艾滋病感染实验室检测
艾滋病实验室检测流程及规范 课程
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艾滋病检测筛查实验室基本标准
艾滋病检测筛查实验室基本标准（一）艾滋病筛查中心实验室及艾滋病筛查实验室。
1、人员条件至少由3名医技人员组成，其中具有中级卫生技术职称人员至少1名。
负责筛查试验的技术人员需具有2年以上从事病毒性疾病血清学检测工作经验，接受过省级以上艾滋病检测技术培训，并获得培训证书。
2、建筑条件：实验室或检测区域应分为清洁区、半污染区和污染区，应符合二级生物安全实验室（BSL-2）要求。
3、仪器设备条件配备艾滋病病毒抗体筛查试验所需设备，至少包括酶标读数仪、洗板机、普通冰箱、水浴箱（或温箱）、离心机、加样器（仪）、消毒与污物处理设备、实验室恒温设备、安全防护用品和生物安全柜。
（二）艾滋病检测点。
1、人员条件：至少由2名经过艾滋病检测技术培训并获得培训证书的专业人员组成。
2、建筑条件：需有艾滋病检测区域或专用实验台，能开展简便、快速检测。
3、设备条件：需配备快速试验所必须的物品，包括普通冰箱、消毒与污物处理设备、一次性消耗品、安全防护用品。
艾滋病检测筛查实验室职能包括艾滋病筛查中心实验室、艾滋病筛查实验室和艾滋病检测点。
艾滋病筛查中心实验室设在市（地）级疾病预防控制中心；艾滋病筛查实验室和艾滋病检测点可设在疾病预防控制机构、医疗机构、采供血机构、计划生育技术服务机构等。
1、艾滋病筛查中心实验室职能。
（1）负责职责范围内艾滋病病毒抗体筛查试验，根据需要可开展其他艾滋病检测工作。
（2）负责将艾滋病病毒抗体筛查呈阳性反应的样品送艾滋病检测确证实验室。
（3）定期汇总艾滋病检测资料，并上报艾滋病检测确证实验室。
配合艾滋病检测确证实验室做好个案调查、登记等随访工作。
（4）负责对职责范围内艾滋病检测筛查实验室的技术指导；协助艾滋病筛查实验室和艾滋病检测点开展自愿咨询检测工作，给予技术支持和指导。
2、艾滋病筛查实验室职能。
（1）开展艾滋病病毒抗体的筛查试验，根据需要可开展其他艾滋病检测工作。
（2）负责将艾滋病病毒抗体筛查呈阳性反应的样品送当地艾滋病筛查中心实验室或艾滋病检测确证实验室。
艾滋病的实验室检查
艾滋病的实验室检查一、概述艾滋病一词系获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)英文名词缩写的音译，由人类免疫缺陷病毒（HIV）引起的。
该病毒主要侵犯人体的免疫系统，尤其是破坏辅助性T淋巴细胞（TH或T4），使患者细胞免疫功能明显低下，失去对外界感染的抵抗力，容易发生各种顽固感染和恶性肿瘤，艾滋病缺乏有效的治疗，死亡率高，预后很差。
艾滋病已成为当今世界严重危害人类健康和生命的烈性传染病。
本病主要通过性接触传播，生殖器皮肤粘膜有破损的受染机会大大增加；其次通过血液、血液制品、组织器官的移植而传播，输入含艾滋病毒的血液或血液制品，静脉吸毒者共用未经消毒的注射器，针头上带有的微量血液足以使人染上艾滋病毒；再次为母婴传播，受艾滋病毒感染的孕妇可通过胎盘的脐带血将病毒传染至胎儿，也可在分娩时及产后传染给婴儿。
国外研究报道，大约1/4的HIV 感染儿童在生后一年发展为艾滋病，HIV感染儿童5年存活率为70%。
二、实验室检查１．HIV病原学检查从患者体液或组织中分离HIV是确定HIV感染最可靠的证据，分离HIV的技术要求高，仅在少数有特殊装备的实验中才能作。
常用的有抗体检测法，可用免疫荧光法，酶联免疫吸附试验（ELISA）及蛋白印迹法等。
也可作抗原检测，如检测HIV P24抗原等。
