金黄色葡萄球菌鉴别方法探讨
金黄色葡萄球菌鉴别方法探讨
目的探讨金黄色葡萄球菌的检验方法，提高金黄色葡萄球菌的鉴定准确率。方法本研究针对金黄色葡萄球菌的特异性、敏感性、准确性进行研究，比较该方法与传统国标法的检测结果。结果在传统国标法上增加API Staph 鉴定试条试验，检测结果与国标法的显示阳性的检测结果相一致。结论此方法可对似阳非阳的结果进行判定，甚至对假阴性进行修正，防止漏检，明显提高了金葡菌的检出水平和准确性，对日常的检验工作具有很现实的指导意义，值得推广。
标签：金黄色葡萄球菌；API Staph；鉴定
The identification method of Staphylococcus aureus
SONG?Songwen
Guangxi Yulin Institute for Food and Drug Control, Yulin 537000, China
[Abstract] Objective To probe into the test methods of Staphylococcus aureus and improve Staphylococcus aureus identification accuracy. Methods This experiment was aimed at researching the specificity, sensitivity and accuracy of Staphylococcus aureus and compares the test results of this approach with that of the traditional national standard method. Results API Staph identification cards are increased in the traditional national standard method.The test results are the same as that of national standard method, which shows positive. Conclusion The results of unclear positive can be judged by this method, even the false negative can be revised to prevent undetection. Thus obviously improves the detection level and accuracy of Staphylococcus aureus.It has practical guiding significance on the daily inspection work, and is worthy to be popularized.
[Key words] Staphylococcus aureus; API Staph; Identification
金黄色葡萄球菌（SA）广泛存在自然界，是一种引起食物中毒的常见致病菌之一，目前很多国家都把金黄色葡萄球菌列为药品和食品卫生的法定检测项目[1]。对金黄色葡萄球菌检验目前采用的方法是以《中国药典》2010年版及食品安全国家标准GB4789.10-2010[2-3]。然而，SA在特殊环境中，可产生变异性，使细菌形态及典型的生化反应有所改变，在检验中常有假阳性发生，影响判断结果。本实验在常规方法的基础上增加API鉴定系统确认，能显著提高金黄色葡萄球菌检出率。因食品和药品对金黄色葡萄球菌检验方法类同，且食品相对于药品而言污染机率较大，杂菌较多，故实验以9批试验结果革兰染色镜检均为阳性的食品样品更具代表性。
1?材料与方法
1.1?材料
1.1.1?对照用菌株?金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]；样品菌株：两批生食鱼片（批号：SP20110189、SP20110212）、三批熟肉制品（批号：SP20110151、SP20110182、SP20110745）、两批豆制品（SP20110740、SP20110847）和两批盒饭（批号：SP20110108、SP20110073）共9个批次，革兰染色镜检试验均显阳性，计划监管中抽取于市场。
1.1.2?培养基和试剂?7.5%氯化钠肉汤；Baird-Parker培养基（B-P）；血琼脂平板；脑心浸出液（BHI）肉汤；营养琼脂斜面；冻干血浆；革兰染色试剂，广州环凯生物技术有限公司。API Staph 鉴定试条，法国生物梅里埃公司。
金黄色葡萄球菌检测方法
金黄色葡萄球菌检测方 法 Revised as of 23 November 2020
金黄色葡萄球菌检测方法 1.纸片法 目前广泛应用的一种方法，用纸片、膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过观察微生物在测试片上面的生长、显色来测定食品中微生物。采用快速测试片检测具有显着的优点：可测定少量检品，不需要配制试剂，不需要大量的玻璃器皿，操作简便迅速；易于消毒保存，便于运输携带方便，价格低廉；除纸片外无其他任何废液废物，大大减少了工作量；可以在取样时同时接种，结果更能反映当时样本中真实细菌数，防止延长接种时间时细菌繁殖造成的污染。 技术优点：操作简单使用方便，避免了繁琐的操作。 技术缺点：用时间比较长，无法准确定性及计数。 此方法现在应用于快速检测领域，美国3M公司Petrifilm为载体的测试片应用最为广泛。但其也存在一些问题：Petrifilm测试片上覆盖了一层薄膜，当样品粘液过多时会出现菌落的扩散和融合，影响计数；Petrifilm测试片面积较小，当菌量大于250cfu时，准确计数较困难；待测样品中含有的某些有机物可能使显色减缓。使目视效果下降，导致计数偏低。 2.免疫学方法 各种免疫学方法的基本原理都是抗原抗体反应。抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。金黄色葡萄球菌特异的抗原能激发机体产生相应的特异性抗体。在免疫检测中，可利用单克隆抗体检测金黄色葡萄球菌的特异抗原，也可利用金黄色葡萄球菌抗原检测体内产生的特异抗体，两种方法均能判断机体的感染状况。目前对于金黄色葡萄球菌的测定主要进行了肠毒素的测定，方法以酶联免疫吸附实验为主，有胶体金方法，也有用亲和素一生物素乳胶凝集实验和免疫荧光实验，但都有一定的局限性。 