环境工程微生物学实验
环境工程微生物学实验
（二)过氧化氢酶的定性测定
1．将配制的斜面培养的枯草杆菌和大肠杆菌各1支 放在试管架上。 2．用滴管吸取过氧化氢滴加入两管菌种斜面上，有 气泡产生的为接触酶阳性(有过氧化氢酶)，无气 泡产生的为接触酶阴性(无过氧化氢酶)。 3．分析结果，把所观察到的现象记录下来，进行分 析。
实验作业： 记录实验结果，并进行分析。
实验二 活性污泥中原生及微型后生 动物观察和数量的测定
实验目的
测定活性污泥法曝气池混合液中微型动物的数目。
实验原理
测定微生物数量方法很多，通常采用的有显微 镜直接计数法、平板计数法和光电比浊计数法。 显微镜直接计数法 将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有 确定面积和容积的载玻片上，又称微型动物计数板， 于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方 法。
实验作业
绘制曲线：以细菌悬液的光密度值(OD)为纵坐标， 培养时间为横坐标，绘出大肠杆菌在正常生长、加 酸处理和加富培养三种条件下的生长曲线。
实验五 细菌淀粉酶和过氧化氢酶的 定性测定
实验目的
通过对淀粉酶和过氧化氢酶的定性测定加深对酶和 酶的作用的感性认识。
仪器和材料
1．试管(15×150毫米)4支、试管架1个、培养 皿(90毫米)3套、接种环。 2．肉膏胨淀粉琼脂培养基l瓶(约50毫升)。 3．革兰氏碘液1小瓶(滴瓶)、3％～10％过氧 化氢1小瓶(滴瓶)。 4．枯草杆菌和大肠杆菌斜面各一支。
（二）查氏培养基（培养霉菌）
蔗糖 30g K2HPO4 1g KCl 0.5g NaNO4 2g MgSO4· 7H2O 0.5g FeSO4· 7H2O 0.01g 水 1000mL pH 自然 灭菌条件：0.072Mpa（1150C，15~20min）
环境工程微生物学试验
将环境工程、生物学、化学等多学科的理论和技术进行整 合，以更全面地理解微生物在环境中的作用。
模拟真实环境
未来试验将更加注重模拟真实环境，以更准确地反映微生 物在自然环境中的行为和功能。
标准化和规范化
随着微生物学试验的不断发展，将需要建立更多的标准化 和规范化操作，以保证试验结果的准确性和可比性。
数据分析
采用统计分析方法，对试验数据进行 处理和分析，得出结论。
03 试验结果与讨论
试验结果呈现
表格呈现
将试验数据整理成表格，包括试验条件、操作步 骤、结果等，方便查看和对比。
图表呈现
将试验结果绘制成图表，如柱状图、折线图等， 直观展示数据的变化趋势和差异。
文字描述
对试验结果进行详细的文字描述，包括数据、现 象、变化规律等，以便深入理解。
试验步骤与操作
试验准备
01
准备好试验所需的菌株、培养基、试剂等材料，准备好试验设行微生物培养、接种、处理等操作，记
录数据。
数据整理与分析
03
对试验数据进行整理、分析，得出结论。
数据记录与分析
数据记录
详细记录试验过程中的数据，包括菌 株生长曲线、污染物降解效率、处理 后水质等指标。
结果解释
结合微生物学、环境工程等相关 知识，对试验结果进行科学解释， 为实际应用提供理论支持。
结果应用
根据试验结果，提出相应的环境 工程措施和建议，为解决实际问 题提供参考和指导。
04 微生物在环境工程中的应 用
污水处理
污水处理原理
生物膜法
利用微生物的代谢作用，将污水中的 有机物转化为稳定的无机物，实现污 水的净化。
环境工程微生物学试验
目录
《环境工程实验Ⅰ》(环境工程微生物)教学大纲
《环境工程实验Ⅰ》（环境工程微生物）教学大纲一、基本信息1二、教学目标及任务环境工程微生物学实验是一门操作技能较强的课程。
通过一系列的实验操作，强化学生无菌操作的理念，使学生掌握微生物实验的基本方法。
通过观察不同的实验材料，进行各项实验操作、分析实验结果、完成实验作业等环节，配合课堂教学，以验证和巩固课堂讲授的微生物学的理论知识。
本课程支撑环境工程专业毕业要求1、2、4和6。
三、学时分配教学课时分配四、实验内容及教学要求实验一:光学显微镜的使用及细菌形态的观察实验目的：学会光学显微镜的使用方法，观察细菌的形态。
本实验教学要求：了解光学显微镜的构造，理解光学显微镜成像原理，掌握显微镜的操作和保养方法。
观察细菌的个体形态，学会生物图的绘制。
本实验重点、难点：显微镜的操作和保养方法，油镜观察细菌的形态，生物图的绘制。
实验二:细菌的简单染色和革兰氏染色实验目的：学会细菌染色的操作技术。
本实验教学要求：了解细菌的图片及染色在微生物实验中的重要性，理解革兰氏染色的原理，掌握细菌染色的操作技术。
本实验重点、难点：掌握微生物的一般染色和革兰氏染色方法。
实验三:真菌的形态观察实验目的：学会用显微镜观察真菌的个体形态本实验教学要求：进一步熟悉和掌握显微镜的操作方法，掌握制作水浸片的方法，观察真菌（酵母、霉菌）的个体形态。
本实验重点、难点：学习制作水浸片的方法，观察真菌的个体形态实验四:微生物细胞的计数和测量实验目的：学会用血球计数板对微生物计数本实验教学要求：了解血球计数板的结构，理解血球计数板计数计微生物的原理和掌握计数方法。
学习测微技术，测量细胞（酵母菌）的大小。
本实验重点、难点：测微技术原理，测量细胞（酵母菌）的大小实验五:培养基的配制，器皿的包扎，灭菌方法实验目的：学习培养基的配制及灭菌方法本实验教学要求：了解配制培养基的过程，理解配制培养基的原理，掌握配制方法。
学会各种各种器皿的包扎，灭菌技术。
本实验重点、难点：培养基配制的原理及方法。
环境工程微生物学操作实验报告 范例
