脑脊液标本的微生物学检验
05.脑脊液检验
脑脊液外观检验参考范围：无色、透明、不凝固。
临床评价：1．正常情况下脑脊液(CSF)为无色透明液体，水分占99%，不发生凝固。
这是由于存在血脑屏障，不但血液中的有形成分(红细胞、白细胞等)不能自由进入脑脊液(CSF)，而且血浆中的各种成分也需通过中枢神经系统脉络丛的选择才能出现于CSF中。
正常CSF中所含细胞数总数极少，蛋白等许多物质含量均较血浆中低。
2．病理情况下，由于血脑屏障因感染、炎症、外伤、肿瘤、阻塞等引起血脑屏障破坏，通透性增高，致使CSF的性状和成分发生改变。
(1)颜色改变。
1)红色：若明显混浊，常因CSF采集时穿刺损伤造成出血；蛛网膜下腔出血和脑出血时，CSF呈透明红色或微混；2)黄色(黄变症)：为CSF中含有变性的血红蛋白，见于陈旧性的蛛网膜下腔出血或脑出血，通常在蛛网膜下腔出血后4～8小时开始出现黄色，48小时最深，约3周左右消失，此为瘀滞性黄变症；还可因髓外肿瘤造成椎管梗阻或蛛网膜下腔粘连使CSF蛋白增高(>1.5g ／L)产生黄色，此外梗阻性黄变症。
尚可见于黄疸、结核性脑膜炎或高胡萝卜素血症等；3)乳白色：常见于脑膜炎球菌、肺炎球菌、溶血性链球菌等引起的化脓性脑膜炎；4)其他较少见的颜色改变：绿色，可见于绿脓杆菌脑膜炎；黑色，可见于黑色素瘤转移。
但脑脊液即使无色透明，也可见于病毒性脑膜炎、病毒性脑炎和运动神经元变性等疾病。
(2)透明度改变及出现凝块。
CSF、的透明度与含有的细胞和细菌数量多少有关。
当白细胞数大于200 ×106／L或红细胞数大于400×106／L时即可混浊；而凝块的出现与CSF 中的纤维蛋白原增多有关。
穿刺出血可出现凝块。
通常，化脓性脑膜炎因CSF中细胞数、纤维蛋白原量增高而明显混浊．且易在标本采集后1～2小时内出现凝块；结核性脑膜炎，呈毛玻璃样混浊，在12～24小时可形成薄膜；而病毒性脑膜炎、霉菌性脑膜炎、脑肿瘤时CSF可较清晰；脑血栓形成，脑栓塞时CSF多为无色透明；在脊髓肿瘤或蛛网膜下腔梗阻时，CSF可呈胶胨样凝固状态；神经梅毒的CSF可有絮状凝块。
脑脊液化学和免疫学检验及意义
脑脊液化学和免疫学检验及意义（1）蛋白质检查：正常脑脊液中蛋白质含量不到血浆蛋白的1%，主要为清蛋白。
1）蛋白质定性试验：①潘迪（Pandy）试验：脑脊液中蛋白质与苯酚结合成不溶性的蛋白盐而产生白色混浊。
②罗-琼试验：正常脑脊液球蛋白质含量很低。
正常定性试验均为阴性。
2）蛋白质定量试验：①磺基水杨酸（SSA）-硫酸钠为比浊法代表方法，特点是简便、快速，无需特殊仪器。
②染料结合比色法以丽春红S和考马斯亮蓝（CBB）法应用较多，CBB法快速、高灵敏度。
比色法的检测灵敏度及结果的重复性优于比浊法，且标本用量少，但对实验条件的pH 值要求较高。
3）参考值：成人，腰池200～400mg/L，脑池100～250mg/L，；脑室内50～150mg/L。
4）临床意义：脑脊液蛋白质含量随着年龄增加而升高。
在新生儿，由于血脑屏障发育尚不完善，脑脊液蛋白质相对较高，6个月后逐步降至成人水平。
脑脊液蛋白质含量见于：血屏障通透性增高性疾病：①脑膜炎：化脓性脑膜炎，蛋白质含量显著增高；结核性脑膜炎，中度增高；病毒性脑炎，轻度增高。
②出血性脑病：脑室及蛛网膜下腔出血，蛋白质含量中度增高。
脑脊液循环障碍：脑部肿瘤或椎管梗阻如脊髓肿瘤、蛛网膜下腔粘连脑脊液蛋白质含量增高。
在蛛网膜下腔梗阻性疾病，蛋白质含量增高到10g/L以上时，脑脊液外观呈黄色胶胨状，且有蛋白-细胞分离现象（Froin综合征），是蛛网膜下腔梗阻的脑脊液特征。
（2）葡萄糖测定：目前常用葡萄糖氧化酶法或己糖激酶法。
1）参考值：2.5～4.4mmol/L2）临床意义：脑脊液中葡萄糖含量与血糖浓度、血脑屏障的通透性及脑脊液中葡萄糖酵解程度有关。
脑脊液葡萄糖减低见于：中枢神经系统细菌性、真菌性感染：主要见于化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎及真菌性脑膜炎等。
当中枢神经系统发生感染性病变时，在病原微生物和破坏细胞释放的葡萄糖酵解酶的作用下，使脑脊液中葡萄糖含量降低。
在化脓性脑膜炎早期，葡萄糖含量即明显降低，疾病高峰期可为零。
临床微生物学检验的标本采集
