(完整版)高效液相色谱仪使用注意事项-2016
高效液相色谱仪的使用注意事项
高效液相色谱仪的使用注意事项
1.使用前须确定操作者是否具有色谱仪操作资格，如未具有资格，应在专业人士的指导下使用。
2.首次使用前，应检查仪器性能是否正常，适当调整参数，以达到最佳操作状态。
3.使用过程中，应注意仪器的安全，避免过热、过压及调节参数超出正常范围，避免仪器受损。
4.样品质控，应定期使用标准品或有关物质进行质控，确保测试精度。
5.操作时应熟练掌握仪器操作流程，以防误操作。
6.应及时更换仪器液体及耗材，以确保实验准确。
7.使用后，应将仪器关闭，安全放置，勿放在水源附近或潮湿环境中。
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高效液相色谱仪使用注意事项[1]
![高效液相色谱仪使用注意事项[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/af2518d54693daef5ef73db0.png)
岛津液相色谱仪使用注意事项1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。
2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。
对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。
5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。
6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。
8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。
清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗；⑧用10％稀硝酸清洗。
9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。
11.要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。
更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。
液相色谱柱使用经验谈色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。
1、样品的前处理：a、最好使用流动相溶解样品。
b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。
c、使用0.45µm的过滤膜过滤除去微粒杂质。
2016新编岛津LC-20ADXR高效液相色谱仪操作细则
岛津LC-20AD XR高效液相色谱仪操作细则1. 开机1.1准备流动相，将过滤头放入流动相中。
1.2打开脱气机、泵、柱箱、自动进样器、检测器的开关：将脱气机的开关拨到“on”档；分别将泵、柱箱、自动进样器和检测器上的“POWER”键按到“ON”状态，然后等待各部分自检。
1.3打开系统控制器：以上各部分自检完成后，将系统控制器上的“power”键按到“on”状态，检查显示屏中是否包含了所有要使用的一起，如果缺少某一项，按一下系统控制器上的“F2”键。
1.4排空操作和零压力调整1.4.1 排空操作：将泵上的排空法逆时针旋转≥90度，按下泵上的“Purge”键，观察脱气机上两个泵的进出管路中是否有空气，确定没有以后再按下：“Purge”键。
1.4.2 零压力调整:连续按泵上的“func”键18下或连续按泵上的“back”键9下，进入“ZERO ADJ”界面，然后按下“Enter”键，再按“CE”键回到原始界面。
2关机2.1关掉工作站2.2系统发出一声响后关掉系统控制器：系统控制器上的“POWER”键按到“OFF”状态.2.3关掉泵、柱箱、自动进样器、脱气机和检测器：脱气机上的开关拨到“OFF”档，其它仪器上的“POWER”键均按到“OFF”状态。
3软件操作及校准验证3.1双击软件“CLASS-VP”，进入工作站窗口。
3.2双击“Instrument 1”。
3.3新建方法文件3.3.1 单击“File”。
3.3.2单击“Method”。
3.3.3单击“New”。
3.4. 编辑方法3.4.1编辑积分参数3.4.1.1单击“Method”。
3.4.1.2 单击“Integration Events”。
]3.4.1.3 打开第三行下拉菜单，单击“Minimum Area”。
3.4.1.4 在“Stop Time”一栏第三行设置检测时间（根据被检测物的保留时间确定）3.4.1.5 在“V alue”一栏第三行根据方法设置一定大小数值。
高效液相色谱仪使用注意事项
岛津液相色谱仪使用注意事项1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。
2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。
对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。
5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。
6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。
8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。
清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗；⑧用10％稀硝酸清洗。