培养基的配制和灭菌细菌的纯种分离、培养接种技术及菌落形态的观察姓名：***学号：************ 课程名称：环境工程微生物实验一、实验目的1、熟悉玻璃器皿的洗涤与灭菌前的准备工作。
2、了解微生物培养基的基本原理，掌握配制、分装培养基的方法。
3、学习各类物品的包装、配制、灭菌技术。
4、从环境中分离、培养微生物，掌握一些常用微生物和纯化微生物的方法。
5、学会几种接种技术。
6、平板菌落计数。
7、抗Cu菌的筛选。
8、观察实验分离出来的几种细菌的个体形态及与其相应的菌落的形态特征。
9、通过观察和比较细菌，放线菌，酵母菌及霉菌的菌落形态，达到初步鉴别微生物的能力。
二、实验原理1、培养基原理：培养基是微生物生长的基质，是按照微生物营养、生长繁殖的需要，有碳、氢‘氧、氮、磷、硫、钾、钙、钠、镁、铁、等微量元素和水，按一定的体积分数配制而成。
调整适合的pH，经高温灭菌后以备培养微生物之用。
由于微生物的种类及代谢类型的多样性，因而培养基放入种类也多，他们的配方及配制法也有所差异，但一般的配置过程大致相同。
本实验采用肉汤蛋白胨培养基、查氏培养基（筛选霉菌）、高氏1号淀粉琼脂培养基（筛选放线菌）。
2、灭菌原理:本次实验中培养基、移液枪头等采取加压蒸汽灭菌法。
加压蒸汽灭菌器是能耐一定压力的密闭金属锅，加压灭菌的原理在于提高灭菌器内的蒸汽温度来达到灭菌的目的。
培养皿等玻璃器皿用具采用干热灭菌法，另外还有膜过滤灭菌法。
接种时对接种针等采用灼烧灭菌。
3、分离纯化原理：本实验使用的平板表面涂布法，是把聚集在一起的群体分散成能在培养基上长成单个菌落的分离方法。
此法加样量不宜太多，只能在0.5mL以下，培养时起初不能倒置，现正置一段时间等水分蒸发后倒置。
平板划线法也可以分离从而获得单一菌落以观察其形态特征。
4、微生物的接种原理：接种就是将一定量的微生物在无菌操作条件下转移到另一无菌的并适合该菌生长繁殖所需的培养基中的过程。
本次实验采取斜面接种法、穿刺接种法，使用到的接种工具是接种环，接种针。
环境工程微生物学大实验实验报告
环境工程微生物学大实验实验报告实验十二环境中四环素抗性细菌的分离鉴定组员：吴富华，张真，，金炯震环5205一、实验目的1、自行设计实验方案从环境中分离四环素抗性菌的实验方法。
2、分离获得四环素抗行菌。
3、检测并分析获得的菌株的四环素抗性强弱。
4、学会通过16SrDNA鉴定实验获得的菌株的种属。
二、实验要求1、自行设计实验证明富集培养是否成功。
2、观察并记录实验现象，作适当的分析或解释。
3、获得至少一株四环素抗性菌（不要多于三株），并进行短期保存。
4、根据实验视频指导和说明，完成菌株基因组DNA纯化，16SrDNA的PCR扩增。
5、比较各组筛选出的抗性菌抗性强弱。
6、各组间交流实验过程和实验结果，分析抗性菌抗性的影响因素。
7、养成良好的实验习惯和团队合作的作风，并给出评价。
三、实验器材1、培养基（营养琼脂，琼脂粉，酵母膏，胰蛋白胨，氯化钠），提供四环素，琼脂糖，灭菌条件。
2、室温和37℃恒温培养箱和摇床。
3、离心机，漩涡震荡仪，PCR仪，电泳仪，紫外成像分析仪。
四、实验步骤（略）1、配置富集培养基和四环素梯度培养基2、四环素抗性菌富集培养3、单菌株筛选4、四环素抗性强弱比较5、单菌株基因组DNA的提取6、16SrDNA的PCR扩增7、PCR产物电泳实验内容、具体操作单菌株基因组DNA提取（5.17进行步骤1-4；5.18进行步骤5-10；5.20进行步骤11）（1）选择5.8号挑选的菌株进行DNA提取实验；（2）取200μL菌液转移到1.5mL灭过菌的EP管中，10000rpm常温离心1min，去掉上清（得到菌细胞）。
菌细胞可在-20℃冻存。
（3）如果是革兰氏阳性菌，取100μL，1mg/mL的溶菌酶/TE加到菌液中，漩涡震荡混匀，37℃温浴1h（溶菌步骤）。
（4）用取液器（移液枪）缓慢吸加500μL（革兰氏阳性）或600μL（革兰氏阴性）裂解缓冲液和20μL，20mg/mL蛋白酶K（proteinase K），充分混匀，50℃过夜（完全裂解细菌并降解所有蛋白质）。
环境工程微生物学实验
实验器材
（1）活材料：培养18h的大肠杆菌（E. coli）培养液。 （2）培养基和试剂：牛肉膏蛋白胨液体培养基14支 (每支10ml)，浓缩5倍的牛肉膏蛋白胨培养基。无菌 酸溶液(甲酸：乙酸：乳酸=3：1：1)。 （3）器材：1ml无菌吸管、摇床、冰箱、光电比色计、 标签等。
实验方法
1、接种：按无菌操作法用吸管向每管准确加入0.2 ml 的大肠杆菌培养液。 2、培养：将接种后的培养管置于摇床上，在37℃下 振荡培养。其中9支培养管分别于培养的0、1.5、3、5、 7、9、12、24和36h后取出，放冰箱中贮存，待测定。 3、比浊：以未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基调零 点，在光电比色计上，选用520～560nm波长进行比浊， 从最稀浓度的菌悬液开始，依次测定。
实验步骤
1．将肉膏胨淀粉琼脂培养基加热融化，待冷至45℃左右倒入无 菌培养皿内(每皿约10～
15毫升)，共倒3个，静置待冷凝即成平板。
2．在无菌操作条件下，用接种环分别挑取大肠杆菌和活性污泥 各一环分别在4个平板上各点种4个点。倒置于37℃恒温箱内培 养24～48h。
3．观察结果，取出平板，分别在2个平板内菌落周围滴加碘液， 观察菌落周围颜色的变化。若在菌落周围有一个无色的透明圈， 说明该细菌产生淀粉酶并扩散到基质中去。若菌落周围仍为蓝 色，说明该细菌不产生淀粉酶。