免疫学方法包括下面两个部分： （1）抗原抗体技术分析：抗原抗体技术是免疫技术中的核心部分，对于金黄色葡萄球菌检测全菌免疫筛选抗体是很困难的事情，现在目前市场有的大多都是对金黄色葡萄球菌毒素类进行免疫得到的抗体，金黄色葡萄球菌毒素有12种，军事医学科学院生产的金黄色葡萄球菌毒素A、B、C的抗体。毒素抗体优势在于敏感度高，易于检查，缺点毒素种类多，检测其中几种不具有普遍性。毒素分离工艺复杂，要得到纯毒素成本比较高。 （2）免疫学方法技术分析：上述免疫学技术应用最多的是酶联免疫技术和胶体金侧向层析技术。酶联免疫技术广泛应用于实验室检测，由于一次可以检测多个样本，此技术多用于体外诊断，目前也广泛用于食品安全。胶体金技术由于操作简单，检测适度快等优势，在食品安全领域广泛用于现场快速检测。 基于免疫学方法的技术主要分为：酶联免疫技术、胶体金侧向层析技术、免疫荧光技术、免疫沉淀技术、乳胶凝集技术、免疫磁珠技术。 3.分子生物学方法 金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：肠毒素、血浆凝固酶、溶血素、杀白细胞素、表皮溶解毒素、毒性体克综合重量毒素I 等。而这些致病因子基因的鉴定(包括耐药性相关基因、毒素基因、酶基因及多
金黄色葡萄球菌的测定
金黄色葡萄球菌的测定 1 卫生学意义 金黄色葡萄球菌定性检验（增菌培养法）：适用于检查含有受损伤的金黄色葡萄球菌的加工食品。 2 检验方法 2.1 术语与定义 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为一种革兰氏染色阳性球形细菌。显微镜下排列成葡萄串状，金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜。是常见的引起食物中毒的致病菌。常见于皮肤表面及上呼吸道黏膜。 2.2 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： （1）恒温培养箱：36℃±1℃。 （2）冰箱：2℃～5℃。 （3）恒温水浴箱：37℃～65℃。 （4）天平：感量0.1g。 （5）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。 （6）无菌锥形瓶：容量100mL、500mL。 （7）无菌培养皿：直径90mm。 （8）pH计或pH比色管或精密pH试纸。 2.3 培养基和试剂 （1）7.5%氯化钠肉汤 1）成分：蛋白胨：10.0g；牛肉膏：5.0g；氯化钠：75g；蒸馏水：1000mL；pH：7.4； 2）制法：将上述成分加热溶解，调节pH，分装，每瓶225mL，121℃高压灭菌15min。 （2）B－P琼脂平板 1）成分：胰蛋白胨：10.0g；牛肉膏：5.0 g；酵母膏：1.0g；丙酮酸钠：10.0g；甘氨酸：12.0g；氯化锂（LiCl·6H2O）：5.0g；琼脂：20.0g；蒸馏水：950mL；pH：7.0±0.2 2）增菌剂的配法：30%卵黄盐水50mL与经过除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10mL 混合，保存于冰箱内。 3）制法：将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，调节pH。分装每
实验七--食品中金黄色葡萄球菌的检验
实验七食品中金黄色葡萄球菌的检验 一、实验目的要求 1、了解食品的质量与金黄色葡萄球菌检验的意义。 2、掌握金黄色葡萄球菌的生物学特性。 3、掌握金黄色葡萄球菌检验的生化试验的操作方法和结果的判断。 4、掌握食品中金黄色葡萄球菌检验的方法和技术。 二、原理 葡萄球菌在自然界分布极广，空气、土壤、水、饲料、食品(剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动物的体表粘膜等处均有存在，大部分是不致病，也有一些致病的球菌。金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一个种。可引起皮肤组织炎症，还能产生肠毒素。如果在食品中大量生长繁殖，产生毒素，人误食了含有毒素的食品，就会发生食物中毒，故食品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在危险，检查食品中金黄色葡萄球菌及数量具有实际意义。 金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多数致病菌株能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，在试管中出现溶血反应。这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。 三、试剂和仪器 （一）最先准备的器材 规格名称数量用途 1、500ml广口瓶1个稀释样品 2、500ml三角瓶1个制生理盐水 3、250ml三角瓶3个制培养基等 4、10×100mm试管6支血浆凝固酶试验 5、1ml移液管2支 6、10ml移液管 2 支 7、直径为90 mm平皿12套制血平板B-P平板 8、250ml量筒1支 （二）应灭菌的其它器材 剪刀1把不锈钢汤匙1把称量纸适量 （三）应制备的培养基 培养基总量所用容器 1.无菌水50ml/瓶1瓶250ml三角瓶（全班共用） 2.0.85%生理盐水70ml/瓶1瓶250ml三角瓶（全班共用） 3.0.85%生理盐225ml/瓶1瓶500ml三角瓶 4.7.5%NaCl肉汤50ml/瓶1瓶250ml三角瓶
金黄色葡萄球菌及其检验