临床微生物学检验的标本采集一、血液和骨髓细菌学检验标本的采集（一）适应症菌血症、败血症和感染性骨髓炎等感染菌的培养鉴定和药物敏感试验。
（二）病人准备1．凡怀疑菌血症和败血症的患者，采血培养时，应尽量在未使用抗菌素前采血，如已使用过抗菌素，应尽量选择抗菌素在体内浓度最低时采血，或在病人第二次使用抗菌素之前采集血培养标本。
2．应在病人发热期或寒颤时采集（三）标本采集1．血培养瓶领取：凭医嘱和检验申请单到检验科细菌室领取。
按照实际情况选择相应类型的血培养瓶：如灰色瓶盖为普通成人培养瓶；粉红色盖为儿童需氧菌培养瓶；紫色盖为厌氧菌培养瓶。
2．将患者信息录入相应的血培养瓶条码中，并在作好病人姓名、科别、床号等标识。
2．采集方法：严格消毒病人采血部位和血培养瓶口，抽一定量血液或骨髓后，无菌注入血培养瓶内，轻轻摇匀。
3．标本量：成人每次采血5~10ml，小儿采血3~5ml，骨髓2~3ml，采血量足够则阳性率高，反之阳性率减低。
（四）注意事项1．抽血、抽骨髓和接种时，须严格注意无菌操作，避免污染杂菌。
2．从抽血、抽骨髓到接种入瓶，动作要快，防止血液凝固。
3．成人不明原因发热、怀疑血流细菌感染时宜在不同部位抽血2套，每套2瓶（需氧、厌氧各一瓶）。
4．怀疑伤寒、亚急性细菌性心内膜炎及布鲁氏菌病的病人等，一般一日抽血三次培养，必要时需追加次数。
（五）标本送检和保存1．标本采集后应及时送检，一般不超过1h送交细菌室。
2．送检过程中应注意防止培养瓶打破或其它潜在性污染可能。
二、痰液或下呼吸道分泌物细菌学检验标本的采集（一）适应症肺炎、肺气肿、支气管炎、鼻窦炎、肺结核等感染菌的培养鉴定、药物敏感试验和抗酸菌检查。
（二）病人准备1．尽量在未使用抗菌素前留取标本。
准备好无菌标本容器，贴上条码、标明标识。
2．住院病人应留取清晨起床第一口痰。
为减少正常菌群的污染，嘱患者早上起床后用清水或生理盐水漱口，不要刷牙，除去鼻咽分泌物。
（三）标本采集1．一般病人用力咳出气管深处或肺部痰液，留于无菌标本容器内。
脑脊液检验
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化学检查
(1)乳酸脱氢酶(LDH)及其同工酶测定
LDH有5种同工酶形成: 即LDH1～LDH5
参考值：成人3Байду номын сангаас40u／L
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临床意义
化学检查
①细菌性脑膜炎与病毒性脑膜炎的鉴别： 细菌性脑膜炎：脑脊液中的LDH活性多增高，同工酶
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化学检查
(2)天门冬氨酸氨基转移酶(AST)测定 参考值： 5～20u／L 临床意义：
脑脊液中AST活性增高见于脑血管病变、中枢神 经系统感染、脑肿瘤、脱髓鞘病、颅脑外伤等。
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化学检查
(3)肌酸激酶(CK)测定： CK有3种同工酶，在脑脊液中同工酶全部是CK—BB
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标本采集
正常压力：80～180 mmH20，
若压力超过200mmH20，放出脑脊液量不应该超过2ml ，若压力低于正常低限可作动力试验，以了解蛛网 膜下腔有无阻塞。
将脑脊液分别收集于3只无菌试管内，每管1～2ml： ◆第一管作细菌学检查 ◆第二管作化学和免疫学检查 ◆第三管作细胞计数和分类 如怀疑为恶性肿瘤，另留一管作脱落细胞检查。
一致
变淡
离心观察上清液颜 呈淡红色或黄色 色
无色
上清液隐血试验 阳性
阴性
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黄色脑脊液，伴有血球（新鲜血）
14
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一般性状检查
(3)乳白色： 多因白细胞增多所致，见于化脓菌引起的化脓性脑
脑脊液标本的结果评价
脑脊液标本的结果评价脑脊液为一水样透明液体，包含在脑室和蛛网膜下腔内。
