菌落总数检测SOP

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菌落总数检验操作规程

A.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST ）肉汤A.1.1成分胰蛋白胨或胰酪胨20.0 g氯化钠5.0 g乳糖5.0 g磷酸氢二钾（K2HPO4）2.75 g磷酸二氢钾（KH2PO4）2.75 g月桂基硫酸钠0.1 g蒸馏水1 000 mL pH 6.8±0.2 制法将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH。

分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL 。

121 ℃高压灭菌15 min 。

菌落总数检验操作规程一、目的建立菌落总数检验的标准操作程序，使操作过程规范化。

二、适用范围适用于菌落总数的检验操作。

三、职责1.检验人员严格按检验操作规程进行检验。

2.QC主管监督检查执行情况。

四、程序1.范围本方法适用于食品中菌落总数（Aerobic plate count）的测定2.术语和定义菌落总数：食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。

3. 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。

3.2冰箱：2 ℃～5 ℃。

3.3 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。

3.4天平：感量为0.1 g。

3.5均质器。

3.6振荡器。

3.7无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。

3.8 无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。

3.9无菌培养皿：直径90 mm。

3.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。

3.11放大镜或和菌落计数器。

4.培养基和试剂4.1 平板计数琼脂培养基：见附录A 中A.1。

4.2 磷酸盐缓冲液：见附录A中A.24.3 无菌生理盐水：见附录A中A.3。

5.检验程序菌落总数的检验程序见图1。

图1 菌落总数的检验程序6.操作步骤6.1 样品的稀释6.1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。