我们以SN标准中的最近似值(MPN)测定法来进行讲解： 这种方法适用于检测认为带有大量竞争菌的食品及其原料和未经处理的食品中的少量金黄色葡萄球菌。 1、样品制备： 固体或半固体食品: 以无菌操作称取25g样品,放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌均质杯内,于8000r/min均质1～2min,制成1:10样品匀液。 液体食品: 用灭菌吸管吸取25mL样品,放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内 (瓶内预置适当数量的玻璃珠),经充分振摇制成1:10样品匀液。 供计数检验时,可按十进位递增稀释法将样品匀液再进行适当稀释。 2、选三个连续稀释度，从每个稀释度分别取1 mL稀释样品液，接种3管含10％氯化钠why?还记得么？金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10-15%NaCl肉汤中生长。因此，这事实上是一种选择性的增菌。胰蛋白胨大豆肉汤。样品的最高稀释度必须达到能获得阴性终点,置36±1℃培养48 h。 3、用3 mm接种环,从有细菌生长的各管中移取1 环,划线接种于表面干燥的Baird- Parker琼脂平板,置36±1℃培养45～48h。 4、从有细菌生长的每一平板上至少挑取1个可疑金黄色葡萄球菌菌落,移种到肉汤培养基中,置36±1℃培养20～24 h。 5、取肉汤培养物0.3mL同0.5mL凝固酶试验兔血浆于8mm×100mm试管内充分混合,置36±1℃培养,定时观察是否有凝块形成,至少观察6 h,以内容物完全凝固,使试管倒置或倾斜时不流动者为阳性。试验中需同时做巳知阳性和阴性对照。对可疑结果,应进行革兰氏染色、镜检和其他辅助试验{如耐热核酸酶试验等} 加以证实。 6、报告结果：根据凝固酶试验结果查最近似值(MPN)表,报告金黄色葡萄球菌的MPN/g (mL)。 附：怎样在平板上进行细菌的划线分离。 1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法
实验5 金黄色葡萄球菌的检验
实验5 金黄色葡萄球菌的检验 1 目的和要求 （1）掌握金黄色葡萄球菌的检验方法 （2）了解金黄色葡萄球菌各检验步骤的依据及原理 2 基本原理 金黄色葡萄球菌进入人体内，可引起局部的痈疾和蜂窝组织炎，还可以引起肺炎、心肌炎、骨骼炎、肾盂肾炎等系统化脓性感染，甚至可发展成败血症。此外，食品中生长金黄色葡萄球菌是食品卫生中的一种潜在危险，因为金黄色葡萄球菌在是中会产生肠毒素，食用后将引起食物中毒，这在我国细菌性食物中毒事件中，仅次于沙门氏菌和副溶血弧菌。因此，检验食品中金黄色葡萄球菌是实际意义。绝大多数金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生金黄色色素，菌落周围有透明的溶血圈，在厌氧条件下能分解甘露醇产酸，产生血浆凝固酶和耐热的DNA酶。 3 实验材料 3.1 检样乳与乳制品（如奶粉、消毒乳）、肉制品、饮料 3.2 菌种金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌斜面培养物。 3.3 培养基7.5%氯化钠肉汤、肉浸液肉汤、血琼脂平板、Baird-Parker氏培养基 3.4 试剂与染色剂无菌生理盐水、兔血浆、革兰氏染色液等。 3.5 仪器与其他用具无菌吸管（1mL、5、10）、无菌试管、载玻片、接种环、酒精灯、显微镜、均质器、恒温箱等。 4 检样程序 5 操作步骤 5.1 5.1.1样品的处理
称取25 g 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。若样品为液态，吸取25 mL 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预臵适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀。 5.1.2 增菌和分离培养 5.1.2.1 将上述样品匀液于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。 5.1.2.2 将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker 平板和血平板，血平板36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。Baird-Parker 平板36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h 或45 h～48 h。 5.1.2.3 金黄色葡萄球菌在Baird-Parker 平板上，菌落直径为2 mm～3 mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。 5.1.3 鉴定 5.1.3.1 染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为0.5 μm～1 μm。 5.1.3.2 血浆凝固酶试验：挑取、Baird-Parker平板或血平板上可疑菌落1个或以上，分别接种到5 mL BHI和营养琼脂小斜面，36 ℃±1℃培养18 h～24 h。 取新鲜配臵兔血浆0.5 mL，放入小试管中，再加入BHI 培养物0.2 mL～0.3 mL，振荡摇匀，臵36℃±1℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察 6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒臵时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。 结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到 5 mL BHI，36 ℃±1℃培养18 h～48 h，重复试验。 病原性葡萄球菌多数产生血浆凝固酶，非病原性的一般不产生。因此，该法是判定葡萄球菌有无致病性的重要指标。 5.2 金黄色葡萄球菌Baird-Parker平板计数 5.2.1 样品的稀释 5.2.1.1固体和半固体样品：称取25 g样品臵盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000 r/min均质1 min～2 min，或臵盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2 min，制成1:10的样品匀液。 5.2.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL样品臵盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预臵适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。 5.2.1.3 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用 1 支1 mL 无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。 5.2.1.4 按5.2.1.3 操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1 次1 mL 无菌吸管或吸头。 5.2.2 样品的接种
