常用蛋白酶切割位点审批稿

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蛋白酶酶切位点

蛋白酶酶切位点木瓜蛋白酶巯基蛋白酶具有广泛特异性TPCK,TLCK,抑蛋白酶醛肽α-巨球蛋白,烷化剂胃蛋白酶酸蛋白酶广泛特异性胃蛋白酶抑制素胰蛋白酶丝氨酸蛋白酶在K或R之后TLCK,PMSF,抑蛋白酶醛肽抑肽酶,α巨球蛋白名称三字符号单字符号Ala AArg RAsp DCys CGln QGlu/Gln EHis HIle IGly GAsn NLeu LLys KMet MPhe FPro PSer SThr TTrp WTyr YVal V胰蛋白酶arg、lys，得到以arg、lys为C末端残基的肽段。

胰凝乳蛋白酶phe、trp、tyr 等疏水aa。

胃蛋白酶phe、trp、tyr等疏水aa。

木瓜蛋白酶arg、lys。

葡萄球菌蛋白酶，磷酸缓冲液ph7.8时断裂glu、asp。

碳酸氢铵缓冲液ph7.8或醋酸铵缓冲液ph4.0时断裂glu。

梭菌蛋白酶arg，用于不溶性蛋白的长时间裂解。

CNBr断裂Met。

羟胺断裂asn—gly间的肽键。

二硫键可以用巯基化合物还原法或者过甲酸氧化法断裂.。

木瓜蛋白酶是番木瓜（Carieapapaya）中含有的一种低特异性蛋白水解酶，广泛地存在于番木瓜的根、茎、叶和果实内，其中在未成熟的乳汁中含量最丰富。

木瓜蛋白酶的活性中心含半胱氨酸，属于巯基蛋白酶，它具有酶活高、热稳定性好、天然卫生安全等特点，因此在食品、医药、饲料、日化、皮革及纺织等行业得到广泛应用。

木瓜蛋白酶是一种蛋白水解酶，分子量为23406，由一种单肽链组成，含有212个氨基酸残基。

至少有三个氨基酸残基存在于酶的活性中心部位，他们分别是Cys25、His159和Asp158，另外六个半胱氨酸残基形成了三对二硫键,且都不在活性部位。

纯木瓜蛋白酶制品可含有：（1）木瓜蛋白酶，分子量21000，约占可溶性蛋白质的10%；（2）木瓜凝乳蛋白酶，分子量26000，约占可溶性蛋白质的45%；（3）溶菌酶，分子量25000，约占可溶性蛋白质的20%；及纤维素酶等不同的酶。

蛋白酶的分类及作用位点审批稿

EDTA，EGTA
羧肽酶B
锌金属蛋白酶
K，R羧基端
EDTA，EGTA，碱性氨基酸
羧肽酶Y
丝氨酸羧肽酶
氨基酸羧基端
PMSF
组织蛋白酶C
琉基蛋白酶
氨基端双肽，可通过K，R或P氨基端作为第二或第三个氨基酸封闭
醋酸碘，甲醛
胰凝乳蛋白酶
丝氨酸蛋白酶
在F，T或Y之后
抑肽酶，PMSF，TPCK，α-巨球蛋白
胶原酶
抑肽酶，抑蛋白酶醛肽
木瓜蛋白酶
巯基蛋白酶
长期孵育时具有广泛特异性
TPCK，TLCK，抑蛋白酶醛肽α-巨球蛋白，烷化剂
胃蛋白酶
酸蛋白酶
广泛特异性
胃蛋白酶抑制素
纤溶酶
丝氨酸蛋白酶
在K或R之后
PMSF，TLCK，抑肽酶，α-巨球蛋白
链霉蛋白酶
混合型
无特异性
B．M．完整药片
蛋白酶K
丝氨酸蛋白酶
广泛特异性
PMSF，PefablocSc
枯草杆菌蛋白酶
丝氨酸蛋白酶
无特异性
PMSF，α巨球蛋白，苯甲脒
热溶素
锌金属蛋白酶
在非极性残基之前
EDTA
凝血酶
丝氨酸蛋白酶
在K之后
TLCK，PMSF，抑蛋白酶醛肽抑肽酶，α巨球蛋白，苯甲脒
胰蛋白酶
丝氨酸蛋白酶
在K或R之后
TLCK，PMSF，抑蛋白酶醛肽抑肽酶，α巨球蛋白
蛋白酶的分类及作用位点
蛋白酶的分类及作用位点
蛋白酶
分类
作用位点
已知抑制物
氨基肽酶
金属
带有自由氨基的L-氨基酸氨基末端；不能分解由X-Pro、·D或·Q组成的肽键

