第三章病毒感染的诊断与防治
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2021/3/3
3.血凝抑制试验(hemagglutinatia inhibition test, HI test)
• 具有HA的病毒能凝集鸡、豚鼠、人等 的红细胞，称血凝现象。这种现象能被 相应抗体抑制，称HI试验。其原理是相 应抗体与病毒结合后，阻抑了病毒表面 的HA与红细胞的结合。本试验简易、 经济，特异性高，常用于粘病毒及乙型 脑炎病毒感染的辅助诊断及流行病学调
2021/3/3
三、病毒感染的血清学诊断
•
原理是用已知病毒抗原来检测病
人血清中有无相应抗体，故须待病人感 染后体内产生抗体时才能检出。
•
另外，在采取临床标本及病人血
清应注意病程，必须采取患者急性期血
清与恢复期血清 (双份血清) 进行血清学
试验。若第2次血清抗体滴度比第1次高
出4
2021/3/3
1.中和试验(neutralizing test,NT test)
•
是病毒在活体内或细胞培养中被特异性
抗体中和而失去感染性的一种试验。
•
中和抗体(netralizing antiwk.baidu.comodies,NTAb)
是作用于病毒表面抗原 (衣壳或包膜) 的抗体，
同种不同型病毒间一般无交叉，特异性高，而
且抗体在体内维持时间长。中和抗体阳性不一
定表示正在感染中，也可能因以前有过隐性感
2021/3/3
• 病毒 +鸡RBC = 凝集（血凝试验）
• 病毒 +特异性抗体 +鸡RBC=不凝集
•
（血凝抑制试验）
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四、病毒感染的快速诊断
胞膜上出现了血凝素(haemagglutinin,HA)， 具有吸附脊椎动物 (豚鼠、鸡、猴等) 红细胞 的能力，这一现象称红细胞吸附，常用来测 定具有HA的粘病毒与副粘病毒的增殖。若有 相应的抗血清，则能中和细胞膜上的HA， HAd不再发生，称红细胞吸附抑制试验。
2021/3/3
• 3.干扰现象(interference) • 某些病毒感染细胞时不出现CPE或其
第三章病毒感染的诊断与防治
第一节 病毒感染的诊断
常用的病毒学诊断方法包括： 病毒的分离鉴定 病毒的血清学检查 病毒蛋白和核酸的检测
2021/3/3
一、标本的采取与送检
• 应注意下列原则：
• 1.对本身带有杂菌 (如咽拭子、粪便) 或易 受污染的标本，要进行病毒分离培养时， 应使用抗生素。
• 2.因病毒在室温中易失去活性，标本应低 温保存并尽快送检。
• 3.血清学诊断标本的采取应在发病初期和 病后2～3w内各取1份血清，以便对比双 份血清抗体效价的动态变化。
2021/3/3
二、病毒的分离与鉴定
• (一)
• 1.动物接种 • 是最原始的病毒培养方法，根据病毒
种类不同，选择敏感动物及适宜接种部 位，如嗜 神经性病毒（狂犬病毒）可 接种于小鼠脑内，痘病毒可接种于家兔 角膜或皮内。
染所致。因此，中和试验适用于人群免疫情况
的调查，在临床诊断上较少使用。
2021/3/3
2.补体结合试验 (complement fixation
test,CF test)
• 用已知病毒可溶性(CF)抗原来检测病 人血清中相应(CF)抗体。CF抗原是病 毒的内部抗原，同种异型间常有交叉， 故特异性较中和试验低。但CF抗体出 现较早，消失较快，故CF阳性可作为 近期感染的指标。
② 有些病毒如麻疹病毒、CMV、RSV等 作用于细胞膜， 可使邻近的细胞相互融合，形成多核巨细胞或称融 合细胞。
③ 有些病毒 (如狂犬病病毒、麻疹病毒等) 可在培养 细胞中形成胞浆或核内的包涵体。
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病毒培养时出现的CPE
• 2.红细胞吸附 (hemadsorption,HAd) • 流感或副流感病毒等感染细胞后，由于细
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• 2.50%组织细胞感染量 (TCID50)测定法 • 该方法是测定病毒能使50%的组织培养细胞
发生感染的最小量。一般是将病毒悬液作10倍 的系列稀释，分别接种细胞，经一定时间后观 察CPE、血细胞吸附等指标，以最高稀释度能 感染50%细胞的量为终点。最后用统计方法计 算出50%组织细胞感染量（ 50%tissue culture infectious dose,TCID50)。