金黄色葡萄球菌的检查
金黄色葡萄球菌的检查 同学们，这一节我们一起来学习一下第四章微生物限度检查法中的金黄色葡萄球菌的检查。 金黄色葡萄球菌为葡萄球菌属中的一种。本菌在自然界分布甚广，空气、土壤、水和日常用具，人的皮肤。看，这就是金黄色葡萄球菌，它是一种革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。 该菌是葡萄球菌中致病力最强的一种，可经皮肤、粘膜侵入人体引起化脓性病变等局部及全身化脓性炎症，严重时可导致败血症。 所以，国家规定外用药品和一般滴眼剂、眼膏剂、软膏剂等规定不得检出金黄色葡萄球菌，检验金黄色葡萄球菌有重要意义。 金黄色葡萄球菌的操作流程如图所示，与之前讲述过的其他控制菌的检查一样： 在完成培养基的配制和供试品的处理后，用营养肉汤于30～35℃增菌培养18～24小时，必要时可延至48小时。增菌培养的目的使被检药物中的被检菌增殖，避免出现漏检。 接着，进行分离纯化，其目的是使被检菌从混合菌中分离出来。以接种环沾取以接种环沾取1～2环培养液，划
线接种于卵黄氯化钠琼脂平板或甘露醇氯化钠琼脂平板上，置30～35℃培养24～72小时。 当阳性对照平板呈典型菌落生长时，供试品分离平板无菌落生长，或有菌落生长但不同于表中所列特征，可判为未检出金黄色葡萄球菌。 若供试品分离平板生长的菌落与表中所列特征相似疑似时，应选取2～3个以上菌落，分别接种于营养琼脂斜面上，于30～35℃培养18～24小时，取其培养物做以下检查。 1. 革兰染色镜检 革兰染色镜检观察显微镜下的细菌结构是否符合金黄色葡萄球菌的形态特征：金黄色葡萄球菌为革兰阳性球菌，无芽孢，无荚膜。排列呈不规则的葡萄状，亦可呈单个、成双或短链状排列，菌体较小。 2. 血浆凝固酶试验 金黄色葡萄球菌能产生血浆凝固酶，能将血浆里的纤维蛋白原转化为纤维蛋白，使血浆凝固。
葡萄球菌属检验
精心整理1．概述 葡萄球菌属是一类触酶试验阳性的革兰阳性球菌，包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中间型葡萄球菌等35个种，17个亚种。金黄色葡萄球菌是最重要的致病葡萄球菌。 2.标本类型 血液、尿液、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。 3.鉴定 3.1形态与染色革兰阳性球菌，成单、双、短链或不规则葡萄状排列。 3.2培养特性金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的典型菌落为金黄色，周围有明显的 溶血环，部分菌落也可呈灰白色或柠檬色。在高盐甘露醇平板上呈淡橙黄色菌落。表皮葡萄球菌在血琼脂平板上菌 O/F试 ”为3.5.1涂片、染色观察菌落特征，在血平板上挑取可疑菌落，涂片染色镜检。 3.5.2触酶试验参见《触酶试验标准操作规程》。 3.5.3凝固酶试验参见《凝固酶试验标准操作规程》。 3.5.4鉴定从血琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。 4.药敏 参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSIM100-S20最新版本文件。 5.质量控制 参见《质量管理程序》。 6.检验结果解释与分析 6.1由于葡萄球菌分布广泛，从临床标本中分离到金黄色葡萄球菌时，将其定为致病菌时应慎重。
精心整理 应根据凝固酶试验进一步确认。对可疑菌株的鉴定，最好利用商品化的鉴定系统根据生化图谱进行确定。表皮葡萄球菌分离自导管相关血流感染时，通常视为致病菌。溶血性葡萄球菌从泌尿感染病人分离得到时，尤其是细菌量较大或作为优势菌时，通常被视为致病菌。 6.2甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌（MRSA）对多种广谱强效抗菌药物呈多重耐药性。如果检测出耐甲氧西林的葡萄球菌菌株则报告耐所有青霉素、头孢菌素、碳青霉烯类和?-内酰胺药/?-内酰胺酶抑制剂类抗生素，对氨基糖苷类和大环内酯类抗生素常协同耐药。若葡萄球菌属对四环素敏感，则对多西环素和米诺环素敏感。某些菌对四环素中介或耐药，而对多西环素和米诺环素敏感。临床感染葡萄球菌的病人用喹诺酮类治疗3-4日后，原来敏感的葡萄球菌易产生耐药。所以对这类葡萄球菌需多次反复进行药敏试验。大环内酯类耐药葡萄球菌包括固有耐药和诱导耐药。所以临床试验室须进行“D”试验以检测克林霉素诱导性耐药，根据“D”试验结果来报告克林霉素的耐药性。 7.临床意义 金黄等， 等。 MRSA 物。 8. [1] [2] [3]
食品中金黄色葡萄球菌检测方法
本文从网络收集而来，上传到平台为了帮到更多的人，如果您需要使用本文档，请点击下载，另外祝您生活愉快，工作顺利，万事如意！ 食品中金黄色葡萄球菌的检测方法
1.范围 本标准规定了食品中金黄色葡萄球菌的检测方法。 本标准第一法适用于金黄色葡萄球菌的定性检测；第二法适用于金黄色葡萄球菌含量较高的食品中金黄色葡萄球菌的计数。第三法适用于金黄色葡萄球菌含量较低而杂菌含量较高的食品中金黄色葡萄球菌的计数。 2.设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 2.1恒温培养箱：36℃±1℃。 2.2冰箱：2℃～5℃。 2.3恒温水浴箱：37℃～65℃。 2.4天平：感量0.1g。 2.5均质器。 2.6振荡器。 2.7无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器。 2.8无菌锥形瓶：容量100mL、500mL。 2.9无菌培养皿：直径90mm。 2.10注射器：0.5mL。 2.11 pH计或pH比色管或精密pH试纸。 2.12全自动微生物生化鉴定系统。（BD Crystal或Phoenix）。 2.13比浊仪。（BD Phoenix比浊仪，货号440910）。 2.14比浊仪定标盒。（BD Phoenix定标盒，货号440911）。 3.培养基和试剂 3.110 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤。