菌落总数测定操作流程

菌落总数测定操作流程一、前期准备。

咱得先把要用的东西都准备好呢。

那都需要啥呢？像培养皿，这可是让菌落安家的小房子，得干净又透亮的。

还有移液管，就像小吸管一样，用来准确吸取各种液体。

再有就是培养基啦，这就好比是菌落的食物，得营养丰富，像牛肉膏蛋白胨培养基就很不错呢。

还有各种消毒用品，像酒精啥的，要把咱们操作的小天地都打扫干净，不能让那些杂菌来捣乱呀。

二、样品采集与处理。

这一步可重要啦。

如果是测食品里的菌落总数，那可得小心地采集样品。

要是固体的食物，比如说一块面包，就从不同的地方取一点，混合到一起。

要是液体的，像牛奶，就得先把它摇一摇，让里面的东西均匀了再取样。

取样之后呢，可能还得稀释，为啥要稀释呢？因为要是菌落太多，长得到处都是，咱可就数不过来了呀。

按照一定的比例，把样品和无菌水混合，就像调果汁一样，调出合适的浓度。

三、接种。

这就像是把小种子种到地里一样。

用咱们之前准备好的移液管，吸取稀释好的样品，小心地滴到培养皿里。

然后呢，再把温热的培养基倒进去，要轻轻地倒，就像给小种子盖被子一样，可不能把它们给冲跑了。

培养基一倒进去，就得赶紧把培养皿晃一晃，让样品和培养基充分混合均匀，这样菌落才能在里面舒舒服服地生长呢。

四、培养。

把接种好的培养皿放到培养箱里。

这个培养箱就像是小温室，要给菌落创造一个合适的生长环境。

温度一般设定在37℃左右，这就像咱们人感觉比较舒服的温度一样。

时间呢，大概是24 - 48小时，在这个时间里，那些小小的菌落就会像小蘑菇一样慢慢地长出来啦。

五、计数。

时间一到，就可以把培养皿拿出来数菌落啦。

这可需要点耐心呢。

拿着小本子和笔，一个一个地数那些小小的菌落点。

有时候菌落会长得密密麻麻的，就像天上的星星一样，可不好数了。

这时候就得小心仔细，别数错了。

如果有连成一片的，那可不能算一个，要按照一定的规则来数呢。

六、结果报告。

数完菌落之后，就可以算出菌落总数啦。

根据咱们之前的稀释倍数，算出每克或者每毫升样品里大概有多少个菌落。

菌落总数检验作业指导书

6.3.1.2样品稀释方法：
A、以无菌操作取检样25ml于225ml灭菌生理盐水中，经充分振摇作成1：10的均匀稀释液。
B、用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内，振摇做成1：100的样品稀释液。
C、另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释度，注意每递增稀释一次，换用1支1ml灭菌吸管。
6.2.2生理盐水：(0.9%浓度)定量分装于锥形瓶或试管内。
6.2.3乙醇：（75%）
菌落总数检验作业指导书
6.3操作步骤：
6.3.1样品处理
6.3.1.1成品直接吸取5ml于灭菌平皿中；半成品、水样以无菌操作直接吸取1ml于灭菌平皿中；原材料、成品复检及一些可疑样品可以视污染情况作不同的稀释处理。
7.0相关文件
7.1《食品卫生微生物学检பைடு நூலகம்菌落总数测定》
8.0质量记录表单
无
E、若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。
F、若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
6.3.4菌落数的报告
菌落数在100以内时，按其实有数报告；大于100时用二位有效数字，在二位有效数字后的数字，以四舍五入方法计算。
6.3.2.2待琼脂凝固后，翻转平皿，置37℃生化培养箱内培养48±2h，取出计算平皿内菌落数目，乘以稀释倍数，即得5ml或1ml检样中所含的细菌菌落总数。
6.3.3菌落计数
6.3.3.1平板菌落数的选择
选取菌落数在30-300之间的平板作为菌落总数计数标准。
6.3.3.2稀释度的选择
A、应选择平均菌落数在30-300之间的稀释度，乘以稀释倍数，报告之。

菌落总数操作手册

菌落总数操作手册
一、概述
菌落总数是指在一定条件下生长的细菌菌落数，用于评估食品或环境的卫生质量。

本操作手册将详细介绍如何进行菌落总数检测，以确保实验结果的准确性和可靠性。

二、实验材料
1. 培养基：平板计数琼脂（PCA）
2. 试剂：无菌生理盐水
3. 器具：无菌棉签、无菌培养皿、无菌移液管（1mL）、天平、pH计、恒温培养箱、计时器、灭菌锅
三、实验步骤
1. 样品采集：使用无菌棉签采集适量样品，并放入无菌容器中。