２．免疫学检查做末梢淋巴细胞计数显示淋巴细胞数量呈进行性下降，做亚形计数主要是CD4细胞（辅助性T细胞，TH）及CD8细胞（抑制性T细胞，Ts）。
在急性期TH计数是正常的，早期TH计数在400/mm3以上，中期降至200～400/mm3以下，晚期降至200/mm3以下，且TH/Ts比值小于1。
３．机会性感染的病原学检查包括病毒、细菌、真菌及原虫等的检测。
早期HIV感染的诊断主要靠检出HIV抗体。
对一些高危人群如发生传染性单核细胞增多症的表现应常规作HIV抗体检测。
（三）诊断标准我国于1990年8月在“中华人民共和国传染病防治法”中规定艾滋病属乙类传染病，并提出试验诊断标准。
艾滋病检测筛查实验室基本标准
艾滋病检测筛查实验室基本标准艾滋病（Acquired Immunodeficiency Syndrome，AIDS）是由人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus，HIV）引起的一种免疫系统疾病，严重威胁人类的健康与生活。
为有效控制艾滋病的传播，艾滋病检测筛查工作的准确性和标准化非常重要。
本文将介绍艾滋病检测筛查实验室的基本标准，以确保检测结果的可靠性。
一、实验室基本建设1. 实验室环境：实验室应设置在独立、封闭的区域内，具备良好通风、充足的阳光照射和患者与外界隔离的条件，确保病毒不会泄露和传播。
2. 设备设施：实验室应配备先进的设备和仪器，如荧光显微镜、PCR仪等，以确保检测的准确性和灵敏度。
3. 安全防护：实验室必须采取严格的生物安全措施，包括实验室人员必须穿戴合适的防护服，使用一次性手套等，以避免病毒的传播。
二、实验室人员要求1. 资质要求：实验室人员需具备相关医学或生物学专业背景并取得相关资质证书，熟悉艾滋病检测筛查的理论和实践操作。
2. 培训和定期考核：实验室人员应定期接受相关培训和考核，保持技能的更新和提高。
3. 团队合作：实验室人员需要具备团队合作精神，有效沟通和协作，以确保实验室工作的顺利进行。
三、标本采集和处理1. 采样器具：艾滋病标本采集应使用一次性器具，以避免交叉感染的发生。
2. 标本种类：常见的标本种类包括血液、唾液等，根据实际需要选择合适的标本类型。
3. 采集操作规范：标本采集操作应符合相关的操作规范，采集时需注意无菌操作和避免污染。
四、实验室操作流程1. 样本登记：在样本送检前，必须进行准确的样本登记和信息记录，包括患者的姓名、年龄、性别等。
2. 样本保存：样本在采集后应妥善保存，并按照规定的时间安排进行检测，以确保结果的准确性。
3. 检测方法：艾滋病检测方法包括酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）、免疫荧光法等，实验室应选择准确可靠的方法进行检测。
艾滋病实验室检测【最新】
艾滋病实验室检测HIV/AIDS 的实验室检测主要包括HIV抗体检测、HIV核酸定性和定量检测、CD4+ T淋巴细胞计数、HIV耐药检测等。
HIV⁃1/2抗体检测是HIV感染诊断的金标准，HIV核酸检测(定性和定量)也用于HIV 感染诊断;HIV 核酸定量(病毒载量)和CD4+ T 淋巴细胞计数是判断疾病进展、临床用药、疗效和预后的两项重要指标;HIV 耐药检测可为HAART方案的选择和更换提供指导。
1.HIV⁃1/2 抗体检测:包括筛查试验和补充试验。
HIV⁃1/2抗体筛查方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、化学发光或免疫荧光试验、快速试验(斑点ELISA和斑点免疫胶体金或胶体硒、免疫层析等)、简单试验(明胶颗粒凝集试验)等。