3.27.5 %氯化钠肉汤。 3.3血琼脂平板。（BD 货号脑心浸液琼脂241830胰蛋白大豆琼脂236950作为基 础加兔血浆） 3.4Baird-Parker 琼脂平板。（BD 货号 276840） 3.5脑心浸出液肉汤(BHI)。（BD 货号 237400） 3.6稀释液：磷酸盐缓冲液。(BD 货号211544) 3.7营养琼脂小斜面。（BD 货号212000） 3.8革兰氏染色液。（BD 货号212539） 3.9无菌生理盐水。 第一法金黄色葡萄球菌的定性检验 4.检验程序 金黄色葡萄球菌定性检验程序见图1： 图1 金黄色葡萄球菌检验程序 5.操作步骤 5.1样品的处理 称取25g样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无
金黄色葡萄球菌检测
金黄色葡萄球菌检测 1 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 1.1 恒温培养箱：36℃±1℃。 1.2 冰箱：2℃～5℃。 1.3 恒温水浴箱：37℃～65℃。 1.4 天平：感量0.1g。 1.5 均质器。 1.6 振荡器。 1.7 无菌吸管：1ml（具0.01ml刻度）、10ml（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸头。 1.8 无菌锥形瓶：容量100ml、500ml。 1.9 无菌培养皿：直径90mm。 1.10 注射器：0.5ml。 1.11 pH计或pH比色管或精密pH试纸。 2 培养基和试剂 2.1 Baird-Parker 琼脂平板：见附录中1。 2.2 脑心浸出液肉汤(BHI) ：见附录中2。 2.3 兔血浆：见附录中3。 2.4 营养琼脂小斜面：见附录中4。 2.5 无菌生理盐水：见附录中5。 3 操作步骤 3.1 样品的稀释
3.1.1 固体和半固体样品 称取25g样品置盛有225ml生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min均质1min～2min，或置盛有225ml稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1：10的样品匀液。 3.1.2 液体样品 以无菌吸管吸取25ml样品置盛有225ml生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1：10的样品匀液。 3.1.3 用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1ml，沿管壁缓慢注于盛有9ml稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支1ml无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。 3.1.4 按3.1.3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用一次1ml无菌吸管或吸头。 3.2 样品的接种 根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1ml样品匀液以0.3ml、0.3ml、0.4ml接种量分别加入三块Baird-Parker平板，然后用无菌L棒涂布整个平板，注意不要触及平板边缘。使用前，如Baird-Parker平板表面有水珠，可放在25℃～50℃的培养箱里干燥，直到平板表面的水珠消失。 3.3 培养 在通常情况下，涂布后，将平板静置10min，如样液不易吸收，可将平板放在培养箱36℃±1℃培养1h；等样品匀液吸收后翻转平皿，倒置于培养箱，36℃±1℃培养，45h～48h。
4.金黄色葡萄球菌检查用培养基适用性检查验证方案
1.概述:培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果。适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制是提供优质培养基的保证。供试品微生物限度检查中所使用的培养基应进行适用性检查。 2.验证目的：本次验证的目的是确认金黄色葡萄球菌检查用培养基适用性检查用的甘露醇氯化钠琼脂培养基的质量，以及其制备程序、保存条件等是否满足微生物限度检查用要求。 3.验证依据：《中国药典》2015年版四部“1106非无菌产品微生物限度检查：微生物控制菌检查”、“9203药品微生物实验室质量管理指导原则”。 4.验证项目：甘露醇氯化钠琼脂培养基的适用性检查。 5.适用范围：成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。 6.验证周期：除另有规定外，在实验室中，若采用已验证的配制和灭菌程序制备培养基且过程受控，那么同一批脱水培养基的适用性检查试验可以只进行一次。如果培养基的制备过程未经验证，那么每一灭菌批培养基均要进行适用性检查试验。 7.验证小组人员及职责： 7.1验证小组人员: 7.2验证人员职责及要求 7.2.1按验证方案及相关文件实施验证。 7.2.2认真观察并做好验证原始记录。 7.2.3对实施验证的结果负责。 7.3验证中各部门的职责 7.3.1验证领导组职责 7.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。
7.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。 7.3.1.3负责验证方案的批准工作。 7.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。 7.3.1.5负责验证报告的批准工作。 7.3.2验证项目小组职责 7.3.2.1负责验证方案的起草工作。 7.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。 7.3.2.3负责验证方案的实施。 7.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。 7.3.2.5参与验证结果的评价工作。 7.3.3质量部职责 7.3.3.1负责公司验证日常管理工作。 7.3.3.2负责验证方案的审核工作。 7.3.3.3负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。 7.3.3.4负责检验仪器及检验方法的验证。 7.3.3.5负责验证中各项检测工作，提供验证的检验记录、检验报告，对验证过程中的各项检验工作负责。 7.3.3.6负责对验证人员的培训、考核工作。 7.3.3.7负责验证资料和报告的审核工作。 7.3.3.8负责验证文件回收、归档管理工作。 8.合格标准： 被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在 0.5-2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。 9.验证实施条件 9.1验证方案培训：在验证实施前，应对参与验证的人员进行验证方案以及与验证相关的文件进行培训，确保相关人员掌握了验证的相关要求与知识。 9.2微生物限度检测室：检验所使用的检测室应经过HVAC系统确认，并符合要求。
