细菌的分离培养
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2. 物体表面细菌的检查：
取无菌棉棒在无菌盐水中浸湿，再在管壁上挤干 水。 将湿棉棒擦拭室内物体表面（如桌、椅、笔、水 池等）取材。 取培养基1个，将标本轻轻涂抹在培养基表面，且 勿划破培养基。 标记后送孵箱培养。
细菌分布试验
3.空气细菌检查：
取培养基1个，放在实验室的适当位置打开盖， 置空气中暴露 20分钟。 标记好后放孵箱中培养，下次实验看结果。
碘酒酒精等。 （每人1小号普通平板） 步骤： 1.手指皮肤消毒前后细菌的检查： 取培养基1个，在底部用记号笔标记消毒前及消毒后。 实验者在标有消毒前的培养基表面用待检手指画十字。
用碘酒，酒精消毒手指皮肤后，再在标有消毒后的部分画十字。
贴好班级姓名标签，送孵箱培养，下次课看结果。
细菌分布试验
实验报告二
细菌的分布实验； 咽拭子血平板培养
目的， 材料， 步骤， 结果记录（下次课看结果） 讨论： 1. 本次咽拭子血培养结果说明什么？ 2. 本次咽拭子血培养的主要细菌是什么？其它对人体健康 有何影响？
平板划线法（又称分离培养法）
平板划线的方法有 连续曲线划线法 间断划线法 分区划线法 分格划线法
其中以分区划线法与曲线划线法较为常用。
C.步聚（连续间断划线法）：
1.烧灼接种环，待冷（约3-5秒种），取一环混合菌液。 2.左手抓握底朝上的琼脂平板，反转过来使平板盖朝上（如图2-1）并靠近 火焰周围。右手持接种环在琼脂培养基表面的12点钟处，涂一薄膜。再 烧灼接种环，同时将平板倒置桌上。 3.左手如上抓握琼脂平板，待接种环冷却后（接种环是否冷却，可将其置 于靠平板边的琼脂表面，如琼脂熔化，则需再冷却）经过薄膜作连续划 线，划线时要用腕力轻轻地滑行，接种环面与琼脂表面成30-40度角，划 线要密但不重叠，每次要划至平板的边缘。如此划至琼脂的1/3。此时再 烧灼接种环，待冷后，重复前次末端2-3根线再向下连续划线至琼脂的 2/3 。烧灼接种环，待冷后，重复前次末端2-3根线再向下连续划线完琼脂。 然后将平板倒置桌上。烧灼接种环。 4.在平板的底玻璃上用蜡笔（或小纸片）注明接种的菌名、接种者姓名、 班、组、日期等。倒置于37℃培养箱中培养。 5.24小时培养后取出，观察各种菌落。注意其大小、形态、边缘、表面、 透明度、颜色等。
实验二 细菌的分布和分离接种
1.示教：
a.紫外线杀菌试验； b.噬菌体溶菌试验 c.细菌的变异现象
2.自做:
a.细菌的分离接种技术 b.细菌的分布实验 c.咽拭子血平板培养（新开实验）
3. 实验报告2：细菌的分布实验，咽拭子血 平板培养
示 教： a.紫外线杀菌试验； b.噬菌体溶菌试验 c.细菌的变异现象
紫外线杀菌的原理
波长为240-300nm的紫外线有 杀菌作用，其中波长为256nm 的紫外线效果最好。其杀菌原 理是此波长范围的紫外线可被 细菌的DNA 吸收，并使相邻的 两个胸腺嘧啶形成二聚体从而 损伤细菌的DNA。
细菌分布试验
目的：通过实验使学生们认识到微生物广泛存在于自然界
材料：普通琼脂平皿，无菌棉棒，无菌生理盐水，
2 细菌的分离培养，纯种细菌接种技术
A 细菌的分离培养技术
a 目的：使学生掌握细菌的分离培养技术及其作用 细菌广泛存在于自然界、且种类多，被检标本如粪便、痰、脓、等 常含一种以上的细菌，临床上要诊断患者是哪一种细菌感染致病，或 我们要专门研究某种细菌，就必须得到细菌的纯培养，要达此目的首 先必须将混杂的细菌分离。 细菌的分离培养技术有多种，常用的有平板划线法和倾注平板法。 b材料: 1.菌种：葡萄球菌和大肠杆菌混合菌液 2.培养基：普通琼脂平板（每人1普通平板） 3.其它：接种环，酒精灯等。
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图2-1 平板培养基的握持法
图2-2 连续间断划线法（左）和分区划线法（右）示意 图
图2-3 平板划线法
图2-4 培养后菌落散布示意图
3.咽试子的血平板培养
a目的: 证实咽部和扁桃体有无细菌存在。 b材料： 咽拭子培养管、血琼脂平板（1人1个）、酒精灯、接种环、 无菌棉签等 c步骤: 1. 取一无菌棉签， 2. 另取两只棉签压舌，用棉签越过舌根到达咽后壁或悬雍 垂后侧或咽喉部， 发红、灰白色可疑假膜部位，反复涂 抹数次后小心退出，拭子退出时注意 避免接触口腔黏膜、 舌头等部位。 3. 将所取拭子在血平板靠近边缘处涂抹。 4. 取接种环，烧灼灭菌，从涂抹标本处开始，三段式分离 划线接种法划线， 每划一段要烧灼灭菌。 5. 做好标记（姓名，咽拭子），37 ℃，培养24h。