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• 2.鸡胚培养 • 鸡胚对多种病毒敏感。一般采用孵化
9～14天的鸡胚，根据病毒种类不同， 将病毒标本 接种于鸡胚的不同部位， 最常用的鸡胚接种部位有：羊膜腔、尿 囊腔、绒毛尿囊膜和卵黄囊等。
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• 3.组织培养法 (tissueculture) 或细胞 培养 (cellculture)法
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(二) 病毒的数量与感染性测定
• 1.蚀斑测定
• 是一种检查和准确滴定病毒感染性的方法。将稀释 的病毒悬液加入单层细胞培养瓶中。病毒吸附后，再 覆盖一层融化的半固体营养琼脂，使病毒在单层细胞 培养中有限扩散。结果是每一个有感染性的病毒在单 层细胞中可产生一个局限性的感染灶。用活性染料 ( 如中性红) 染色，则活细胞着色，受病毒感染而破坏 的细胞不着色，形成肉眼可见的蚀斑(plaque)。每个 蚀斑是由一个感染性病毒颗粒形成的，称作蚀斑形成 单位 (plaque forming unit,PFU)。病毒悬液中的感染 性病毒量的滴度可用PFU／ml表示。
• 是将离体活组织块或分散的组织细胞 加以培养的技术总称，为病毒分离鉴定 中的最常用的基本方法。
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病毒在培养细胞中增殖的指标
1. 细胞的变化
① 有些病毒在细胞内增殖时可引起特有的细胞病变， 称为细胞病变效应 (CPE)。常见的变化有细胞变圆、 聚集、坏死、溶解或脱落等。
他易于测出的变化(如HAd)，但能干扰 在其后感染的另一病毒的增殖。如风疹 病毒感染Vero细胞时CPE不明显，但它 能干扰后感染的埃可病毒 (ECHOV) 的 增殖，从而阻抑后者所特有的CPE。
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• 4.细胞代谢的改变 • 病毒感染细胞的结果可使培养液的pH
值改变，说明细胞的代谢在病毒感染后 发生了变化。这种培养环境的生化改变 也可作为判断病毒增殖的指标。
3.血凝抑制试验(hemagglutinatia inhibition test, HI test)
• 具有HA的病毒能凝集鸡、豚鼠、人等 的红细胞，称血凝现象。这种现象能被 相应抗体抑制，称HI试验。其原理是相 应抗体与病毒结合后，阻抑了病毒表面 的HA与红细胞的结合。本试验简易、 经济，特异性高，常用于粘病毒及乙型 脑炎病毒感染的辅助诊断及流行病学调
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三、病毒感染的血清学诊断
•
原理是用已知病毒抗原来检测病
人血清中有无相应抗体，故须待病人感 染后体内产生抗体时才能检出。
•
另外，在采取临床标本及病人血
清应注意病程，必须采取患者急性期血
清与恢复期血清 (双份血清) 进行血清学
试验。若第2次血清抗体滴度比第1次高
出4
2021/3/3
1.中和试验(neutralizing test,NT test)
•
是病毒在活体内或细胞培养中被特异性
抗体中和而失去感染性的一种试验。
•
中和抗体(netralizing antiwk.baidu.comodies,NTAb)
是作用于病毒表面抗原 (衣壳或包膜) 的抗体，
同种不同型病毒间一般无交叉，特异性高，而
且抗体在体内维持时间长。中和抗体阳性不一
定表示正在感染中，也可能因以前有过隐性感
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• 病毒 +鸡RBC = 凝集（血凝试验）
• 病毒 +特异性抗体 +鸡RBC=不凝集
•
（血凝抑制试验）
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四、病毒感染的快速诊断
胞膜上出现了血凝素(haemagglutinin,HA)， 具有吸附脊椎动物 (豚鼠、鸡、猴等) 红细胞 的能力，这一现象称红细胞吸附，常用来测 定具有HA的粘病毒与副粘病毒的增殖。若有 相应的抗血清，则能中和细胞膜上的HA， HAd不再发生，称红细胞吸附抑制试验。