9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。
11.要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。
更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。
液相色谱柱使用经验谈色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。
1、样品的前处理：a、最好使用流动相溶解样品。
b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。
c、使用0.45µm的过滤膜过滤除去微粒杂质。
高效液相注意事项
高效液相色谱仪使用注意事项1、使用流速一般为1.0ml/min，最高不超过2.0ml/min，压力一般不超过25MPa，最高不超过30MPa。
2、使用温度一般不高于50℃，最高不高于60℃（特殊要求的除外）。
3、试剂瓶上应注明试剂名称，配制人员以及配制日期，同时写好仪器使用记录。
4、开机后，先用色谱乙腈或甲醇（使用前要超声，脱气）冲洗约30分钟，流动相中若含磷酸盐缓冲液，用5%乙腈或8％甲醇溶液（配制后超声，脱气）冲洗约30分钟再换流动相；若不含磷酸盐缓冲液，可直接换流动相；若不含有机溶剂,用注射用水冲洗约30分钟再换流动相。
更换时注意停泵！5、分析完毕，用5%乙腈或8％甲醇溶液冲洗约30分钟再换乙腈或甲醇冲洗约30分钟。
6、流动相使用前用有机滤膜过滤，超声波脱气约2分钟，使用时间一般不超过3天，且每次使用前都要重新抽滤。
7、注射用水、5%乙腈或8％甲醇溶液使用前用0.45微米有机滤膜过滤（若过滤速度太慢可用少量乙腈冲洗滤膜），超声波脱气约2分钟，当天配制，当天使用。
8、冲洗用乙腈和甲醇用0.45微米有机滤膜过滤，以后每3天用0.45微米有机滤膜过滤1次。
9、使用微孔滤膜时应注意水系和有机系，水系滤膜不能用于抽滤含有有机溶剂的溶液。
10、所用水均为注射用水或纯化水（限当天使用），乙腈、甲醇均为色谱纯。
11、使用过程中，注意压力变化，若压力过低或者过高，及时查明原因。
注：以上注意事项以C18柱为例，若为其它特殊色谱柱，要根据要求相应调整。
特殊柱子的使用：1、阳离子柱：不能接触有机溶剂，一般保存在水中，使用时注意管路中的有机溶剂。
2、硅胶柱：反相：使用时同C18柱；正相：注意溶剂的混溶，正己烷、正庚烷与甲醇、水、乙腈不互溶，可用异丙醇过渡。
高效液相色谱仪维护1、保持仪器室和仪器的干净整洁，同时打开排风扇保持室内良好的通风。
2、每次开机仪器均应通过自检，否则根据说明书的要求进行处理，在任何时候出现异常情况或若遇操作人员处理不了的情况时，需及时报请相关领导批准后进行处理或请专业维修人员进行处理。
高效液相色谱仪操作步骤及注意事项汇总
高效液相色谱仪操作步骤及注意事项汇总1. 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。
2. 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3.打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5. 有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。
冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10?ml/min。
6. 调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。
点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。
7. 设计走样方法。
点击file，选取select?users?and?methods，可以选取现有的各种走样方法。
若需建立一个新的方法，点击new?method。
选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。
选完后，点击protocol。
一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8. 进样和进样后操作。
选定走样方法，点击start。
进样，所有的样品均需过滤。
方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。
全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9．填写登记本，由负责人签字。
10．流动相均需色谱纯度，水用20m的去离子水。
脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。
11．柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。
12．所有过柱子的液体均需严格的过滤。
13．压力不能太大，最好不要超过2000 psi。
选择波长要从以下几个方面考虑：1. 检测波长要大于溶剂截止波长。
如果所选择的波长下溶剂有很强的吸收当然是不合适的。
(完整版)高效液相色谱仪使用注意事项-2016
岛津液相色谱仪使用注意事项1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。
2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。
对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。