在生理情况下，血液和脑脊液之间有血－脑脊液屏障，阻碍各种微生物通过血液进入中枢神经系统，故正常人的脑脊液是绝对无菌的。
若在脑脊液中检出细菌，排除标本在采集和检验过程中造成的污染外，都应看做是病原菌。
2 病理情况在病理情况下，血－脑脊液屏障受到破坏，病原微生物及其产物进入脑脊液，引起中枢神经系统损害。
此时在脑脊液中可检出病原微生物。
化脓性脑膜炎可由多种细菌引起，其中脑膜炎奈瑟菌最为多见，引起的脑脊髓膜炎以流行性为特征。
在成人化脓性脑膜炎的病原菌中居第二位的是肺炎链球菌，占30%～50%，主要见于40岁以上成人，可以是原发性，也可以并发于肺炎链球菌性肺炎、中耳炎、乳突炎、鼻窦炎或心内膜炎，还可继发于颅骨骨折造成的蛛网膜下腔和鼻腔或鼻窦之间的沟通。
葡萄球菌和链球菌性脑膜炎多为继发性，前者多继发于败血症、局部病变和损伤等，临床上少见；后者多继发于耳鼻喉感染，尤以乳突炎和中耳炎多见。
在3个月～5岁儿童的细菌性脑膜炎中，最常见的致病菌是流感嗜血杆菌，占40%～60%，(而成人只占1%～3%)，常为急性原发性，以B型菌为多，该菌能产生TEM型β内酰胺酶，对青霉素有耐药性。
新生儿脑膜炎多由大肠埃希菌、b群溶血性链球菌和脑膜败血性黄杆菌引起，特别是早产婴儿，继发于败血症。
结核性脑膜炎是结核分枝杆菌经血行播散侵及脑膜引起，继发于1～5岁的小儿。
脑部外伤、神经外科手术和脊髓麻醉等引起的脑膜炎，病原菌通常为大肠埃希菌、变形杆菌、克雷伯菌、枸橼酸杆菌、不动杆菌和肠球菌。
脑脊髓分流术所致脑膜炎约有75%为表皮葡萄球菌感染。
腰椎穿刺、小脑延髓池穿刺等情况下发生的脑膜炎(接种性脑膜炎)，常为铜绿假单胞菌经医疗器械进入髓腔所致。
其他可引起脑膜炎的细菌较为少见，有卡他莫拉菌、沙门菌、沙雷菌、类志贺邻单胞菌、胎儿弯曲菌等，见于婴幼儿、老年人或机体免疫力减低的患者，有时继发于败血症。
关于微生物检验标本采集和运送
•
6.采用专用无菌容器收集标本。容器须灭菌处理，防止渗
漏，但不得使用消毒剂。标本中不可添加防腐剂。
•
7.采样后应立即送检，最好在2h内。如不能及时送检，应将标
本置于适当的储存环境待送，但不超过24小时。对可疑淋病奈瑟菌
、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌等对外界环境敏感的
苛养菌感染的患者标本应室温保存。当标本量小于1ml时应于15～
• 3.选择正确的解剖部位，并以适当的技术、方法与 容器收集足量的标本。
• 4.采样时应严格执行无菌操作，将污染可能降至最 低。
• 5.收集真正感染的病灶处的标本，且避免邻近区域 常居菌群的污染。
•
• 注意事项：
• 采样时机
•
抗生素使用前（停用抗生素3至5天或下次用药前）采样
• 采样方法
•
采集无菌部位的标本应严格无菌操作，非无菌部位尽量减少正
关于微Байду номын сангаас物检验标本 采集和运送原则
内容
• 1.微生物标本及常见致病菌 • 2.微生物检验标本采集和运送原则 • 3.图片展示：现场指导和培训
微生物标本及常见致病菌
• 1.血液标本血液标本的细菌培养是诊断菌血症 或败血病的基本方法。
• 正常人的血液是无菌的、如从患者血液中检出细 菌一般应视为病原菌(排除采集标本或具他操作 过程污染)，提示有菌血症或败血症，或心内膜 炎、心包炎、血源性骨髓炎。常见的病原菌主要 有金黄色或表皮葡萄球菌、链球菌(A、B群，肺 炎链球菌等)、肠球菌、产单核细胞李斯特菌、 脑膜炎奈瑟菌、伤寒及副伤寒沙门菌和厌氧菌等 。
• 2.骨髓标本正常人的骨髓是无菌的。
• 若从患者骨髓中检出细菌(排除污染)，提示细菌 性骨髓炎或菌血症、败血症。常见病原菌同血液
脑脊液的标本处理流程
脑脊液的标本处理流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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临床微生物学检验理论课：03常见类型标本病原体检测
导管相关性血流感染不保留导管
从独立的外周静脉无菌采集2套血培养， 无菌状态下取出导管并剪下5cm导管尖端或近心
端，进行Maki半定量平板滚动培养或者定量培养。