2021/3/3
• 3.干扰现象(interference) • 某些病毒感染细胞时不出现CPE或其
第三章病毒感染的诊断与防治
第一节 病毒感染的诊断
常用的病毒学诊断方法包括： 病毒的分离鉴定 病毒的血清学检查 病毒蛋白和核酸的检测
2021/3/3
一、标本的采取与送检
• 应注意下列原则：
• 1.对本身带有杂菌 (如咽拭子、粪便) 或易 受污染的标本，要进行病毒分离培养时， 应使用抗生素。
• 2.因病毒在室温中易失去活性，标本应低 温保存并尽快送检。
• 3.血清学诊断标本的采取应在发病初期和 病后2～3w内各取1份血清，以便对比双 份血清抗体效价的动态变化。
2021/3/3
二、病毒的分离与鉴定
• (一)
• 1.动物接种 • 是最原始的病毒培养方法，根据病毒
种类不同，选择敏感动物及适宜接种部 位，如嗜 神经性病毒（狂犬病毒）可 接种于小鼠脑内，痘病毒可接种于家兔 角膜或皮内。
染所致。因此，中和试验适用于人群免疫情况
的调查，在临床诊断上较少使用。
2021/3/3
2.补体结合试验 (complement fixation
test,CF test)
• 用已知病毒可溶性(CF)抗原来检测病 人血清中相应(CF)抗体。CF抗原是病 毒的内部抗原，同种异型间常有交叉， 故特异性较中和试验低。但CF抗体出 现较早，消失较快，故CF阳性可作为 近期感染的指标。
② 有些病毒如麻疹病毒、CMV、RSV等 作用于细胞膜， 可使邻近的细胞相互融合，形成多核巨细胞或称融 合细胞。
③ 有些病毒 (如狂犬病病毒、麻疹病毒等) 可在培养 细胞中形成胞浆或核内的包涵体。
2021/3/3
2021/3/3
病毒培养时出现的CPE
• 2.红细胞吸附 (hemadsorption,HAd) • 流感或副流感病毒等感染细胞后，由于细
2021/3/3
• 2.50%组织细胞感染量 (TCID50)测定法 • 该方法是测定病毒能使50%的组织培养细胞
发生感染的最小量。一般是将病毒悬液作10倍 的系列稀释，分别接种细胞，经一定时间后观 察CPE、血细胞吸附等指标，以最高稀释度能 感染50%细胞的量为终点。最后用统计方法计 算出50%组织细胞感染量（ 50%tissue culture infectious dose,TCID50)。
2021/3/3
• 2.鸡胚培养 • 鸡胚对多种病毒敏感。一般采用孵化
9～14天的鸡胚，根据病毒种类不同， 将病毒标本 接种于鸡胚的不同部位， 最常用的鸡胚接种部位有：羊膜腔、尿 囊腔、绒毛尿囊膜和卵黄囊等。
2021/3/3
2021/3/3
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• 3.组织培养法 (tissueculture) 或细胞 培养 (cellculture)法
2021/3/3
(二) 病毒的数量与感染性测定
• 1.蚀斑测定
• 是一种检查和准确滴定病毒感染性的方法。将稀释 的病毒悬液加入单层细胞培养瓶中。病毒吸附后，再 覆盖一层融化的半固体营养琼脂，使病毒在单层细胞 培养中有限扩散。结果是每一个有感染性的病毒在单 层细胞中可产生一个局限性的感染灶。用活性染料 ( 如中性红) 染色，则活细胞着色，受病毒感染而破坏 的细胞不着色，形成肉眼可见的蚀斑(plaque)。每个 蚀斑是由一个感染性病毒颗粒形成的，称作蚀斑形成 单位 (plaque forming unit,PFU)。病毒悬液中的感染 性病毒量的滴度可用PFU／ml表示。
• 是将离体活组织块或分散的组织细胞 加以培养的技术总称，为病毒分离鉴定 中的最常用的基本方法。
2021/3/3
2021/3/3
病毒在培养细胞中增殖的指标
1. 细胞的变化
① 有些病毒在细胞内增殖时可引起特有的细胞病变， 称为细胞病变效应 (CPE)。常见的变化有细胞变圆、 聚集、坏死、溶解或脱落等。
他易于测出的变化(如HAd)，但能干扰 在其后感染的另一病毒的增殖。如风疹 病毒感染Vero细胞时CPE不明显，但它 能干扰后感染的埃可病毒 (ECHOV) 的 增殖，从而阻抑后者所特有的CPE。
2021/3/3
• 4.细胞代谢的改变 • 病毒感染细胞的结果可使培养液的pH
值改变，说明细胞的代谢在病毒感染后 发生了变化。这种培养环境的生化改变 也可作为判断病毒增殖的指标。