5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。
6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。
8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。
清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗；⑧用10％稀硝酸清洗。
9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。
11.要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。
更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。
液相色谱柱使用经验谈色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。
1、样品的前处理：a、最好使用流动相溶解样品。
b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。
c、使用0.45µm的过滤膜过滤除去微粒杂质。
高效液相色谱仪操作使用过程中的注意事项
高效液相色谱仪操作使用过程中的注意事项一，高效液相色谱仪操作过程：1、开机操作：（1）、打开电源，用Harb相连接时，注意Harb电源，打开计算机，打开Bootp Server（一般启动时已打开）；（2）、自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符），打开工作站（先打开On line）；（3）、打开冲洗泵头的10％异丙醇溶液的开关（需用针捅抽），控制流量大小，以能流出的最小流量为准；（4）、注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于最低限会自动停泵，注意洗泵溶液的体积，及时加液；（5）、使用过程中要经常观察仪器工作状态，及时正确处理各种突发事件。
2、先以所用流动相冲洗系统一定时间（如所用流动相为含盐流动相，必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相），正式进样分析前30min 左右开启D灯或W灯，以延长灯的使用寿命；3、建立色谱操作方法，注意保存为自己命名的Method，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果；4、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡；5、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤；6、实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上，再用甲醇冲洗。
冲洗过程中关闭D灯、W灯；7、关机时，先关闭泵、检测器等，再关闭工作站，然后关机，最后自下而上关闭色谱仪各组件，关闭洗泵溶液的开关；8、使用者须认真履行仪器使用登记制度，出现问题及时向老师报告，不要擅自拆卸仪器。
（续）1、操作过程若发现压力很小，则可能管件连接有漏，注意检查。
当出现错误警告（各组件指示灯均为红色），一般为漏液，其中一个感应器中已有溶剂，漏液故障排除后，擦干，点击On line操作界面中的Instrument/System Off，然后再点击操作界面中的Instrument/System On即可。
高效液相色谱仪使用中应注意的几点问题
高效液相色谱仪使用中应注意的问题：
1. 柱温控制：高效液相色谱仪通常需要在一定的温度下进行分析，因此使用过程中需要确保柱温控制系统稳定，并按照要求设置适当的柱温。
2. 流速控制：在使用高效液相色谱仪时，需要准确控制流速以保证分离效果。
不同的分析条件有不同的最佳流速范围，因此在实验前要进行流速校正并按需调节。
3. 样品准备：样品准备是影响分析结果的重要环节，需要确保样品充分溶解，可以使用适当的溶剂和溶解条件。
同时，在样品准备过程中要注意避免造成杂质的污染。
4. 使用试管的问题：注意试管的洁净问题，如果使用不洁净的试管会影响试验结果的准确性；注意塑料试管的溶解问题，有些有机溶剂可能会对管壁有溶解现象；注意被测样品在试管壁上的吸附问题，有些药物可能会吸附在玻璃试管的管壁上。
高效液相色谱仪操作注意事项
随着药品检验设备的不断增加，各个地方药品检验所都配备了上海睿析科学仪器生产的高效液相色谱仪。
这也要求药品检验人员不断地提高对高效液相色谱仪的操作技术，高效液相色谱仪的寿命和合理正确的使用是分不开的，所以本人就实际工作中使用高效液相色谱仪时容易忽略的地方，总结几点建议供大家参考。
第一、流动相使用前必
须经脱气和过滤处理。
第二、避免流动相组成
及极性的剧烈变化。
当流动
相中含有缓冲溶液(酸，盐，
碱)，应该先用无缓冲流动相
(即把缓冲液换成水)冲洗
20～30min后,再更换强溶剂，
更换流动相时，流速应不超过0.5ml/min。
如果突然切换到高浓度有机溶剂，可能会使HPLC流动体系中的缓冲液沉淀，这样会导致更大的问题如柱头堵塞、管道堵塞、泵泄漏、活塞损伤或进样阀转轴失灵。
第三、如需要更换色谱柱，须对使用的色谱柱进行冲洗(如应用的流动相含有酸或无机盐，应当用20倍柱体积纯净水冲洗干净)、平衡后，保存在有机溶剂中。
第四、除特殊情况外，一般都应使用预保护柱。
如没有配置的在
取下色谱柱时，应立即将两端接头封口。
第五、样品在分析测试完毕后，须用90%水-10%有机溶剂混合液冲洗至少40min后，再用有机溶剂冲洗30min左右，最后将色谱柱保存在有机溶剂中。