金黄色葡萄球菌检测方法
金黄色葡萄球菌检测方法 一．材料与方法 1、材料 ①培养基：7.5%NaCl肉汤培养基，血琼脂平板培养基（按常规方法制作） ②试剂：7.5%NaCl肉汤培养基，革兰氏染色，血琼脂平板，Baird-Parker琼脂平板，生理盐水，兔血浆（1：4）， ③器材：温箱，显微镜，天平，均质器，载玻片，L型涂片棒，三角瓶，刻度吸管，平皿，试管及试管架，研磨，1ml注射器， ④实验动物：健康的小白鼠 2、方法 待检样品25g+225ml灭菌生理盐水 │ ┌─────┴─────┐ 直接计数法增菌培养方法 ↓↓ Baird-Parker琼脂平板7.5%NaCl肉汤培养基 ↓↓ 血平板血平板 └─────┰─────┘ ↓ ┌─────┰─────┰──────┐ ↓↓↓↓ 涂片染色镜溶血观察动物接种试验血浆凝固试验 └─────┴──┯──┴──────┘ ↓ 报告 1、样品的采集 称取25g火腿肠，切碎搅匀（用灭菌研钵研磨），置于250ml锥形瓶中，加入225ml灭菌生理盐水，制成1：10样品混悬液，混匀后作用20分钟，随机取10ml离心。 2、增菌及分离培养 ①增菌培养方法：吸取5ml上清液，接种于7.5%NaCl肉汤培养基内，置于（37±1℃）恒温箱中培养24h，划线接种入血平板，（37±1℃）恒温箱中培养24h。 ②直接计数方法：吸取上述悬液，进行10倍递增稀释，根据样品污染情况，选择不同浓度的
稀释液各1ml，分别加入3个Baird-Parker琼脂平板，每个平板的接种量分别为0.3ml、0.3ml、0.4ml。用灭菌L型涂布棒涂布整个平板，置于（37±1℃）恒温箱中培养24h。之后分别对3个平板上生长的周围有浑浊带的黑色菌落进行计数。转接入血平板，（37±1℃）恒温箱中培养24h。 3、涂片、染色与镜检 将纯培养的未知菌涂片，革兰氏染色，显微镜观察。 4、生化实验 ①触酶试验 在载玻片上滴1滴3%的过氧化氢，调取纯化的细菌放在过氧化氢中观察变化。30s内产生大量气泡者为阳性，不产生气泡者为阴性。 ②血浆凝固酶试验 吸取1：4新鲜兔血浆0.5ml，放入小试管中，再加入培养24h的2①中的肉汤培养液0.5ml，摇荡均匀，放入（37±1℃）恒温箱中培养，每0.5h观察一次，观察6h，检查是否出现凝固。将试管倾斜或倒置时，呈现凝块状，可判定为阳性，同时以已知阳性葡糖球菌和阴性肉汤作为对照。 5、动物感染实验 用无菌生理盐水将2①中血琼脂板上纯化的菌落洗下后，以0.5ml/只腹腔注射入小白鼠体内，同时用灭菌生理盐水注射入另外的小白鼠体内，以做对照，分别在相同条件饲养，观察其症状。对感染试验出现症状或死亡的小白鼠进行剖检，并采集病料，进行分离。 二．结果与分析 1、培养特性及形态特征 ①培养特性 在37℃条件下，需氧与厌氧培养的血液营养琼脂平板均长出光滑、湿润、隆起，约1mm大小的金黄色菌落，并且有β溶血现象。 ②镜检结果 显微镜下观察该菌为革兰氏阳性球菌，排列成葡萄串状，也有个别2个或3个球菌相连。根据菌落形态、镜检结果怀疑该菌为葡萄球菌。 2、菌落计数报告 将直接计数法试验中的3个平板中疑似黑色葡萄球菌的金黄色菌落数相加，乘以血浆凝固酶试验阳性数，除以5，在乘以稀释倍数，即为每克样品中金黄色葡萄球菌数量。 3、动物感染试验 只注生理盐水的小白鼠没有任何变化：接种分离菌的小白鼠在9h内死亡。将死亡的小白鼠剖检采集病料，进行细菌分离和生化试验，得到与原分离菌。
奶粉中金黄色葡萄球菌的检测
奶粉中金黄色葡萄球菌的检测 一、【实验步骤】 1.样品的采集和送检 采取10包小型包装的奶粉，注意要采取整件包装及包装的完整性。 2.检样处理 用75%酒精棉球擦拭消毒袋口后，手戴消毒手套，以无菌刀打开袋口，无菌杓对10个包装进行取样，注意每取一个样品时更换新的无菌刀，杓。在铺有等大无菌硫酸纸的精度为0.1g的分析天平上分别秤取10个样品各25g并放入10个装有玻璃珠的三角烧瓶内，每秤取一个新样品时更换新的无菌硫酸纸，用记号笔在烧瓶底部分别编号为1~10，用1个200ml 的灭菌量筒和1个50ml灭菌的量筒分别量取200ml和25ml已用电炉温热的灭菌生理盐水共225ml徐徐加入1号三角烧瓶内（先加少许使奶粉调成糊状，再全部加入，以免奶粉结块），振摇均匀，使充分溶解后即为1：10稀释液。 2~10号烧瓶操作与1号相同。 小结：这一过程需要的仪器试剂有75%酒精棉球一包，消毒手套一双，无菌刀十个，无菌杓十个，无菌硫酸纸20张，精度0.1g的分析天平一台，300ml装有玻璃珠的三角烧瓶十个，记号笔一支，200ml灭菌量筒一个，50ml灭菌量筒一个，灭菌生理盐水 10L，1L大烧杯2个。 3.增菌培养 用电炉将7.5%NaCl肉汤培养基加热至融化，取10个直径9cm的无菌平皿用记号笔在平皿底部分别编号为1~10，用一个 50ml的灭菌量筒量取45ml融化的培养基倒入1号平皿中，用一支5ml的无菌吸管吸取一号烧瓶中的稀释液5ml加入1号平皿中，2~10号样品按同法制成相应的2~10号平皿，注意每吸取一个样品需要更换一支新的5ml灭菌吸管。将这十个平皿置于37℃温箱培养24h。看到样品在肉汤中呈浑浊生长。 小结：这一过程需要的仪器试剂有电炉一台，37℃温箱一台，直径9cm的无菌平皿10个，记号笔一支，50ml的灭菌量筒量一个，5ml的无菌吸管十支，锥形瓶一个，2L烧杯一个。 4.分离培养 用一支用酒精灯火焰充分消毒并凉至室温的接种针取一个平皿的增菌培养物划线接种至血平板和Baird-Parker平板（注意接种下一个平皿中的增菌培养物时要用酒精灯火焰消毒接种针）在平板底部用记号笔标记其所来自样本的编号，将其置于37℃温箱培养24h取可疑菌落（金黄色葡萄球菌在血平板上菌落为金黄色，有时也为白色，大而突起、圆形、不透明、表面光滑，周围有溶血圈。