对于液体样品，直接使用无菌移液管取样；对于固体或半固体样品，需将样品研磨或搅拌均匀后取样。

2. 样品稀释：将采集的样品进行稀释，使细菌能更好地在培养基上生长。

根据样品性质和预计菌落数，选择适当的稀释倍数。

一般采用10倍稀释法。

3. 制备平板：将PCA培养基加热融化后，冷却至45℃左右，倒入无菌培养皿中，每皿约15mL。

4. 接种样品：将稀释后的样品取1mL加入已制备好的平板中，用无菌玻璃棒均匀涂布在培养基上。

5. 培养：将培养皿倒置放入恒温培养箱中，在37℃下培养24-48小时。

6. 计数：计数平板上的菌落数，并记录结果。

根据实验要求，计算出样品中的菌落总数。

7. 结果报告：根据实验数据，撰写实验报告并向上级汇报检测结果。

四、注意事项
1. 实验前应保证所有器具和试剂的无菌状态，避免交叉污染。

2. 实验过程中要保持清洁卫生，避免人为误差。

菌落总数检验操作规程

菌落总数检验操作规程一、实验室准备工作1.准备培养基：根据实验需求选择适当的培养基，如营养琼脂培养基、大肠埃希氏菌选择性培养基等。

注意培养基的成分和质量。

2.准备培养基平板：测量合适的培养基量并加入培养皿中，使用无菌技术将培养基均匀倒入培养皿，标明编号和日期。

二、样品处理1.准备样品：如食品样品，需要将样品称重并加入适当的生理盐水中，用搅拌器或均质仪进行均匀悬浮。

2.稀释样品：根据实验需要，对样品进行系列稀释。

取适量的悬浮样品，依次加入尺量瓶中的生理盐水，振摇均匀。

三、接种培养1.无菌操作：在无菌工作台内进行操作，穿戴好无菌手套，将培养皿放入工作台上，注意防止污染。

2.接种样品：使用无菌移液器，取适量的稀释样品均匀滴入培养皿上。

3.均匀涂布：使用无菌匀涂棒，将样品在培养皿上均匀涂抹，注意避免混入外来微生物。

四、培养条件1.始菌箱：将接种后的培养皿置于始菌箱中，设定适当的温度和湿度（如37℃，24小时）。

2.孵化箱：将始菌箱中的培养皿转移到恒温培养箱中适当孵育时间，保持适宜温度及湿度。

五、菌落计数1.观察菌落：取出培养好的菌落总数平板，放在均匀光源下观察菌落的形态、颜色、大小等特征，标记异常菌落。

2.计数菌落：使用计数器或显微镜对菌落进行计数，记录结果，并用公式计算菌落总数。

每个菌落总数平板至少计数两遍，计算平均值。

六、数据分析与结果判定1.数据分析：对不同样品的检测结果进行归类整理，统计菌落总数的分布情况。

2.结果判定：根据相应的标准或规定，比较样品的检测结果与标准要求，判定样品是否合格。

七、清洗和消毒1.清洗：将培养皿彻底清洗干净，清除残留的培养基和菌落。

2.消毒：将使用过的器材进行高温高压消毒或化学消毒，确保无菌环境。

以上就是菌落总数检验操作规程的简要示例，实验过程中需严格遵守无菌操作规范，并根据具体实验要求进行相应的调整。

在实验过程中，及时记录实验数据，注意安全操作。

实验完成后，对结果进行统计分析和归档保存。

SOP-013洁净室(区)手菌总数监测标准操作规程

操作规程文件编号：SOP-013 版号：A/0编制：审核：2020.3.1洁净室（区）手菌总数监测标准操作规程批准：生效日期：1目的：建立洁净室（区）手菌总数监测标准操作规程，保证监测人员操作的规范化、标准化。

2范围：适用于洁净室（区）人员手菌表面微生物监测和洁净度等级的验证。

3职责：3.1质量控制部负责本规程的起草、修订、审核、培训、执行和监督。

3.2质量控制部QA负责对表面微生物的取样，QC负责菌落的培养，结果的判定，被测部门配合监测的工作。

4 编制依据：《一次性使用卫生用品卫生标准》 GB/T 15979-2002《医疗器械生产质量管理规范》5.基本概念：5.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。

6.内容：6.1 监测方法：接触平皿法6.2 操作原理通过接触平皿法用无菌培养基表面与被测试表面直接接触，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀接触、吸附收集被测试表面的微生物培养，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净室内人员表面的活微生物数。

它适用于对平整的有规则性表面进行取样监测。

该方法有以下局限性：不适用于不规则表面；如果培养基比较湿，会造成微生物的混合和漫延；必须将培养基的残留物从取样点的位置清除干净。

6.3 仪器、用具经校正并在有效期内的恒温培养箱、培养基平板。

6.3.1 每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。

选定3只培养皿作对照培养，将培养基平皿倒置于30℃～35℃恒温培养箱中培养3天，若培养基平皿上确无菌落生长，本批培养基可供表面微生物监测（接触平皿法）采样用。

6.4 监测条件6.4.1 表面微生物（接触平皿法）测试前，被测试洁净室(区)的温湿度、压差、换气次数监测必须合格，在日常生产操作中，表面微生物监测（接触平皿法）应在关键操作完成后进行（验证需要在生产前、生产过程中的测试的除外）。

