血清肌酸激酶MB同工酶测定
血清肌酸激酶同工酶测定标准操作规程
33、血清肌酸激酶同工酶测定标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请:血清肌酸激酶同工酶测定(缩写CK-MB), 组合项目申请:血生化中心肌酶谱项目测定。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理标本采集常规静脉采血约2 ml,不抗凝,置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
检查体液乳酸脱氢酶的体液标本应用肝素抗凝。
检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
急诊标本采集后,在检验申请单上填写标本采集时间。
标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态,对不合格标本予以拒收。
下列标本为不合格标本标本量不足:少于的全血标本,或少于的血清或血浆。
对反应吸光度有干扰的标本,包括严重溶血、严重浑浊的标本。
无法确认标本与申请单对应关系的。
其他如标识涂改、标本试管破裂等。
标本保存接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。
标本保存时间:室温(15~25℃)下可稳定4h,普通冰箱中(2~8℃)稳定8h。
-20℃保存稳定30天。
为避免标本中水分挥发使血清浓缩,对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
已完成测试的标本保持完整的识别号,置4~8℃冰箱内保存7天。
标本采集的注意事项采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动,24h 不饮酒和12h 以上禁食空腹状态。
注意有无应用影响测试项目的药物。
可以使用肝素抗凝的血液标本。
3 方法原理试剂中抑制CK 同工酶CK-M 的抗体,完全抑制CK-M 的活性而不影响另一种CK 同工酶CK-B 的活性。
CK-B 在两个工具酶的参与下,通过下面三个反应式所表示的反应,最后使NADP 转化成在340nm 波长处有光吸收的NADPH ,在340nm 波长处连续监测NADPH 吸光度的增加速率,推算出CK-B 的活性。
所得结果乘以2即得CK-MB 的活性。
ATP ADP CK +−→−+肌酸磷酸肌酸ADP 6ATP HK +--−→−+磷酸葡萄糖葡萄糖NADPH 6NADP 6PDH 6G +-−−−→−+--磷酸葡萄糖酸磷酸葡萄糖4 试剂及其他用品试剂盒名称:利德曼肌酸激酶同功酶(CK-MB )试剂盒,北京利德曼生化技术有限公司出品。
肌酸激酶MB型同功酶质量测定SOP_MMB临床意义_检验科生化项目SOP
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1检测原理
MMB方法是基于“三明治”原理的一步式酶免疫分析法。样本是利用带有具体针对CKB亚基的单克隆抗体涂层的二氧化铬粒子以及轭合物试剂(标有β-吡喃半乳糖苷的具体针对CKMB同功酶的单克隆抗体)孵育的标本与包被CKB亚基特异的单克隆抗体的二氧化铬颗粒及结合物(被CKMB同功酶特异的单克隆抗体标记的β半乳糖苷酶)一起孵育。在孵育过程中会形成一个由颗粒/CKMB/结合物组成的三明治式的结构,没有结合的结合物可通过磁性分离和清洗来清除,结合了三明治的β-吡喃半乳糖苷与一个发色底物氯酚红-β-d-吡喃半乳糖苷(CPRG)结合,CPRG水解释放色基(CPR)。患者样本中所呈现的CKMB的浓度直接与由于在577nm处测量的CPR的形成而导致的颜色变化的比率成比例。
CrO2-Ab+ F(ab′)2-β-吡喃半乳糖苷(转移到比色杯)
CPRG(在577nm处不吸收)CrO2-Ab- CKMB- F(ab′)2-β-galCPR(在577nm处吸收)
2标本采集与处理
2.1采血方法
空腹不抗凝静脉血2~3ml。
2.2标本保存
室温保存,及时送检和检测。样本在室温下可存储12小时,在4℃下可存储3天,在–20℃下冷冻保存1个月。
5.2校准条件
肌酸激酶同功酶质量测定
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在室内质控失控、更换试剂批号、更换仪器主要配件或进行大保养后均需校准。无特殊情况校准周期为3个月。
5.3校准程序
主屏幕按F5:PROCESS CTRL→F1:CALIBRATION,按enter→F2:SET-UP&RUN,按项目键选择所需要校准的项目名称METHOD,选中相应试剂批号LOT,输入操作者姓名Operator、校准液货号Calibrator
CKMB——精选推荐
CKMB肌酸激酶同⼯酶MB(CKMB)的检测⼀、项⽬名称、检验⽅法名称1. 项⽬名称:肌酸激酶同⼯酶MB(CKMB)的检测2. 检验⽅法名称:化学发光法⼆、⽅法学原理:肌酸激酶同⼯酶MB测定采⽤双位点夹⼼化学发光免疫分析法,其采⽤的技术原理如下:第⼀步:将样本与包被着CK-MB单克隆抗体的超顺磁性磁微粒(磁珠)以及CK-MB单克隆抗体-碱性磷酸酶标记物添加到反应管中,经过孵育,样本中的CK-MB和包被在磁珠上的CK-MB单克隆抗体结合,同时CK-MB单克隆抗体-碱性磷酸酶标记物与样本中CK-MB另⼀位点结合。