第六、吸滤头每周用5%硝酸水溶液超声清洗1次。
高效液相色谱仪使用注意事
高效液相色谱仪使用注意事项
（1）流动相放置时间超过三天的不要继续使用，应重新配制，需要调PH的千万不能遗忘！！！
（2）配制好的流动相应过滤，并超声15分钟！
（3）换流动相时候，应停泵，换好流动相后，先将流速调为0.8，运行10分钟后将流速重新调回标准要求的
流速。
（4）实验过程中，注意观察压力的变化，并注意流动相是否充足，否则应该及时补充。
（5）实验前和实验后都应清洗进样阀，定量环，并将基线走平，用滤纸把进样口擦干！
（6）进样的时候，应该将进样针完全插入进样口，若进样针还有部分留在外面，说明没有进到位，样品不
会完全打进去！！！
（7）实验完成后，应尽快关闭检测器，因为紫外灯的寿命只有2000小时，而且更换紫外灯的费用比较高！（8）冲柱子的冲柱水和甲醇都应该过滤和超声，且在换冲柱水和甲醇的时候都要调流速。
参照第（3）条！（9）经常注意观察桌面上和地上的废液缸，及时倒掉废液！。
高效液相色谱仪的操作步骤及注意事项
高效液相色谱仪的操作步骤及注意事项高效液相色谱仪的操作步骤及注意事项液相色谱仪根据固定相是液体或是固体，又分为液-液色谱(LLC）及液-固色谱(LSC）。
现代液相色谱仪由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分组成。
与经典液相柱色谱装置比较，具有高效、快速、灵敏等特点。
下面是店铺整理的高效液相色谱仪的操作步骤及注意事项，一起来看看吧。
一、操作步骤：1.开机前先将流动相过滤和超声：水流动相用混合滤膜（0.2μm）过滤,有机流动相用有机滤膜过滤，之后超声脱气15-20分钟。
（过滤的目的是除去流动相里的杂质，以免杂质进入色谱柱堵塞色谱柱；超声的目的是排除流动相里面的气体，以防气体进入色谱柱损害色谱柱，影响柱效能）注：试验过程中由于只有0.45μm的混合滤膜，第一次使用时感觉效果不好，于是过滤水时同时使用两张混合滤膜过滤水流动相。
2.超声结束后，将流动相放置到规定位置（1号泵接水流动相，2号泵接有机流动相），开机逐个排气（先启动泵，排气结束后再打开检测器）。
3.排气结束后，关闭所有排气阀。
先用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，基线走稳之后，再打开水流动相（注意：水流动相和有机流动相流速之和为1ml/min），继续走基线，直到基线平稳。
注意：实验结束后，再用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，冲出色谱柱内残留的样品物质，预防长时间不使用仪器样品的残留物质沉积在色谱柱内，导致下次使用难以冲出，色谱柱柱压偏高，基线不稳，出现大量鬼峰。
（不同规格的色谱柱其所允许的最大流速之和不同）4.走基线时，应将进样阀处于Load状态，用注射器进样时应快速进样，进样后将进样阀立即扳回到Inject状态，此时液相系统开始进入采样状态。
采样结束后，可在数据分析里面查看分析结果并可进行编辑，也可以在脱机状态下查看样品的分析结果并编辑。
二、使用中常见的问题及注意事项1.过滤时有时会出现流动相漏液。
高效液相色谱仪在使用和维护中的注意事项
高效液相色谱仪在使用和维护中的注意事项
一、高效液相色谱仪的使用注意事项
1、使用人在使用前一定要确认当前系统是处于哪种色谱状态；
2、要对流动相系统、进样器等进行排气操作，避免有气泡干扰；正式进样前，要将流动相、色谱柱、检测器等设置好，并进行预平衡，待仪器处于稳定的初始条件下，再开始进样检测；
3、待检测的样品根据仪器的要求一定要保证澄清透明，可选择高速离心或者过滤膜等方式进行净化；
4、进样的顺序建议按照试剂空白、标准系列溶液、试剂空白、样品空白、质控样品、待测样品、试剂空白的顺序进行，以便确认仪器中是否存在干扰待测成分的物质、质控效果等，若待测样品较多，建议在待测样品中间插入质控样品，以确保检测质量；
5、采用梯度洗脱条件检测时，一个样品检测完成之后，一定要确保柱压等条件恢复到初始状态再进行下一个样品的检测；
6、所有检测工作完成后，要对液相系统进行溶剂替换，反相系统建议用甲醇或乙腈保存，包括进样器和液相管路部分，如果使用缓冲盐作为流动相，要用大比例水相将盐冲出，再用纯有机相替换。
高效液相注意事项
高效液相色谱仪使用注意事项1、使用流速一般为1.0ml/min，最高不超过3.0ml/min（制备），压力一般不超过25MPa，最高不超过30MPa。
2、使用温度一般不高于50℃，最高不高于60℃（特殊要求的除外）。
3、试剂瓶上应注明试剂名称，配制人员以及配制日期，同时写好仪器使用记录。
4、开机后，先用色谱乙腈或甲醇（使用前要超声，脱气）冲洗约30分钟，流动相中若含磷酸盐缓冲液，用5%乙腈或8％甲醇溶液（配制后超声，脱气）冲洗约30分钟再换流动相；若不含磷酸盐缓冲液，可直接换流动相；若不含有机溶剂,用注射用水冲洗约30分钟再换流动相。
更换时注意停泵！5、分析完毕，用5%乙腈或8％甲醇溶液冲洗约30分钟再换乙腈或甲醇冲洗约30分钟。
6、流动相使用前用有机滤膜过滤，超声波脱气约2分钟，使用时间一般不超过2天，且每次使用前都要重新抽滤。
7、注射用水、5%乙腈或8％甲醇溶液使用前用0.45微米有机滤膜过滤（若过滤速度太慢可用少量乙腈冲洗滤膜），超声波脱气约2分钟，当天配制，当天使用。
8、冲洗用乙腈和甲醇用0.45微米有机滤膜过滤，以后每3天用0.45微米有机滤膜过滤1次。
9、使用微孔滤膜时应注意水系和有机系，水系滤膜不能用于抽滤含有有机溶剂的溶液，过滤装置目前实验室只有一套，请大家一定倍加珍惜，过滤时，实验人员必须守在旁边。
10、所用水均为超纯水或市售哇哈哈用水（限当天使用），乙腈、甲醇均为色谱纯。
11、样品进样前，必须用色谱级溶剂溶解，再经有机滤头过滤，方可进样。
12、使用过程中，注意压力变化，若压力过低或者过高，及时查明原因。
