免疫学检测技术解读PPT课件
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免疫检验课件ppt
移植免疫监测
器官移植后，患者需要接受免疫抑制治疗以防止排斥反应。通过监测免疫功能和相关抗体，有助于评估患者的免疫状态和移植效果。
02
CHAPTER
免疫检验基础知识
抗原是指能够刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答的物质，包括外源性抗原和内源性抗原。
抗原
抗体是指机体在抗原刺激下产生的具有高度特异性的蛋白质分子，能够与相应抗原结合，发挥免疫效应。
通过检测T细胞增殖和转化能力，评估机体的细胞免疫功能。
通过检测细胞因子表达水平，了解机体的免疫应答状态。
通过检测免疫细胞的杀伤、吞噬、释放细胞因子等功能，评估机体的免疫功能。
利用基因芯片等技术对免疫相关基因的表达水平进行检测，了解机体的免疫应答机制。
基因表达谱分析
通过制备针对特定抗原的单克隆抗体，用于免疫学检测和免疫治疗。
通过检测炎症因子（如IL-1、IL-6、TNF等）的水平，了解机体的炎症反应状态。
通过检测自身抗体（如类风湿因子、抗核抗体等）的水平，了解机体的自身免疫状态。
04
CHAPTER
常见免疫检验项目及解读
总结词
乙肝两对半检测是常见的免疫检验项目之一，用于检测乙型肝炎病毒的抗原和抗体。
详细描述
乙肝两对半检测包括乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、表面抗体（HBsAb）、e抗原（HBeAg）、e抗体（HBeAb）和核心抗体（HBcAb）的检测。通过检测这些抗原和抗体，可以了解个体是否感染了乙型肝炎病毒，以及感染阶段和免疫状态。
01
免疫组学技术
利用免疫组学方法，研究免疫细胞和分子的功能和相互作用，为免疫疾病的诊断和治疗提供新思路。
02
生物信息学
结合生物信息学技术，对免疫相关基因和蛋白质进行大数据分析，挖掘免疫相关疾病的发病机制和潜在治疗靶点。
临床免疫学检验技术PPT(共64页)
临床免疫学检验技术
• 江西省胸科医院：熊国亮
一、概述
• 免疫学检验是研究免疫学技术及其在医学 检验领域应用的一门学科。免疫检验技术 则重点阐述各类免疫学技术的基本原理、 方法类型和临床应用。19世纪末相继建立 了凝集试验、沉淀试验和补体结合试验等 三大经典血清学试验，用于检测病原微生 物的抗原或抗体对传染病的诊断起到重要 作用。
三、酶联免疫吸附试验（enzy发展，放射 免疫技术、荧光免疫技术、酶免疫技术、 化学发光免疫技术、流式细胞免疫分析技 术等免疫标记技术应用于临床免疫学检验， 加快了免疫学检验的自动化、标准化进程， 极大地提高了免疫学检验的灵敏度，拓展 了免疫学检测范围，从检测免疫相关物质 （抗原、抗体、补体、免疫活性细胞和细 胞因子等）到检测体液中的微量物质（激 素、酶、血浆微量蛋白、血药浓度、微量 元素等）。
三、酶联免疫吸附试验（enzymelinked immunosorbent assay,ELISA）
• 此法常用多孔聚苯乙烯反应板作为固相载 体，读取结果需用酶标仪。标记抗原或抗 体所用的酶常选择辣根过氧化物酶（HRP）、 碱性磷酸酶（AP）等，HRP常用的底物有 邻苯二胺（OPD）或四甲基联苯胺 （TMB），碱性磷酸酶一般采用对硝基苯 磷酸酯（P-NPP）作为底物，产物为黄色的 对硝基酚，在405nm波长处有最高吸收峰。
二、免疫检验技术在临床免疫学 检验的应用
• 3.免疫球蛋白、循环免疫复合物和补体的测 定 包括测定五类免疫球蛋白的含量、血清 总补体活性及补体成分的含量和在多种疾 病时血清中升高的循环免疫复合物。
二、免疫检验技术在临床免疫学 检验的应用
• 4. 细胞免疫相关指标测定 检测淋巴细胞亚 群和淋巴细胞的功能以及白细胞介素—2等 多种细胞因子，用于判断机体细胞免疫功 能状况。
• 江西省胸科医院：熊国亮
一、概述