反应完成后,磁场吸住磁珠,洗去未结合的物质。
第⼆步:将化学发光底物(3-(2-螺旋⾦刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-⼆氧环⼄烷,AMPPD)添加到反应管内,发光底物AMPPD能有效地被碱性磷酸酶所分解, 脱去⼀个磷酸根基团,⽣成不稳定的中间产物,该中间产物通过分⼦内电⼦转移产⽣间氧苯甲酸甲酯阴离⼦,处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离⼦从激发态返回基态时,产⽣化学发光,由光电倍增管对反应所产⽣的光⼦数进⾏测量,所产⽣的光⼦数与样本内CK-MB的浓度成正⽐。
样本内分析物的量由定标曲线来确定。
三、试剂品牌、代号、包装规格、内含物1、试剂品牌:深圳迈瑞2、包装规格:2*503、内含物:Ra试剂:包被着抗CK-MB抗体的超顺磁性微粒,0.2 g/L;Tris缓冲液,50 mmol/L;ProClin 300,0.5 g/L;叠氮钠,0.9g/L;Rb试剂:抗CK-MB抗体-碱性磷酸酶标记物,3 mg/L;MES缓冲液,50 mmol/L;ProClin 300,0.5 g/L;叠氮钠,0.9 g/L 4、储存条件及有效期:2~8℃保存,有效期365天。
上机使⽤后,在2~8℃的贮存环境下有效期为28天四、仪器品牌、型号:迈瑞CL1000i五、具体操作步骤(包括主要的仪器测定参数)5.1校准:5.1.1校准品来源:试剂⼚家的标准液。
心肌同工酶(CK-MB)测定操作规程(SOP)
心肌同工酶(CK-MB)测定操作规程(SOP)一、用途本产品用于体外定量测定血清样品中肌酸激酶同工酶(CKMB)的活性。
二、临床意义(一)概述肌酸激酶是由M型和B型两种亚基组成的二聚体,结合形成三种CK同工酶:CK-BB、CK-MB、CK-MM。
骨骼肌中大多数为CK-MM;胃肠道和脑组织中以CK-BB为主;心肌中以CK-MB为主。
当心肌损害,特别是发生心肌梗塞时,血液中CK-MB水平升高。
胸疼发生后4-6小时CK-MB水平开始升高,12-24小时到达高峰,48小时后回到基质水平。
(二)临床意义CK-MB主要存在于心肌中,约为心肌总CK的14%,血清CK-MB上升先于总活力的升高,24小时达峰值,36小时内其波动曲线与总活力相平行,至48小时消失。
(三)医学决定水平15U/L: 高于此值,且有持续性临床表现(胸痛、心电图显示特异性改变等),提示为急性心肌梗塞,应及时进行治疗。
90U/L: 高于此值多由于非心肌性CK-MB释放,如恶性肿瘤,应采取其他有关诊断方法,予以确诊。
三、检验原理磷酸肌酸 + ADP −−→−-B CK肌酸 + ATP ATP + 葡萄糖−−→−HK葡萄糖-6-磷酸 + ADP葡萄糖-6-磷酸 + NADP −−−−→−PDH G 66-磷酸-葡萄糖 + NADPH + H+用特异的抗CK-M 抗体抑制CK-M 的活性,在340nm 波长处,通过连续监测吸光度的上升速率(△A /min),测定CK-B 的活性,将CK-B 活性测定值乘以2,即可计算出样品中CK-MB 的活性。
四、样品血液样品原则上采集晨起空腹血(禁食12小时);患者处于平静、休息状态,减少患者由于运动、饮食带来的影响;静脉采血时患者应取坐位或卧位;止血带使用后1分钟内采血,回血后立即松开;正确使用抗凝剂;防止溶血;防止过失性采样。
样品运送过程中应防止过度振荡、防止样品容器的破损、防止样品被污染、防止样品及唯一性标志的丢失和混淆,防止样品对环境的污染、水分蒸发。
肌酸激酶同工酶定量测定试剂盒标准操作程序
肌酸激酶同工酶测定标准操作程序1. 摘要肌酸激酶MB 型同工酶(CK-MB )试剂盒(免疫抑制法)试剂盒适用于在生化分析仪上定量测定人血清肌酸激酶MB 型同工酶(CK -MB )的活力。
2. 适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中CK-MB 的浓度。
3. 职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定CK-MB 浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行,室负责人监督管理;本SOP 的改动,可由任一使用本SOP 的工作人员提出,并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4. 检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的肌酸激酶MB 型同工酶(CK-MB )试剂盒采用的是免疫抑制法。
5. 原理应用抗CK-M 抗体抑制CK-M ,但不影响MB 和BB 中B 单位活性,然后用CK 试剂(NAC 为激活剂)测试CK 的活力,测得的CK 活力乘以2即为CK-MB 活力,即肌酸激酶(CK )催化磷酸肌酸与二磷酸腺苷(ADP )反应产生三磷酸腺苷(ATP )与肌酸;偶联己糖激酶(HK )及葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD )的催化反应。
HK 催化葡萄糖与ATP 反应,形成葡萄糖-6-磷酸(G6P ),G6PD 催化G6P 氧化,形成6-磷酸葡萄糖内酯(6-PG )及还原型辅酶Ⅱ(NADPH )。