实验器材
1．培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。 2．仪器：电炉、恒温水浴锅．恒温培养箱．放大 镜。 3．试剂：硫代硫酸钠溶液。 4．其他用品：无菌采样瓶，9ml无菌水试管，无菌 培养皿(直径9cm)，无菌移液管等。
实验步骤
1．水样采取 2．细菌总数测定 (1) 水样稀释：根据水样受有机物或粪便污染的程度，可用无
3．高倍镜观察
环境工程微生物学实验报告6
实验目的：
1.熟悉玻璃器皿的洗涤及灭菌前的准备工作；
2.了解配制微生物培养基的基本原理，掌握配制、分装培养基的方法。本实验通过常用培养基的配制，使学生了解常规的配制培养基的方法。
3.学会各类物品的包装、配制和灭菌。
基本原理：
培养基是钾、钙、钠、镁、铁、等微量元素和水，按一定的体积分数配制而成。调整适合的ph，经高温灭菌后以备培养微生物之用。
由于微生物的种类及代谢类型的多样性，因而培养基放入种类也多，他们的配方及配制法也有所差异，但一般的配置过程大致相同。
实验器皿和材料：
高压蒸汽灭菌器、干燥箱、煤气灯、培养皿、试管、刻度移液管、锥形瓶、烧杯、量筒、药物天平、玻棒、玻璃珠、石棉网、药匙、铁架、表面皿、PH
试纸和棉花、牛肉膏、蛋白胨、NaCl、NaOH和琼脂。
实验内容:
一.玻璃器皿的准备
1.玻璃器皿的洗涤
2.玻璃器皿的包装
1移液管的包装；
2培养皿的包装；
3棉塞的制作。
二.培养基的配制
1.按照配方要求配制溶液；
2.根据微生物的生长需求调节PH；
3.过滤杂质；
4.将锥形瓶和试管进行分装加棉塞，包装后灭菌；
5.斜面的制作。
三.稀释水的配备
1.锥形瓶稀释水的配备
2.试管稀释水的配备
四.灭菌
1.干热灭菌法
2.加压蒸汽灭菌法
注意事项：
1.在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气要尽可能排除完；
2.易燃易爆物品（如：硝化甘油、硝化纤维、黄磷、红磷、乙醚、汽油及可燃性气体等）不能用高压灭菌法灭菌；
3.当含盐类的液体和含盐的琼脂中大量的盐类泼洒在工作腔体，要立即换水，冲洗腔体，仔细擦干锅盖垫圈上的水滴。否则它们会带来腐蚀和变质。要检查压力表上的指数为“0Mpa”后才能打开锅盖。
环境工程微生物学实验指导书
实验报告要包括以下内容： 1．实验名称、学生姓名、学号、班号和实验日期； 2．实验目的和要求； 3．实验仪器、设备与材料； 4．实验原理；
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武汉科技大学实验指导书
5．实验步骤； 6．实验原始记录； 7．实验数据计算结果； 8．实验结果分析，讨论实验指导书中提出的思考题，写出心得与体会。
二、实验内容
掌握细菌的革兰氏染色方法；掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养，以观 察菌种的个体，学会生物图的绘制。
三、实验仪器、设备及材料
显微镜、载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、石碳酸复红染液、草酸铵结晶紫染液、革氏 碘液、95%乙醇、蕃红染液、接种钩、酒精灯、已培养好的菌株。
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武汉科技大学实验指导书
实验三 微生物的接种技术
一、实验目的
掌握从环境中分离培养微生物和对微生物进行扩大培养的方法，从而获得若干种微生物的纯培养 技能。
二、实验内容
以微生物的斜面接种技术为例，掌握微生物的各种接种技术中需要注意的问题。
三、实验仪器、设备及材料
无菌斜面培养基、已培养好的待接种微生物、酒精灯、接种钩、无菌操作台。
七、实验注意事项
必须严格掌握乙醇脱色程度，如果脱色过度，阳性菌被误染为阴性菌；若脱色不够时，阴性菌被误 染为阳性菌。
八、思考题
1、光学显微镜的操作方法？ 2、微生物的染色原理是什么？ 3、绘制细菌的形态图，并说明革兰氏染色的结果。 4、通过革兰氏染色，你认为它在微生物学中有何实践意义？
主要参考文献： 周群英 高廷耀编著，环境工程微生物学（第二版）中第三部分“环境工程微生物实验”，高等教育出版 社，北京，2000
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武汉科技大学实验指导书
《环境工程微生物学》课程实验教学大纲.doc
《环境工程微生物学》课程实验教学大纲［适用对象］环境科学专业［实验学时］18学时一、实验教学任务和目的《环境工程微生物学实验》是与《环境工程微生物学》理论课程密切结合的一门重要的、非单独设课的环境科学专业基础实验课程。
课程学习的目的是让学生掌握本课程基本技能操作，为学习基础环境科学有关课程和为学生将来从事环境相关工作和科研工作奠定基础。
二、实验教学基本要求(1)训练学生掌握环境微生物学最基本的操作技能。
(2)加深理解课堂讲授的某些环境微生物学理论。
(3)培养学生观察、思考、分析问题、解决问题和提出问题的能力。
(4)培养学生实事求是、严肃认真的科学态度，以及敢于创新的开拓精神。
(5)培养学生树立勤俭节约、爱护公物的良好作风。
三、实验教学内容实验一细菌的人工培养法1、实验目的和要求(1)掌握各种培养基接种技术。
(2)熟悉细菌在培养基中的生长现象；认识菌落、菌苔。
(3)了解常用的液体、固体和半固体培养基的成分、制备方法和用途。