• 免疫学检验是研究免疫学技术及其在医学 检验领域应用的一门学科。免疫检验技术 则重点阐述各类免疫学技术的基本原理、 方法类型和临床应用。19世纪末相继建立 了凝集试验、沉淀试验和补体结合试验等 三大经典血清学试验，用于检测病原微生 物的抗原或抗体对传染病的诊断起到重要 作用。
三、酶联免疫吸附试验（enzy发展，放射 免疫技术、荧光免疫技术、酶免疫技术、 化学发光免疫技术、流式细胞免疫分析技 术等免疫标记技术应用于临床免疫学检验， 加快了免疫学检验的自动化、标准化进程， 极大地提高了免疫学检验的灵敏度，拓展 了免疫学检测范围，从检测免疫相关物质 （抗原、抗体、补体、免疫活性细胞和细 胞因子等）到检测体液中的微量物质（激 素、酶、血浆微量蛋白、血药浓度、微量 元素等）。
三、酶联免疫吸附试验（enzymelinked immunosorbent assay,ELISA）
• 此法常用多孔聚苯乙烯反应板作为固相载 体，读取结果需用酶标仪。标记抗原或抗 体所用的酶常选择辣根过氧化物酶（HRP）、 碱性磷酸酶（AP）等，HRP常用的底物有 邻苯二胺（OPD）或四甲基联苯胺 （TMB），碱性磷酸酶一般采用对硝基苯 磷酸酯（P-NPP）作为底物，产物为黄色的 对硝基酚，在405nm波长处有最高吸收峰。
二、免疫检验技术在临床免疫学 检验的应用
• 3.免疫球蛋白、循环免疫复合物和补体的测 定 包括测定五类免疫球蛋白的含量、血清 总补体活性及补体成分的含量和在多种疾 病时血清中升高的循环免疫复合物。
二、免疫检验技术在临床免疫学 检验的应用
• 4. 细胞免疫相关指标测定 检测淋巴细胞亚 群和淋巴细胞的功能以及白细胞介素—2等 多种细胞因子，用于判断机体细胞免疫功 能状况。
免疫检测法PPT课件
质。
缺点
01
02
03
04
交叉反应
有时会出现交叉反应，导致假 阳性结果。
抗体依赖
免疫检测法依赖于抗体的质量 和特异性，因此抗体制备的难
度和成本较高。
样品处理要求高
对于某些生物样品，需要进行 复杂的预处理才能进行检测。
检测时间较长
相对于一些快速检测方法，免 疫检测法可能需要更长时间才
能获得结果。
改进方向
分类
根据检测原理和应用领域，免疫 检测法可分为酶联免疫吸附试验 、放射免疫分析、荧光免疫分析 、化学发光免疫分析等。
免疫检测法的应用领域
01
02
03
医学诊断
用于检测人体内的肿瘤标 志物、激素、病毒抗原、 药物残留等，辅助医生进 行疾病诊断和病情监测。
食品安全
用于检测食品中的农药残 留、兽药残留、毒素等有 害物质，保障食品安全。
情监测。
激素水平检测
性激素检测
通过检测性激素水平，有助于评估男性和女性的生殖健康状况，如 睾酮、雌二醇、孕酮等激素的检测。
甲状腺激素检测
甲状腺激素对人体的新陈代谢和生长发育具有重要作用，通过检测 甲状腺激素水平，有助于甲状腺功能亢进和减退的诊断和治疗。
肾上腺激素检测
肾上腺激素与人体应激反应、免疫功能等方面密切相关，通过检测肾 上腺激素水平，有助于相关疾病的诊断和治疗。Fra bibliotek传染病检测
结核病检测
性病检测
通过检测结核病抗体，有助于早期发 现和诊断结核病，为预防和治疗提供 依据。
免疫检测法在性病检测中发挥着重要 作用，如梅毒、淋病、尖锐湿疣等， 通过检测相关抗体和抗原，及时发现 和治疗性病。
肝炎检测
缺点
01
02
03
04
交叉反应
有时会出现交叉反应，导致假 阳性结果。
抗体依赖
免疫检测法依赖于抗体的质量 和特异性，因此抗体制备的难
度和成本较高。
样品处理要求高
对于某些生物样品，需要进行 复杂的预处理才能进行检测。
检测时间较长
相对于一些快速检测方法，免 疫检测法可能需要更长时间才
能获得结果。
改进方向
分类
根据检测原理和应用领域，免疫 检测法可分为酶联免疫吸附试验 、放射免疫分析、荧光免疫分析 、化学发光免疫分析等。
免疫检测法的应用领域
01
02
03
医学诊断
用于检测人体内的肿瘤标 志物、激素、病毒抗原、 药物残留等，辅助医生进 行疾病诊断和病情监测。
食品安全
用于检测食品中的农药残 留、兽药残留、毒素等有 害物质，保障食品安全。