NADPH 形成的速率与血清中肌酸激酶(CK )的活性成正比。
+-+++−−−→−+++−→−++−−−→−+H NADPH O H NADP ADPATP ATPADP DH P G HK PH CK 磷酸葡萄糖酸磷酸葡萄糖磷酸葡萄糖葡萄糖肌酸磷酸肌酸-6--6--6-628.6,6. 仪器日立7600自动生化分析仪7. 试剂7.1 试剂来源:上海科华生物工程股份有限公司提供7.2 试剂瓶内主要成分:R1:咪唑缓冲液,醋酸镁,葡萄糖,EDTA ,AMP,ADP,NAD,5-磷酸二腺苷,N-乙酰半胱氨酸,己糖激酶,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶,抗CK-M 抗体,防腐剂R2: 咪唑缓冲液,磷酸肌酶,防腐剂7.3试剂稳定性:试剂避光保存于2-8℃,若无污染,可稳定至失效期,本试剂有效期为12个月。
CKMB
肌酸激酶同工酶MB(CKMB)的检测一、项目名称、检验方法名称1. 项目名称:肌酸激酶同工酶MB(CKMB)的检测2. 检验方法名称:化学发光法二、方法学原理:肌酸激酶同工酶MB测定采用双位点夹心化学发光免疫分析法,其采用的技术原理如下:第一步:将样本与包被着CK-MB单克隆抗体的超顺磁性磁微粒(磁珠)以及CK-MB单克隆抗体-碱性磷酸酶标记物添加到反应管中,经过孵育,样本中的CK-MB和包被在磁珠上的CK-MB单克隆抗体结合,同时CK-MB单克隆抗体-碱性磷酸酶标记物与样本中CK-MB另一位点结合。
反应完成后,磁场吸住磁珠,洗去未结合的物质。
第二步:将化学发光底物(3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷,AMPPD)添加到反应管内,发光底物AMPPD能有效地被碱性磷酸酶所分解, 脱去一个磷酸根基团,生成不稳定的中间产物,该中间产物通过分子内电子转移产生间氧苯甲酸甲酯阴离子,处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子从激发态返回基态时,产生化学发光,由光电倍增管对反应所产生的光子数进行测量,所产生的光子数与样本内CK-MB的浓度成正比。
样本内分析物的量由定标曲线来确定。
三、试剂品牌、代号、包装规格、内含物1、试剂品牌:深圳迈瑞2、包装规格:2*503、内含物:Ra试剂:包被着抗CK-MB抗体的超顺磁性微粒,0.2 g/L;Tris缓冲液,50 mmol/L;ProClin 300,0.5 g/L;叠氮钠,0.9 g/L;Rb试剂:抗CK-MB抗体-碱性磷酸酶标记物,3 mg/L;MES缓冲液,50 mmol/L;ProClin 300,0.5 g/L;叠氮钠,0.9 g/L4、储存条件及有效期:2~8℃保存,有效期365天。
上机使用后,在2~8℃的贮存环境下有效期为28天四、仪器品牌、型号:迈瑞CL1000i五、具体操作步骤(包括主要的仪器测定参数)5.1校准:5.1.1校准品来源:试剂厂家的标准液。
肌酸激酶同工酶质量法在正常范围
肌酸激酶同工酶质量法在正常范围肌酸激酶同工酶(Creatine Kinase Isoenzyme,CK-MB)是一种特殊的酶,它在心肌细胞受损时会释放到血液中。
肌酸激酶同工酶质量法是一种常用的检测方法,用于评估心肌细胞损伤程度和诊断心肌梗死。
本文将介绍肌酸激酶同工酶质量法的正常范围以及其在临床上的应用。
肌酸激酶同工酶是由三个亚基组成的酶,包括肌酸激酶B亚基(CK-MB)、肌酸激酶M亚基(CK-MM)和肌酸激酶BB亚基(CK-BB)。
在正常情况下,肌酸激酶同工酶在血液中的比例是CK-MM:CK-MB:CK-BB≈97%:3%:0%。
其中,CK-MM主要存在于骨骼肌,CK-MB主要存在于心肌,CK-BB主要存在于脑组织。
肌酸激酶同工酶质量法是通过测定血液中不同亚基的质量来确定各个亚基的比例。
该方法利用了亚基在电泳过程中的不同迁移速度来进行分离,然后通过酶活性测定来确定各个亚基的含量。
通过测定血液中CK-MB的含量,可以评估心肌细胞的损伤程度和诊断心肌梗死。
在正常情况下,成年人血液中肌酸激酶同工酶的含量是很低的,通常不超过正常范围。
根据临床实践和研究,正常人的CK-MB质量分数通常在0-5 ng/mL之间。
当心肌细胞受损时,CK-MB的含量会显著增加,超过正常范围。
因此,CK-MB的升高可以提示心肌细胞损伤,可能是心肌梗死的征象。
肌酸激酶同工酶质量法在临床上有着广泛的应用。
首先,它可以用于诊断心肌梗死。
心肌梗死是心肌血液供应不足引起的心肌细胞坏死,是一种严重的心血管疾病。
通过测定血液中CK-MB的含量,可以判断心肌梗死的程度和范围,辅助临床医生进行诊断和治疗决策。
肌酸激酶同工酶质量法还可以用于监测心肌损伤的恢复过程。
在心肌梗死后,心肌细胞会逐渐修复和再生。
通过定期检测血液中CK-MB的含量,可以了解心肌损伤的恢复情况,评估治疗效果,以及预测心血管事件的风险。
肌酸激酶同工酶质量法还可用于鉴别心肌损伤的原因。
血清肌酸激酶MB同工酶DGKC推荐方法测定
血清肌酸激酶MB 同工酶DGKC 推荐方法测定1. 实验原理使用多克隆抗体抑制CK 的CK-M 同工酶活性后,按照德国临床化学学会(DGKC)和国际临床化学学会(IFCC)推荐的连续监测法检测余下的肌酸激酶活力。
CK-MB 由CK-M 和CK-B 亚单位组成。
抗CK-M 抗体完全抑制了CK-MM (肌酸激酶的主要活性部分)和CK-MB 中的CK-M 亚单位的活性。