菌落总数的测定标准

菌落总数的测定标准一、采样方案1.1 采样对象：本标准适用于各类食品、药品、化妆品等产品。

1.2 采样量：根据产品类型及实际需要，一般采样量为10-50g（mL）。

1.3 采样方法：用无菌采样器随机取样，然后将样品混匀，制成1:10的稀释液。

二、培养基2.1 选择培养基：使用国家规定的标准培养基，如营养琼脂、孟加拉红培养基等。

2.2 培养基配制：按照培养基说明书进行配制，加入适量添加剂以满足实验要求。

三、培养温度3.1 培养温度：菌落总数培养温度为36℃±1℃。

3.2 恒温培养：培养过程中需保持恒温，不得超过±2℃。

四、培养时间4.1 培养时间：菌落总数培养时间为48小时±2小时。

4.2 时间记录：记录每个平皿的培养时间，以获得准确的菌落计数。

五、结果报告5.1 计数方法：使用菌落计数器对各稀释度平皿进行计数，并记录每个稀释度的平均菌落数。

5.2 结果报告：根据平均菌落数计算出每克（mL）样品中的菌落总数，并按照规定格式填写结果报告。

六、精度要求6.1 重复精度：同一稀释度同一平皿的菌落数偏差不得超过10%。

6.2 仪器精度：菌落计数器的精度应符合国家相关标准要求。

七、空白对照7.1 空白培养基：取适量空白培养基放入恒温培养箱中，观察其是否受到污染。

7.2 空白样品：取适量空白样品（如无菌水）进行实验，观察其是否受到污染。

八、重复试验8.1 重复次数：同一批次样品至少进行两次独立实验，以验证实验结果的可靠性。

8.2 异常情况处理：如出现异常数据或不符合要求的数据，应重新进行实验或采用备用样品进行实验。

菌落总数检验步骤1很详细

菌落总数检验步骤第一法平板菌落计数法1 操作步骤1.1 样品的稀释1.1.1 固体和半固体样品：称取25g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，5 000r/min~10 000r/min 均质 1 min~2 min ，或放人盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min~2 min ，制成1：10 的样品匀液。

1.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1 ：10 的样品匀液。

1.1.3 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1： 10 样品匀液1 mL ，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用一支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1：100 的样品匀液。

1.1.4 按1.1.3 操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。

每递增稀释一次，换用一次1 mL 无菌吸管或吸头。

1.1.5 根据对样品污染状况的估计，选择2 个~3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液）, 在进行10 倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1 mL 样品匀液加人两个无菌平皿内。

同时分别取1 mL 稀释液加人两个无菌平皿作空白对照。

1.1.6 及时将15 mL~20 mL 冷却至46 ℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46 ℃±1 ℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。

1.2 培养1.2.1 琼脂凝固后，将平板翻转，36 ℃±1 ℃培养48h±2h 。

水产品30 ℃±1 ℃培养72h±3h.1.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4 mL ) ，凝固后翻转平板，按6.2.1 条件进行培养。

菌落总数检测SOP

6.3.1.4根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
使用的窗体
使用的工器具
发布
核准：
审核：
制作：
日期：
日期：
日期：
2018.09.15
文件名
菌落总数检测SOP
文件编号
C05-03
使用的窗体
使用的工器具
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审核：
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日期：
日期：
日期：
2018.09.15
文件名
菌落总数检测SOP
文件编号
C05-03
主办部门
研发品管部
版本别
A
页次
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6.1.13酒精灯。
6.1.14均质器或乳钵。
6.1.15试管架。
6.1.16灭菌刀或剪子。
6.1.17灭菌镊子。
6.2培养基和试剂
6.2.1营养琼脂培养基：按GB4789.28中4.7规定。
文件编号
C05-03
主办部门
研发品管部
版本别
A
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1.目的
为了使公司产品的质量保证稳定，对检测方法进行管控。
2.适用范围
本标准规定了原物料、成品、样品的检测方法。
3.权责
3.1资料收集：品管课
3.2标准制定：品管课
4.参考文件：GB/T 4789
5.定义：无
6.作业内容（如下）
6.检验要求
6.1设备和材料
6.3.3.2.4若所有稀释度的平均菌落均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

微生物室细菌菌落总数测定操作规程

微生物室菌落总数测定操作规程菌落总数：将一定量的待测样在营养琼脂上，有氧条件下37℃培养48h后，营养琼脂中所含菌落的总数1材料准备1.1培养基与试剂1.2营养琼脂培养基1.2.1.1成分a．蛋白胨 10gb．牛肉膏 3gc．氯化钠 5gd．琼脂 10—20ge．蒸馏水 1000mlf．生理盐水约1000ml1.1.1.2 制法将上述成分混合并加热溶解后，加入琼脂加热溶化，然后补足所需要的水分，再调整pH为7.4—7.6，然后放入三角瓶中包扎好后，在121℃条件下灭菌20min，冷却备用。

1.3仪器a．高压蒸汽灭菌器（锅）b．恒温培养箱（37℃±1℃）c．电炉d．天平e．冰箱f．放大镜g．pH计（或精密pH试纸）h．灭菌试管、平皿（φ=9cm）、刻度吸管、管塞等i．灭菌移液枪枪头j．玻璃菌落涂布器2检验步骤2.1取样并稀释2.1.1制备无菌生理盐水制取1000ml生理盐水，在121℃条件下灭菌20min冷却至室温，放置于无菌条件下备用。

2.1.2 取样稀释用灭菌注射器（或灭菌吸管）吸取一定量的待测样品注入已盛有一定量灭菌生理盐水和足够的玻璃珠的灭菌三角瓶中，扎好瓶口，在震荡器中振摇20min，制成10-1的菌悬液，再用无菌吸管（或移液枪）在10-1的菌悬液取1ml，加入另一个已盛有9ml无菌生理盐水的试管中，混匀，制成10-2的菌悬液。