情监测。
激素水平检测
性激素检测
通过检测性激素水平，有助于评估男性和女性的生殖健康状况，如 睾酮、雌二醇、孕酮等激素的检测。
甲状腺激素检测
甲状腺激素对人体的新陈代谢和生长发育具有重要作用，通过检测 甲状腺激素水平，有助于甲状腺功能亢进和减退的诊断和治疗。
肾上腺激素检测
肾上腺激素与人体应激反应、免疫功能等方面密切相关，通过检测肾 上腺激素水平，有助于相关疾病的诊断和治疗。Fra bibliotek传染病检测
结核病检测
性病检测
通过检测结核病抗体，有助于早期发 现和诊断结核病，为预防和治疗提供 依据。
免疫检测法在性病检测中发挥着重要 作用，如梅毒、淋病、尖锐湿疣等， 通过检测相关抗体和抗原，及时发现 和治疗性病。
肝炎检测
免疫学检测原理及临床应用课件-PPT精选文档
凝集反应种类 ⑴直接凝集反应 ⑵间接凝集反应 是将可溶性抗原或抗体吸附于与免疫无关的 载体上，使之成为致敏载体颗粒，然后与相 应抗体或抗原作用，在电解质参与下出现的 凝集反应 ⑶间接凝集抑制反应 将可溶性抗原与相应抗体预先作用，然后再 加入致敏载体悬液，由于抗体已被可溶性抗原 结合，因而致敏颗粒不发生凝集现象，称为 间接凝集抑制试验
2 沉淀反应 可溶性抗原（如细菌浸出液，组织浸出 液和 动物血清等）与相应抗体结合后， 在电解质存在条件下，经过一定时间作 用后，可出现肉眼可见的沉淀物，称为 沉淀反应
⑴ 单向扩散试验 是一种定量试验，使抗原在含有抗体的琼脂 介质中扩散，经一定时间后即可见抗原孔周 围出现由抗原抗体复合物形成的沉淀环。沉 淀环的直径与抗原浓度成正比。故试验前应 用已知不同浓度标准抗原制成标准曲线（纵 座标为沉淀环直径，横座标为抗原浓度）， 可根据沉淀环直径的大小从标准曲线中查出 待检样品中抗原的含量。临床上常用于测定 IgG、IgM、IgA的含量
*酶联免疫斑点试验
*BSA-ELISA
⑶免疫组化技术 ⑷放射免疫测定法 ⑸化学发光免疫分析 ⑹免疫印迹法
二免疫细胞检测
㈠免疫细胞及其亚类计数
㈡淋巴细胞功能测定
1 体外试验
⑴淋巴细胞增殖试验 ⑵细胞毒试验 ⑶分泌功能测定 2 体内试验
三免疫分子检测 ㈠免疫球蛋白测定 ㈡补体测定 ㈢细胞因子检测 ㈣CD分子、表面受体和黏附分子的检测 ㈤HLA分型
免疫学检测原理 及临床应用
一、基于抗原抗体反应的检测方法 ㈠ 抗原抗体结合反应的特点 1.高度特异性 2.抗原抗体结合的带现象与可见性 3.可逆性 ㈡ 影响抗原抗体反应的因素 1.电解质 2.酸碱度 3.温度 4.抗原和抗体的性质
前 带 现 象
免疫学检查PPT课件
Y
YY
Y
Y
Y
Y
酶免疫化学发光仪测定原理：例如竞争法
+ ++
磁性 羊抗鼠 单克隆
微粒
IgG 鼠 抗 茶 碱 抗 体
子
待测血清中 茶碱
ALP标 记 的 茶碱
3 37℃ 7 C
YYY
AM PD
AM PPD
37℃
清洗 3 37℃ 7 C
四、生殖内分泌功能的免疫分析
卵巢储备功能的实验监测 卵巢储备功能是指卵巢内存留卵泡的数量和质量，反映女性的生育能力。
➢ HPV检测方法：传统的细胞学检测方法及其进展:巴氏涂片法、薄层液 基制片技术、计算机辅助检测技术等
➢ HPV-DNA检测方法
➢ HPV检测新技术
HPV-DNA检测方法：通用型引物聚合酶链反应(PCR) 核酸杂交检测 核酸印迹原位杂交 斑点印迹 原位杂交 杂 交 捕 获 法 (hybrid capture- II ， 又 称 HC-Ⅱ 系 统 )
梅毒螺旋体感染的实验室诊断
根据梅毒螺旋体（treponema pallidum，TP） 的生物学及免疫学特 性，检测方法主要有以下几种：
1病原体的检查 2梅毒血清学试验 3基因诊断技术
二、生殖感染的免疫实验诊断
基因诊断技术 ：聚合酶链反应（PCR）从选择的标本扩增梅毒螺旋体 DNA序列，使其拷贝数量增加，再用特异性探针来进行检测，能选择性 地将靶基因扩增106以上，方法敏感特异。
分子生物学检测方法 ：有基因探针、PCR、蛋白表达等方法
二、生殖感染的免疫实验诊断