补充试验方法包括抗体确证试验(免疫印迹法，条带/线性免疫试验和快速试验)和核酸试验(定性和定量)。
筛查试验呈阴性反应可出具HIV⁃1/2抗体阴性报告, 见于未被HIV感染的个体，但窗口期感染者筛查试验也可呈阴性反应。
若呈阳性反应，用原有试剂双份(快速试验)/双孔(化学发光试验或ELISA)或两种试剂进行重复检测，如均呈阴性反应，则报告为HIV抗体阴性;如一阴一阳或均呈阳性反应，需进行补充试验。
补充试验:抗体确证试验无HIV特异性条带产生，报告HIV⁃1/2抗体阴性;出现条带但不满足诊断条件的报告不确定，可进行核酸试验或2~4周后随访，根据核酸试验或随访结果进行判断。
补充试验HIV⁃1/2 抗体阳性者，出具HIV⁃1/2抗体阳性确证报告。
核酸试验:核酸定性检测结果阳性报告HIV⁃1核酸阳性，结果阴性报告HIV⁃1核酸阴性。
病毒载量检测结果低于检测线报告低于检测线;>5 000拷贝/ml 报告检测值;检测线以上但≤5 000拷贝/ml建议重新采样检测，临床医生可结合流行病学史、CD4+、CD8+T淋巴细胞计数或HIV抗体随访检测结果等进行诊断或排除诊断。
2.CD4+T淋巴细胞检测CD4+T淋巴细胞是HIV感染最主要的靶细胞，HIV感染人体后，出现CD4+T淋巴细胞进行性减少，CD4+/CD8+T淋巴细胞比值倒置，细胞免疫功能受损。
HIV实验室检测方法和步骤
HIV实验室检测方法和步骤HIV，也称为人类免疫缺陷病毒，是一种能导致艾滋病的病毒。
HIV实验室检测方法和步骤被广泛应用于检测感染HIV的个体。
以下是一般情况下使用的实验室检测方法和步骤的详细说明。
1.预处理和登记在进行HIV实验室检测之前，需要对样本进行预处理和登记。
预处理包括标识样本的相关信息，如样本编号和患者信息。
这些信息对于结果记录和跟踪是至关重要的。
此外，还需检查样本的适应性和完整性。
2.血液样本采集3.血清分离采集到的血液样本需要进行血清分离。
这可以通过离心来分离血液的不同成分，例如血红蛋白和血清。
离心速度和时间需要根据实验室设备和协议进行调整。
4.酶联免疫吸附测定法（ELISA）最常用的HIV实验室检测方法是酶联免疫吸附测定法（ELISA）。
这种方法使用特定的抗体来检测血液中特定的抗原。
根据ELISA方法的不同，可检测HIV抗原或抗体。
实验室技术人员将患者血清样本加入到已包含HIV相关抗原或抗体的试剂盘中，然后根据试剂盘的建议操作，包括孵育时间、温度和洗涤步骤。
任何与接触抗原或抗体反应的特异性颜色改变，都可作为阳性结果。
否则，结果被视为阴性。
5.确认试验在进行HIV检测的初步结果后，通常会进行一个或多个确认试验。
确认试验的目的是统一确定检测结果的可靠性。
常用的确认试验包括HIV免疫荧光试验（IFA）和西方印迹法（Western blot）。
这些试验通过检测血清中的HIV特异性抗体，以确保先前的结果的准确性。
6.分子检测有时，为了获得更加可靠和敏感的结果，实验室会使用分子检测方法，例如聚合酶链式反应（PCR）。
PCR可以检测和放大病毒的基因或核酸，以确定HIV感染的存在和病毒的数量。
7.结果解读和记录HIV实验室检测结束后，实验室技术人员需要解读并记录结果。
阳性结果意味着存在HIV感染，而阴性结果则表示未检测到HIV感染。
针对不同的检测方法和样本类型，结果的解释可能有所不同。
因此，在结果解读和记录时，实验室人员需要严密遵循实验室的标准操作规程（SOP）。
HIV筛查实验室检测操作规程
HIV筛查实验室检测操作规程