按此法依次制成10-3,10-4,10-5,10-6,10-7等不同稀释度的菌悬液备用。

2.2.1制平板并涂布将灭菌后的培养皿取出，冷却。

将每个培养皿里倾注约15-35ml已溶融化并冷却到45℃左右的培养琼脂，待其完全凝固后选择3～4个合适的稀释度的菌悬液，移取0.1ml于培养基上，用灭菌的涂布器将菌悬液均匀的涂布于培养基表面，将培养皿放置于水平桌面上至少20min，使微生物完全吸附于培养基上。

每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作空白对照(视情况可不做空白对照)。

菌落总数检验流程

菌落总数检验流程一、准备工作。

咱们要开始做菌落总数检验呀，得先把要用的东西都准备好。

这就像做饭得先把食材和厨具找齐一样。

像培养基就得提前准备好，营养琼脂培养基就很常用呢。

这就好比是细菌生长的小乐园，给细菌提供营养，让它们能快快长大。

还有平皿，要干净又卫生的，这是细菌未来的小房子。

再就是各种小工具啦，像接种环、酒精灯之类的。

接种环就像一个小小的魔法棒，用来把细菌接到培养基上。

酒精灯嘛，就像是个小卫士，给操作环境消消毒，保证只有咱们想检验的细菌在这儿生长。

二、样品采集。

采集样品也是个技术活呢。

如果是食品的话，得按照规定的方法去取。

比如说从大包装里取一小部分，而且要取有代表性的地方。

可不能随便挖一勺就了事呀，那就像抽奖只抽一个角儿，不准的。

要是从环境中采集呢，像采集空气里的细菌样本，就需要用专门的采样器，这就像是捕捉细菌的小网子，把空气中的细菌都抓到我们的小瓶子里。

采集的过程就像是一场小小的探险，要小心翼翼的，保证采集到的样品能真实反映出我们想要检测的情况。

三、样品处理。

采到样品之后呢，就得处理啦。

如果是固体的样品，可能需要把它捣碎或者溶解。

这就好比把一块大石头敲碎成小石子，让细菌能均匀地分布在里面。

要是液体样品相对就简单一点，但也得进行适当的稀释。

为啥要稀释呢？就像人太多住不下一个小房子一样，细菌太多了在培养基上也会长得密密麻麻，咱们就数不清啦。

稀释到合适的倍数，这样每个平皿里的细菌数量就比较好数了。

四、接种培养。

处理好样品之后，就到了接种这一步啦。

用接种环蘸取稀释好的样品，轻轻地在培养基上划几道，就像在画布上画画一样。

不过这个画画可是有规矩的，要保证细菌能均匀地分布在培养基上。

然后把平皿放到培养箱里，培养箱就像是细菌的小温室，温度、湿度都刚刚好。

一般来说，37摄氏度是比较常见的培养温度，就像给细菌创造了一个最舒服的小窝，让它们快快繁殖。

五、菌落计数。

等培养的时间到了，就可以把平皿拿出来数菌落啦。

这时候就像是在数小星星一样，不过要特别仔细哦。

菌落总数的检验程序的流程

菌落总数的检验程序的流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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菌落总数测定操作规程

1 规范性引用文件：下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。

凡是注日期的引用文件，起随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用与本标准，然而，鼓励根据本标准达成的协议的各方研究是否适用这些文件最新版本。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

中华人民共和国药典2005 版附录2 抽样方法成品同一批号的产品中至少随机抽取 3 包装样品，取好的样品应用无菌袋装好，检验前不得打开。

3 设备和材料3.1 冰箱0 C〜4°C。

3.2 恒温培养箱：36C±1 C和25土1C3.3 恒温水浴锅：46C±1C。

3.4 电子天平：0g〜500g，精确至0.01g.3.5 可调试移液枪：1ml〜5ml3.6 旋涡混匀器3.7 薄膜过滤器：三联3.8 灭菌吸管：1ml（具0.01ml 刻度）、10ml （0.1ml 刻度）。