衣原体感染的免疫学诊断 ： 衣原体包括沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体和肺炎衣原体。寄生于宿主细胞 内，有特殊的生长繁殖周期，在周期中以形态和功能不同的状态存在， 即细胞外具有感染性的原体和细胞内无感染性的始体或网状体。
YY
Y
Y
Y
Y
酶免疫化学发光仪测定原理：例如竞争法
+ ++
磁性 羊抗鼠 单克隆
微粒
IgG 鼠 抗 茶 碱 抗 体
子
待测血清中 茶碱
ALP标 记 的 茶碱
3 37℃ 7 C
YYY
AM PD
AM PPD
37℃
清洗 3 37℃ 7 C
四、生殖内分泌功能的免疫分析
卵巢储备功能的实验监测 卵巢储备功能是指卵巢内存留卵泡的数量和质量，反映女性的生育能力。
➢ HPV检测方法：传统的细胞学检测方法及其进展:巴氏涂片法、薄层液 基制片技术、计算机辅助检测技术等
➢ HPV-DNA检测方法
➢ HPV检测新技术
HPV-DNA检测方法：通用型引物聚合酶链反应(PCR) 核酸杂交检测 核酸印迹原位杂交 斑点印迹 原位杂交 杂 交 捕 获 法 (hybrid capture- II ， 又 称 HC-Ⅱ 系 统 )
梅毒螺旋体感染的实验室诊断
根据梅毒螺旋体（treponema pallidum，TP） 的生物学及免疫学特 性，检测方法主要有以下几种：
1病原体的检查 2梅毒血清学试验 3基因诊断技术
二、生殖感染的免疫实验诊断
基因诊断技术 ：聚合酶链反应（PCR）从选择的标本扩增梅毒螺旋体 DNA序列，使其拷贝数量增加，再用特异性探针来进行检测，能选择性 地将靶基因扩增106以上，方法敏感特异。
分子生物学检测方法 ：有基因探针、PCR、蛋白表达等方法
二、生殖感染的免疫实验诊断
衣原体感染的免疫学诊断 ： 衣原体包括沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体和肺炎衣原体。寄生于宿主细胞 内，有特殊的生长繁殖周期，在周期中以形态和功能不同的状态存在， 即细胞外具有感染性的原体和细胞内无感染性的始体或网状体。
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1．直接凝集试验 玻片凝集试验：用于定性测抗原。如ABO血型鉴定，
细菌的鉴定、分型等。 试管凝集试验：用于定量测抗体，如肥达氏反应。
2．间接凝集试验 如类风湿因子的测定等。
9
10
（二）沉淀反应 可溶性抗原（血清蛋白、组织浸液等）与
相应抗体结合而形成可见沉淀物的反应。 因该类反应多在半固体琼脂凝胶中进行，故
22
间接法ELISA
乙肝标志物中 抗HBs的检测 常采用本法
23
2 )免疫荧光技术
(Immunofluorescence Technique) 用荧光素标记一抗或二抗，检测特异性抗原 或抗体的方法
24
常用荧光素 异硫氰酸荧光素（FITC）， 显黄绿色。 藻红蛋白（PE），显红色。
用途：细胞表面CD分子 抗核抗体
36
原理：是将各种蛋白质有序地固定于载玻片等各种介质
载体上成为检测的芯片，然后，用标记了有特定荧光物质 的抗体与芯片作用，与芯片上的蛋白质相匹配的抗体将与 其对应的蛋白质结合，抗体上的荧光将指示对应的蛋白质 及其表达数量。
37
第三节 免疫细胞功能的检测
38
39
免疫细胞的分离
➢ 外周血单个核细胞分离 ➢ 淋巴细胞的分离 ➢ T细胞和B细胞的分离 ➢ T细胞亚群的分离
第二十二章 免疫学检测技术
p193
1
第一节 体外抗原抗体结合反 应的特点及影响因素
2
一. 体外抗原抗体反应的特征
高度特异性：抗原的表位与抗体的抗原结合 点结构互补。
表面化学基团之间的可逆性结合 适宜的抗原抗体浓度和比例 抗原抗体反应的两个阶段
3
高度专一性的结合
4
可逆性结合
Equivalence – Lattice formation
优点：该方法既具有免疫反应的高度特异性又有发光分析的 高灵敏度。
30
化学发光免疫测定 吖啶酯、鲁米诺 生物发光免疫测定 萤火虫、发光水母