2、实验内容(1)培养基的配制，摆斜面，倒平板(2)分离培养法(平板划线法)(3)斜面培养基接种方法(4)液体培养基接种法(5)半固体培养基的接种法(6)观察细菌在培养基上的生长情况：细菌各种培养物的示教；描述细菌在各种培养基上的生长现象；观察大肠杆菌与痢疾杆菌在半固体培养基上的现象。
普通琼脂平板，普通琼脂斜面，半固体培养基，肉汤培养基，接种环，接种针，酒精灯，大肠杆菌24小时斜面培养物等。
4、实验学时3学时实验二细菌的分布及消毒与灭菌1、实验目的和要求掌握高压蒸气灭菌器的使用方法及注意事项；证实热力和紫外线的杀菌效果；证实常用消毒剂的消毒效果；证明细菌在自然界和正常人体的存在，为在微生物学实践中树立严格的“无菌观念”提供依据。
2、实验内容(1)高压蒸气灭菌法(2)干热灭菌器(干烤箱)(3)紫外线的杀菌实验(4)热力对芽胞及繁殖体的作用(5)药物敏感性试验(6)化学消毒剂的杀菌的作用------ 手指皮肤消毒前后的细菌学检查(7)空气中的细菌检查(8)污水和净水中的细菌数检查(9)皮肤表面的细菌检查3、实验仪器普通琼脂平板、1%高层琼脂，血琼脂平板，无菌试管，无菌吸管，无菌平皿，灭菌棉签，咽拭子，酒精灯等。
环境工程微生物学实验
（1）试管编号；
（2）2只试管分别穿刺接种大肠杆菌和变形杆菌； （3）37 ℃ ，培养24h 3、柠檬酸盐利用试验
（1）试管编号；
（2）2只试管分别划线接种大肠杆菌和枯草杆菌； （3）37 ℃ ，培养24h
四、实验结果观察与记录
1、将实验结果填入下表，＋表示阳性，－表示阴性。 2、思考题：微生物生理生化反应的意义何在？
三操作步骤1微生物大小的测量1枯草杆菌标本片的制作2目镜测微尺的标定放置镜台测微尺放置目镜测微尺校正目镜测微尺计算不同放大倍数下目镜测微尺每格代表的长度3枯草杆菌大小的测量四实验报告1将目镜测微尺校正结果填入下表接物镜接物镜倍数目镜测微尺目镜测微尺每格代表的长度2在高倍镜下测量枯草杆菌大小的实验结果填入下表菌体编号长度的目镜测微尺格数宽度的目镜测微尺格数平均值菌体大小平均值m3分析实验结果一实验目的明确显微镜计数的原理
酵母菌的形态构造
线 粒 体 芽体液泡 芽 体 核 液 泡 膜 细 胞 壁 细 胞 膜
根霉（Rhizopus)
青霉（Penicillum):
曲霉(Aspergillus)
四、实验报告
1. 分析实验结果，绘制酵母菌、青霉、黑曲霉的形
态图，并注明各部位名称，。 2. 怎样才能观察到较为完整的霉菌形态，各种霉菌 制片过程中分别有哪些注意事项？
121℃,灭菌20~30min
使用时, 将培养基加热融化, 待温度降至50 ℃左右时在 100mL培养基中加入1%链霉素0.3mL
糖发酵培养基：
蛋白胨2g，葡萄糖10g， K2HPO4 0.2g, NaCl 5g, 琼脂5～6g， pH7.0～7.2 ，蒸馏水1L ， 1%溴百里酚蓝 3ml. 分装试管，每管4～5cm， 112℃,灭菌30min.
以“微”见大,为世界疫情提供“中国方案”：《环境工程微生物实验》课程思政优秀案例
以“微”见大，为世界疫情提供“中国方案”：《环境工程微生物实验》课程思政优秀案例一、课程基本情况《环境工程微生物学实验》是环境工程专业的一门专业实验必修课，也是环境工程专业的主干课程之一。
通过课程学习，使学生系统地了解微生物学方面的基础理论，掌握微生物在环境中所处的地位以及在废水、固废处理中的重要作用及利用微生物进行生化处理的技术技能，从而进一步利用微生物为环境治理工程服务。
课程思政的目标是培养学生的科学素养、奉献精神和爱国主义精神等，塑造学生正确的世界观、人生观和价值观。
二、课程思政教学设计思路（一）认知目标（1）掌握光学显微镜的结构、光学原理及操作与使用方法；（2）熟练制备培养微生物所需要的培养基的方法；（3）掌握环境中微生物生长的测定方法；（4）掌握从环境中分离和培养微生物的方法和技能。
（二）能力目标（1）通过光学显微镜的使用，培养学生微生物方面的基本技能；（2）通过培养基的制备及微生物数量的测定，使学生具备测定微生物的基本能力；（3）学生掌握从环境中分离和培养微生物的方法和技能，培养科学探究能力，养成良好的科研思维能力。
（三）情感目标（1）学生通过使用显微镜实验观测微生物的形态，从而了解我国是最早利用微生物的国家之一，树立民族自信心；（2）通过微生物分离、培养与测定实验，使学生了解我国著名微生物家汤飞凡对微生物学发展发展的贡献以及钟南山院士对新冠病毒控制的杰出贡献，激发学生学习微生物专业的热情，培养爱国主义情怀和良好的科学素养。
（3）通过细菌数量的测定实验，引出2021年新冠肺炎病毒在我国和国外的控制情况及我国控制新冠病毒的方法和措施为国外提供很好的借鉴，中国为世界问题的解决提供方案，增强民族自豪感。
三、教学方法与教学过程课程导入直接影响学生的学习兴趣，好的课程导入对学生学习的积极性和主动性有着重要的影响。
在环境工程微生物实验中，可以采用情境教学法导入课程。
如以大家比较熟悉的新冠肺炎病毒为例，教师先展示新冠肺炎病毒的图片，组织学生讨论：“怎样才能观察到新冠肺炎病毒，实验室如何分离、检测新冠肺炎病毒，以及如何防治新冠肺炎病毒？”，从而引出本课程的学习目的和重要性。
环境工程微生物学操作实验报告-范例
环境工程微生物学操作实验报告-范例培养基的配制和灭菌细菌的纯种分离、培养接种技术及菌落形态的观察姓名：张世凡学号：201330480123课程名称：环境工程微生物实验一、实验目的1、熟悉玻璃器皿的洗涤与灭菌前的准备工作。
2、了解微生物培养基的基本原理，掌握配制、分装培养基的方法。
3、学习各类物品的包装、配制、灭菌技术。