采血后在2h内送到检验科，立即放入血液培养仪，自动培养 并实时检测。如不能及时运送，则室温保存，不要放冰箱， 以免嗜血杆菌、奈瑟菌、链球菌冻死。
洋葱伯克霍尔德菌
6% 8%
9%
嗜麦芽寡养单胞菌 近平滑念珠菌
腐生葡萄球菌
白色念珠菌
热带念珠菌
产酸克雷伯菌
血液标本分离菌株种类及构成嗜 液水 化比气 沙单 雷%胞 菌菌
无乳链球菌
二、尿液标本病原菌检验
目的和意义
检测泌尿系统感染； 一般进行细菌和真菌培养、菌落计数和药敏； 离心后对沉渣涂片检查，革兰染色或抗酸染色； 也可用于淋球菌培养和涂片检查。
为细菌提供生长中心，提高生长 速度，提高检出率，一个BACTEC 血培养瓶的树脂作用表面积=5个 标准足球场的面积。
厌氧瓶，提高兼性厌氧菌检出率 帽子和标签纸左上方为黄色， “Standard Anaerobic/F”， 血液量3-10ml，8-10ml最佳， 不仅用于厌氧菌培养，由于营
养丰富，还可以大大提高兼性 厌氧菌的检出率； 穿刺液或中段尿等厌氧菌培养 也可用厌氧血培养瓶。
厌氧瓶提高血培养阳性率20%以上
7072份标本，同时需氧瓶和厌氧瓶血培养； 640份阳性，阳性率9%； 需氧瓶和厌氧瓶同时阳性，352份，占55%； 仅需氧瓶阳性，而厌氧瓶阴性，166份，占26%； 如仅用单瓶需氧瓶，阳性合计，518份，占81%； 仅厌氧瓶阳性，而需氧瓶阴性，122份，占19%； 所以强调每次采血“双瓶”（需氧瓶和厌氧瓶）。
为避免皮肤污染，采集时须严格消毒
脑脊液标本的微生物学检验医学PPT
采集后需密切观察患者有无头痛、恶心呕吐 等并发症，及时处理。
02
脑脊液微生物学检验方法
直接显微镜检查
直接显微镜检查
瑞氏染色法
通过直接观察脑脊液标本，可以初步 判断是否存在细菌、真菌或寄生虫等 微生物。
瑞氏染色法可以用于检查脑脊液中是 否存在真菌或寄生虫，如隐球菌、囊 尾蚴等。
革兰染色法
05
脑脊液微生物学检验的局限 性
检验方法的局限性
培养方法的限制
脑脊液微生物学检验主要依赖于培养方法，但有 些微生物可能难以在培养基上生长，导致漏检。
培养时间较长
培养方法需要一定时间才能得到结果，可能影响 患者的及时治疗。
培养特异性不高
培养方法对于某些相似菌种的区分能力有限，可 能出现误判。
微生物种类的局限性
诊断感染性疾病
脑脊液微生物学检验是诊断中枢神经 系统感染性疾病的重要手段，通过对 脑脊液中病原微生物的分离和鉴定， 可以确定感染的病原体类型，为临床 提供准确的诊断依据。
脑脊液微生物学检验还可以帮助判断 感染的严重程度，为制定治疗方案和 评估预后提供参考。
评估治疗效果
通过脑脊液微生物学检验，可以监测 治疗效果和评估病情变化。如果治疗 后脑脊液中病原微生物消失或数量显 著减少，说明治疗有效。
断病原菌的抗原成分。
抗体检测
抗体检测
通过检测脑脊液中免疫球蛋白的含量，可以间接判断是否存在感 染。
IgG和IgM检测
检测脑脊液中免疫球蛋白G（IgG）和免疫球蛋白M（IgM）的含 量，有助于判断感染的类型和病程。
补体结合试验
通过检测补体结合试验可以判断感染的程度和病程，为临床治疗提 供依据。
03
脑脊液标本的微生物学检验 医学
脑脊液标本细菌学检验
脑脊液标本细菌学检验1. 检验目的规范脑脊液标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2. 适用范围脑脊液培养3. 标本采集与运送3.1 标本采集：由临床医师以无菌要求做腰椎穿刺，抽取脑脊液2-3ml,盛于无菌容器中送检。
3.2 标本运送3.2.1 采集标本后立即送到细菌室，不能及时送检可置室温或保温，放置时间不应超过2h。
切勿放冰箱，否则影响检出率。
3.2.2 非细菌室工作时间，标本应送急诊化验室进行标本保温。
4. 检验步骤4.1 涂片检查：外观浑浊或脓样脑脊液直接涂片。
无色、透明的脑脊液，应3000rpm/min离心10-15min后取沉淀物涂片。
涂片后革兰染色、墨汁染色、抗酸染色。
镜检阳性应立即以电话的方式将镜检结果告知临床医生，并登记到危急值登记本。
4.2 接种：在生物安全柜中用一次性无菌接种环挑取浑浊脑脊液或离心沉淀的沉淀物按照分区划线的方法接种血平板和巧克力平板。
血平板和巧克力平板需要预先置于室温平衡30min。