化学发光酶免疫测定 辣根过氧化物酶（HRP） 碱性磷酸酶（AP） 电化学发光免疫测定
31
5 )免疫胶体金技术
用胶体金标记一抗或二抗，检测特异性抗原或抗 体的方法
18
常用酶及其底物
➢ 辣根过氧化物酶（HRP） ➢ 碱性磷酸酶（AP）
➢
19
分类
20
双抗体夹心法
在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原， 例如HBsAg、HBeAg、AFP、HCG等
21
特点：
❖ 非竞争结合反应 ❖ 常用于抗原的检测 ❖ 适用于分子中具有至少两个抗原决定簇
的多价抗原，而不能用于小分子半抗原 的检测 ❖ 所用两种抗体分别针对同一个抗原分子 的不同抗原决定簇
45
（二）淋巴细胞及其亚群的分离和分析
➢ 免疫吸附分离法 ➢ 免疫磁珠法 ➢ 荧光激活细胞分离仪分离法
（ (Fluorescence Activated Cell Sorting)， FACS ） ➢ 抗原肽-MHC分子四聚体技术分析CTL
46
2. 免 疫 磁 珠 细 胞 分 离
47
48
免疫磁珠法细胞分选过程
➢不同细胞密度不同 ➢不同细胞表面生物学特性不同 ➢不同细胞表面分化抗原不同
42
不同细胞密度不同
➢人的红细胞密度为1.093 ➢粒细胞密度为1.092 ➢单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的密度为 1.075-1.090
43
用1.077±0.001的分层液可将细胞分离
44
密度梯度离心(Ficoll)离心
又称为琼脂扩散试验或免疫扩散。
11
琼脂凝胶
12
1．单向免疫扩散 用于定量测抗原。
如检测血清免疫球蛋白、C3等含量。
13
2．双向免疫扩散
主要用于定性检测抗原或抗体，抗原组成及两 种抗原相关性分析
14
3．免疫电泳
其方法是先电泳、后扩散。主要用于抗原成分的分析，亦可 用于诊断如骨髓瘤、性联低丙种球蛋白血症等的诊断
25
26
27
28
3 )放射免疫测定法（RIA）
用放射性核素标记一抗或二抗，检测特异性抗原或抗体 的方法
敏感度可达pg水平， 其标记物为125I、131I等。 常用于微量物质的检测，如激素、IgE等。
29
4 )发光免疫分析
immunoassay LIA)
(luminescence
将发光分析系统和免疫测定相结合而建立的一种新的超微量 免疫分析技术。
15
（三）免疫标记技术
免疫标记技术 = 免疫技术 + 标记技术
抗原抗体反应 示踪物标记
特异性
灵敏性
标记免疫技术的主要特点：
高特异性荧光素、放射性核素、化学发光物质 及胶体金
优点：极大的提高了反应的灵敏度，可以 对微量物质进行定量、定性 或定位检测。
免疫标记技术主要类型：
免疫酶技术
免疫荧光技术
放射免疫测定法
发光免疫分析
免疫胶体金技术
17
1)免疫酶测定法 （Enzyme Immunoassay, EIA）
利用酶标记一抗或二抗检测特异性抗原 或抗体的方法
特点：利用抗原-抗体反应的高度特异性， 以及酶催化底物反应的生物放大作用, 最后用酶标仪测定光密度值（OD），评 定抗原-抗体的含量。
32
6 )免疫印迹法（Western blotting）
该法是将凝胶电泳与固相免疫相接合的检测 技术，即将电泳分区的蛋白质转移到固相载体， 再用酶免疫、放射免疫技术测定。
常用于检测多种蛋白质
33
免 疫 印 迹 法 示 意 图
34
35
4.蛋白质芯片技术：又称蛋白质微阵列
是一种高通量的蛋白功能分析技术，可用于蛋白质表达谱 分析，研究蛋白质与蛋白质的相互作用，甚至DNA－蛋白 质、RNA－蛋白质的相互作用，筛选药物作用的蛋白靶点 等。
40
(一)外周血单个核细胞分离
➢ 外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMCs）包括淋巴细胞和
单核细胞（monocyte）。 ➢ Ficoll分离液法主要用于分离外周血中的单个核细
胞，是一种单次差速密度梯度离心的分离法。
41
细胞分离基本原理
5