再检测CK 的活力为余下的CK-B 的活力,相当于一半CK-MB 活力。
所以将结果乘以2,为CK-MB 的活力。
ADP + 磷酸肌酸 肌酸 + ATPATP + 葡萄糖 ADP + 葡萄糖-6-磷酸葡萄糖-6-磷酸+ 6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H +2. 标本:2.1 病人准备:无特殊。
2.2 类型:血清,肝素或EDTA 血浆。
3. 标本存放:稳定性:-20℃保存稳定4周(避光保存)。
活性损失:2~8℃保存24小时或18~22℃保存1小时至少损失10%。
4. 标本运输:常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准:细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂 利德曼CK 测定试剂盒(试剂1 6×64ml 试剂2 6×16ml )6.1.1 试剂组成试剂1(R1)+ 试剂2(R2):咪唑缓冲液 pH6.7 100mmol/L磷酸肌酸 30mmol/L葡萄糖 20mmol/LN-乙酰半胱氨酸(NAC ) 20mmol/L乙酸镁 10mmol/LEDTA-Na2 2mmol/LADP 2mmol/LNADP 2mmol/LAMP 5mmol/L CK 己糖激酶(HK) (G6P-DH)二腺苷-5'-磷酸10μmol/L6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6P-DH)≥1500U/L已糖激酶(HK)≥2500U/L抑制人CK-MM的人抗体≥2000U/L6.1.2 试剂准备:试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存:试剂避光保存于2~8℃,若无污染,可稳定至失效期。
肌酸激酶MB型同工酶测定方法操作规程
肌酸激酶MB型同工酶(CK-MB)测定方法操作规程【产品名称】通用名称:肌酸激酶MB型同工酶(CK-MB)测定试剂盒(免疫抑制法)使用说明书【预期用途】该试剂盒采用免疫抑制法,用于体外定量测定人血清中肌酸激酶MB型同工酶的活力。
【检验原理1CK-MB由CK-M和CK-B亚单位组成。
抗CK-M 抗体完全抑制了CK-MM (肌酸激酶的主要活性局部)和CK-MB 中的CK-M亚单位的活性。
再检测CK的活性为余下的CK-B的活性,相当于一半CK-MB活性。
所以将结果乘以2,为CK-MB 的活性。
【主要组成成份】Ri:咪哩缓冲液100 mmol/L葡萄糖20 mmol/LN-乙酰半胱氨酸(NAC)0.2 mmol/L乙酸镁10 mmol/LEDTA 2 mmol/LNADP 2 mmol/LAMP5 mmol/L己糖激酶>4 U/mL羊抗人多克隆抗体2000U/LCK-MM R2:磷酸肌酸30 mmol/L2 mmol/LADPG-6-PDH >2.8U/mL*不同批号试剂盒各组分请勿混用。
【储存条件与有效期】未开启的试剂盒在2〜8°C保存有效期为一年。
试剂开瓶后应避光保存,在2°C~8°C可稳定30天。
试剂不可冰冻。
【适用仪器】迈瑞BS系列全自动生化分析仪、日立7180型全自动生化分析仪、日立7060型全自动生化分析仪、日立7600P自动生化分析仪、奥林巴斯AU400型全自动生化分析仪、奥林巴斯AU2700型全自动生化分析仪、贝克曼库尔特AU680 型全自动生化分析仪。
假设需自动生化分析仪应用参数,请随时和公司联系。
建议用户在不同仪器上使用本产品时,根据实验室情况进行验证。
【样本要求】新鲜血清或血浆,采集后及时测定,应防止溶血和污染。
样本在2°C ~8 °C保存7天内或25 °C保存24小时活性损失2%。
【检验方法】试剂准备R1:即用液体试剂R2:即用液体试剂测定条件样本管一空白管*试剂和样本量可根据不同生化分析仪要求按比例适当增减。
肌酸激酶同工酶MB测定试剂盒说明书
肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)测定试剂盒(化学发光免疫分析法)说明书【产品名称】通用名称:肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)测定试剂盒(化学发光免疫分析法)英文名称:Creatine kinase MB(CLIA)【包装规格】2×30 人份/盒、2×50 人份/盒、2×100 人份/盒【预期用途】用于体外定量测定人体血清或(和)血浆中肌酸激酶同工酶MB 的含量。
肌酸激酶主要催化高能磷酸键从ATP 转移到肌酸,生成磷酸肌酸。
肌酸激酶是二聚体酶,包括骨骼肌CK-MM,脑组织CK-BB,心肌CK-MB 和线粒体肌酸激酶等四种同工酶形式。
CK-MB 分子量80,000,由两个亚单位组成(每个亚基MW= 40000):亚单位M 表示肌肉型,亚单位B 表示脑型。
CK-MB 主要存在于心肌组织,占CK 总活性的20%,骨骼肌中也有微量分布。
血清中CK-MB 含量对诊断急性心肌梗死、心肌炎等心肌缺血性疾病有重要意义。
CK-MB 在心肌损伤早期即可出现于循环血中,于心肌损伤后2-6 小时开始升高,在12-24 小时内达到峰值,之后降至正常水平(36–72 小时),CK-MB 测值的升降伴随ECG 演变和胸痛病史。