4.3 培养：血平板、巧克力平板置35℃二氧化碳培养箱培养18-48h。
4.4 培养结果观察4.4.1 培养24h无菌生长需继续培养24h,如仍然无菌生长，则报告“无菌生长”。
4.4.2 培养出细菌，挑取单菌落革兰染色镜检，将镜检结果以电话方式告知临床医生，并登记到危急值登记本。
4.4.2.1 血平板上菌落呈浅灰色、不溶血，或者菌落呈粘稠状，菌落附近呈灰绿色。
在巧克力平板上的菌落光滑整齐、圆形凸起、半透明、露滴状菌落。
革兰染色镜检为肾形或咖啡豆装的革兰阴性双球菌，应怀疑为脑膜炎奈瑟菌，常见于脓性脑脊液。
4.4.2.2 血平板上呈现草绿色溶血、灰色、圆形、略扁的菌落，同时革兰染色为革兰阳性链球菌，疑为肺炎链球菌。
4.4.2.3 镜下可见革兰阴性小杆菌，多形性，巧克力平板可见较多的透明、湿润革兰阴性杆菌，做卫星试验。
血平板卫星+，MH卫星-，报告“流感嗜血杆菌”。
4.4.2.4 新生儿脑膜炎多由大肠埃希菌、B群溶血性链球菌和脑膜败血黄杆菌引起的，特别是早产婴儿。
初级检验士考试(微生物学检验)讲义第二十九章临床标本微生物检验概述
临床标本微生物检验概述● 考点临床标本微生物学检验（血液、脑脊液、痰、尿液、粪便、性传播疾病、创伤）（1）常见病原菌（2）标本采集及运送（3）检验方法（4）临床意义一、临床标本细菌检验的基本程序二、血液感染◆正常人的血液是无菌的。
◆菌血症是指在血液中可检测到细菌，包括一过性和持续性在血中存在。
◆败血症是指病原菌侵入血流后，在其中大量繁殖并产生毒性产物，引起全身中毒症状。
◆脓毒血症是指化脓性细菌败血症时，细菌通过血流扩散至全身其他组织或器官，产生新的化脓性病灶。
（一）常见病原菌（二）标本采集1.采血时间和频率◆病人发热初期或高峰期采集，或在未用抗生素前采集。
但怀疑细菌性心内膜炎时，血培养不少于三次。
2.采血量◆一般为静脉采血，成人采血量10～20ml，儿童3～5ml，婴儿1～2ml。
3.床边直接注入血液培养基，否则用SPS抗凝剂送检，不得用EDTA，枸橼酸钠抗凝。
4.检查血管内导管有无细菌污染，可无菌操作，剪下导管5cm远侧段，置无菌容器内送检。
（三）微生物分离培养和鉴定1.培养基的选择◆用自动血培养分析仪时选用相应的血培养瓶，如需氧＋厌氧，需氧＋高渗等。
2.分离和鉴定当观察有细菌生长时或血培养仪阳性报警时，应及时作如下检验：◆（1）涂片染色镜检，结果及时与临床联系；◆（2）转种血平板、巧克力平板、厌氧血平板或其他特殊培养基等分离培养纯菌再进行鉴定；◆（3）同时做药敏试验，结果及时报告临床作治疗参考。
（四）报告方式阴性结果：◆7d报告无细菌生长。
◆疑为亚急性细菌性心内膜炎、布鲁菌病、厌氧菌血症、真菌血症时，血培养至少连续培养2～3周，仍无细菌生长者可报告为阴性。
阳性结果——三级报告方式：◆第一级报告告知标本已出现阳性并报告直接细菌涂片结果，同时做初步药敏试验；◆第二级是报告初步药敏结果，同时做正式鉴定和药敏试验；◆第三级报告正式鉴定和药敏试验结果。
（五）临床意义◆葡萄球菌菌血症常由疖、痈、脓肿及烧伤创面等原发感染灶继发，也可由呼吸道感染引起。
160410脑脊液标本的微生物学检验
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第三十页，共124页。
中枢神经系统感染标本的细菌、 真菌学检查
（一） 标本采集
标本采集后应在常温下立即送检，培养脑膜炎奈 瑟菌、流感嗜血杆菌等苛养菌时，应将标本置于
35℃保温送检。用于常规细菌检测的脑脊液 量应为1ml或大于1ml；用于检测抗酸菌的脑 脊液量应为5ml或大于5ml。
中枢神经系统感染病 常见病原微生物
中枢神经系统感染较为少见，但是脑和脊髓一 旦受到感染则后果严重。患者即使免于死亡， 也可能遗留神经性损伤。快速的鉴别诊断与早 期治疗均有助于降低本病的死亡率和致残率。
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6第六页Βιβλιοθήκη 共124页。中枢神经系统感染病 常见病原微生物
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主要为单个核细胞，淋巴细
胞与单核细胞之比为7:3.