注：以上注意事项以C18柱为例，若为其它特殊色谱柱，要根据要求相应调整。
13、戴安液相分析和制备时需更换定量环及检测池，请根据需要更换，若有疑问，请咨询负责人。
特殊柱子的使用：1、阳离子柱：不能接触有机溶剂，一般保存在水中，使用时注意管路中的有机溶剂。
2、硅胶柱：反相：使用时同C18柱；正相：注意溶剂的混溶，正己烷、正庚烷与甲醇、水、乙腈不互溶，可用异丙醇过渡。
高效液相色谱仪使用注意事项
高效液相色谱仪使用注意事项1、使用者上机前首先须经过管理老师的同意，须认真履行仪器使用登记制度，出现问题应及时向老师报告。
2、须自备分析柱和流动相溶剂。
3、流动相：须使用色谱纯级溶剂，样品溶液和流动相需用0.45µm 滤膜过滤。
若是使用V ARIAN色谱仪，流动相须首先赶气40～60分钟。
4、进样：一定要使用平头微量进样针进样。
对一般样品而言，进样体积需大于定量环的2.5倍～4 倍则更加保险。
5、请正确开关机，顺序如下：打开计算机（Agilent 1100还须先运行Bootp Server程序）→打开HPLC 各模块电源→待各模块自检完成后，打开化学工作站→打开Purge阀，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止→关上Purge阀→进行数据分析方法编辑和数据采集方法编辑→用流动相冲洗和平衡系统和分析柱（更换溶剂后应以较长时间平衡系统）→关机时，先关闭化学工作站，再关HPLC 各模块电源和计算机。
6、使用双泵时，A、B、C、D四相中，若所用流动相中有含盐流动相，则A、D（进液口位于混合器下方）放置含盐流动相，B、C（进液口位于混合器上方）放置不含盐流动相。
7、请在每次分析时检查并记录压力是否在正常范围；每次使用完毕后请清洗系统：先以适当比例水和ACN 或MeOH混合溶液清洗20～30分钟，再以100％ACN 或MeOH 清洗10～20分钟，最后应将有机溶剂保留在系统中。
当流动相中使用了无机盐、酸等缓冲盐物质，在分析结束后，应先用纯水“purge”脱气机管路冲洗5分钟，再用95％水和5％ACN 或MeOH清洗色谱柱30～40分钟后，再以100％ACN 或MeOH 清洗10～20分钟，最后应将有机溶剂保留在系统中。
冲洗过程中关闭D灯、W灯。
8、为防止缓冲盐和样品残留在进样阀中，每次分析结束后应冲洗进样阀。
通常可用水冲洗，或先用能溶解样品的溶剂冲洗，再用水冲洗。
高效液相色谱仪的使用方法及注意事项
高效液相色谱仪操作步骤：1)．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。
2)．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3)．打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4)．进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5)．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。
冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。
6)．调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。
点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。
7)．设计走样方法。
点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。
若需建立一个新的方法，点击new method。
选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。
选完后，点击protocol。
一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8)．进样和进样后操作。
选定走样方法，点击start。
进样，所有的样品均需过滤。
方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。
全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9)．关机时，先关计算机，再关液相色谱。
10)．填写登记本，由负责人签字。
高效液相色谱仪使用注意事项：1、泵正常工作时，在流动相和流速不变的前提下柱压应该是稳定的，当然在换流动相时压力变化是正常的，正常情况下如果柱压升高基本上都是由色谱柱使用时间长引起的（只有更换色谱柱），如果正常情况下压力突然降低有可能是（1）接头处有漏液的地方，采取的方法是有滤纸检查，如有漏液的地方用扳手拧紧即可。
高效液相色谱仪使用中应注意的几点问题
高效液相色谱仪（HPLC）作为一种重要的分析仪器，在科学研究、药物研发、环境监测等领域都有着广泛的应用。
然而，由于其操作较为复杂，使用中需要注意的问题也比较多。
本文将对HPLC使用中需要注意的几点问题进行全面评估，并根据此撰写一篇有价值的文章。
一、样品制备在进行HPLC分析前，样品制备是至关重要的一步。
需确保样品的准确称量和适当稀释，以避免因样品过浓或过稀导致分析结果不准确。
要注意避免样品污染或降解，尤其是针对易挥发性或光敏性样品，在样品制备过程中应采取相应的保护措施，如避光、密封等。
二、色谱柱选择色谱柱是HPLC的核心组件，其选择对分析结果有着直接影响。
在选择色谱柱时，需考虑分析物的特性、分离要求以及实验条件等因素，合理选择适合的色谱柱才能保证分析结果的准确性和可靠性。
色谱柱的保养和更换也是需要注意的问题，及时清洗和更换老化的色谱柱可以延长色谱柱的使用寿命并提高分析效果。