常用蛋白酶切割位点

Novagen, Roche
Trypsin Inhibitor-Agarose
TEV protease（烟草蚀纹病毒蛋白酶）
Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln▼Gly
E-N-L-Y–F-Q▼G
Invitrogen – Life Technologies
Ni-NTA (6His recomb. TEV)
KEX2对arg的专一性高，要求最重要。
Arg前为lys效率最高，不切-Arg-lys，Pro影响KEX2切割
羧肽酶
羧肽酶B可以切割C端的Lys或Arg；羧肽酶A可以切割C端除了Lys、Arg、Pro的氨基酸，但如果倒数第二个氨基酸为Pro两种羧肽酶均不能作用
1.胰蛋白酶属肽链内切酶，能把多肽链中Lys和Arg残基中的羧基侧切断。
Qiagen
Ni-NTA (6His recomb. enzyme)
Intein Site（内含肽）
dithiothreitol cleavage（二硫苏糖醇清除）
New England Biolabs
DTT elimination by dialysis（透析）
HRV 3C Protease（3c蛋白酶）
2.胰凝乳蛋白酶（亦称糜蛋白酶）属肽链内切酶，主要切断多肽链中的芳香族氨基酸（Phe、Trp、Tyr）残基的羧基一侧。
3.羧肽酶（分A和B型），一般的题目中没有特别指明的话就是两种类型的功能都具备，可以从羧基端切除氨基酸（若羧基端的第1个或第2个氨基酸为Pro的则不能切除）。
4.溴化氰处理，专一性的切割甲硫氨酸羧基端的肽键。
常用融合蛋白切割位点
PROTEASE
COMPANY
Protease Capture

蛋白酶切位点

.
Arg-|-Xaa, Lys-|-Xaa,
AminopeptidaseA,or angiotensinase,or glutamyl-aminopeptidase
.
Glu-|-Xaa>>Asp-|-Xaa,
Dipeptidyl-peptidaseI,or cathepsin(组织蛋白酶)C or J
.
Plasma kallikrein (血浆激肽释放酶)
.
Arg-|-Xaa, Lys-|-Xaa,including
Arg-|-Ser,Lys-|-Arg,
Leukocyteelastase(白细胞弹性蛋白酶),orneutrophilelastase(中性白细胞弹性蛋白酶),orlysosomalelastase(溶酶体弹性蛋白酶)
≠AlaorVal
脑啡肽酶),or enkephalinase(脑啡肽酶),or neutralendopeptidase
.
Xaa-|-Tyr,Xaa-|-Phe, Xaa-|-Trp,and
Xaa-|-Leu,
Thimet oligopeptidase(甲拌磷寡肽酶),or endo-oligopeptidase A,or endopeptidase(肽链内切酶),or pz-peptidease(肠促胰酶素)
.
Xaa-Yaa-|-Zaa,if Xaa≠ArgorLys,or
Yaa ≠Pro,orZaa≠Pro
Dipeptidyl-peptidase IV
.
Preferentially Xaa-Pro-|-Zaa,(but also Xaa-Ala-|-Yaa)withYaa ≠Pro or Hyp
Prolyl tripeptyl-peptidase