1、样品应按《全国艾滋病检测规范》要求采集，并做好标记，填好送检表格。
采样时一定要注意安全，谨慎操作。
防止发生刺伤和外界污染。
采样完毕后应尽快送往实验室。
2、实验室收到样品后及时登记、编号、校对、分离血清。
如短期内检测可冷藏保存，否则放-20。
C冰柜低温保存。
3、检测操作应严格按厂家的试剂说明书及仪器操作程序进行准确操作，并做好质量控制，不能擅自更改，操作时要注意移液咀与本酶标板之间交叉污染。
所用的试剂必须是经过国家药品监督管理局注册批准、批批检合格、在有效期内的试剂。
4、筛查阳性标本须再用同一种试剂和不同厂家或不同检测原理的试剂进行复检，如复检均呈阳性或一阴一阳，须填好筛查阳性复检单和送检单送往复查中心实验室复检。
筛查阴性的填好HIV抗体筛查报告。
5、可疑阳性或阳性样品的转送，必须按照规定的运送程序，将血清盛于有标签的螺旋管内，防止样品流出，标签上注明姓名、唯一编号。
然后置于标有HIV检测专用字样的塑料容器内运送，保持2—4。
C冷藏运送。
送检单和复检单与样品分开放置。
6、实验结后应对实验室环境和实验废弃物进行消毒。
7、实验原始记录即时填写，实验后应认真填写实验记录和各种报表，做好质控。
HIV实验室检测技术
HIV实验室检测技术
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操作方法
• 实验准备:试验开始前将试剂和样品放置在 室温(18~23℃), 按实验室SOP做好试剂准 备。
• 备好试剂盒、待检样品和外部对照质控血 清后,严格按试剂盒说明书以及质控和安全 防护要求进行筛查检测.
1/3/2021
HIV实验室检测技术
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注意事项
• ELISA 是目前公认的抗-HIV 较佳的筛选方 法，但在实际工作中，ELISA抗-HIV的检测 受诸多因素影响。
艾滋病期：保持和发展AIDS早期症状，出现多种机 会性感染，神经细胞和功能损伤的表现，易发生 多种肿瘤
* AIDS的病程通常2年
1/3/2021
HIV实验室检测技术
2
关于检测抗-HIV的残余危险度
含义：在目前条件下，筛查后仍具感染性的机率 称为残余危险度。
影响因素： * 窗口期和检测时机的选择问题 * 实验室质控 * 个别人免疫功能低下，对HIV无反应 * 试剂质量和保存问题 * 是否在有效期内使用 * 试验操作错误：标本或结果登记的差错、仪器校准否、 错误的操作
第4代试剂
• 从理论上来讲，这种试剂是很完美的，但其 敏感度和特异度尚需通过大量的临床评估加 以确认。在初筛诊断试剂上还发展了特异的 HIV IgA，用作围产期儿童诊断，敏感度达 93.1%，特异度在1月龄以上的婴儿可达 100%。此外，在对抗HIV IgM的诊断也正在 积极研究，并取得了可喜的成绩，无形中可 缩短窗口期7—10天。
B
± ±或 ＋ 再次采样，做确证实验
C
±－
报告抗-HIV阴性
D
－ 不必复检 报告抗-HIV阴性
1/3/2021
HIV实验室检测技术
梅毒、 艾滋病、乙肝的实验室检测
三期梅毒
. 流行病学：多数有不安全性行为，或性伴感染史，或多性伴史；可有一期或二期梅毒史。病期在2年以上。
. 临床表现：晚期良性梅毒：结节性梅毒疹、马鞍鼻，梅毒性骨关节损坏，眼梅毒，神经梅毒及心血管梅毒。
. 实验室检查：
1、血清检查：
特异性抗体： 阳性
非特异性抗体： 阳性
.
有明确的不安全性行为史，而2年前无不安全性行为史。
.
有过符合一期或二期梅毒的临床表现，但当时未得到诊断和治疗者。
.