3.9 灭菌锥形瓶：500ml,250ml.3.10 灭菌培养皿：直径约90mm3.11 灭菌剪子、镊子、滤头、移液枪头等。

4 试剂和培养基4.5 0.1%2 , 3, 5-三苯基氯化四氮咗溶液121C, 15min灭菌备用。

4.2 磷酸24.1 营养琼脂培养基：取15.2g营养琼脂培养基溶于400ml水中，装入500ml锥形瓶121C, 15min灭菌备用。

4.2 沙氏琼脂培养基：取25.6g 沙氏琼脂培养基溶于400ml 水中,装入500ml 锥形瓶121C, 15min灭菌备用。

4.3 洗脱液：取0.9g氯化钠溶于100水中（加入2 g山梨酸脂80）,装入100ml锥形瓶，另外再取0.9%氯化钠溶液分别以9ml/支分装于试管中121C, 15min灭菌备用。

4.4 75% 乙醇溶液4.5 0.1%2 , 3, 5-三苯基氯化四氮咗溶液121C, 15min灭菌备用。

5 操作步骤5.1 检样稀释及培养5.1.1以无菌操作将检样10g（ml）放于含有100mL灭菌生理盐水灭菌玻璃瓶，经充分振摇制成1 ：10 的均匀稀释液。

菌落总数测定实验步骤

菌落总数测定实验步骤
菌落总数测定实验的步骤如下：
1. 准备所需材料和试剂：琼脂培养基、试管、乳酸菌平板、移液器、消毒液等。

2. 将琼脂培养基溶解并熔化，待稍微冷却至37℃左右。

3. 取一定量的菌液，一般可采用10倍稀释法，将菌液加入含有适量琼脂培养基的试管中，彻底混合均匀。

4. 将加有菌液的琼脂培养基倒入乳酸菌平板中，待凝固。

5. 将已经凝固的乳酸菌平板倒置，放入孵化箱中，以37℃恒温培养。

6. 培养时间通常为24-48小时，视具体菌种而定。

7. 从孵化箱中取出培养好的乳酸菌平板，将菌落数目较多且分散的平板选取，以避免菌落过于密集而无法清楚计数。

8. 使用显微镜或肉眼观察，使用计数板或计数器，对菌落进行计数，记录下每个平板上的菌落总数。

9. 根据实验设计的需要，可以进行平均数的计算和数据的统计分析。

10. 实验结束后，用消毒液彻底清洗实验器材，并正确处置菌
液和培养平板。

注意事项：
- 操作过程中应注意无菌操作，避免外部污染。

- 实验室内需要保持清洁卫生，定期消毒工作台和实验室器材。

- 孵化过程中需要注意温度和时间的控制，避免过渡时间或温
度过高导致菌落生长异常。

- 菌落计数时需要仔细观察，避免漏计或重复计数。

- 实验结束后，遵守实验室规定的废弃物处理要求，确保安全
环保。

菌落总数测定操作流程

菌落总数测定操作流程一、准备工作。

咱得先把要用的东西都找齐喽。

啥东西呢？像培养皿得有吧，这就像是小房子，是给那些菌落住的。

还有移液管，这就像个小吸管，能准确地把液体吸出来。

培养基也不能少，这可是菌落生长的“食物”呢。

另外，像天平、三角瓶这些东西也都得准备好。

在开始之前呢，可一定要把手洗得干干净净的，最好再消个毒，可别把咱手上的细菌也带进去捣乱了呀。

二、样品处理。

如果是固体样品，那可得费点事儿。

咱得把它弄成小块小块的，然后放到有生理盐水或者磷酸盐缓冲液的三角瓶里。

这就像是给它洗个澡，把它表面的那些杂七杂八的东西都洗干净。

如果是液体样品呢，就简单一些啦，不过也得按照一定的比例稀释一下，就像把一杯浓果汁兑点水变得淡一点一样。

为啥要稀释呢？因为如果菌落太多，都挤在一起，咱可就数不清了。

三、接种。

现在就到了把处理好的样品接种到培养皿里的时候啦。

用移液管小心地吸取一定量的样品溶液，轻轻地滴到培养皿里。

这时候动作可得轻点儿，就像照顾小婴儿一样，别把它们给弄洒了或者溅出来。

然后呢，再把已经融化并且冷却到合适温度的培养基倒进去，把培养皿轻轻地晃一晃，让样品和培养基充分混合。

这就像是给菌落铺好了床，让它们能舒舒服服地在里面生长。

四、培养。

把接种好的培养皿放到培养箱里去。

这培养箱的温度和时间可都是有讲究的呢。

一般来说，是36℃左右，培养个48小时左右。

在这个过程中，那些小小的菌落就在培养皿里悄悄地生长起来啦。

就像小种子在合适的环境里慢慢发芽一样，可神奇了。

五、计数。

培养时间到了之后，就可以把培养皿拿出来计数啦。

这时候你就会看到培养皿里有好多小点点，那些就是菌落啦。

数菌落的时候可得仔细点儿，可别多数了或者少数了。

有时候菌落会长得密密麻麻的，这时候就更考验咱的耐心了。