①标本采集后应在1h内进行细胞计数。标本放置过久，细胞可能凝集
成团或被破坏，影响计数结果。
②标本必须混匀后方可进行检查，否则会影响计数结果。
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29
第二十九页，共124页。
脑脊液
蛋白定量：0.2～0.45g/L； 葡萄糖：2.5～4.5mmol/L， 脑脊液血浆葡萄糖比率0.3～0.9； 氯化物：120～130mmol/L。
尖端相背，菌体周围有明显荚膜，则提示肺
炎链球菌感染；若为革兰阴性、多形态，
短小球杆状或丝状，可同时做荚膜肿胀试
验，进行快速鉴定,则提示流感嗜血杆菌感
染；若为革兰阳性短小杆菌，V字形或成双
排列，出现于大量单核细胞之间，则提示产
单核细胞李斯特菌感染。
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脑脊液标本微生物检验
• 1. 涂片检查 (1) 一般细菌涂片检查： 例如：革兰阴性、凹面相对的球菌， 可能是脑膜炎奈瑟菌；链状排列的革兰阳 性球菌；长丝状等多形态性的革兰阴性杆 菌，可能是流感嗜血杆菌。 (2)结核分枝杆菌涂片检查 抗酸染色 (3)新生隐球菌涂片检查 墨汁染色 （4）真菌培养 22度和35 度培养
• 2. 报告方式 • （1）涂片检查：革兰染色：查找一般细菌， 尤其脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌和 链球菌 多见。 • 革兰染色镜检报告“C内（外）G-双球菌， 形似脑膜炎奈瑟菌”“G+双球菌，形似肺 炎链球菌” • 抗酸染色报告：“找到抗酸• 培养3天，仍无菌生长者报告 “培养3天无细菌生长”。 • 查见细菌报告"检出XX细菌"， 报告菌名和药敏结果。
操 作 流 程
（二）、脑脊液标本
• 1、腰穿法采集脑脊液3—5ml打入血培养 瓶中或放入无菌试管中，立即送检； 2、注意保温，不可置冰箱保存，因为会使 病原菌死亡，尤其是脑膜炎奈瑟氏菌、肺 炎链球菌及流感嗜血杆菌； 3、脑脓肿吸出物尚须检测厌氧菌和寄生虫 • 培养基选择：普通血培养瓶、厌氧血培养 瓶、血平皿、中国蓝平皿、流感嗜血杆菌 平皿。
操 作 流 程 图
（二）检验方法和操作流程
• 1. 涂片检查 (1) 一般细菌涂片检查： 例如：革兰阴性、凹面相对的球菌，可能 是脑膜炎奈瑟菌；链状排列的革兰阳性球菌； 长丝状等多形态性的革兰阴性杆菌，可能是流 感嗜血杆菌。 (2)结核分枝杆菌涂片检查 (3)新生隐球菌涂片检查 • 2. 分离培养 • 3. 报告方式 培养48小时，仍无菌生长者报
微生物学检验第版不动杆菌与脑脊液ppt课件
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注意事项
3、脑膜炎奈瑟菌对外界环境抵抗力差， 特别对寒冷和干燥敏感，因此要注意将标本 在25-37℃保温，不可放置冰箱冷藏或低温 保存。防止标本干燥和避免日光直接照射。
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具体实验操作
第一天的主要操作：
一、脑脊液标本 分区画线接种到血平板、巧克力平板、中国蓝平板 二、提供的菌落
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THANK
YOU
SUCCESS
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脑脊液标本常见的分离菌
革兰阳性细菌 革兰阴性细菌
脑膜炎奈瑟菌、卡他 布兰汉菌 流感嗜血杆菌、大肠 埃希菌、产气肠杆菌、 肺炎克雷伯菌、变形 杆菌、铜绿假单胞菌、 不动杆菌、脑膜炎败 血黄杆菌、类杆菌 钩端螺旋体
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球菌
金黄色葡萄球菌、化脓性 链球菌、B群链球菌、肺 炎链球菌、消化链球菌
KIA: K/K 动力： 枸櫞酸盐利用: + 注意与形态相似的奈瑟菌鉴别；注意 与不分解糖的产碱杆菌鉴别
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目的要求
1. 掌握脑脊液标本的细菌学检验和报告方 法。 2. 掌握不动杆菌的培养特征、主要微生物 特性及鉴定方法。
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器材和试剂
1、标本：脑脊液标本 2、菌种：不动杆菌 3、培养基：血平板、中国蓝平板、巧克 力平板、克氏双糖斜面培养基、半固体培 养基、非发酵菌微量生化管。
取出标本分离培养的血平板、巧克力平 板、中国蓝平板观察平板上的菌落形态、 颜色
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具体实验操作
第二天的主要操作：
2.
观察半固体培养基
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具体实验操作
检验科脑脊液常规检测标准操作规程
检验科脑脊液常规检测标准操作规程1.【目的】为了使脑脊液常规检验方法标准化，特制定本规程。
2.【职责】2.1实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.2本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
3.【样本类型及实验前准备】3.1样本类型：新鲜脑脊液3.2患者准备：患者处于安静状态精神、体力、情绪等因素的影响较小。