4、从环境中分离、培养微生物，掌握一些常用微生物和纯化微生物的方法。
5、学会几种接种技术。
6、平板菌落计数。
7、抗Cu菌的筛选。
8、观察实验分离出来的几种细菌的个体形态及与其相应的菌落的形态特征。
9、通过观察和比较细菌，放线菌，酵母菌及霉菌的菌落形态，达到初步鉴别微生物的能力。
二、实验原理1、培养基原理：培养基是微生物生长的基质，是按照微生物营养、生长繁殖的需要，有碳、氢‘氧、氮、磷、硫、钾、钙、钠、镁、铁、等微量元素和水，按一定的体积分数配制而成。
调整适合的pH，经高温灭菌后以备培养微生物之用。
由于微生物的种类及代谢类型的多样性，因而培养基放入种类也多，他们的配方及配制法也有所差异，但一般的配置过程大致相同。
本实验采用肉汤蛋白胨培养基、查氏培养基（筛选霉菌）、高氏1号淀粉琼脂培养基（筛选放线菌）。
2、灭菌原理:本次实验中培养基、移液枪头等采取加压蒸汽灭菌法。
加压蒸汽灭菌器是能耐一定压力的密闭金属锅，加压灭菌的原理在于提高灭菌器内的蒸汽温度来达到灭菌的目的。
培养皿等玻璃器皿用具采用干热灭菌法，另外还有膜过滤灭菌法。
接种时对接种针等采用灼烧灭菌。
3、分离纯化原理：本实验使用的平板表面涂布法，是把聚集在一起的群体分散成能在培养基上长成单个菌落的分离方法。
此法加样量不宜太多，只能在0.5mL以下，培养时起初不能倒置，现正置一段时间等水分蒸发后倒置。
平板划线法也可以分离从而获得单一菌落以观察其形态特征。
4、微生物的接种原理：接种就是将一定量的微生物在无菌操作条件下转移到另一无菌的并适合该菌生长繁殖所需的培养基中的过程。
环境工程微生物学实验答案
1.使用油镜时，为什么要先用低倍镜观察油镜指的是为了减少高倍镜的折光，在物镜和玻片之间滴上松节油等。
所以油镜其实就是给高倍镜物镜和玻片之间加油。
而所有高倍镜从前都先要用低倍镜观察，是因为低倍镜下好找目标。
低倍镜放大10 倍，高倍镜放大40 倍，油镜放大100 倍，先用低倍镜、高倍镜，既便于找到目标，又方便调焦距。
要使显微镜视野光明，除采用光源外，还可以够采用哪些措施加大聚光器光圈，同样设置下低倍物镜比高倍物镜视野亮把资料切薄一点透光较好使用滤光片，增加反差和清楚度。
向上调理聚光器。
2.怎样差异活性污泥中的几种固着型纤毛虫大多数情况下，会遇到钟虫、柄纤毛虫、累枝虫等。
三种虫形态均近似钟的形状，钟虫每个都是独立的，互相之间没有连接；柄纤毛虫近似钟虫，量很大，可是在根部汇聚在一根柄上，能够理解成一根柄上分出很多个钟虫；而累枝虫就像是树，一根柄上分出很多个柄，尔后很多个柄上又分出很多个“钟虫”。
用压滴法制作标本片晌注意什么问题1. 使用的载玻片和盖玻片都要干净；2. 制成的标本片不能够有气泡4. 涂片为什么要固定，固准时应注意什么问题若是不固定的话你进行染色后水洗去节余染料的同时会将菌体一并冲走注意的就是不要弄死细胞咯！不知道你用什么方法，若是是用火，那就是不要烧死它们，用载玻片背面凑近火源，过两次就好。
Over一般我都是用酒精灯的外焰烤的但是要注意温度。
温度过高挥出现变形细胞。
温度已载玻片接触手背，手背不感觉烫为宜。
加热只水分蒸发完好后，再在酒精灯外焰上经过两到三次，就成了。
革兰氏染色法中若只做1~4 步，不用番红染液复染，能否分辨出革兰氏染色结果为什么能。
在酒精脱色后，不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋），被酒精脱色为革兰氏阴性菌。
最后一步用番红染液复染，是为了让结果更清楚。
革兰氏染色原理和番红复染自己并没关系。
但是，但是，你能指着一片空白的照片说这些细菌没有被结晶紫染色所以是阴形吗鬼知道那处有没有细菌。
环境工程微生物学实验项目(精)
环境工程微生物学实验项目培养基的制备与灭菌环境中的微生物大肠杆菌的平板划线分离法微生物的染色与鉴定平板菌落计数法水污染控制工程实验项目离心泵性能测定板框过滤实验干燥实验环境化学实验项目水体中总磷、生产率和叶绿素含量的测定天然水体中氨氮的测定底泥中铬的简单状态鉴别底质对汞的吸附作用大气中氮氧化物的测定碱液吸收气体中的二氧化硫电位法测定茶叶中的微量氟食品添加剂的检测-软饮料中防腐剂和色素的检测环境监测实验项目目恃比色法测定水中色度分光光度法测定水中浊度纳试剂比色法测定氨氮酸性高锰酸钾指数碘量法测定水中溶解氧的）的测定化学需氧量（CODC r碘量法测定硫化物4-氨基安替比林分光光度挥发酚的测定重量法测污水中石油类大气中总悬浮颗粒物的测定甲醛缓冲溶液吸收-盐酸副玫瑰苯胺分光光度法测定大气中二氧化硫城市交通噪声测量环境仪器分析实验项目气相色谱定量分析-内标法测定邻二甲苯中杂质利用气-固色谱法分析O2，N2，CH4混合气体高效液相色谱法甲苯含量的测定离子色谱法测定废水中的阴离子火焰原子吸收法测定水中钙，镁的含量原子发射光谱法测定废水中的重金属气相质谱法测定气体组分利用红外光谱法进行化合物结构鉴定有机化合物的吸收光谱及溶剂效应差值吸收光谱法测定废水中微量苯酚邻二氮菲分光光度法测定铁Ce4+氧化还原滴定法测定Fe2+的含量NaOH电位滴定法测定H3PO4的含量及H3PO4的各级酸离解常数自动电位滴定法测定水中Cl- I-的含量空气污染控制工程实验项目粉尘密度的测定粉体粒径分布的测汽车尾气中总悬浮物、硫氧化物及氮氧化物的测定环境空气中硫氧化物及氮氧化物的测定室内空气中总悬浮物及VOCs的测定旋风除尘试验袋式除尘试验吸附法去除气体中的VOCs的实验及模拟生物法净化VOCs的实验及模拟水污染控制工程实验项目自由沉淀絮凝沉淀实验气浮离子交换实验活性炭吸附实验水充氧实验废水可生化性测定厌氧污泥活性的测试污泥脱水性能测定环境工程试验教学大纲实验教学大纲代号课程名称英文名称学期安排任课教师教材或参考书0902105 