在Baird- Parker平板上的菌落较小，圆形、光滑突起、湿润，直径2~3mm，灰黑到黑色，边缘为淡色，周围为一圈浑浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落，但无浑浊带和透明圈）作革兰染色镜检，金葡菌为革兰阳性球菌，葡萄状排列，无芽孢，无荚膜，根据此特性，将可疑菌落同法接种于琼脂斜面及普通肉汤中，分别相应标记为1~10号，37℃培养24h，作进一步鉴定。 小结：这一过程需要的仪器试剂有酒精灯一个，火柴一盒，接种针一支，37℃温箱一台，血平板和Baird-Parker平板各十个，显微镜一台，琼脂斜面及普通肉汤管各10个,1L烧杯2个。 5.血浆凝固酶试验 （1）玻片法：取干净玻片一块，用记号笔将玻片划成两格，背面标记为1，用两支吸管分别滴加新鲜兔血浆及生理盐水各一滴，用两支用酒精灯火焰充分消毒并凉至室温的接种针挑取步骤4中1号琼脂斜面的待检菌落分别于血浆和生理盐水混合，立即观察结果，同法处理其余九个样品。每挑取一次待检菌后均需要对接种针在酒精灯火焰上消毒并凉至室温。如血浆中有明显颗粒出现，而生理盐水中无自凝现象即为阳性。 小结：这一过程需要的仪器试剂有干净玻片十块，记号笔一支，新鲜兔血浆15ml，生理盐水100ml，100ml、200ml烧杯各一个，酒精灯一个，接种针一个。
实验金黄色葡萄球菌的检验.doc
实验 5金黄色葡萄球菌的检验 1目的和要求 （1）掌握金黄色葡萄球菌的检验方法 （2）了解金黄色葡萄球菌各检验步骤的依据及原理 2基本原理 金黄色葡萄球菌进入人体内，可引起局部的痈疾和蜂窝组织炎，还可以引起肺炎、心肌炎、骨骼炎、肾盂肾炎等系统化脓性感染，甚至可发展成败血症。此外，食品中生长金黄色葡萄球菌是食品卫生中的一种潜在危险，因为金黄色葡萄球菌在是中会产生肠毒素， 食用后将引起食物中毒，这在我国细菌性食物中毒事件中，仅次于沙门氏菌和副溶血弧菌。 因此，检验食品中金黄色葡萄球菌是实际意义。绝大多数金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上 产生金黄色色素，菌落周围有透明的溶血圈，在厌氧条件下能分解甘露醇产酸，产生血浆凝固酶和耐热的 DNA酶。 3实验材料 3.1 检样乳与乳制品（如奶粉、消毒乳）、肉制品、饮料 3.2 菌种金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌斜面培养物。 3.3 培养基 7.5% 氯化钠肉汤、肉浸液肉汤、血琼脂平板、 Baird-Parker氏培养基 3.4 试剂与染色剂无菌生理盐水、兔血浆、革兰氏染色液等。 3.5 仪器与其他用具无菌吸管（1mL、5、10）、无菌试管、载玻片、接种环、酒精灯、 显微镜、均质器、恒温箱等。 4检样程序 5操作步骤
5.1 5.1.1 样品的处理 称取 25 g样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 % 氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无 菌均质杯内， 8000 r/min ～10000 r/min均质 1 min～2 min，或放入盛有225 mL 7.5 % 氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min 。若样品为液态，吸取25 mL 样品至盛有225 mL 7.5 % 氯化钠肉汤或10 % 氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶( 瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠) 中，振荡混匀。 5.1.2增菌和分离培养 5.1.2.1将上述样品匀液于36℃± 1℃培养18 h～24 h。金黄色葡萄球菌在7.5% 氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。 5.1.2.2将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker平板和血平板，血平板36℃±1 ℃培养 18 h ～24 h 。Baird-Parker 平板 36 ℃± 1 ℃培养 18 h ～24 h 或 45 h ～48 h。 5.1.2.3金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上，菌落直径为 2 mm～ 3 mm，颜色呈 灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落有似 奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存 的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并 干燥。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。 5.1.3鉴定 5.1.3.1 染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞， 无荚膜，直径约为 0.5 μm～1 μm。 5.1.3.2 分别接种到 血浆凝固酶试验：挑取、Baird-Parker平板或血平板上可疑菌落 5 mL BHI 和营养琼脂小斜面， 3 6 ℃ ± 1℃培养 18 h ～24 h 。 1 个或以上，
金黄色葡萄球菌检验步骤
金黄色葡萄球菌检验步骤 一.设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃ 。 2 冰箱：2 ℃ ~5 ℃ 。 3 恒温水浴箱：37 ℃±1 ℃ 。 4 天平：感量0.19 。 5 均质器。 6 振荡器。 7 无菌吸管：1 mL （具0.01mL 刻度）、10mL （具0.lmL 刻度）或微量移液器及吸头。 8 无菌锥形瓶：容量100 mL 、500 mL 。 9 无菌培养皿：直径90 mm 。 10 注射器：0.5 mL 。 11 pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。 二、培养基和试剂 1 10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤 2、7.5%氯化钠肉汤 3 血琼脂平板 4 Baird - Parker 琼脂平板 5 脑心浸出液（BHI）肉汤 6 兔血浆 7 磷酸盐缓冲液 8 营养琼脂斜面 9 革兰氏染色液 10 无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1 000 mL 蒸馏水中，121 ℃ 高压灭菌15 min 。 11 1 mol/L 氢氧化钠（NaOH ) ：称取40g 氢氧化钠（NaOH ）溶于1 000 mL 蒸馏水中。 12 1 mol/L 盐酸（HCL ) : 37 ％浓盐酸90 mL ，加蒸馏水到1 000 mL 。
