且每种药物对不同实验对象的LD50 值不同。
实验材料：白鼠
试剂：药物
仪器和耗材：动物天平、注射器、电子计算器
实验步骤
1. 预备实验
①摸索上下限：即用少量动物逐步摸索出使全部动物死亡的最小剂量（Dm）和一个动物也不死亡的最大剂量(Dn)。
方法是据经验或文献定出一个估计量，观察2～3 只动物的死亡情况。
如全死，则降低剂量；如全不死，则加大剂量再行摸索，直到找出Pm = 100% 和Pn = 0% 的剂量，此两量分别为上下限。
②确定组数，组距及各组剂量
组数：一般5-8 组，可根据适宜的组距确定组数，如先确定5 组，若组距过大，可再增加组数以缩小组距。
有时也可根据动物死亡情况来决定增减组数。
药物半数致死量的测定
药物半数致死量的测定普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定【实验目的】了解药物LD50测定的意义、方法、计算过程。
【实验原理】量-效关系：量反应：血压、心率、血糖等；质反应：有或无、阴性或阳性、死亡或存活等。
药物的剂量与死亡率之间呈常态分布曲线，与累积死亡率之间呈长尾“S”形曲线；药物的对数剂量与累积死亡率之间呈对称“S”形曲线。
此量效曲线两端平坦，反应灵敏度差，中间段陡，反应灵敏。
而以50%处最敏感，剂量稍有变化，死亡率就有明显变化。
故常以引起半数动物死亡(LD50)或半数动物产生阳性效应(ED50)的剂量作为衡量药物毒性或效应大小的最常用、最恰当的指标。
LD50是指使—群动物中半数死亡的剂量，是衡量药物毒性大小的指标，是评价药物毒性的重要参数。
可了解药物单次给药或短时间内多次给药后动物所产生的毒性反应及其严重程度，为临床安全用药及监测提供一定的参考。
由于生物间存在个体差异性，因此LD50常需要一批相当数量的实验动物才能测得。
最大耐受量LD50的测定方法很多，较为常用的有寇氏法、简化概率单位法、序贯法、孙瑞元点斜法和Bliss-Finney法。
由于寇氏法常用，并有计算简便，结果较准确等特点，故本实验主要介绍寇氏法。
【实验对象】小白鼠，体重18～22g，♀♂各半。
实验前禁食12h，不禁水。
【实验器材和药品】计算器，电子秤、量筒(10ml)、注射器(1ml)、小鼠笼；盐酸普鲁卡因(procaine hydrochloride)溶液、苦味酸。
【实验条件】1．剂量必须按等比级数（剂量对数按等差级数）分组。
2．各组动物数应相等。
3．反应大致呈正态分布。
最小剂量组的死亡率（Pn）应为0，最大剂量组的死亡率（Pm）应为100%。
如果Pn＜20%或Pm＞80%需要用校正公式计算。
【实验步骤和观察项目】(一)预备实验1．探索剂量范围根据经验或文献找出动物100％及0％死亡的剂量，即上下限剂量(Dm、Dn)。
对于无毒性参考资料的药物，一般先配制最大浓度药剂，然后按等比关系(如2：1)稀释成多个剂量。
6-药物半数致死量(LD50)的测定
实验设计安排
1.自选题 2.13周交实验设计书 3.14开题报告（选1-2份） 4.15周实验准备 5.16周按实验方案做实验 6.书写实验报告
思考题：
什么是LD50和ED50? 测定其有何意义?
什么是治疗指数？评价药物安全性的大小
还有哪些指标？
普鲁卡因和尼可刹米产生毒性的表现和
及其机理如何?