性伴有明确的早期梅毒感染史。
晚期隐性梅毒：感染时间在2年以上。无法判断感染时间者亦视为晚期隐性梅毒。既往无明确的梅毒诊
断和治疗史。
临床表现：无任何梅毒性的临床表现。 1、血清检查：
特异性抗体： 阳性 非特异性抗体： 阳性 2、脑脊液检查：一般无明显异常（用于排除无症状神经梅毒）
• 因治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为 疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。
二、梅毒螺旋体抗原血清学试验----- 特异性梅毒抗体
. 梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA) . 梅毒螺旋体血球凝集试验 (TPHA) . 梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA） . 化学发光免疫分析法（CLIA） . 梅免疫层析法-梅毒快速检测 (RT) . 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS） . 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）
• 所有HIV感染母亲所生儿童，在出生后6周或3个月未接受EID检测者，应进行 HIV抗体检测。检测时间： • 满12月龄 和 • 满18月龄（必要时，见HIV抗体检测流程）
• 出生后3个月EID检测结果为阴性的儿童也应接受HIV抗体检测
满18月龄HIV抗体检测阳性，可确认儿童HIV感染。
艾滋病实验室检查
淋巴细胞HIV RNA检测——
分子生物学检测（2）
*
Northern印迹杂交(Northern blot) 原理： RNA片段经电泳分离，从凝胶中转移到硝酸纤维素滤膜，再用探针杂交
分子生物学检测（3）
*ห้องสมุดไป่ตู้
HIV变异株检测——Sanger测序法
Ⅰ
Ⅰ
诊断标准
*
01
HIV抗体阳性
02
CD4+T淋巴细胞数<200/mm3
03
无上述表现或症状
鉴别诊断
*
01
原发性CD4+淋巴细胞减少症
无HIV感染流行病学资料，HIV-1和HIV-2病原学检测阴性。
继发性CD4+淋巴细胞减少
肿瘤和自生免疫性疾病（autoimmune disease）化疗或免疫抑制治疗后。
原理：核酸扩增时，核苷酸在某一固定点开始，随机在某一特定的碱基处终止，产生A、T、C、G四组不同长度的一系列核苷酸，通过在尿素变性的PAGE胶上电泳，获得DNA序列
病毒检测
*
01
血浆、单核细胞、脑脊液可分离出HIV
02
操作复杂，主要用于科研
*
诊 断
单击此处添加正文，文字是您思想的提炼， 请尽量言简意赅的阐述观点。
血清学检测（３）
*
HIV抗原检测——ELISA夹心法
测定p24抗原 敏感性很高（7～10 pg/ml） 特异性稍差（可有假阳性）
分子生物学检测（1）
*
PCR：高温变性(94℃)→低温退火(55℃)→适温延伸(72℃)；经25~30个循环，成倍数扩增 荧光定量PCR：比常规PCR多一个寡聚核苷酸探针（带一个荧光发光分子和一个荧光淬灭分子） 应用：PCR查PBMCs前病毒DNA；RT-PCR查血浆中的病毒RNA
艾滋病初筛实验室检测样品的规范化要求
艾滋病初筛实验室检测样品的规范化要求艾滋病检测最常用的样品是血液，包括血清、血浆、全血和用全血制备的细胞、干血斑。
唾液或尿液有时也可以作为测试样品，但目前极少使用。
样品采集、运送和保存涉及面较广，与检测结果有一定关系，所以制定规范化要求是非常必要的。
血清样品采集和处理对于艾滋病和HIV感染的诊断，主要采用血清样品检测HIV抗体。
可用一次性注射器（或真空采血管）无菌抽取5～10ML（根据需要确定采样量）静脉血，室温下自然放置1～2h,,待血液凝固、血块收缩后用3000rpm，离心15分钟，吸取血清进行HIV抗体检测。
如果当天不能进行检测，应将血清样品置2～8℃冰箱保存备用。
快速检测试剂检测HIV抗体，也可以用末梢全血：成人和1岁以上儿童可选择中指、无名指或食指采集；1岁以下儿童可采用足踵采血。
用75％医用酒精或碘伏消毒采血局部皮肤，用无菌纱布擦掉第一滴血。
用EDTA毛细管吸取血样时避免气泡进入毛细管。