三、流动相及流速流动相的选择和流速的设定直接影响色谱分离的效果。
不同的分析物需要选择不同的流动相，而流速的调整则会影响分离的时间和分离效果。
在使用HPLC时，需要根据实际样品特性和分析要求，合理选择流动相组成和流速参数，以达到最佳的分离效果和分析速度。
四、仪器条件设置HPLC仪器的条件设置也是影响分析结果的重要因素。
包括但不限于，检测波长、柱温、进样量、检测方式等参数的设定，都需要根据具体的分析要求进行合理设置。
需要定期校正仪器的各项参数和检测灵敏度，以确保分析结果的准确性和可靠性。
五、数据处理与结果解释在HPLC分析结束后，得到的数据处理和结果解释也是使用中需要注意的问题。
在数据处理过程中，需要注意确保所用的数据处理软件和算法的准确性和稳定性，以避免因错误的数据处理而导致分析结果出现偏差。
在结果解释中，需要充分考虑实验条件、对照样品和标准曲线等因素，以得出准确可靠的分析结果。
总结与观点HPLC在使用中需要注意的问题包括样品制备、色谱柱选择、流动相及流速、仪器条件设置以及数据处理与结果解释等多个方面。
高效液相色谱仪的使用方法及注意事项
高效液相色谱仪操作步骤：1)．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。
2)．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3)．打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4)．进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5)．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。
冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。
6)．调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。
点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。
7)．设计走样方法。
点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。
若需建立一个新的方法，点击new method。
选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。
选完后，点击protocol。
一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8)．进样和进样后操作。
选定走样方法，点击start。
进样，所有的样品均需过滤。
方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。
全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9)．关机时，先关计算机，再关液相色谱。
10)．填写登记本，由负责人签字。
高效液相色谱仪使用注意事项：1、泵正常工作时，在流动相和流速不变的前提下柱压应该是稳定的，当然在换流动相时压力变化是正常的，正常情况下如果柱压升高基本上都是由色谱柱使用时间长引起的（只有更换色谱柱），如果正常情况下压力突然降低有可能是（1）接头处有漏液的地方，采取的方法是有滤纸检查，如有漏液的地方用扳手拧紧即可。
高效液相色谱仪使用注意事项 液相色谱如何操作
高效液相色谱仪使用注意事项液相色谱如何操作液相色谱仪在高效使用中需注意以下几个问题：1、色谱柱中的流动相是否会会排干的问题：不少做色谱分别试验的人碰到过这样的情形：不慎未适时补充流动相，泵将溶剂液相色谱仪在高效使用中需注意以下几个问题：1、色谱柱中的流动相是否会会排干的问题：不少做色谱分别试验的人碰到过这样的情形：不慎未适时补充流动相，泵将溶剂瓶中的流动相吸干了，HPLC系统由此而停止工作了。
如此情况是否会损坏色谱柱？泵是否已将色谱柱中全部流动相都排干了？色谱柱还能使用吗？事实上，假如泵将溶剂瓶中的流动相吸干，并不会造成色谱柱的损坏。
即使泵中充分了空气，泵也不会将空气排入色谱柱。
由于泵只能输送液体，而不能输送空气。
2、色谱柱变干的问题：另一个更可能发生的情况是忘掉盖上色谱柱两端的密封盖或盖子太松而使色谱柱变干。
同样，整个色谱柱干枯的情况不太简单发生，多半可能只是色谱柱两端的几个毫米变干了，因挥发掉全部溶剂是色谱柱变干需要相当长的时间。
即使色谱柱真的变干了，也不愿定就不可救药了。
可以尝试用一种完全脱气的、表面张力低的溶剂（如经氦气脱气的甲醇）冲洗色谱柱以除去气体。
较低的表面张力有助于浸润填料表面；已脱气的溶剂应当能够溶解并去除滞留在填料中的气体。
色谱柱大约需要（以1mL/min的流速）冲一个小时或更多的时间被彻底浸润，恢复到正常状态。
3、使用PEEK（polyetheretherketone）管路和接头需要注意以下问题：假如常常需要更改流路或更换不同品牌的色谱柱，使用PEEK材料制成的管路和接头会特别便利。
PEEK管路简单连接；PEEK接头不仅无需工具，手拧即可固定，而且简单调整锥箍之外的管路长度，便利与不同品牌或规格的色谱柱相连接。
使用此类材料的管路需要注意的是：PEEK对卤代烷烃和四氢呋喃的兼容性不好。
虽然未察看到上述溶剂溶解PEEK材料的明显迹象，但PEEK碰到上述溶剂会变脆。
另一个西药考虑的因素是压力限。
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岛津液相色谱仪使用注意事项1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。