可以用个小记号笔，数一个就画个小圈，这样就不容易数乱了。

如果有的菌落长得特别大，或者是看起来有点奇怪，也得算进去哦，毕竟它们都是从样品里长出来的嘛。

六、结果报告。

菌落总数检验操作规程

菌落总数检验操作规程目的：该操作规程用于规范公司产品及原料的活菌数量检验操作。

范围：该操作规程适用于公司要求检查该项的产品和原料的菌落总数检验责任人：微生物检验员，QC主管内容：1 技术依据及原理菌落总数计数采用平板菌落计数法，这是活菌计数方法之一。

该方法以在琼脂平板上，样品经过处理在一定条件下培养后，所得1ml（或1g）检样中形成菌落的总数。

测定结果只反映在规定条件下，只包括一群在平板计数琼脂生长发育的嗜中温需氧菌或兼性厌氧菌的菌落总数。

在进行本法测定时，必须严格按本法规定的条件操作，以免产生实验误差。

2 材料、仪器、试剂的准备及基本要求2.1 无菌室2.1.1 结构和要求无菌室面积不超过10m2，高度不超过2.4m，应采光良好、避免潮湿、远离厕所所及污染区，有缓冲间（2个）、操作间组成。

操作间与缓冲间之间应有样品传递窗（箱），出入操作间和缓冲间的门不应直对。

无菌室应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。

墙与地面及墙壁、天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，不留死角。

操作间内不得安装下水道。

无菌室照明灯应嵌装在天花板内，室内光照分布均匀，光照度不低于300勒克斯。

缓冲间和操作间均应设置紫外线杀菌灯（2～2.5W/m3）, 紫外线杀菌灯距实验台面高度不超过1 m，并定期检查其辐射强度，辐射强度不低于70µW·cm-2（1 m距离），不符合要求的紫外线杀菌灯应即使更换。

2.1.2 温度、湿度无菌室内温度和相对湿度直接影响紫外线杀菌灯的杀菌效果，故应控制温度18～26℃，相对湿度40～60%。

操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压，压差不低于4.9Pa。

2.1.3 操作间操作间应安装空气除菌过滤层流装置。

洁净度应不低于10000级，局部净化度100级，或放置同等级净化工作台，并准备药物天平，乙醇灯、打火机、大小橡皮乳头等。

2.1.4 缓冲间缓冲间应有洗手盆，无菌衣、帽、口罩、拖鞋等。

菌类检测

菌类检测（一）菌落总数测定1.操作规程（1）以无菌操作,将检样的25g剪碎放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内或灭菌均质器中以8000－10000ppm的速度处理1分钟,做成1:10的稀释液.（2）用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml,注入含有9ml灭菌生理盐水（3）另取1ml灭菌吸管按上项顺序作10倍的均匀稀释液.（4）选择2－3个适宜稀释度分别将各稀释度的1ml放于灭菌平皿内,每个稀释度作两个平皿.（5）将盛有稀释液的平皿上注入凉至46℃营养琼脂培养基约15ml,转动平皿内作空白对照明.（6）待琼脂凝固后,翻转平板,置36±1℃培养箱内培养48±2小时取出计算平板内菌落数目,乘以稀释倍数,即得1g肉品所含菌落总数.2．注意事项（1）灭菌玻璃瓶内放入适当数量的玻璃珠。

（2）灭菌啄管尖端不要触及管内稀释液。

（3）平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查。

（4）记录各平板的菌落数后，求出不同稀释度的各平板平均菌落数。

（5）将盛有稀释液的平皿上注入凉至46度营养琼脂培养基约15ML。

转动平皿混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液的灭菌平皿内作空白对照。

（6）待琼脂凝固后，翻转平板，置于36±1℃培养箱内培养48±2小时取出计算平板内菌落数目,乘以稀释倍数,即得1g肉品所含菌落总数.（7）检查菌落总数时，如一个平板有较大片状菌落生长时，不宜采用，应以无片菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2代表全皿菌落数。