3.3容器添加剂类型：可用EDTA盐抗凝3.4实验试剂：苯酚(饱和石碳酸溶液)3.5标本的采集和保存3.5.1腰椎穿刺成功后立即测定脑脊液压力，然后留取脑脊液标本于3个无菌试管，每个试管1-2ml。
第一管做病原微生物学检验，第二管做化学和免疫学检验，第三管做理学和细胞学检验。
标本采集后立即送检，并于1h内检验完毕。
因放置过久，可造成细胞破坏、葡萄糖等物质分解、细菌溶解等，影响检验结果。
脑脊液标本应尽量避免凝固和混入血液。
若混入血液应注明，进行细胞计数时应做校正。
3.5.2收到标本后应立即检验。
久置可致细胞破坏，影响细胞计数及分类检查；葡萄糖含量降低；病原菌破坏或溶解。
3.5.3细胞计数管应避免标本凝固，遇高蛋白标本时，可用EDTA盐抗凝。
4.【测定原理】脑脊液中球蛋白与苯酚结合，可形成不溶性蛋白盐而下沉，产生白色浑浊或沉淀，即潘氏（Pandy）试验。
5.【操作步骤】5.1一般性状.：主要观察颜色与透明度，可记录为水样透明（白细胞200/μl或红细胞400/μl 可致轻微混浊）白雾状混浊，微黄混浊、绿黄混浊、灰白混浊等。
颜色①红色如标本为血性、为区别珠网膜下隙出血或穿刺损伤，应注意以下情况。
将血性脑脊液使管离心沉淀（1500r/min），如上层液体呈黄色，隐血试验阳性，多为珠网膜下隙出血，且出血时间已超过4h，约90%患者为12h内发生出血。
如上层液体澄清无色，红细胞均沉管底，多为穿刺损伤或因病变所致的新鲜出血。
红细胞皱缩，不仅见于陈旧性出血，在穿刺外伤引起出血时也可以见到。
脑脊液常规检查及注意事项
脑脊液常规检查及注意事项脑脊液常规是临床上一种常见的检查项目之一，它主要包括一般性状检查（外观）、蛋白定性（潘氏试验）、蛋白质定量、细胞计数和细胞分类、细胞学、糖定性、葡萄糖定量测定、氯化物定量测定、微生物学、等检查内容。
脑脊液是由脑室内脉络丛产生的一种无色透明的液体，它循环流动于脑和脊髓表面，经脑内静脉系统与体循环相关联，一般在正常情况下脑脊液呈无色透明水样液体，不凝结，葡萄糖定性阳性，蛋白定性阴性。
1.脑脊液检查的一般性状检查：脑脊液一般性状检查是对颜色，透明度，凝固物，压力进行检查，以便对疾病的诊断。
从最基本最容易辨别的颜色来看，如果脑脊液颜色是红色的，其原因主要一般是由于穿刺损伤出血、蛛网膜下腔或脑室出血引起的。
如果脑脊液的颜色是黄色的，那么造成黄色的主要原因可能是由于蛛网膜下腔出血、胆红素增高、椎管阻塞、多神经炎、脑膜炎等等。
当患者的脑脊液呈现白色或灰白色居多的时候，那么可能是由于白细胞增加所致常见于化脓性脑膜炎；而当脑脊液呈现褐色或黑色时，则很有可能是因为脑膜黑色素瘤的原因造成的；有时候会患者的脑脊液会出现微绿色，这种情况通常常见于铜绿假单胞菌、肺炎链球菌、甲型链球菌引起的脑膜炎等。
因此可以通过颜色、透明度、凝固物等不同的状态来区分辨别，很好的帮助患者尽快找准病因，通过检查的数据找到患者的主要病因，让患者可以尽快对症下药的治病。
二、脑脊液蛋白定性检查：一般情况下脑脊液中的蛋白质含量大大低于血液中的蛋白质，当中枢神经系统发生病变的时候，病变组织是可以直接释放出蛋白质的，而血浆中的各种蛋白质容易突破血脑屏障进入脑脊液，因此脑脊液蛋白定性检查可反映中枢神经系统的疾病状态，是反映患者病症状态的一面对照镜。
三、脑脊液细胞计数和细胞分类检查：患者的红细胞和白细胞的计数是否正常，是可以及时判断患者的身体状态的，而细胞计数需要注意新型隐球菌和白细胞、红细胞的区别。
目前医学临床中会通过全自动血细胞分析仪测定脑脊液细胞数，根据全血功能的测定结果对脑脊液的细胞计数有一个更加全面的分析数据。
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金胺“O”染色、墨汁染色 （2）分离培养 培养基选择、菌落性状、生
化鉴定
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中枢神经系统感染病
中枢神经系统（Central nervous system，CNS）
感染系指病原微生物侵犯CNS实质、被膜及血管等
引起的急性或慢性炎症性（或非炎症性）疾病。
畏寒、头疼、烦躁、惊厥、 特菌
喷射性呕吐、意识障碍等中 毒症状。脑膜刺激征阳性。。
B群链球菌
大肠埃希菌
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结核性脑膜炎常见临床特征 及其细菌
结核性脑膜炎起病缓慢，早 期有低热、盗汗、食欲不振、
结核分枝杆菌
恶心、便秘、易激动等症状。
1~2周后病情加剧，出现典
型的脑膜刺激征。部分患者
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中枢神经系统感染病
可传播性海绵样脑病朊病毒 疾病，是人和动物共患的一 类遗传性、传染性和散发性 的中央神经系统退行性脑病， 最终可以导致患者死亡，它 能在人和动物中进行传染
克-雅病潜伏期长，最初临 床症状表现在精神和感觉方 面，继而出现共济失调，进 一步发展为肌肉痉挛并伴有 痴呆，最终导致死亡。发病 年龄多在50岁以上。
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中枢神经系统感染病 常见病原微生物
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中枢神经系统感染 的一般临床特征
中枢神经系统感染除可出现与其他急性 感染相似症状如：发热、不适、食欲不 振、恶心、乏力外，还可出现头疼、喷 射性呕吐及颈强直症状脑膜刺激征。
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中枢神经系统感染 的一般临床特征
中枢神经系统感染病
一般实验室检查