反映药物急性毒性大小和药理作用的强弱
评价药物的安全性
申报新药过程中必须具备的药效学资料
盐酸普鲁卡因(Procaine)
局麻药 过量应用引起中枢神经系统和心血 管反应 表现为中枢神经系统先兴奋后抑制 不安、惊厥、昏迷、呼吸抑制心血 管活动抑制 致死原因：呼吸衰竭
尼可刹米(Nikethamide)
药物半数致死量 （LD50）的测定
实验要求
掌握测定药物LD50和ED50的药理学 意义和方法（改进寇氏法） 熟悉序贯法的特点、实验方法和计 算方法
【相关知识】 ED50(median effective dose)：
在一定的实验条件下,一定数量的动物用药 后，约半数实验动物出现疗效的药物剂量。
序贯法
取10只小鼠编号、称重 从最大剂量开始给药(尼可刹米0.1ml/10g) ， 观察10min. 若死亡，则下一只小白鼠降低一级 剂量，若没死亡，则用高一级剂量，依次类推， 直至10只小白鼠全死. 记录结果 计算X· R、∑（X· R） 按公式计算尼可刹米的半数致死量 LD50＝lg-1 ( C/n ) (mg/kg) n=实验动物数+1
实验设计的三大要素
2.处理因素
医学科 学研究
指实验者人为地施加给实验对象的某种外部 干预。 对处理因素的控制和安排应注意以下三点： 1)主要因素 2)处理因素 3)非处理因素
药物半数致死量_LD50的测定
盐酸普鲁卡因产生毒性作用的原理: • 盐酸普鲁卡因是一种局部麻醉药，当被大量吸收后会产
生全身性毒性反应，主要表现为中枢神经系统先兴奋后抑
制，初期表现为眩晕、烦躁不安、肌肉震颤，进而发展为
神经错乱、惊厥、昏迷、呼吸抑制等。患者可因呼吸衰竭 而死亡。
【实验材料】 • 实验动物：小白鼠，体重18～２２g，实验 前禁食12h,不禁水。 • 实验器材：电子秤、注射器。 • 实验药品：盐酸普＝lg-1 [Xm－i(Σp－0.5)]
不含0%及100%死亡率的LD50＝lg-1 [Xm－i(Σp－ 0.5)]+i/4（1-Pm-Pn） 改良寇氏法公式要求： Dm组，死亡率≥80% Dn组，死亡率≤20%，等比式数为0.7～0.85 结果允许轻微倒置，当不能相差太大。
【注意事项】
给药剂量准确 小鼠腹腔注射 脱臼处死实验用过小鼠
【思考题】
1.测定LD50有何药理意义？
2.为何选择测定LD50作为衡量药物毒性大小的指 标?
实验结束
各组将实验台和实验器材刷洗干净
加权机率单位法(Bliss 法)、寇氏法、序贯法等。
• Bliss 法是目前推荐使用的方法。此法对剂量分
组无严格要求，不需要剂量组有0%和100%死亡率，
是目前公认最准确的测定方法。但本法计算繁琐，
故现多采用计算机程序计算。
• 我国卫生部规定，Bliss法是作为新药LD50测定评
定必须采用的方法。
• 时间关系，选择孙瑞元的点斜计算法。
表1 盐酸普鲁卡因LD50测定结果记录表 组 别
1 2 3 4
剂量（mg/ml） Log D D X
124 145 171 200
动物数(只) 死亡数（只） N F
机能学实验药物半数致死量测定要点护理课件
实验局限性
指出实验的局限性，如实验动物种类、药物浓度范围等。
总结实验结果
对实验结果进行总结，阐述药物的半数致死量及其意义。
未来研究方向
提出进一步的研究方向，如探索药物作用机制、研究其他药物毒性指标等。
THANKS
感谢您的观看。
在机能学实验中，常采用不同剂量的药物对动物进行注射或灌胃，观察动物的生理反应和死亡情况。
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CHAPTER
药物半数致死量测定
药物准备是实验的重要环节，需要确保药物的纯度、浓度和剂量准确。
在准备药物时，应选择符合实验要求的纯度高的药物，并按照实验要求准确配制药物的浓度和剂量。同时，需要注意药物的储存和使用方法，避免药物污染和损失。
实验操作是测定药物半数致死量的关键环节，需要严格遵循操作规程，确保实验的准确性和安全性。
在实验操作过程中，需要按照规定的步骤和方法进行操作，避免误差和偏差。同时，需要注意实验过程中的安全问题，如防止动物抓伤、咬伤等意外伤害，以及避免药物溅出等意外事故。
数据记录与处理是实验的重要环节，需要准确记录实验数据，并进行正确的处理和分析。
在实验过程中，应注意实验动物的饮食和饮水，保持正常的生理需求。
实验后应密切观察实验动物的生命体征，及时发现并处理异常情况。
实验后应做好实验动物的清洁和护理工作，保持健康状态。
实验后应确保实验动物得到充分的休息和护理，促进恢复。
实验后应整理实验数据和结果，做好实验总结和报告工作。
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CHAPTER