2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。
对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。
5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。
6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。
8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。
清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗；⑧用10％稀硝酸清洗。
9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。
11.要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。
更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。
液相色谱柱使用经验谈色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。
1、样品的前处理：a、最好使用流动相溶解样品。
b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。
c、使用0.45μm的过滤膜过滤除去微粒杂质。
流动相的配制液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
b、流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。
c、流动相的黏度要尽量小，以便在使用较长的分析柱时能得到好的分离效果；同时降低柱压降，延长液体泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。
如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。
f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。
除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
3、流动相流速的选择：因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。
对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。
对内径为 4.6mm的色谱柱，流速一般选择1ml／min，对于内径为 4.0mm 柱，流速0.8ml／min为佳。
当选用最佳流速时，分析时间可能延长。
可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。
注意：a．由于甲醇廉价，对于反相柱推荐使用甲醇体系(必须使用乙腈的场合除外)。
b．对于正相柱推荐使用沸程为30-60℃的石油醚或提纯后的己烷作流动相，没有提纯的己烷不得使用。
用水最好使用超纯水(电阻率大于18兆欧)，去离子水及双蒸水中含有酚类杂质，有可能影响分析结果。
c．含水流动相最好在临实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要过夜。
最好加入叠氮化钠，防止细菌生长。
d．流动相要求使用0.45 μm滤膜过滤，除去微粒杂质。
e．使用HPLC级溶剂配制流动相，使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命，提高柱性能常见故障的断定及解决方法诊状可能的原因及解决方法(一)保留时间变化1.柱温变化柱恒温，必要时需配置恒温箱2.等度与梯度间未能充分平衡至少用10倍柱体积的流动相平衡柱3.缓冲液容量不够用》25mmol/L的缓冲液4.柱污染每天冲洗柱5.柱内条件变化稳定进样条件,调节流动相6.柱快达到寿命采用保护柱(二)保留时间缩短1.流速增加检查泵,重新设定流速2.样品超载降低样品量3.键合相流失流动相pH值保持在3~7.5，检查柱的方向4.流动相组成变化防止流动相蒸发或沉淀5.温度增加柱恒温(三)保留时间延长1.流速下降管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡2.硅胶柱上活性点变化用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱质钝化柱3.键合相流失同前(二)34.流动相组成变化同前(二)45.温度降低同前(二)5(四) 出现肩峰或分叉1.样品体积过大用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%2.样品溶剂过强采用较弱的样品溶剂3.柱塌陷或形成短路通道更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件4.柱内烧结不锈钢失效更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品5.进样器损坏更换进样器转子(五)鬼峰1.进样阀残余峰每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗2.样品中未知物处理样品3.柱未平衡重新平衡柱,用流动相作样品溶剂(尤其是离子对色谱)4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) 每天新配,用抗氧化剂5.