采血结束后，局部必须认真消毒，彻底止血，采血完成后的穿刺针头必须丢弃在利器盒里，严防职业损伤。
根据实验项目要求选用适当的抗凝剂，采集用于CD4＋／CD8＋T淋巴细胞测定的样品，可选用EDTA或肝素或柠檬酸钠；HIV病毒分离、核酸定性／定量检测可选用EDTA或柠檬酸钠。
样品采集后应在规定时间及时送到实验室，避免因采集不当、时间延缓等因素而影响检测结果的真实性，采集的抗凝全血应在4-8h以内分离。
分离后将样品放在﹣20或﹣70℃冷冻。
对所有样品进行编号，写明日期和收集时间。
样品的保存用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于﹣20℃以下，短期（1周）内进行检测的样品可存放于2～8℃.HIV检测阳性反应血清样品保存时间至少十年。
HIV检测的阴性血清样品是否需要保存和保存要根据不同情况而定。
用于CD4＋／CD8＋T淋巴细胞测定的样品不能长期保存，样品采集时间超过48h则不可检测。
由于HIV检测阳性反应血清样品都保存在艾滋病检测确认实验室，因此，在HIV检测阳性反应血清样品较多的地区，艾滋病检测确认实验室应根据需要配备﹣20℃以下的低温冰箱和﹣80℃的超低温冰箱，设置血清库。
艾滋病的实验室常规检验项目
艾滋病的实验室常规检验项目
艾滋病检测，是指采用实验室方法对人体血液、其他体液、组织器官、血液衍生物等进行艾滋病病毒、艾滋病病毒抗体及相关免疫指标检测。
艾滋病的检测方法有：抗体检测，抗原检测，核酸检测，病毒分离。
(1)主要是中度以上细胞免疫缺陷包括：CD4+T 淋巴细胞耗竭：T淋巴细胞功能下降，外周血淋巴细胞显著减少，CD4<；200/μl，CD4/CD8<；1.0，(正常人为1.25—2.1)，迟发型变态反应皮试阴性，有丝分裂原刺激反应低下。
(2)B淋巴细胞功能失调：多克隆性高球蛋白血症，循环免疫复合物形成和自身抗体形成。
(3)NK细胞活性下降。
(4)各种致病性感染的病原体检查如PCR。
组织学证实的恶性肿瘤，如KS。
(5)HIV抗体检测：
1.酶联免疫吸附法(ELISA)；
2.明胶颗粒凝集试验(PA)；
3.免疫荧光检测法(IFA)；
4.免疫印迹检测法(Western Blot，简称WB法)；
5.放射免疫沉淀法(RIP)。
其中前三项常用于筛选试验，后二者用于确证试验。
(6)PCR技术检测HIV病毒。
HIV感染的实验室检测(共36张PPT)
• （3）实验结果
• ①阴性对照（NC），HIV-1阳性对照（PC1），HIV-2阳性对照 （PC2）
NC 必须＜0.25方可用，排除NC≥0.25的值，计算NC平均 值。
NC界限范围：0.6倍NC均值＜NC＜1.4倍NC均值。
• 竞争法、捕获包被法等 4、严格遵守实验室标准操作规程（SOP）。
为了达到以上的某个目的的HIV 检测可能不适合其他目的，比如输血服务的检测不适合临床诊断HIV感染 （4）艾滋病唾液检测卡：在硝酸纤维膜上包被人工合成的HIVgp41/gp36蛋白抗原，可同时检测含在唾液中的HIV-1/HIV-2抗体，原理为酶 免疫间接法。 监测(为了知晓人群流行状况) Introduction to HIV Testing ⑥在2h内置于酶标仪读数，单波长450nm，或双波长450/630nm测OD值。 常用HIV抗体检测方法: 加受检标本，保温反应。 （1）明胶颗粒凝集试验（PA）：PA是HIV血清抗体检测的一种简便方法，是将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作用，混匀后 保温（一般为室温）。
ELISA的原理
用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗 体复合物与液体中的其他物质分开。再 加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应 而结合在固相载体上。此时固相上的酶 量与标本中受检物质的量呈一定的比例 。
ELISA的原理
加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有 色产物，产物的量与标本中受检物质的量 直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性 或定量分析。由于酶的催化效率很高，间 接地放大了免疫反应的结果，使测定方法 达到很高的敏感度。
