抑菌试验步骤

1.培养基的制作（PDA培养基）：

制作：新鲜土豆200g（去皮后），切成小块（差不多宫保鸡丁的小块那么大），加入蒸馏水约1000mL（可以适当多加点，因为煮的过程中水分要蒸发），水煮沸时开始计时，30min 后，停止加热，用纱布过滤（3层），补充滤液至1000mL，滤液中加入2%的葡萄糖（即是20g），滤液加热后，加入1.5%琼脂（15g），即制作好了培养基

分装：趁热将制作好的培养基用20mL移液管移至玻璃管中，每管19mL。

灭菌：将装好的培养基，包扎，灭菌。（121℃20min）需要灭菌的物品还有：移液枪枪头；玻璃棒（直径小于5mm的）；内直径5mm的塑料小管

2.药液的配制：

万分之一天平称取待测物质0.02g于10mL离心管中，加入二甲桠枫将其溶解（尽量少用溶剂，一般200uL加入后即可，如果不能溶解，再加。一般加入溶剂后稍微加热即可溶解）；再加入配制好的千分之一的吐温804.8mL（使溶液体积为5mL），即配制好了100ppm（此时的浓度并非100ppm，而是后面加入培养基后的浓度）的药液，梯度稀释成50ppm、25ppm、12.5ppm、6.25ppm。空白的也要加入二甲桠枫和吐温80.

50ppm（都是最后在培养基中的浓度）硫酸链霉素的配制：精确称取硫酸链霉素0.05g 于25mL比色管中，蒸馏水定容。（加入该物质是为了抑制细菌生长的）

3.倒平板：培养基灭菌完成后趁热拿到超菌台，分别加入0.5mL的药液和0.5mL的硫酸链

霉素溶液（此操作最好两人分别完成），然后，一人将培养基摇匀，另一人将摇匀的培养基倒入事先已灭菌烘干的平板中（在酒精灯旁完成）。两人合作实验时，分别坐在超菌台的两边。

4.接种：待培养基凝固后，一人A用直径5mm的塑料管戳取菌种菌饼，另一人B左手拿

培养皿，打开盖子，A将有菌饼的小管移至培养皿中心，B右手用灭菌的玻璃棒将其戳出，粘于培养皿中心，即可。（此操作在酒精灯旁进行）

5.培养：25℃培养玉米小斑病菌、水稻立枯丝病菌、小麦赤霉菌、灰葡萄孢；28℃培

养油菜菌核菌。