环境工程微生物学实验Experiments of EnvironmentalEngineering Microbiologcy第五学期白卯娟自编实验讲义0902106 环境监测实验Professional experiments forenvironmental monitoring第六学期鲁风芹环境监测实验刘0902107 水污染控制工程实验Water Pollution ControlEngineering第六学期路明义水污染控制工程0902108 大气污染控制工程实验0902215 环境化学实验Experiments of EnvironmentalChemistry第五学期周贵忠自编实验讲义0902216 环境仪器分析实验Apparatus Analysis ofEnvironment第四学期孙玉焕自编实验讲义。
《环境工程微生物》实验指导书
《环境工程微生物》实验指导书《环境工程微生物》实验指导书一、实验目的本实验指导书旨在让学生了解和掌握环境工程微生物实验的基本原理、实验方法、实验步骤和实验技巧，培养学生对环境工程微生物的观察、分析和解决问题的能力，提高学生的实践能力和综合素质。
二、实验原理环境工程微生物实验是环境工程学科中重要的实验课程之一，主要涉及微生物的生长、代谢、分离、鉴定等实验技术。
本实验指导书将涵盖以下内容：1.微生物的生长和繁殖：通过观察微生物的生长过程，掌握微生物的生长条件和繁殖规律。
2.微生物的分离与纯化：学习使用各种方法从环境中分离微生物，并进行纯化培养。
3.微生物的鉴定：学习使用形态学、生理学等方法对微生物进行鉴定。
4.微生物的代谢：通过测定微生物的代谢产物，了解微生物的代谢过程和代谢途径。
5.微生物的生长曲线：通过绘制生长曲线，掌握微生物的生长规律和生长动力学。
三、实验步骤与操作方法1.实验准备：进行实验前，需要准备好各种实验器材、试剂和培养基等。
2.样品采集：选择具有代表性的环境样品，如水样、土壤样、垃圾样等，进行采集。
3.样品处理：将采集的样品进行处理，以备后续实验使用。
4.微生物分离：采用适当的分离方法，将微生物从样品中分离出来。
5.微生物培养：将分离得到的微生物进行培养，观察其生长情况。
6.微生物鉴定：根据微生物的形态学和生理学特征，对分离得到的微生物进行鉴定。
7.数据分析：整理实验数据，进行统计分析，得出实验结论。
8.实验总结：对实验结果进行总结，分析实验中存在的问题和不足之处，提出改进措施。
四、注意事项1.实验过程中要保持实验室的清洁卫生，避免污染和交叉感染。
2.使用试剂和培养基时要严格按照规定进行配制和使用，确保实验结果的准确性和可靠性。
3.在进行实验操作时要注意安全问题，避免发生意外事故。
例如，在处理危险性化学品时要佩戴个人防护用品；在使用高压灭菌锅时要遵守操作规程，避免发生爆炸等事故。
4.实验结束后要及时清理实验场地和器材，保证实验室的整洁和卫生。
环境工程微生物学实验
实验注意事项
一、实验须知
教学实验是教学实践的重要组成部分，是不断提高学 生动手能力及操作技能的主要教学形式。环境工程微生物 学实验是一门操作技能较强的课程，通过实验，掌握微生 物学实验的一套基本技术，树立严谨、求实的科学态度， 提高观察、分析问题和解决问题的能力。为了更好地进行 实验，保证实验教学质量和实验室的安全，必须注意以下 事项：
5. 实验报告
实验结束后，整理现场记录的有关内容，对实验结 果作实事求是地总结、综合，完成实验报告。
二、实验规则
规范实验，遵守学生实验守则及实验室安全工作各项 规定，确保实验正常进行。
1. 预习
做到认真阅读有关的实验教材，பைடு நூலகம்实验的主要内容、 目的和方法等有所了解，并初步熟悉实验的主要环节，做 好各项准备工作。
2.记录
实验课开始，教师对实验内容的安排及注意问题进 行讲解，学生必须认真听讲并作必要的记录，实验中更 要及时、准确地做好现场记录，作为完成实验报告的重 要依据。
3.示教
实验中有示教内容，尤其是形态学实验，可帮助学 生了解实验的难点，加深印象，以便能在有限的时间内 获得更多感性知识的机会。
4.操作与观察
实验应按要求独立操作与观察，包括显微镜的使用 技术、微生物的染色和纯培养等技术，都必须做到规范 操作。还有微生物学实验中最重要的环节之一就是无菌 操作，必须严格要求，反复练习，以达到一定的熟练程 度。实验中要认真注意观察实验现象和实验结果，结合 微生物学理论知识，去比较、分析、说明问题。
环境工程微生物学实验
第十三章 环境工程微生物学实验
目录
实验一、光学显微镜的使用及原核生物的个体形态观察 实验二、真核微生物的个体形态观察 实验三、细菌的简单染色和革兰氏染色 实验四、细菌淀粉酶的测定 实验五、培养基的配制与灭菌 实验六、活性污泥中细菌的纯种分离和培养 实验七、纯培养菌体和菌落形态的观察 实验八、总大肠菌群数的测定 实验九、综合性实验：校园河水中的生物检测与水体水 质评述 实验十、应用API 20E细菌鉴定系统鉴定肠杆菌科和其他 革兰氏 阴性杆菌
环境工程微生物学实验报告七
实验七细菌的纯种分离、培养和接种技术实验目的：1.从环境（土壤、水体、活性污泥、垃圾、堆肥等）中分离、培养微生物，掌握一些常用微生物和纯化微生物的方法。
2.学会几种接种技术。
实验原理:在自然界中，微生物的种类很多，数量很大，为了获得单个菌体，首先必须把要分离的材料进行适当的稀释，按微生物生长所需要的条件，使其在平板上，由一个菌体繁殖成单个菌落，这样，就能从中挑选出所需要的纯种。