CK-MB 含量和时间变化,对评估心肌损伤发病时间、梗死体积以及再灌注后损伤有重要意义。
此外,骨骼肌损伤、横纹肌溶解症及中风等疾病中,也伴随有CK-MB 含量升高。
临床诊断上,CK-MB 经常与肌红蛋白和肌钙蛋白I 联合检测。
在心肌损伤相关疾病诊断上,肌钙蛋白I 特异性强,肌红蛋白和CK-MB 早期敏感性高,三者联合检测可以提高诊断的特异性、敏感性。
【检验原理】肌酸激酶同工酶MB 测定采用双位点夹心化学发光免疫分析法,其采用的技术原理如下:第一步:将样本与包被着CK-MB 单克隆抗体的超顺磁性磁微粒(磁珠)以及CK-MB 单克隆抗体-碱性磷酸酶标记物添加到反应管中,经过孵育,样本中的CK-MB 和包被在磁珠上的CK-MB 单克隆抗体结合,同时CK-MB 单克隆抗体-碱性磷酸酶标记物与样本中CK-MB 另一位点结合。
体检项目中的异常指标解析血清肌酸激酶同工酶(CKMB)的意义和解读
体检项目中的异常指标解析血清肌酸激酶同工酶(CKMB)的意义和解读体检项目中的异常指标解析血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)的意义和解读体检是人们维护健康的重要手段之一,通过体检可以了解自身的身体状况和潜在的健康问题。
体检报告中的各项指标可以提供有关身体健康状态的重要信息。
而当体检项目中出现异常指标时,我们需要特别关注并进行解读。
其中,血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)是一项常见的异常指标之一,本文将介绍CK-MB的意义和解读方法。
血清肌酸激酶同工酶是一组酶,包括肌酸激酶(CK)、心肌型肌酸激酶同工酶(CK-MB)和脑型肌酸激酶同工酶(CK-BB)。
CK-MB 主要存在于心肌细胞中,当心肌细胞受到损伤或缺血时,CK-MB释放入血液中。
因此,CK-MB的异常升高通常被认为是心肌损伤或心肌缺血的指标。
在分析体检报告时,若发现CK-MB异常升高,需结合其他相关指标综合判断。
一般情况下,血清肌酸激酶同工酶的正常参考范围为男性0-4.8 ng/mL、女性0-3.4 ng/mL。
若CK-MB检测结果超出正常参考范围,可能存在以下几种情况:1. 心肌损伤:CK-MB的异常升高常见于急性冠状动脉综合征(如心肌梗死)或心肌炎等导致的心肌损伤。
这时,CK-MB的升高往往伴随心肌肌钙蛋白等指标的变化,且持续时间较长。
需要进一步进行心电图、超声心动图等检查来明确诊断。
2. 肌肉损伤:除了心肌损伤,一些肌肉损伤如腹股沟疝气手术后、创伤等也可能导致CK-MB的升高。
在这种情况下,结合临床病史和其他相关检查结果可帮助鉴别是否为心肌损伤。
3. 运动引起的生理性升高:剧烈运动、体力劳动或剧烈活动后,如长时间激烈跑步、举重等,肌肉组织受到短暂的损伤,CK-MB可能出现短暂的升高。
此时应注意与病理性升高进行区分,如持续升高或伴有其他心血管疾病风险因素则需进一步检查。
4. 其他心血管因素:CK-MB的异常升高也可能与心肌疾病、心脏手术、心肌炎症、心肌肥厚等因素相关,需要综合分析相关病史和其他检查结果来进行判断。
肌酸激酶同工酶(CK-MB)测定标准操作规程
肌酸激酶同工酶(CK-MB )测定标准操作规程1.检验原理:(免疫抑制法)用抗人CK-M 抗体与病人血清共同温育,血清中的CK-M 亚单位全部被抑制,再用测定空白扣除血清中残余的腺苷激酶(AK ),测定剩余的非M-CK 活力,即代表C-BB 和CK-MB 中的B-亚基活力。
由于健康人和心脏、肌肉疾患病人血清中CK-BB 的含量极低,一般忽略不计,此等病人的非M-CK 活力实际上代表CK-MB 中的B 亚基活力。
非M-CK 活力测定方法如下:在抑制CK-M 亚单位后,磷酸肌酸和腺苷-5-二磷酸二钠(ADP.2a N )在肌酸激酶作用下,生成肌酸和腺苷-5-三磷酸二钠(ATP.2a N )。
ATP 和葡萄糖在己糖激酶(HK )催化下,生成6-磷酸葡萄糖(G6P ).G6P 在6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下脱氢,同时使氧化型辅酶Ⅰ(+NAD )还原成还原型辅酶Ⅰ(NADH ),后者引起340nm 吸光度的增高。
在340nm 监测NADH 的生成量,即可计算出非M-CK 的活力。
CK-M 亚单位+抗人CK-M 抗体−→−抗体-抗原复合物 磷酸肌酸+ADP −−−→−-CKM 非肌酸+ATP ATP+葡萄糖−−−→−己糖激酶ADP+6-磷酸葡萄糖 6-磷酸葡萄糖++NAD −−−→−PDHG 66-磷酸葡萄糖酸+NADH++H 2.试剂主要组成成分3.样本要求:静脉采血后立即分离血清。
新鲜无溶血血清。
在22~25℃保存8小时,2~8℃保48小时,-20℃可保存1年。
样本不可反复冻融!4.检验方法;仪器法(详见DF-603/DI-600标准操作规程)5参考范围:6.检验结果的解释:6.1样本含量超出线性范围时,建议用0.9%(W/V)的氯化钠溶液稀释样本。
建议最大稀释不超过10倍10-6.2.单位换算:ukat/L=U/L×16.67×37.检验结果的局限性7.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
肌酸激酶mb同工酶高的原因
肌酸激酶同工酶临床上主要是指CK-MB,是心肌细胞损伤的血清标志物之一,检查时出现偏高现象,可能是心肌损伤、骨骼肌损伤、脑组织损伤等原因有关。