常用蛋白酶酶切位点

Invitrogen – Life Technologies, LifeSensors
Ni-NTA (6His recomb. enzyme)
Amersham-Biosciences
GSTrap for GST fusion enzyme
TAGZyme
His-tag removal by Exoproteolytic Digestion
Qiagen
Ni-NTA (6His recomb. enzyme)
Intein Site
dithiothreitol cleavage
Factor Xa
Ile-Glu/Asp-Gly-Arg��
Amersham-Biosciences, New England Biolabs,
Roche
Benzamidine-Agarose
Enterokinase
Asp-Asp-Asp-Asp-Lys��
New England Biolabs,
vagen, Roche
Cleavage Sites Table for Fusion Proteins：
PROTEASE
COMPANY
Protease Capture
Thrombin
Leu-Val-Pro-Arg��Gly-Ser
Amersham-Biosciences, Novagen,
SIGMA, Roche
Benzamidine-Agarose
Trypsin Inhibitor-Agarose
TEV protease
Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln��Gly
Invitrogen – Life Technologies

蛋白酶切位点

Arg-|-Xaa, Lys-|-Xaa,
Pancreatic elastase (胰弹性蛋白酶)
E.C.3.4.21.36
Ala-|-Xaa,andalsoGly-|-Xaa,
Val-|-Xaa, Ser-|-Xaa,
Thrombin(凝血酶)
E.C.3.4.21.5
Arg-|-Gly,
Plasmin(胞质素，胞浆素)
Enzymes
E.C. Number
Cleavage sites
α-chymotrypsin(胰凝乳蛋白酶，糜
蛋白酶)
E.C.3.4.21.1
Tyr-|-Xaa,Trp-|-Xaa, Phe-|-Xaa, and
alsoLeu-|-Xaa,Met-|-Xaa,
Trypsin (胰朊酶，胰蛋白酶)
E.C.3.4.21.4
chymotrypsin胰凝乳蛋白酶糜蛋白酶ec34211tyrxaatrpxaaphexaaalsoleuxaametxaatrypsin胰朊酶胰蛋白酶ec34214argxaalysxaapancreaticelastase胰弹性蛋白酶ec342136alaxaaandalsoglyxaavalxaaserxaathrombin凝血酶ec34215argglyplasmin胞质素胞浆素ec34217lysxaaargxaaprolyloligopeptidaseorprolylendopeptidaseec342126proxaaalaxaaplasmakallikrein血浆激肽释放酶ec342134argxaalysxaaincludingargserlysargleukocyteelastase白细胞弹性蛋neutrophilelastase中性白细胞弹性蛋白酶orlysosomalelastase溶酶体弹性蛋白酶ec342137valxaaalaxaacysteineproteasesec3422