由于细菌、放线菌和霉菌所要求的营养条件不同，利用不同的培养基制成平板进行分离，然后从菌落形态上的差异，可以把细菌、放线菌和霉菌三大类群区分并可计算出其数量，分别接种到试管斜面上，然后，在平板上反复进行分离培养，最后可获得纯种。
仪器和材料：1.实验六中准备的无菌物品：包括各种玻璃器皿、培养基、稀释水等。
2.活性污泥、土壤或湖水一瓶。
3.接种环、酒精灯或煤气灯、恒温培养箱。
细菌纯种分离的操作方法：一.平板划线法：(1) 倒平板: 将融化并冷至50℃的细菌培养基倒约15~20ml于无菌培养皿中，立即放在桌上轻轻转动使之均匀。
冷后成平板。
（3个）(2) 划线：在火焰旁，左手拿平板，右手拿接种环，取一环菌液（原污水）在平板上划线。
常用的方法有如下三种：划线完毕后盖上皿盖，倒置于37℃恒温箱中培养48小时后观察结果。
二.稀释平板分离法(1) 取样…(2) 稀释水样以无菌操作按十倍稀释法用无菌吸量管和无菌水将10-3倍的水样稀释至10-4、10-5、10-6倍。
(3) 平板制作将三套无菌培养皿编号，将上述三种浓度的水样各吸0.5ml 于相应的培养皿中。
加热融化培养基，待其冷至约45℃时以无菌操作倾注10~15ml 入培养皿中，马上将培养皿平放桌上轻轻转动使之混合均匀，冷却后成平板。
倒置，于37℃培养48小时后观察结果。
三.平板表面涂布法a.稀释样品b. b.倒平板c. c.涂布d. d.培养e. e.结果观察细菌的接种方法：（1）斜面接种技术操作时下图的顺序，并注意教师的示范操作。
环境工程微生物学综合实验-
环境工程微生物学综合实验- 功能菌（絮凝菌）的分离、筛选与性能研究实验须知*一、环境工程微生物学实验目的1. 通过实验进一步加深理解课堂讲授的理论内容。
2. 训练学生掌握微生物学最基本的操作技能，建立无菌概念并掌握无菌操作技术。
通过实验，培养学生分析问题、解决问题的能力及创新能力，提高学生的综合素质，为将来能够独立工作打下坚实的基础。
二、环境工程微生物学实验基本要求1. 每次实验前必须对实验内容进行充分预习，弄清实验目的、原理及操作步骤，以免手忙脚乱，影响实验课效果。
2. 实验前，按内容要求仔细检查所需仪器、药品是否齐全，若有问题及时提出。
3. 整个实验过程要严格按操作步骤进行，不得马马糊糊，否则会造成错误，甚至出现事故。
4. 实验过程中要做好记录，特别是对于连续观察的实验，必须认真记下每次观察到的现象与结果，然后进行整理分析，写出实验报告。
5. 使用贵重精密仪器时要特别小心，注意保护，用毕要复原，并进行登记。
实验使用的一切物品实验完毕均放回原处。
损坏仪器照价赔偿。
6. 实验室要保持整洁、干净，不准大声喧哗，勿随意走动，严禁吸烟，不许吃东西，不准随便乱丢废物。
7. 实验过程中，一些易燃品如乙醇、丙酮等切勿接近火焰。
如遇火险，要先切断火源，再用沙土或湿布灭火，必要时应使用灭火器。
8. 使用过的废液及琼脂培养基不得直接倒入水池内，应先进行灭菌处理，然后再将废液倒入下水道，将琼脂培养基埋掉。
9. 离开实验室前要将桌面擦净，清扫卫生，检查电源、火源、自来水、门窗是否关闭，以确保安全。
实验一、絮凝菌分离、筛选准备实验（器皿的包装、无菌水、培养基的制备与灭菌）一、器皿的包装（一）实验目的学会微生物技术实验中所用器皿的包装方法及意义。
（二）包装方法1.培养皿的包装用牛皮纸或旧报纸进行包装。
包好后灭菌备用。
2. 吸管的包装在已干燥的吸管的平头端距0.5cm处，塞长约1.5cm的棉花，松紧要合适。
过松，棉花易脱出；过紧，吹吸费力，甚至吹吸不动。
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产芽孢细菌的种类
芽孢
菌体 （营养细胞）
spor es
枯草芽孢杆菌
三、实验步骤
1. 制片
2. 染色：加数滴孔雀绿染色液于涂片上，用木夹夹 住载玻片一端，在微火上加热至染料冒热气并 开始计时，维持5min；
3. 水洗 4. 复染：用番红液复染2min； 5. 水洗 6. 干燥镜检
四、实验报告
1、绘制菌体形态图并注明芽孢、芽孢囊和营养菌
4. 调pH值：
5. 分装：
6. 包扎：
7. 灭菌：
各组分工： 第1,2 组：各配制LB培养基600mL，分装30支试管， 灭
菌后摆斜面。其余分装于三角瓶中，装量约为瓶高的1/3。
第3,4组：各配制马丁培养基500mL，分装于三角瓶中，
每瓶100mL。
第1,2组：配制淀粉培养基500mL，分装于三角瓶中，每 瓶100mL。 第3,4组：配制柠檬酸盐培养基250mL，分装30支试管。 第5,6组：配制葡萄糖发酵半固体培养基250mL，分装30
的对比,在显微镜下更易于识别.常用的染料有:美蓝、
结晶紫、碱性复红等.
染色观察
简单染色法 正染色 死菌 细菌染色法
革兰氏染色法
抗酸性染色法 鉴别染色法 芽孢染色法 姬姆萨染色法
荚膜染色法等 负染色：
活菌: 用美蓝或TTC（氯化三苯基四唑） 等作活菌染色
三、实验准备
1. 菌种 2. 染色剂 3. 仪器或其他用具：显微镜，酒精灯，载玻 片，接种环，香柏油，檫镜纸等
淀粉培养基：
蛋白胨10g，牛肉膏5g， 淀粉 2g, NaCl 5g, 琼脂15～18g， pH7.0～7.2 ，蒸馏水1L . 121℃,灭菌30min.
柠檬酸盐培养基：
柠檬酸钠 2g，K2HPO4 0.5g, NH4NO3 2g, 琼脂15～18g, pH6.8～7.0， 1%溴百里酚蓝 1ml ，蒸馏水 1L. 分装试管，每管4～5cm， 121℃,灭菌30min.