水污染(反相) 通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水(六) 基线噪声1.气泡(尖锐峰) 流动相脱气,加柱后背压2.污染(随机噪声) 清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂3.检测器灯连续噪声更换氘灯4.电干扰(偶然噪声) 采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)5.检测器中有气泡流动相脱气,加柱后背压(七)峰拖尾1.柱超载降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相2.峰干扰清洁样品,调整流动相3.硅羟基作用加三乙胺,用碱质钝化柱，增加缓冲液或盐的浓度，降低流动相pH值，钝化样品4.同前(四)4 同前(四)45.同前(四)3 5.同前(四)36.死体积或柱外体积过大连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管7.柱效下降用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱(八)峰展宽1.进样体积过大同(四)12.在进样阀中造成峰扩展进样前后排出气泡以降低扩散3.数据系统采样速率太慢设定速率应是每峰大于10点4.检测器时间常数过大设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%5.流动相粘度过高增加柱温,采用低粘度流动相6.检测池体积过大用小体积池,卸下热交换器7.保留时间过长等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱8.柱外体积过大将连接管径和连接管长度降至最小9.样品过载进小浓度小体积样品液相色谱仪使用操作规程液相色谱仪使用操作规程总流程：超纯水冲洗柱——流动相分离样品——超纯水冲洗柱——纯乙睛保存柱1．电源准备打开稳压器电源开关，须待电压指示至220V 后，才能开启其他有关设备。
2．HP1100 高效液相色谱仪的准备试剂：三氟乙酸乙腈(Fisher 公司产品色谱纯)超纯水(Millipore 超纯水)冰乙酸溶液配置：贮液瓶与流动相的准备A 液0.1%三氟乙酸（三氟乙酸1ml，超纯水999ml）室温保存B 液60%乙腈（乙腈600ml，超纯水400ml）室温保存样品液0.01%乙酸（冰乙酸0.01ml，超纯水100ml）室温保存泵头冲洗液：精滤后超纯水或者是1%色谱纯甲醇室温保存注：贮液瓶应用超纯水清洗干净，备用。
流动相溶剂用洁净硼砂漏斗精滤除去微小颗粒。
操作者必须清楚并注明A、B 贮液瓶盛装为何种溶剂。
冲洗泵头：用注射管于软塑料管末端抽吸至有水流出，调节流速开关控制流速为20-30drop/min.。
①流动相管道排气如果管道中气泡较多，可通过弹击管道，排除气泡，并逆时针旋转脱气泵活塞使其松动，用注射管于流动相出口的塑料管末端抽吸至管道内气泡排除完全。
操作时，我们通常已经打开了脱气机（气泡严重影响分离效果，所以观察管道中液体是否有气泡非常重要。
）②开机③进入HP1100 操作系统a.双击WIN-95 操作界面中左下角Instrument 1 online 图标，进入HP1100 工作站软件操作界面。
单击工作站操作界面上方Run control 菜单，在下拉菜单中找到Sample Info 子菜单，单击。
在Sample Info 信息框内定义操作者、样品前缀及编号、保存路径等参数。
在保存路径项下，将可定义子目录分别输入操作者拼音缩写，以方便检索时互不干扰。
b.等待工作站操作界面中泵、柱温箱、检测器各指示图标由灰色转变为绿色后，单击泵、检测器各图标可从其各自弹出的菜单中设定流动相各溶剂比例、流速等。
（1）流速通常为1ml/min。
检测波长通常为280，或者254nm。
（2） A 液设置为100%，运行15-30 分钟（目的是色谱柱的预平衡），观键可将基线调至零点。
待基线平察基线走势，基线应为直线，通过单击“Balance”稳后可进样。
（3）调整 A 液为0，B 液为100%再运行60 分钟（此时乙腈实际浓度为60%）（4）在 A 液冲洗同时进行进样环的冲洗：用500μl 的针样注射器，在load 状态，注入超纯水500μl。
（反复三次，若是20μl 进样环，则加入20μl 以上，多余的水可废液管流出。
通常同一样品上样30 次后应冲洗进样环，如果不同样品，最好，每次上样前均进行冲洗。
）（5）吸取一定量可直接进样的样品溶液（上样液最好用滤器滤过），将进样阀逆时针旋至Load 档，将进样针从进样孔处水平推入，按进样器活塞将样品溶液注射入进样环后，立即将进样阀顺时针方向旋至Inject 档，与此同时，数据开始自动收集。
（6）此时样品分析已经完成。
在HP1100 主操作界面的检测器图标，关闭检测器，然后关闭色谱仪主机检测器开关（目的是延长检测器寿命）。
将 B 通道调为0，A 通道调为100%，即 A 液冲洗色谱柱约10-30min。
用 A 液续冲洗色谱柱约10-30m（目的是冲出柱内残留的杂质）（7） A 通道换为 C 通道（100%乙腈）续冲洗色柱约10-30min。
（目的主要为保护柱）④数据记录的终止与保存电脑将自动收集并保存数据，终止运行后，将自动弹出数据框，或者可通过DATA ANALYSIS菜单，调出资料。
3．图谱处理4．关机1）HP1100 的关闭在HP1100 的主操作界面上分别单击关闭泵、检测器图标，或通过菜单关闭。
然后，单击HP1100 的主操作界面右上方“X”，退出Instrument 1 online 程等待序，返回至WIN-95 操作界面。
单击左下角“Start”菜单，单击“Shut down”，提示后，按电脑主机电源键，关闭电脑主机及显示器。