操作步骤 5.1 样品的稀释 5.1.1 固体和半固体样品：称取25g 样品至盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min~10 000r/min 均质1 min~2 min ，或放人盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min ~2 min ，制成1 : 10 的样品匀液。 5.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品至盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1 : 10 的样品匀液。 5.2 增菌和分离培养 5.2.1 增菌培养：吸取5 mL 上述样品匀液，接种于50 mL 7.5 ％氯化钠肉汤或10 ％氯化钠胰酪胨大豆肉汤培养基内，36 ℃±1 ℃培养18h ~24h 。金黄色葡萄球菌在7.5 ％氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在10 ％氯化钠胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。 5.2.2 将上述培养物，分别划线接种到Baird -Parker 平板和血平板，血平板36 ℃±1 ℃培养18h~24h 。Baird-Parker 平板36℃±1 ℃培养18h ~ 24h 或45h ~ 48h 。 5.2.3 金黄色葡萄球菌在Baird-Parker 平板上，菌落直径为2 mm~3 mm ，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落，但无浑浊带及透明圈。菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。 5.2.4 形态：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为0.5um~1um。 5.3 血浆凝固酶试验 5.3.1 挑取Baird - Parker 平板或血平板上可疑菌落1 个或以上，分别接种到5 mL BHI 和营养琼脂斜面，36℃±l℃培养18h~24h 。 5.3.2 取新鲜配制兔血浆0.5 mL ，放人小试管中，再加人5.3.1 BHI 培养物0.2 mL~0.3 mL ，振荡摇匀，置36 ℃±1 ℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察6h ，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。5.3.3 结果如可疑，挑取营养琼脂斜面的菌落到5 mL BHI , 36 ℃±1 ℃培养18h~48h ，重复5.3.2 。 5.4 葡萄球菌肠毒素的检测 可疑食物中毒样品或产生葡萄球菌肠毒素的金黄色葡萄球菌菌株的鉴定，应按附录 B 检测葡萄球菌肠毒素。 6 结果与报告 6.1 结果判定：符合5.2.3、5.2.4、血浆凝固酶试验阳性，可判定为金黄色葡萄球菌。 6.2 结果报告：在25g（或25ml）样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌。
FDA金黄色葡萄球菌检测方法
黄色葡萄球菌—概述 根据《伯杰氏鉴定细菌学手册》，按葡萄球菌的生理化学组成，将葡萄球菌分为金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(S. epidermidis)和腐生葡萄球菌(S. saprophyticus)，其中金葡多为致病性菌，表葡偶尔致病。λ 金黄色葡萄球菌是人类化脓性感染中最常见的病原菌。可引起局部化脓性感染，如疖、痈、皮下脓肿、外科切口及烧伤创面的感染；也可引起肺炎、伪膜性肠炎、肾盂肾炎、心包炎等多系统的化脓性感染；还可引起败血症、脓毒症等全身性感染。葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶。λ 金黄色葡萄球菌—生物学特性 金黄色葡萄球菌呈球形，直径0.8μm左右，排列成葡萄串状，无芽孢，无荚膜。 金黄色葡萄球菌—生长特性 金黄色葡萄球菌在肉汤中呈浑浊生长，在胰酪胨大豆肉汤内有时液体澄清，菌量多时呈浑浊生长。λ 金黄色葡萄球菌检验—方法适用性 MPN法：适用于检测带有大量竞争菌的食品及其原料和未经处理的含少量金黄色葡萄球菌的食品。λ 直接平板计数法：适用于检查金黄色葡萄球菌数不小于10/g（ml）的食品。λ 增菌培养法：适用于检查含有受损伤的金黄色葡萄球菌的加工食品。λ 金黄色葡萄球菌检验——直接平板计数法 （FDA BAM &ISO） 1.检样（50g+450mL稀释液） 2. 适当十倍稀释样品 3.选择2~3个连续适宜稀释度 4.吸取1ml菌液按照0.3mL、0.3mL、0.4mL分别涂布于 3块90mmBaird-Parker平板上（做平行试验） 35℃，45~48 h 5.确证试验 报告 FDA BAM 金黄色葡萄球菌检验—MPN法 1.检样（50g+450mL稀释液） 2.适当十倍稀释样品 3.选择3个适宜的连续稀释度的样品稀释液， 每个稀释度接种三管10% NaCl TSB肉汤， 每管接种1mL 35℃，48 ±2 h 4.从生长的管中接种1环划线于 Baird-Parker平板上 35℃，48 h 5.确证试验 6.报告 FDA BAM 金黄色葡萄球菌确证试验 1.凝固酶试验 方法：从平板上至少挑取1个可疑金黄色葡萄球菌菌落，移种到TSB/BHI肉汤中，置35℃培养18-24h。取肉汤培养物0.3mL同0.5mL凝固酶试验兔血浆充分混合，置35℃培养，定时观察是否有凝块形成，至少观察6h。试验中需同时做已知阳性和阴性对照。λ 结果判定：以内容物完全凝固，使试管倒置或倾斜时不流动为阳性。部分凝固（2+和3+）的必须进行生化鉴定加以证实。λ