ELISA
酶联免疫吸附试验 + ve
HIV
包被了HIV 抗
原的检测板
患者的抗体
hiv感染实验室检测
特异性好、快速、简捷。
定量NASBA技术：
是由一对引物引导的，连续均一的体外特异核苷酸序列的 等温扩增的酶促反应过程。 优点：操作十分简单，只需将制备好的模板直接加到反应体
系中，恒温41℃培育1.5～2小时，即可将模板扩增109倍。 NASBA 反 应 体 系 包 括 AMV 反 转 录 酶 、 RNA 酶 H 、
through, FT)
免疫层析 （Immunochromatograpy, lateral
flow, IF)
快速检测试剂的应用
目前在国内批准注册的国外进口试剂有：Determine HIV1/2（ABBOTT，雅培）、Instant CHEK-HIV1+2 （EY）、麦美华、中新科炬
一般10-30min内出结果。 2003年国内已有产品被SFDA批准。有金豪、万泰、
②仅需少量标本或标本中仅含少量病毒也能检测；
③在病毒感染的急性期抗体尚未出现之前，病毒感染的诊断主 要依靠NAT，适用于早期诊断；
④可对病毒进行定量检测，有助于疗效监测； ⑤可对病毒基因进行基因分型，比血清分型更有价值； ⑥通过对病毒耐药基因的检测，可预测或发现病毒的耐药性；
⑦可用于先天性或围产期获得性病毒感染的诊断；
预约检测后咨询时间。
危险因素评估
1.性行为：具体的性活动方式、性伴数量、性活动频度、 使用安全套的情况和性伴感染的可能性。特别要注意某 些高危行为，如多性伴关系，无保护性交或肛交，性病 史。 2.吸毒行为：吸毒方式、注射器具消毒、共用注射器等。
3.其他接触血液的行为： 输血或血制品史，有无采供血（浆）史、器官移植史或 者被血液污染器具刺伤、纹身、穿耳等等；
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4）HIV亚型分析；确定人群中HIV的变异； 5）监测临床抗病毒药物治疗效果； 6）检测病毒的耐药性突变。
2006年10月12日浙江省艾滋病治疗培训班
（二）HIV病毒分离培养
将病人淋巴细胞与正常人的淋巴细胞共同培 养，适当周期培养后测定培养液HIV p24抗原 /RT，从而判断病人的淋巴细胞是否受到HIV感 染。
结果作为辅助诊断的依据。2次不同时间的样本核酸检测均为阳性提 示为HIV感染，均为阴性提示未感染。同时18个月时做抗体检测， 当18个月HIV抗体确证阳性方可诊断 HIV感染。
2006年10月12日浙江省艾滋病治疗培训班
核酸检测主要应用：
2）对18个月婴儿HIV抗体WB试验的不确定 （或可疑）结果进一步做辅助诊断；
–
1. 核酸检测（ cDNA测定-PCR、 RNA测定-病毒载量）
– 2. 病毒培养分离
– 3. P24抗原检测
–常用HIV抗体检测方法:
– 初筛：1.酶联免疫吸附法 ELISA：第三代、第四代
–
2.快速检测 RT：金标、硒标
–
3.简单法 PA: 明胶颗粒凝集
– 确证：免疫印迹法 WB:（Western Blot）、RIBA
④可对病毒进行定量检测，有助于疗效监测； ⑤可对病毒基因进行基因分型，比血清分型更有价值； ⑥通过对病毒耐药基因的检测，可预测或发现病毒的耐药性； ⑦可用于先天性或围产期获得性病毒感染的诊断； ⑧灵敏度高（可达ng甚至fg水平，理论上能检出单个病毒基
因），特异性好、快速、简捷。
2006年10月12日浙江省艾滋病治疗培训班
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核酸检测特点：
① 能 够 用 于 常 规 不 能 培 养 和 分 离 的 病 毒 的 检 测 （ 如 HBV、 HCV、HIV等）；
②仅需少量标本或标本中仅含少量病毒也能检测；
③在病毒感染的急性期抗体尚未出现之前，病毒感染的诊断 主要依靠NAT，适用于早期诊断；
HIV-1 P24抗原检测结果报告和解释：
（1）HIV-1 P24抗原的阳性结果必须经过中 和试验确认，若阳性标本的OD值比中和反 应前减少50%以上，才确定为HIV P24抗原 结果阳性。
（2）HIV-1 P24抗原阳性仅作为HIV感染的 辅助诊断依据，不能据此确诊。
（3）HIV-1P24抗原阴性结果只表示在本试 验中无反应，不能排除HIV感染。
