菌落总数检测SOP
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文件编号
C05-03
主办部门
研发品管部
版本别
A
页次
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1.目的
为了使公司产品的质量保证稳定，对检测方法进行管控。
2.适用范围
本标准规定了原物料、成品、样品的检测方法。
3.权责
3.1资料收集：品管课
3.2标准制定：品管课
4.参考文件：GB/T 4789
5.定义：无
6.作业内容（如下）
6.检验要求
6.1设备和材料
稀释度选择及菌落数报告方式
例次
稀释液及菌落数
两稀释液之比
菌落总数
报告方式
1×10-1
1×10-2
1×10-3
个/g或mL
个/g或mL
1
多不可计
164
20
─
16400
16000或1.6×104
2
多为可计
295
46
1.6
37750
38000或6.8×104
3
多不可计
271
60
2.2
27100
27000或2.7×104
6.3.2菌落计数方法：做平板菌落数计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
6.3.3菌落计数的报告
6.3.3.1平板菌落数的选择：选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，可视为一个菌落；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。
6.1.1温箱：36±1℃。
6.1.2冰箱：0～4℃。
6.1.3恒温水浴：46±1℃。
6.1.4天平。
6.1.5电炉。
6.1.6吸管。
6.1.7广口瓶或三角瓶：容量为500ML。
6.1.8玻璃珠：直径约5mm。
6.1.9平皿：直径为90mm。
6.1.10试管。
6.1.11放大镜。
6.1.12菌落计数器。
使用的窗体
使用的工器具
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2018.09.15
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菌落总数检测SOP
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C05-03
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A
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6.3.3.3菌落数的报告
菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示。
6.3.3.2.4若所有稀释度的平均菌落均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
6.3.3.2.5若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。
6.3.3.2.6若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分大于或小于30时， 则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
6.3.1.4根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
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6.1.13酒精灯。
6.1.14均质器或乳钵。
6.1.15试管架。
6.1.16灭菌刀或剪子。
6.1.17灭菌镊子。
6.2培养基和试剂
6.2.1营养琼脂培养基：按GB4789.28中4.7规定。
4
多为可计
多为可计
313
─
313000
310000或6.1×105
5
27
11
5
─
270
270或6.1×102
6
0
0
0
─
<1×10
<10
7
多为可计
305
12
─
30500
31000或6.1×104
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异动日期
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2008.12.15
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菌落总数检测SOP
6.3.3.2稀释度的选择
6.3.3.2.1应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。
6.3.3.2.2若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字。
6.3.3.2.3若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
6.2.2磷酸盐缓冲稀释液：按GB4789.28中6.22规定。
6.2.3生理盐水。
6.2.4乙醇75%。
6.3操作步骤
6.3.1检样稀释及培养
6.3.1.1以无菌操作，将检样25g(或mL)剪碎放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。固体检样在加入稀释液后，最好置均质器中以8000～10000 r / min的速度处理1 min，做成1：10的均匀稀释液。
6.3.1.2用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1Ml，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管，混合均匀，做成1：100的稀释液。
6.3.1.3另取1mL灭菌吸管，按上条操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL灭菌吸管。
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6.3.1.5稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基（可放置于46±1℃水浴保温）注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。
6.3.1.6待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h。
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1.目的
为了使公司产品的质量保证稳定，对检测方法进行管控。
2.适用范围
本标准规定了原物料、成品、样品的检测方法。
3.权责
3.1资料收集：品管课
3.2标准制定：品管课
4.参考文件：GB/T 4789
5.定义：无
6.作业内容（如下）
6.检验要求
6.1设备和材料
稀释度选择及菌落数报告方式
例次
稀释液及菌落数
两稀释液之比
菌落总数
报告方式
1×10-1
1×10-2
1×10-3
个/g或mL
个/g或mL
1
多不可计
164
20
─
16400
16000或1.6×104
2
多为可计
295
46
1.6
37750
38000或6.8×104
3
多不可计
271
60
2.2
27100
27000或2.7×104
6.3.2菌落计数方法：做平板菌落数计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
6.3.3菌落计数的报告
6.3.3.1平板菌落数的选择：选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，可视为一个菌落；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。
6.1.1温箱：36±1℃。
6.1.2冰箱：0～4℃。
6.1.3恒温水浴：46±1℃。
6.1.4天平。
6.1.5电炉。
6.1.6吸管。
6.1.7广口瓶或三角瓶：容量为500ML。
6.1.8玻璃珠：直径约5mm。
6.1.9平皿：直径为90mm。
6.1.10试管。
6.1.11放大镜。
6.1.12菌落计数器。
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6.3.3.3菌落数的报告
菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示。
6.3.3.2.4若所有稀释度的平均菌落均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
6.3.3.2.5若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。
6.3.3.2.6若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分大于或小于30时， 则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
6.3.1.4根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
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6.1.13酒精灯。
6.1.14均质器或乳钵。
6.1.15试管架。
6.1.16灭菌刀或剪子。
6.1.17灭菌镊子。
6.2培养基和试剂
6.2.1营养琼脂培养基：按GB4789.28中4.7规定。
4
多为可计
多为可计
313
─
313000
310000或6.1×105
5
27
11
5
─
270
270或6.1×102
6
0
0
0
─
<1×10
<10
7
多为可计
305
12
─
30500
31000或6.1×104
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菌落总数检测SOP
6.3.3.2稀释度的选择
6.3.3.2.1应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。
6.3.3.2.2若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字。
6.3.3.2.3若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
6.2.2磷酸盐缓冲稀释液：按GB4789.28中6.22规定。
6.2.3生理盐水。
6.2.4乙醇75%。
6.3操作步骤
6.3.1检样稀释及培养
6.3.1.1以无菌操作，将检样25g(或mL)剪碎放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。固体检样在加入稀释液后，最好置均质器中以8000～10000 r / min的速度处理1 min，做成1：10的均匀稀释液。
6.3.1.2用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1Ml，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管，混合均匀，做成1：100的稀释液。
6.3.1.3另取1mL灭菌吸管，按上条操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL灭菌吸管。
主办部门
研发品管部
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5/6
6.3.1.5稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基（可放置于46±1℃水浴保温）注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。
6.3.1.6待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h。