肌酸激酶同工酶主要分布于心肌及骨骼肌,其次分布在脑组织和平滑肌。
1.心肌损伤:心肌细胞受损以后,细胞内的肌酸激酶同工酶释放入血,在3至4个小时迅速升高,在24小时达到高峰,持续约3至4天,是心肌损伤重要特异性指标,常出现于心肌梗死、心肌炎等。
2.骨骼肌损伤:骨骼肌受损同样会释放肌酸激酶同工酶入血,导致肌酸激酶同工酶升高。
常见于肌肉劳损、重症肌无力、肌萎缩、进行性肌营养不良、多发性肌炎、手术、创伤等情况。
3.脑组织损伤:肌酸激酶同工酶也会存在于脑组织当中,当患有脑组织病变,比如脑炎、脑出血、脑梗死等,也有可能会导致数值升高。
如出现不适的症状,请及时就医。
肌酸激酶同工酶测定方法
肌酸激酶同工酶测定方法肌酸激酶是一种在细胞内起着重要功能的酶,它参与肌肉收缩和能量代谢的调节。
肌酸激酶同工酶测定方法是一种用来测量肌酸激酶同工酶在体内的浓度的技术。
肌酸激酶同工酶是由不同的亚单位组成的复合物。
在人体中,有三种主要的肌酸激酶同工酶,分别是肌酸激酶BB(CK-BB)、肌酸激酶MM(CK-MM)和肌酸激酶MB(CK-MB),它们在组织中的比例不同。
肌酸激酶同工酶的测定方法有很多种,其中最常用的是酶促动力学法。
这种方法是通过测量肌酸激酶同工酶在特定底物上的催化反应速率来确定其浓度。
测定时,首先将待测样品与特定底物相混合,然后在特定条件下进行反应。
反应结束后,通过测量底物浓度的变化来计算肌酸激酶同工酶的浓度。
除了酶促动力学法外,还有其他一些常用的肌酸激酶同工酶测定方法。
例如,电化学法可以通过测量肌酸激酶同工酶的电化学信号来确定其浓度;免疫学方法可以利用特定抗体与肌酸激酶同工酶结合,并通过测量抗体与酶结合的量来确定其浓度。
肌酸激酶同工酶测定方法的选择应根据实际需要来进行。
不同的方法在测量的灵敏度、准确性和成本方面可能存在差异。
因此,在选择方法时,需综合考虑实验条件、所需测定的范围和目的来进行决策。
肌酸激酶同工酶测定方法在医学领域具有重要意义。
临床上,肌酸激酶同工酶的测定可用于诊断心肌梗死、肌肉损伤和其他与肌酸激酶同工酶有关的疾病。
例如,在心肌梗死的早期阶段,肌酸激酶MM和肌酸激酶MB的浓度会显著升高,因此可以通过测定其浓度来对心肌梗死进行诊断。
总之,肌酸激酶同工酶测定方法是一种重要的实验技术,可用于测量肌酸激酶同工酶在体内的浓度。
选择合适的测定方法,并结合实际需要和实验条件进行分析和解读,有助于更好地应用肌酸激酶同工酶测定方法在临床诊断和科学研究中。
血清肌酸激酶同工酶MB质量和活性检测临床应用的比较
血清肌酸激酶同工酶MB质量和活性检测临床应用的比较  目的比较血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)质量和活性在缺血性心脏疾病中的应用。
方法采用免疫化学发光法和免疫抑制法同步检测血清中CK-MB的质量和活性。
结果在48例缺血性心脏疾病患者中发生急性心肌梗死(AMI)12例,其CK-MB质量的诊断灵敏度和特异性为91.7%和65%,重度升高者9例;CK-MB活性的灵敏度和特异性为83.3%和62.5%,重度升高4例;肺部感染引发心肌缺血者18例,其CK-MB质量的诊断灵敏度和特异性为61.1%和58.8%;CK-MB活性的灵敏度和特异性为33.3%和50%,质量和活性的升高程度多数为轻度升高;一般心肌缺血患者18例,二者无论从阳性率、升高倍数及在血液中出现的时间及维持时间均无明显差异。
结论CK-MB质量检测优于CK-MB活性检测,特别是对AMI患者和有较明显感染的心肌缺血患者的诊断。
标签: 肌酸激酶同工酶酶的质量测定酶的活性测定1对象与方法1.1研究对象本院住院和门诊就诊的48例缺血性心脏疾病患者,年龄(72.1±13.2)岁。
将其分为3组:(1)急性心肌梗死(AMl)组12例,年龄(66.0±14.6)岁,男性8例,女性4例,均以临床确诊为AMI入选,除外骨骼肌损伤和脑部疾病患者。
(2)肺部感染引发心肌缺血组18例,年龄(70.2±6.03)岁,男性14例,女性4例。
①患有冠心病,以肺部感染入院;②住院期间出现较明显的心肌缺血症状和体征;③除外骨骼肌损伤和脑部疾病患者。
(3)一般心肌缺血组18例,年龄(74.1±10.3)岁,男性12例,女性6例,按如下标准入选:①出现较明显心肌缺血症状和体征;②除外骨骼肌损伤和脑部疾病患者。
1.2实验器材与检测方法仪器:美国雅培公司AXSYM全自动化学发光仪,日本TBA-120全自动生化分析仪。
肌酸激酶MB同工酶(CKMB)测定试剂盒(免疫抑制法)产品技术要求sainuo
肌酸激酶MB同工酶(CKMB)测定试剂盒(免疫抑制法)适用范围:用于体外定量测定人体血清中肌酸激酶同工酶的活性。
1.1试剂盒包装规格试剂1:1×20ml,试剂2:1×5ml;试剂1:2×60ml,试剂2:2×15ml;试剂1:3×40ml,试剂2:3×10ml;试剂1:4×60ml,试剂2:4×15ml;试剂1:2×400ml,试剂2:1×200ml;试剂1:1×8L,试剂2:1×2L;试剂1:2×40ml,试剂2:2×10ml。
质控品(选配,冻干品):1×1ml,1×2ml,1×3ml,1×5ml。
1.2试剂盒主要组成成分2.1 外观液体双试剂:试剂1无色至浅黄色澄清液体;试剂2无色至浅黄色澄清液体。
质控品:冻干品,溶解后为无色至浅黄色液体。
2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。