废弃物分类
根据废弃物的性质采取相应的处理方式，如焚烧、填埋、回收等，确保废弃物得到妥善处理，避免对环境和人体健康造成危害。
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0％或100％反应率的机率单位近似值
组内动物数
机率单位值 0％ 2.90 2.82 2.76 2.71 2.67 2.63 2.60 2.54 2.47 2.41 2.38 2.32 2.31 2.26 2.17 2.10 100％ 7.10 7.18 7.24 7.29 7.33 7.37 7.40 7.46 7.53 7.59 7.62 7.68 7.69 7.74 7.83 7.90
药物半数致死量的测定
药理教研室
目 的
掌握药物半数致死量（LD50）的概念， 了解其测定原理、方法及计算。
概 念
• 量反应（Graded response）： • 质反应（All or none response）：
– 半数致死量(Median lethal dose, LD50); – 半数有效量(Median effective dose, ED50); – 治疗指数(Therapeutic index, TI): LD50 / ED50. 两者平行时 用。
3.72 377 3.83 3.87 3.92 3.96 4.01 4.05 4.09 4.12
4.16 4.19 4.23 4.26 4.29 4.33 4.36 4.39 4.42 4.45
4.48 4.50 4.53 4.56 4.59 4.62 4.64 4.67 4.70 4.72
4.75 4.77 4.80 4.82 4.85 4.87 4.90 4.93 4.95 4.98
n
4 5 6 7 8 9 10 12 15 18 20 24 25 30 40 50
LD50计算
1. 以对数剂量为x，相应的机率单位为y， 建立直线回归方程，求得a、b、r； 2. 根据50％动物死亡时机率单位为5 （ y ），FORECAST对数剂量x （logLD50），进而求得LD50。
5.00 5.03 5.05 5.08 5.10 5.13 5.15 5.18 5.20 5.23
5.25 5.28 5.31 5.33 5.36 5.39 5.41 5.44 5.47 5.50 5.52 5.55 5.58 5.61 5.64 5.67 5.71 5.74 5.77 5.81 5.84 5.88 5.92 5.95 5.99 6.04 6.08 6.13 6.18 6.23 6.28 6.34 6.41 6.48 6.56 6.65 6.75 6.88 7.05 7.33
区组随机法
• 以体重划区，以不同药物剂量为组。 • 先以体重分区（区数等于每组内动物数）， 然后每个区内动物随机分组。这样就能保证 每个剂量药物组内动物体重均衡。 • 23，23，23，23，24，24，24，24，24，25， 25，25，25，25，25，25，26，26，27，27， 28，28，29，30，30，31，32，32，33，33
1 2 3 4
110.8 147.7 196.9 262.5
2.0445 2.1694 2.2942 2.4191
10 10 10 10
5
350.0
2.5441
10
机率单位表
反应率 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 0
—
1
2
3
4
5
6
7
8
9
67 2.95 3.12 3.25 3.36 3.45 3.52 3.60 3.66
测定原理
量效反应线
机率单位 （Probit unit）
x μ Y 5 σ
死亡率在10％～90％之间的机率单位
简化公式：
0.029 P Y 5 1.5 log( ) 1.029 P P为死亡率。
实验方法
1. 2. 3. 4. 摸索剂量范围，确定各等级剂量。 动物分组：区组随机法 给药：药量计算 观察与记录，汇总结果，并查得相应的 机率单位。 5. 计算：以对数剂量为x，相应的机率单 位为y，建立直线回归方程，然后求得 使50％动物死亡所需的剂量。
药量计算
• 已知动物体重为25 g，给药剂量为110.8 mg/kg，普鲁卡因药液溶度为1％，给药 量为多少ml？ 【解】 0.025 kg × 110.8 mg/kg ＝ 2.77 mg 1％溶度是指 1g/100ml = 10mg /ml 2.77 mg需药液0.277ml。
结果汇总
组别 剂量 对数剂量 机率单位 动物数 死亡数 死亡率 (mg/kg) X Y