生化检验项目校准

冰冻产品的处理步骤：从-70℃或-20℃冰箱中取出 样本，置室温（18-25）℃下平衡，使之完全融化 ，温和混匀。 冻干产品的复溶步骤： 从冰箱中取出样本，置室 温（18-25）℃下平衡，并放置在水平桌面上，轻 拍小瓶，以确保所有物质已沉淀在该小瓶底部，小 心拔开胶塞，采用已校准的移液管沿瓶壁缓慢精确 加入规定体积的去离子水，压胶塞到原位后置室温 下使之完全溶解，温和混匀。 应按厂家提供说明书操作。
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校准后的验证
•校准后用校准品当样本进行测试，看其值与定值 之间的差异 •测定室内质控，看结果是否在控。 •参加室间质评或返测已知浓度的室间质评样本。
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•记录每次校准结果，与之前的校正结果进行比较。
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生化检验项目校准
泸州市人民医院
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校准：在规定条件下，为确定测量仪器(或 测量系统)所指示的量值，或实物量具(或参考 物质)所代表的值，与对应的由标准所复现的量 值之间关系的一组操作。
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仪器的性能验证：
• • • • • • • • • 零点漂移 波长准确度及重复性 杂散光 吸光度正确度 吸光度重复性 吸光度线性误差 交叉污染率 温度正确度 比色杯间差距
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三、处理： 1. 分别对10umol/L、33umol/L的校准品进行对倍 稀释，得到5umol/L、16.5umol/L浓度的校准； 2. 把参数中校准品个数修改为：5； 3. 浓度设置修改为0、5、10、16.5、33umol/L。 4. 仍采用Spline定标模式重新进行校准，后校准 顺利通过，结果如下：
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线性校准（Linear）：其反应为线性（直线） ，一般只需一个校准品进行校准。
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非线性法：又称非直线性校准法 非线性法包 括logit-log法、指数函数法、样条函数法等 方法 Logit-log3p对数函数法中的一种，适用于浓 度升高而吸光度表现为收束的工作曲线。P表 示参数之意，由3个参数（S1Abs、k、a）参与 计算。S1Abs表示试剂空白，K表示校准所得斜 率，a表示近似常数。
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5.不同的仪器，在做非线性校准时所要求的校准品 个数是不同的。 例如： ① 日立、奥林巴斯等仪器，要求至少带三个浓度的 校准品即可进行非线性拟合； ② 贝克曼、东芝等仪器，则要求至少带四个浓度的 校准品才进行非线性拟合。 五、总结： 我们在进行新项目实验前，除了选择正确的校 准模式外，还要根据该仪器的性能特点，选择符合 要求的校准品个数，以保证实验的顺利进行。
校准品：含有已知量的欲测物，用以校准该测定 方法的数值，它与该方法、试剂、仪器是相关联 的。校准品的作用是为了减少或消除仪器、试剂 等造成的系统性误差。
最好为人血清基质，减少基质效应 仪器、试剂、校准品的配套性 如有可能校准品应溯源到参考方法或参考物质 要有明确的不确定度
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• 问题讨论
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校准方法的选择
线性 非线 性
• 线性校准方法需选用1个或多个已知浓度的标准物 质或校准品，1点线性校准通常被定义为K因子校 准，仅空白溶液用于校准；在生化分析仪上最常 用的2点线性校准等同于分析化学中的外标2点法， 需使用空白溶液和1个已知浓度的校准品。
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二、了解情况： 查看校准结果，发现其每个浓度的吸光度实 际在该仪器上已做出测定，分别为：0：-0.0027 10：-0.0344 33：-0.0738，但参与最终结果 计算的Cal Factor（校准因数）却显示为0，说 明该仪器并未通过所测定的吸光度进行曲线拟合 ，故出现“校准失败”报警。
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•logit-logXp与样条函数法
•抛物线型(左下图)，则多考虑用logic方法拟合。 •曲线类型不确定时，或校准曲线类型如图12-37所示 的S型非线性校准类型，则多考虑Splain方法拟合。
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校准品的选择及准备
问题讨论
• 定值质控品是否可以替代校准品？ • 空白校准的选择？ • K值究竟该选择理论、实测、校准K值？ • 零度水平是否均可以用水来代替？（LPa） • 校准品的保存与使用？ • 室内质控失控是否都应进行校准纠正？ • 不同批号的校准品使用和对k值的影响？ • 校准品是否可以通用于各仪器和方法，测量次 数？
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校准频率的选择
理想状况下进行每批次检测前都应进行 试剂改变了种类或更换了批号 仪器进行了大的维护维修或更换了重要的配件， 如光源灯、滤光片等 室内质控出现了趋势性变化或飘移（系统性误 差）；或者超出了实验室规定接受限，采取了一 般性纠正措施后，不能识别和纠正问题时 厂家试剂有明确校准时限规定的
检测项目校准
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校准目的是准确度的传递
一级标准品 决定性方法
参考方法
溯 源 二级标准品 厂家方法 校 准 品
校 准
常规分析
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项目校准主要涉及内容
• 校准方法的选择
• 校准品的选择及准备
• 校准频率的选择
• 校准后的验证
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logit-log4p对数函数法中的一种，适用于浓度升 高而吸光度表现为收束的工作曲线。
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样条函数法（spline）：是将每一标准液测定的 吸光度连接起来（点对点），形成一个完整曲线 ，即为曲线拟合。该曲线拟合优于折线法校准。
• 如果测量方法的反应信号与被测量浓度不成线性反 应（如免疫分析方法），则应选用非线性校准模式， 需涉及3至6个校准品，采用曲线拟合、多项式、对 数等方式建立非HOSPITAL
K因子法（+ -）： 理论k值：根据理论摩尔消光系数来计算。通常试 剂生产厂家给出的k值都属于。 实测K值：是根据仪器实测的摩尔消光系数来设置K 值 校准k值：是根据仪器当前的实际状态，试剂的稳 定性等通过校准品校准后得到的K值。 K因数法适用的分析方法有一点终点法，两点 终点法，两点速率法，多点速率法。
0 umol/L 5 umol/L 10 umol/L
Cal Factor 吸光度
-87.2
-0.0032 -0.0195
-213.5
-0.0366
16.5 umol/L -279.6 -0.0558
33 umol/L
-365.3
-0.0744
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5、之后校准显示通过，质控在控，证明校准成功 四、分析： 1. 全自动生化分析仪的校准模式设置中均有线性或 非线性的选择。当我们对其进行设置时，会根据 试剂盒的反应原理选择合适的校准模式。 2. 通常情况下，常规的生化项目我们会选择线性模 式校准，而免疫比浊项目我们会选择非线性模式 校准。 3. 若选择线性校准，往往我们只需带一个校准品进 行两点校准即可。 4. 若选择非线性校准时，我们会带多个浓度校准品 进行多点校准。
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校准品浓度水平及个数选择 • 校准至少包含你需要报告结果的内容/范围。 • 校准范围也定义为分析方法的工作范围。 • 个数要与仪器要求相匹配
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案例分析
一、现象： 某品牌HCY试剂（仪器：雅培 C8000），校准无法通过 ，出现“校准失败”的报警。 试剂参数为：Primary wavelength：340nm； Secondary wavelength：700nm； Main read time：31-33； Blank read time：26-28； Sample volume：10ul； R1 reagent volume：185ul； R2 reagent volume：50ul； Calibration method：Spline； 校准品个数设置：3； 浓度分别设置为：0、10、33umol/L。
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