是一种血清学夹心法EIA。 （1） HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断。 （2）HIV-1抗体阳性母亲所生婴儿早期的辅助诊断。 （3）第四代HIV抗原/抗体ELISA试剂检测呈阳性反
应，但HIV-1抗体确认试验呈阴性者的辅助诊断。 （4）监测病程进展和抗病毒治疗效果。
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2.毒株可用于抗病毒药物筛选，耐药性及其生物学特 性等研究。
3.用定量细胞培养法可测定细胞的半数感染单位 （TCID50）和半数抑制药物浓度（IC50）用于抗病 毒药物测定。或消毒杀菌药品的效果评价。
本法一般不用于常规诊断。
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（三）HIV p24抗原测定及适用范围：
NASBA的反应分为两相：循环相和非循环相。
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NASBA图解
引物1
逆转录酶
liniar phase
RNA酶H
amplification phase
引物 2
逆转录酶 引物 2
T7 RNA多聚酶
逆转录酶
RNA酶 H 引物1
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艾滋病感染实验室检测
HIV相关检测目的
1.临床诊断 2.安全输血 3.流行病学调查、高危人群监测 4.自愿咨询检测VCT 5.抗病毒治疗后效果检测 6.抗病毒治疗耐药性检测 7.免疫功能测定
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HIV感染的实验室检测方法
–常用HIV病原学检测方法:
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2006年10月12日浙江省艾滋病原理
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核酸检测主要应用：
1） 早期诊断围产期HIV感染的辅助诊断： 宫内感染（检测定义）： 新生儿出生48小时内，检测到病毒核
酸，或病毒培养阳性，则提示孕期（宫内）感染。 对围产期感染儿童在18月龄前的早期诊断，目前以2次核酸检测
–其他相关检测方法:
– 免疫功能测定：CD4/CD8检测
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（一）HIV核酸检测
1. HIV核酸定性检测：通常使用PCR或
RT-PCR技术，用于HIV感染的辅助诊断。
2. HIV核酸定量检测：使用RT-PCR, NASBA,
bDNA等技术，常用于监测HIV感染者的病程 进展和抗病毒治疗效果。
细胞培养与血清学方法相比，专一性很强， 不会出现假阳性。但其敏感性不如血清学或 PCR。
必须在P3级生物安全实验室进行。
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HIV病毒分离培养的应用
1.能得到最原始的临床毒种，其重要意义在于确认对 WB不确定的可疑感染者及母婴传播、婴幼儿HIV感 染者。对法律纠纷或职业暴露明确毒主株亲缘关系。
定量NASBA技术：
是由一对引物引导的，连续均一的体外特异核苷酸 序列的等温扩增的酶促反应过程。 优点：操作十分简单，只需将制备好的模板直接加到 反应体系中，恒温41℃培育1.5～2小时，即可将模板 扩增109倍。
NASBA反应体系包括AMV反转录酶、RNA酶H、 T7RNA聚合酶、核糖核苷三磷酸、脱氧核糖核苷三磷 酸、两个特异的引物及适宜的缓冲液。
逆转录酶
PCR反应图解
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bDNA信号扩增技术
主 要 包 括 分 枝 DNA 检 测 （ branched DNA assays） 和 杂 交 捕 获 检 测 （ hybrid capture assays）。
检测时病原模板并不扩增，而是通过 对检测信号的放大来实现对病毒核酸的检 测和定量。