2.3 试剂空白2.3.1试剂空白吸光度:在37℃、340nm波长、1cm光径条件下,试剂空白吸光度应不大于0.5。
2.3.2试剂空白吸光度变化率:在37℃、340 nm波长、1cm光径条件下,试剂空白吸光度变化率(ΔA/min)应不大于0.01。
2.4 分析灵敏度测定活性为100U/L的样本,吸光度变化值(ΔA/min)应不小于0.007。
2.5 线性范围在(5,1000) U/L线性范围内,线性相关系数r不小于0.996。
在(60,1000)U/L范围内,线性相对偏差不大于±10%;在(5,60]U/L范围内,线性绝对偏差不大于±6U/L。
2.6 重复性重复测试两份高低浓度的样本,所得结果的变异系数(CV%)应不大于10%。
2.7 批间差不同批号试剂测试同一份样本,测定结果的批间相对极差应不大于10%。
2.8 准确度相对偏差:相对偏差应不超过±10%。
血清肌酸激酶同工酶MB的实验室诊断进展
血清肌酸激酶同工酶MB的实验室诊断进展1 CK-MB活性检测的不足1.1 早期诊断灵敏度不高:临床上要求在AMI发病6小时内就能进行诊断和治疗,因为心肌细胞缺氧超过6小时将出现不可逆的病变。
但mair报道CK-MB 活性在发病后4小时的诊断阳性率仅为5%[3],国内报道发病后5小时的阳性率约40%[4],这意味着在发病6小时内有很大部分病例的CK-MB活性还没有升高,以致于造成该指标的漏诊率偏高。
1.2 酶易于老化:CK-MB活性的酶易于老化,主要表现为酶构象改变[5]。
其引起CK-MB活性检测降低或正常的原因可能是由于过了检测时间,以致血清中酶老化使酶的催化活性降低或丧失,从而导致酶的活化能升高所致。
1.3 易受非典型CK、巨CK-1和CK-BB的干扰:CK-MB活性检测用免疫抑制法进行,其原理是在抗M亚基选择性抑制CK-MM活性的前提下,然后测定B亚基的活性,再乘以2后换算成的活力值,以U/L报告结果[5]。
因此,从方法上决定了血液中非典型CK、巨CK-1、CK-BB和CK-MM等都会产生干扰现象,导致结果偏高。
且存在一定临床假阳性,有学者已建议摈弃此法[6]。
1.4 对微小心肌损伤(MMD)难以做出有效反应:MMD指临床上不符合WHO 诊断AMI标准,但又存在着缺血性心肌损伤,有可能出现不良后果的情况。
Keffer 和Adams的实验均证实用CK-MB活性等酶学指标难以检出MMD[7],这是因为酶的分子量较大,细胞内外的浓度差较小,在MMD时CK-MB等心肌标志物难以透过细胞膜释放入血,使得在血液中的检测灵敏度降低。
1.5 其它因素的影响:据文献报道[4],CK-MB活性还受抗体(抗M亚基)不能被完全抑制;唾液酸和硫酸脂酶之间的差别会导致异质性;组织酶进入血循环发生变性,导致酶活性降低或部分丧失,使活化能升高等多因素的影响。
鉴于CK-MB活力测定存在如此多的不足,不少学者将注意力集中在一种新的检测方法,能够克服众多因素的影响,同时对临床诊断、治疗、病情的发生发展又有极大帮助的CK-MB质量检测,已引起国内外一些实验室的关注。
血清肌酸激酶同工酶方法
血清肌酸激酶同工酶方法引言:血清肌酸激酶(serum creatine kinase,CK)是一种常见的生物标志物,常用于临床诊断和监测肌肉损伤、肌无力等疾病。
血清肌酸激酶同工酶(CK isoenzymes)是指在电泳分离中根据电荷和分子大小的不同而产生的多种亚型。
本文将介绍血清肌酸激酶同工酶的测定方法及其在临床中的应用。
一、血清肌酸激酶同工酶的分类血清肌酸激酶同工酶主要包括三种亚型,分别为CK-MM、CK-MB 和CK-BB。
其中,CK-MM主要存在于骨骼肌和心肌中,CK-MB 主要存在于心肌中,CK-BB主要存在于脑组织中。
二、血清肌酸激酶同工酶的测定方法血清肌酸激酶同工酶的测定方法主要有电泳法、免疫测定法和分光光度法等。
其中,电泳法是较为常用的方法。
1. 电泳法电泳法是根据血清肌酸激酶同工酶在电场中迁移速度的不同来进行分离和鉴定的方法。
该方法包括直接电泳法和间接电泳法。
直接电泳法是将血清样品直接加载到凝胶中进行电泳,通过比较不同亚型的迁移距离来确定同工酶的类型。
间接电泳法是将血清样品先进行酶活分离,然后再进行电泳分离,以提高测定的准确性和灵敏度。
2. 免疫测定法免疫测定法是利用抗体与抗原的特异性结合来进行测定的方法。
血清肌酸激酶同工酶的免疫测定主要包括酶联免疫吸附测定法(ELISA)和放射免疫测定法(RIA)等。
这些方法通过特异性抗体与不同亚型的结合来实现同工酶的测定。
3. 分光光度法分光光度法是通过测定血清肌酸激酶同工酶的吸光度来进行测定的方法。
该方法包括直接法和差减法。
直接法是将样品与特定试剂反应后,通过测定其吸光度来计算同工酶的浓度。
差减法是将样品与不同试剂反应后,测定其吸光度差异来确定同工酶的浓度。
三、血清肌酸激酶同工酶的临床应用血清肌酸激酶同工酶在临床中的应用主要体现在以下几个方面:1. 心肌损伤的诊断CK-MB主要存在于心肌中,当心肌发生损伤时,CK-MB释放到血液中,因此可以通过测定血清CK-MB的水平来判断是否存在心肌损伤。
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血清肌酸激酶MB同工酶测定
1 检验目的
指导本室工作人员规范操作本检测项目,确保检测结果的准确。
2 实验原理