脑脊液常规检测项目包括：①脑脊液的外 观检查（颜色、透明度、薄膜及凝块）； ②脑脊液有形成分检查；③脑脊液细菌直 接涂片检查；④脑脊液蛋白定性；⑤脑脊 液蛋白定量；⑥脑脊液葡萄糖定量（需同 时比较脑脊液和血清中的葡萄糖水平）； ⑦脑脊液氯化物测定
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体检时，患者克氏征（Kernig征）和布氏征 （Brudzinski征）阳性。
颅内压升高时，患者出现头疼的症状，平躺 后疼痛加剧。颅内压增高严重者易出现脑疝。
除此之外，患者亦可出现意识障碍、视乳头 神经水肿等临床表现。
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中枢神经系统的主要感染性疾病 及其常见临床特征
脑膜炎
新生隐球菌
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病毒性脑炎常见临床特征
及其病毒
病毒性脑炎 急性发病，可有上呼吸道感染如头痛、 乏力、肌痛等前驱症状。记忆力下降、计算力及 定向力下降等智力减退症状。淡漠、易激动、缄 默等精神症状。嗜睡、昏睡、甚至昏迷等意识障 碍。偏瘫、抽搐、震颤等神经系统局灶症状或体 征。
单纯疱疹病毒、乙型脑炎病毒、柯萨奇病 毒、埃可病毒肠道病毒70、71 腮腺炎病毒、 狂犬病病、毒麻疹病毒、风疹病毒、淋巴 细胞性脉络丛脑膜炎病毒、朊粒
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慢病毒性脑炎和脑病 常见临床特征及其病毒
亚急性硬化性全脑炎较为罕见，多见于儿童及 少年的神经系统疾病。发病隐匿，根据病程演 变及临床特征分为如下四期：行为精神障碍期； 运动障碍期；昏迷角弓反张期；大脑皮质功能 丧失期
进行性风疹性全脑炎早期表现为学习成绩下降， 反应迟钝，成痴呆状。小脑共济失调。患者无 头痛、发热、颈强直等感染的表现。
化脓性脑膜炎 结核ห้องสมุดไป่ตู้脑膜炎 新生隐球菌性脑膜炎
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化脓性脑膜炎常见临床特征 及其细菌
化脓性脑膜炎 本病是由各种化脓性细菌感
脑膜炎奈瑟菌
染引起的脑膜炎症。软脑膜 肺炎链球菌
和蛛网膜因细菌感染而发生 流感嗜血杆菌感
化脓性改变，并使脑脊液产 染
生炎症性变化起病急，高热、 产单核细胞李斯
脑脊液标本微生物学检验
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主要内容
中枢神经系统感染病常见病原微生物 与主要临床特征
脑脊液标本的采集、运送与外观观察 脑脊液标本的细菌学检验程序
病毒性脑炎病原学检查原则
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主要内容
化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、新生隐球菌 性脑膜炎的病原学检查方法与临床意义
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中枢神经系统感染病
可传播性海绵样脑病
库鲁病起病隐匿，以小脑 受损为主。表现为下肢颤 抖，行走困难，共济失调 等。依病程发展分为三个 阶段即可行动期、静坐期 和终期。
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中枢神经系统感染病
一般实验室检查
诊断中枢神经系统感染的一般实验室检查 包括外周血常规检查和脑脊液检查。其中 最重要的就是通过腰穿术采集脑脊液标本 进行的脑脊液检查。正确的腰穿术对脑膜 炎患者无任何危险，但若是怀疑患者脑脓 肿或颅内压增高，则应避免腰椎穿刺。
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不同病原体所致中枢神经系统感染 的早期脑脊液标本检查结果
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中枢神经系统感染病
一般实验室检查
血常规 白细胞计数
明显增高：化脓性感染，且以中性粒细胞为 主，可出现核左移
正常或略微增高：病毒或结核分枝杆菌感染
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中枢神经系统感染病
实验室检查
脑脊液
一般性状检查 细胞计数检查 化学检查 病原生物学检查
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中枢神经系统感染病
一般而言，微生物难以侵入中枢神经系统， 其周围不仅具有坚固的骨骼，亦存在特殊的 毛细血管循环供养。这种毛细血管微循环为 非渗漏性血管，若非局灶性炎症，抗生素也 难以进入其中。
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中枢神经系统感染病 常见病原微生物
中枢神经系统感染较为少见，但是脑和脊髓 一旦受到感染则后果严重。患者即使免于死 亡，也可能遗留神经性损伤。快速的鉴别诊 断与早期治疗均有助于降低本病的死亡率和 致残率。
可出现意识障碍、抽搐、瞳
孔改变等。若脑神经受损则
可有眼睑下垂、面瘫等。
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新生隐球菌性脑膜炎 常见临床特征及其细菌
新生隐球菌性脑膜炎亚急性起病， 病初可表现为轻度间歇性头痛，此 后头痛逐渐呈爆裂样剧痛、常伴有 恶心、喷射性呕吐、多数患者有发 热、精神异常。1/3患者有意识障 碍，表现为嗜睡、瞻望、昏迷等。 脑膜刺激征明显，常有多颅神经受 损的表现，以视神经受累最多。少 数患者有脑疝形成最后死亡。