常用蛋白酶切割位点

常用融合蛋白切割位点
1.胰蛋白酶属肽链内切酶，能把多肽链中Lys和Arg残基中的羧基侧切断。

2.胰凝乳蛋白酶（亦称糜蛋白酶）属肽链内切酶，主要切断多肽链中的芳香族氨基酸（Phe、Trp、Tyr）残基的羧基一侧。

3.羧肽酶（分A和B型），一般的题目中没有特别指明的话就是两种类型的功能都具备，可以从羧基端切除氨基酸（若羧基端的第1个或第2个氨基酸为Pro的则不能切除）。

4.溴化氰处理，专一性的切割甲硫氨酸羧基端的肽键。

如有侵权请联系告知删除，感谢你们的配合！。

常用蛋白酶的作用位点

常用蛋白酶的作用位点哎呀，今天咱们来聊聊常用蛋白酶的作用位点，这可是个有趣的话题，绝对让你开眼界。

蛋白酶，听起来就像是科学家们在实验室里用显微镜研究的神秘生物，其实它们就在我们日常生活中，和我们息息相关。

想象一下，咱们吃的肉啊、豆腐啊，里面就有这些小家伙在默默工作，帮助我们消化食物。

你要是没见过蛋白酶的样子，那就真是小瞧了它们。

它们可不是光听名字好听，实际上还挺厉害的。

蛋白酶主要的工作就是切割蛋白质，听上去是不是有点简单？其实它们的工作方式就像是厨师在切菜。

想想一大堆蔬菜，有的细、有的粗，厨师得根据需要来切成不同的形状。

蛋白酶也是如此，它们会根据不同的蛋白质结构，选择合适的“切割点”，把大蛋白质切成小块，方便我们消化吸收。

就好像你把一块大牛肉切成小块，容易下嘴，对吧？这就是蛋白酶的魅力所在。

说到切割点，那就得提到几种常见的蛋白酶。

比如说，胃蛋白酶，它可是胃里的大力士，专门负责把肉类的蛋白质分解。

你一吃肉，它就开始工作，把那些看似坚不可摧的蛋白质拆解得七零八落，真是威风凛凛。

不过呀，胃蛋白酶的工作可不是无休止的，它在酸性环境下活得特别好，基本上是个“酸性小霸王”。

可见，科学真是无处不在啊，连吃饭都得靠它们来帮忙。

再说说胰蛋白酶，嘿，这家伙可是从胰腺里分泌出来的，任务也是不轻松。

它跟胃蛋白酶不同，更加喜欢中性的环境。

想象一下，蛋白质进了肠子，胰蛋白酶就像个聪明的侦探，找到了最适合的“切割点”，把那些蛋白质切得规规整整，方便后面的小肠吸收。

对了，咱们的小肠可是营养吸收的“超级市场”，得靠它把蛋白质弄得小巧玲珑，才能被咱们的身体吸收进去。

再聊聊木瓜酶，这家伙可是在热带水果里出道的明星。

吃个木瓜，蛋白质就得到了“贴心服务”。

它能把食物中的蛋白质分解得特别好，所以很多人用它来嫩肉。

想想那个时候，菜市场里一片繁忙，大家都在挑选最好的木瓜，既能解馋又能帮忙，真是两全其美。

再来讲讲植物蛋白酶，这个可有趣了，它们在植物里广泛存在，很多时候也跟我们的饮食有关。

蛋白酶酶切位点

胰凝乳蛋白酶phe、trp、tyr 等疏水aa。

胃蛋白酶phe、trp、tyr等疏水aa。

木瓜蛋白酶arg、lys。

葡萄球菌蛋白酶，磷酸缓冲液ph7.8时断裂glu、asp。

碳酸氢铵缓冲液ph7.8或醋酸铵缓冲液ph4.0时断裂glu。

梭菌蛋白酶arg，用于不溶性蛋白的长时间裂解。

CNBr断裂Met。

羟胺断裂asn—gly间的肽键。

二硫键可以用巯基化合物还原法或者过甲酸氧化法断裂.。

木瓜蛋白酶是一种蛋白水解酶，分子量为23406，由一种单肽链组成，含有212个氨基酸残基。

至少有三个氨基酸残基存在于酶的活性中心部位，他们分别是Cys25、His159和Asp158，另外六个半胱氨酸残基形成了三对二硫键,且都不在活性部位。

蛋白酶-酶切位点

or angiotensinase, or glutamyl-aminopeptidase Dipeptidyl-peptidases and tripeptidyl-peptidases Dipeptidyl-peptidase I, or cathepsin C or J
Dipeptidyl-peptidase IV
Cathepsin B
Clostripain, or endoproteinase Arg-C Calpain-1,
酶名称
中文
E.C.号
酶切位点
丝氨酸蛋白酶
胰凝乳蛋白酶，糜蛋白酶
胰朊酶，胰蛋白酶胰弹性蛋白酶凝血酶胞质素，胞浆素
E.C.3.4.21
E.C.3.4.21.1
E.C.3.4.21.4 E.C.3.4.21.36 E.C.3.4.21.5 E.C.3.4.21.7
基氨肽酶
二肽基肽酶和三肽基肽酶组织蛋白酶
E.C.3.4.14 E.C.3.4.14.1
二肽基肽酶 IV
C.3.4.14.5
脯氨酰三肽-肽酶
E.C.3.4.14.12
肽基-二肽酶
E.C.3.4.15
肽基-二肽酶 A，血管紧张素转化 E.C.3.4.15.1
酶
金属羧肽酶
E.C.3.4.17
羧肽酶 A
羧肽酶 N，羧基肽酶，激肽酶 I E.C.3.4.17.3 Xaa-|-Lys >>Xaa-|-Arg
羧肽酶 U 或 R 谷氨酸羧肽酶，叶酸水解酶
E.C.3.4.17.20 E.C.3.4.17.21
Xaa-|-Arg and Xaa-|-Lys Xaa-|-Glu, preferentially with Xaa=Asp or Glu

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