取无菌棉棒在无菌盐水中浸湿，再在管壁上挤干 水。 将湿棉棒擦拭室内物体表面（如桌、椅、笔、水 池等）取材。 取培养基1个，将标本轻轻涂抹在培养基表面，且 勿划破培养基。 标记后送孵箱培养。
细菌分布试验
3.空气细菌检查：
取培养基1个，放在实验室的适当位置打开盖， 置空气中暴露 20分钟。 标记好后放孵箱中培养，下次实验看结果。
碘酒酒精等。 （每人1小号普通平板） 步骤： 1.手指皮肤消毒前后细菌的检查： 取培养基1个，在底部用记号笔标记消毒前及消毒后。 实验者在标有消毒前的培养基表面用待检手指画十字。
用碘酒，酒精消毒手指皮肤后，再在标有消毒后的部分画十字。
贴好班级姓名标签，送孵箱培养，下次课看结果。
细菌分布试验
实验报告二
细菌的分布实验； 咽拭子血平板培养
目的， 材料， 步骤， 结果记录（下次课看结果） 讨论： 1. 本次咽拭子血培养结果说明什么？ 2. 本次咽拭子血培养的主要细菌是什么？其它对人体健康 有何影响？
平板划线法（又称分离培养法）
平板划线的方法有 连续曲线划线法 间断划线法 分区划线法 分格划线法
其中以分区划线法与曲线划线法较为常用。
C.步聚（连续间断划线法）：
1.烧灼接种环，待冷（约3-5秒种），取一环混合菌液。 2.左手抓握底朝上的琼脂平板，反转过来使平板盖朝上（如图2-1）并靠近 火焰周围。右手持接种环在琼脂培养基表面的12点钟处，涂一薄膜。再 烧灼接种环，同时将平板倒置桌上。 3.左手如上抓握琼脂平板，待接种环冷却后（接种环是否冷却，可将其置 于靠平板边的琼脂表面，如琼脂熔化，则需再冷却）经过薄膜作连续划 线，划线时要用腕力轻轻地滑行，接种环面与琼脂表面成30-40度角，划 线要密但不重叠，每次要划至平板的边缘。如此划至琼脂的1/3。此时再 烧灼接种环，待冷后，重复前次末端2-3根线再向下连续划线至琼脂的 2/3 。烧灼接种环，待冷后，重复前次末端2-3根线再向下连续划线完琼脂。 然后将平板倒置桌上。烧灼接种环。 4.在平板的底玻璃上用蜡笔（或小纸片）注明接种的菌名、接种者姓名、 班、组、日期等。倒置于37℃培养箱中培养。 5.24小时培养后取出，观察各种菌落。注意其大小、形态、边缘、表面、 透明度、颜色等。
实验二 细菌的分布和分离接种
1.示教：
a.紫外线杀菌试验； b.噬菌体溶菌试验 c.细菌的变异现象
2.自做:
a.细菌的分离接种技术 b.细菌的分布实验 c.咽拭子血平板培养（新开实验）
3. 实验报告2：细菌的分布实验，咽拭子血 平板培养
示 教： a.紫外线杀菌试验； b.噬菌体溶菌试验 c.细菌的变异现象
紫外线杀菌的原理
波长为240-300nm的紫外线有 杀菌作用，其中波长为256nm 的紫外线效果最好。其杀菌原 理是此波长范围的紫外线可被 细菌的DNA 吸收，并使相邻的 两个胸腺嘧啶形成二聚体从而 损伤细菌的DNA。
细菌分布试验
目的：通过实验使学生们认识到微生物广泛存在于自然界
材料：普通琼脂平皿，无菌棉棒，无菌生理盐水，
2 细菌的分离培养，纯种细菌接种技术
A 细菌的分离培养技术
a 目的：使学生掌握细菌的分离培养技术及其作用 细菌广泛存在于自然界、且种类多，被检标本如粪便、痰、脓、等 常含一种以上的细菌，临床上要诊断患者是哪一种细菌感染致病，或 我们要专门研究某种细菌，就必须得到细菌的纯培养，要达此目的首 先必须将混杂的细菌分离。 细菌的分离培养技术有多种，常用的有平板划线法和倾注平板法。 b材料: 1.菌种：葡萄球菌和大肠杆菌混合菌液 2.培养基：普通琼脂平板（每人1普通平板） 3.其它：接种环，酒精灯等。
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图2-1 平板培养基的握持法
图2-2 连续间断划线法（左）和分区划线法（右）示意 图
图2-3 平板划线法
图2-4 培养后菌落散布示意图
3.咽试子的血平板培养
a目的: 证实咽部和扁桃体有无细菌存在。 b材料： 咽拭子培养管、血琼脂平板（1人1个）、酒精灯、接种环、 无菌棉签等 c步骤: 1. 取一无菌棉签， 2. 另取两只棉签压舌，用棉签越过舌根到达咽后壁或悬雍 垂后侧或咽喉部， 发红、灰白色可疑假膜部位，反复涂 抹数次后小心退出，拭子退出时注意 避免接触口腔黏膜、 舌头等部位。 3. 将所取拭子在血平板靠近边缘处涂抹。 4. 取接种环，烧灼灭菌，从涂抹标本处开始，三段式分离 划线接种法划线， 每划一段要烧灼灭菌。 5. 做好标记（姓名，咽拭子），37 ℃，培养24h。