（二）大肠菌群测定1.操作规程（1）检样稀释A：以无菌操作将检样25ml（25g）放于含有225 ml灭菌后理盐水瓶内或灭菌乳钵内充分振摇或研磨作成1：10的均匀稀释液。

B：用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内摇混匀，作成1：10的稀释液。

菌落总数操作手册

菌落总数操作手册一、引言菌落总数是一种常用的微生物检测方法，用于评估食品、水源和医药产品的微生物污染情况。

本操作手册旨在提供详细的步骤和技巧，帮助实验人员正确、准确地进行菌落总数测试。

二、实验室准备1. 实验室环境：确保实验室内的空气清洁，减少空气中微生物的干扰。

2. 实验室设备准备：2.1 培养基：使用适宜的培养基，如TSA（Trypticase Soy Agar）。

2.2 培养基平板：准备含有适量的培养基的平板，用于菌落生长。

2.3 微量移液器和吸头：用于取样和移液，确保无菌。

2.4 灭菌器：用于灭菌实验室工具和试剂。

2.5 培养箱：用于保存培养基平板在适宜的温度下孵育。

三、样品采集和处理1. 样品采集：根据需要采集待测样品，注意采样工具和容器的无菌处理，防止外界污染。

2. 样品处理：2.1 固体样品：将固体样品称量，加入适量的生理盐水或缓冲液中，进行均匀悬浮。

2.2 液体样品：取适量的液体样品，按照一定比例加入生理盐水或缓冲液中进行稀释。

2.3 混合样品：按照比例混合不同样品，确保样品的均匀分布。

四、菌落计数操作步骤1. 稀释处理：1.1 取适量的悬浮液，加入无菌试管中，加入适量的生理盐水或缓冲液进行一定倍数的稀释，如10^-1、10^-2、10^-3等。

1.2 使用无菌移液器，吸取适量的菌液，均匀涂布在培养基平板表面，用无菌酒精灯杀菌吸头。

1.3 等待菌液均匀渗入培养基平板后，用倒置培养后的平板。

2. 孵育：2.1 将培养基平板放置在培养箱中，设置适当的温度和时间，让菌落生长。

2.2 在孵育期间避免移动或震动培养基平板，以免影响菌落形成。

3. 菌落计数：3.1 使用显微镜观察培养基平板上的菌落，选择合适放大倍率。

3.2 通过目视法或使用计数器进行菌落计数，确保每个菌落仅计数一次。

3.3 记录每个稀释倍数对应的菌落数。

五、结果分析和报告1. 结果计算：1.1 根据需要计算出初始样品中的菌落总数，考虑稀释倍数和计数范围。

餐饮企业空气菌落总数检验操作规程作业指导书

餐饮企业空气菌落总数检验操作规程作业指导书
2.1.1培养基配制
准确用万分之一天平称取蛋白胨10g，氯化钠5g，肉膏5g，琼脂20。

加热溶解于1000ml蒸馏水中，调PH至7.0±2。

2.1.2灭菌
将培养基分装于三角瓶或试管容器中，包扎密封。

将培养基及平皿置于灭菌锅中在121℃环境下灭菌15min。

2.1.3平皿准备
将灭菌后的培养基放置于46±1℃恒温水浴锅中冷却至46℃，于无菌环境下倾倒15-20ml于无菌平皿中，并不断转动平皿使其均匀分布。

倾倒完毕及时用取样袋密封备用。

2.1.4样品采集
关闭相应采样车间门窗，将无菌平皿开盖放置于车间相应位置15-30min后盒盖密封，立即送检。

（采样点：室内面积不超过30m2，在对角线上设里、中、外三点，里、外点位置距墙1m；室内面积超过30m2，设东、西、南、北、中5点，周围4点距墙1m。

）2.1.5检验方法
将采集细菌后的营养琼脂平板置于35℃-37℃培养箱中培养48h，菌落计数。

2.1.6结果计算
空气菌落总数的测定结果按式（1）得出。

y1= (1)
式中：y1--------空气中细菌总数，cfu/m3；
A---------平板上平均细菌总数；
S1--------平板面积,cm2；t----------暴露时间，min。