抗原抗体比例对反应现象 的影响
6
抗原抗体反应的影响因素
电解质：可促进抗原与抗体的结合。 常用生理盐水。
温度：最适温度为37℃。 酸碱度：最适pH =6-8。
7
第二节 检测抗原或抗体的 体外试验
8
（一）凝集反应 颗粒性抗原（RBC、细菌等）与相应抗体
结合形成肉眼可见凝集物的现象或反应。
细菌的鉴定、分型等。 试管凝集试验：用于定量测抗体，如肥达氏反应。
2．间接凝集试验 如类风湿因子的测定等。
9
10
（二）沉淀反应 可溶性抗原（血清蛋白、组织浸液等）与
相应抗体结合而形成可见沉淀物的反应。 因该类反应多在半固体琼脂凝胶中进行，故
22
间接法ELISA
乙肝标志物中 抗HBs的检测 常采用本法
23
2 )免疫荧光技术
(Immunofluorescence Technique) 用荧光素标记一抗或二抗，检测特异性抗原 或抗体的方法
24
常用荧光素 异硫氰酸荧光素（FITC）， 显黄绿色。 藻红蛋白（PE），显红色。
用途：细胞表面CD分子 抗核抗体
36
原理：是将各种蛋白质有序地固定于载玻片等各种介质
载体上成为检测的芯片，然后，用标记了有特定荧光物质 的抗体与芯片作用，与芯片上的蛋白质相匹配的抗体将与 其对应的蛋白质结合，抗体上的荧光将指示对应的蛋白质 及其表达数量。
37
第三节 免疫细胞功能的检测
38
39
免疫细胞的分离
➢ 外周血单个核细胞分离 ➢ 淋巴细胞的分离 ➢ T细胞和B细胞的分离 ➢ T细胞亚群的分离
第二十二章 免疫学检测技术
p193
1
第一节 体外抗原抗体结合反 应的特点及影响因素
2
一. 体外抗原抗体反应的特征
高度特异性：抗原的表位与抗体的抗原结合 点结构互补。
表面化学基团之间的可逆性结合 适宜的抗原抗体浓度和比例 抗原抗体反应的两个阶段
3
高度专一性的结合
4
可逆性结合
Equivalence – Lattice formation
优点：该方法既具有免疫反应的高度特异性又有发光分析的 高灵敏度。
30
化学发光免疫测定 吖啶酯、鲁米诺 生物发光免疫测定 萤火虫、发光水母
化学发光酶免疫测定 辣根过氧化物酶（HRP） 碱性磷酸酶（AP） 电化学发光免疫测定
31
5 )免疫胶体金技术
用胶体金标记一抗或二抗，检测特异性抗原或抗 体的方法
18
常用酶及其底物
➢ 辣根过氧化物酶（HRP） ➢ 碱性磷酸酶（AP）
➢
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分类
20
双抗体夹心法
在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原， 例如HBsAg、HBeAg、AFP、HCG等
21
特点：
❖ 非竞争结合反应 ❖ 常用于抗原的检测 ❖ 适用于分子中具有至少两个抗原决定簇
的多价抗原，而不能用于小分子半抗原 的检测 ❖ 所用两种抗体分别针对同一个抗原分子 的不同抗原决定簇
45
（二）淋巴细胞及其亚群的分离和分析
➢ 免疫吸附分离法 ➢ 免疫磁珠法 ➢ 荧光激活细胞分离仪分离法
（ (Fluorescence Activated Cell Sorting)， FACS ） ➢ 抗原肽-MHC分子四聚体技术分析CTL
46
2. 免 疫 磁 珠 细 胞 分 离
47
48
免疫磁珠法细胞分选过程
➢不同细胞密度不同 ➢不同细胞表面生物学特性不同 ➢不同细胞表面分化抗原不同
42
不同细胞密度不同
➢人的红细胞密度为1.093 ➢粒细胞密度为1.092 ➢单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的密度为 1.075-1.090
43
用1.077±0.001的分层液可将细胞分离
44
密度梯度离心(Ficoll)离心
又称为琼脂扩散试验或免疫扩散。
11
琼脂凝胶
12
1．单向免疫扩散 用于定量测抗原。
如检测血清免疫球蛋白、C3等含量。
13
2．双向免疫扩散
主要用于定性检测抗原或抗体，抗原组成及两 种抗原相关性分析
14
3．免疫电泳