使用CK-M 多克隆抗体对肌酸激酶(CK)中CK-M同工酶的活性进行抑制后,采用德国临床化学会(DGKC)和国际临床化学会(IFCC)推荐的连续监测法测定余下的肌酸激酶(CK)活性。
其反应原理如下:
⑴CK-MM 型同工酶 + CK-M抗体→ CK-MM型同工酶的活性被抑制;CK-MB 型同工酶+ CK-M 抗体→ 50%的CK-MB 型同工酶的活性被抑制;
⑵剩余的50%无活性的CK-MB型同工酶 + N-乙酰半胱氨酸→有活性的CK-B型同工酶
CK同工酶
⑶磷酸肌酸 + ADP 肌酸 + ATP
己糖激酶(HK)
ATP + 葡萄糖 ADP + 葡萄糖-6-磷酸
(G6P-DH)
葡萄糖-6-磷酸+NADP+6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H+
式中:ADP为二磷酸腺苷;ATP为三磷酸腺苷;NADP+为氧化型辅酶II;NADPH+H+为还原型辅酶II。
在上述反应中,NADPH+H+ 的生成速率与样本中肌酸激酶B 型同工酶(CK-B)的活性成正比。
通过在波长340nm 处监测吸光度值的上升速率,即可测得样本中肌
酸激酶B 型同工酶(CK-B)的活性。
肌酸激酶B 型同工酶(CK-B)活性相当于1/2肌酸激酶MB型同工酶的活性,将所测得的肌酸激酶B型同工酶(CK-B)的活性乘以2,即为肌酸激酶MB 型同工酶(CK-MB)的活性。
3 标本:
3.1 病人准备:无特殊。
3.2 类型:血清或肝素血浆。
3.3 标本存放:稳定性:-20℃保存稳定4周(避光保存)。
活性损失:2~8℃保存24小时或18~22℃保存1小时至少
损失10%。
3.4 标本运输:常温条件下保存运输。
血标本应尽快送往化
验室,室温下放置30―45分钟,后离心,放置时间不得超过3h.
血清必须吸出,转移至有盖的试管中.
3.5 标本拒收标准:细菌污染的标本。
4 实验材料
4.1 试剂:上海复星长征医学科学有限公司CK-MB试剂盒(沪
食药监械(准)字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014)
4.1.1 试剂组成
试剂1(R1):
D-葡萄糖27mmol/L 咪唑缓冲液
60mmol/L
乙酸镁14mmol/L NADP 2.7mmol/L
N-乙酰半胱氨酸27mmol/L AMP 7mmol/L
试剂2(R2):
磷酸肌酸 160mmol/L 6-磷酸葡萄糖脱氢酶≥
20KU/L
ADP 11mmol/L 糖激酶≥
20KU/L
CK-M 抗体
4.1.2 试剂准备:试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存:2~8℃避光、密封的储存条件下,
试剂(盒)自生产之日起有效期为12个月。
试剂1 与试剂
2 启用后,在2~10℃避光的条件下可稳定20天。
4.1.4 变质指示:当试剂有看得见的微生物生长,有浊度,
或者未开盖的液体有沉淀时,表明试剂已变质,不能继续使
用。
4.1.5 注意事项:试剂中含稳定剂。
不可入口!避免接触皮
肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂。
4.2 校准品:
4.2.1采用以检测用水为空白的方式进行校准。
4.2.2校准及校准频次的要求:正常情况下,应每周至少对测定进行一次校准。
当发生下列情况时(如:使用的试剂批号发生改变时、使用的仪器进行维修、保养或关键部件进行更换后、质控品的测定结果发生漂移或超出规定的范围等),应重新对测定进行校准后再对患者的样本进行检测。
4.3 质控品:使用正常值、病理值复合控制品。
5 仪器
AU2700生化分析仪,罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪,东芝TBA-120生化分析仪。
6 操作步骤
6.1 样品的准备:将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。
6.2 试剂的检测:仪器开机后,检查各种试剂的位置,体积等确认无误后方可进行测定。
6.3 项目基本参数:参见生化检验AU2700生化分析仪,罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪,东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。
6.4仪器操作步骤:参见生化检验AU2700生化分析仪,罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪,东芝TBA-120生化分析仪操作规程。
7 质量控制
在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析,以2S为质控警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。
8 计算方法
在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠的检测结果,以U/L报告。
9 参考值范围:0-24U/L
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。
根据好的实验室经验,每个实验室应建立自己的参考值。
我室参考值0-25 u/L。