其方法是先电泳、后扩散。主要用于抗原成分的分析，亦可 用于诊断如骨髓瘤、性联低丙种球蛋白血症等的诊断
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3 )放射免疫测定法（RIA）
用放射性核素标记一抗或二抗，检测特异性抗原或抗体 的方法
敏感度可达pg水平， 其标记物为125I、131I等。 常用于微量物质的检测，如激素、IgE等。
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4 )发光免疫分析
immunoassay LIA)
(luminescence
将发光分析系统和免疫测定相结合而建立的一种新的超微量 免疫分析技术。
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（三）免疫标记技术
免疫标记技术 = 免疫技术 + 标记技术
抗原抗体反应 示踪物标记
特异性
灵敏性
标记免疫技术的主要特点：
高特异性荧光素、放射性核素、化学发光物质 及胶体金
优点：极大的提高了反应的灵敏度，可以 对微量物质进行定量、定性 或定位检测。
免疫标记技术主要类型：
免疫酶技术
免疫荧光技术
放射免疫测定法
发光免疫分析
免疫胶体金技术
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1)免疫酶测定法 （Enzyme Immunoassay, EIA）
利用酶标记一抗或二抗检测特异性抗原 或抗体的方法
特点：利用抗原-抗体反应的高度特异性， 以及酶催化底物反应的生物放大作用, 最后用酶标仪测定光密度值（OD），评 定抗原-抗体的含量。
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6 )免疫印迹法（Western blotting）
该法是将凝胶电泳与固相免疫相接合的检测 技术，即将电泳分区的蛋白质转移到固相载体， 再用酶免疫、放射免疫技术测定。
常用于检测多种蛋白质
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免 疫 印 迹 法 示 意 图
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4.蛋白质芯片技术：又称蛋白质微阵列
是一种高通量的蛋白功能分析技术，可用于蛋白质表达谱 分析，研究蛋白质与蛋白质的相互作用，甚至DNA－蛋白 质、RNA－蛋白质的相互作用，筛选药物作用的蛋白靶点 等。
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(一)外周血单个核细胞分离
➢ 外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMCs）包括淋巴细胞和
单核细胞（monocyte）。 ➢ Ficoll分离液法主要用于分离外周血中的单个核细
胞，是一种单次差速密度梯度离心的分离法。
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细胞分离基本原理
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抗原抗体比例对反应现象 的影响
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抗原抗体反应的影响因素
电解质：可促进抗原与抗体的结合。 常用生理盐水。
温度：最适温度为37℃。 酸碱度：最适pH =6-8。
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第二节 检测抗原或抗体的 体外试验
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（一）凝集反应 颗粒性抗原（RBC、细菌等）与相应抗体
结合形成肉眼可见凝集物的现象或反应。