实验五 活性污泥生物相观察
一、实验目的
了解活性污泥生物相中生物的多样性
二、实验步骤
（1）在载玻片中央加半滴污泥液，盖盖玻片。 （2）低、高倍镜观察。
实验六 微生物大小的测量 实验七 显微镜直接计数法
一、实验目的
1、掌握用显微测微尺测量微生物大小的基本方法。 2、明确显微镜计数的原理。
单球菌（显微镜下示意图）
双球菌(double coccus)
..... . . . ...... . . . . . .. .. .. . ... .. . . . .
双球菌（显微镜下示意图）
四联球菌
(Micrococcus lactis)
上：显微镜效 下：电镜照片
八叠球菌(Sarcina ureae)
支试管。
LB培养基: 蛋 白 胨 10g, 酵母 粉 5g, NaCl 10g, 琼 脂 15~18g,
pH7.2~7.4, 蒸馏水1L,
121℃,灭菌20~30min 马丁培养基: 蛋白胨 5g, 葡萄糖10g, K2HPO4 1g, MgSO47H2O 0.5g, 1%孟 加拉 红3.3mL, 琼脂15~18g, 自然pH, 蒸馏水1 L,
2. 加入45ml无菌生理盐水中;
3. 振荡5min; 4. 制备系列稀释的土壤悬液; 5. 取适当稀释的土壤悬液1ml入无菌培养皿中; 6. 倒入培养基(45~50℃),混匀,放置于桌面,待冷却;
7. 培养基凝固后平板放在25℃,倒置培养24~48h;
8. 观察菌落形态,进行菌落计数,分离细菌.
Serial Dilutions
2. 掌握区分酵母菌死、活细胞的染色方法
3. 掌握观察霉菌形态的基本方法，并观察其形态特征
二、基本原理
三、操作步骤
1. 酵母菌美蓝浸片观察
（1）在载玻片中央加半滴0.1%美蓝染液和半滴水，
挑取少量菌体，涂匀后盖盖玻片。
（2）低、高倍镜观察。
2. 霉菌棉蓝浸片观察 在载玻片中央加一滴棉蓝染液，挑取少量菌丝体 轻轻放入染色液中,盖盖玻片，低、高倍镜观察。
体。 2、芽孢染色中有哪些注意事项？
实验四 鞭毛染色
一、目的要求
了解鞭毛染色的原理，学习并掌握鞭毛染色的
方法。
二、实验原理
鞭毛直径为0.01~0.02um，在普通光学显微
镜的分辨力限度以外，因此鞭毛染色是借媒染 剂和染色剂的沉淀作用，使染料堆积在鞭毛上， 加粗鞭毛的直径，同时使鞭毛着色，在普通光 学显微镜下能够看到。
了解芽孢染色的原理，学习并掌握芽孢染
色的方法。
二、实验原理
芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲和 力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体 呈不同的颜色而便于区别，芽孢壁厚、透性低、着色
困难，用孔雀绿或碱性品红等弱碱性染料在加热条件
下进行染色时，此染料不仅可进入菌体也可进入芽孢， 进入菌体的染料可经水洗脱，而进入芽孢的染料则难 以透出，再用色差较大的番红复染，菌体和芽孢易于 区分。
121℃,灭菌20~30min
使用时, 将培养基加热融化, 待温度降至50 ℃左右时在 100mL培养基中加入1%链霉素0.3mL
糖发酵培养基：
蛋白胨2g，葡萄糖10g， K2HPO4 0.2g, NaCl 5g, 琼脂5～6g， pH7.0～7.2 ，蒸馏水1L ， 1%溴百里酚蓝 3ml. 分装试管，每管4～5cm， 112℃,灭菌30min.
2、在高倍镜下测量枯草杆菌大小的实验结果填入下表
菌体编号 1 2 长度的目镜测微尺格数 宽度的目镜测微尺格数
3
4 5
平均值
菌体大小平均值(μm)
3、分析实验结果
实验七 显微镜直接计数法
一、实验目的
明确显微镜计数的原理；
学习使用血球计数板进行微生物计数的方法
二、实验原理
Petroff-Hauser Requires at least counting chamber 106 cells/ml
四、实验步骤
1. 涂片
2. 干燥
3. 固定
4. 染色
5. 水洗
6. 镜检
五、实验报告
1、绘出你观察到的经单染色的球菌和杆菌形态图
2、思考题 （1）根据实验体会，你认为制备细菌染色标本时应 注意哪些事项？ （2）油镜使用完毕后应怎样处理？
单球菌(single coccus)
.. ....... ............ ...... . . ..... .....
革兰氏染色步骤
甲菌
初染 结晶紫 乙菌
紫色（G＋） 媒染 碘液 脱色 乙醇
复染 沙黄 红色(G-)
五、实验报告
1、绘制菌体形态图并注明染色结果及革兰氏染色结 果。
2、革兰氏染色中有哪些注意事项？怎样能确定你对 未知菌的染色 结果准确与否？
3 、油镜使用完毕
后应怎样处理？
实验三 芽孢染色方法
一、目的要求
3、学习使用血球计数板计数的方法。
二、实验原理
1、镜台测微尺： 一般将1 mm等分为100格，每格长度为0.01 mm，即 10 μm，专用于校正目镜测微尺。 2、目镜测微尺：
是一块可放在接目镜内的隔板上的圆形小玻璃片，其
中央刻有精确的刻度，有等分50小格和100小格的2种，
每格代表的长度根据放大倍数有所不同，由镜台测微尺来
八叠球菌
八叠球菌（显微镜下示意图）
链球菌
链球菌（显微镜下示意图）
b.杆菌(bacillus)
显微镜下的杆菌
显微镜下的螺旋菌
实验二 细菌革兰氏染色方法
一、目的要求
了解革兰氏染色的原理，学习并掌握革兰氏染
色的方法。
二、基本原理
•Peptidoglycan is found only in bacteria •Keeps cells from lysing, due to turgor pressure
三、实验准备
1. 菌种:大肠杆菌,枯草杆菌,金黄色葡萄球菌, 四联球菌 2. 染色剂:
3. 仪器或其他用具：显微镜，酒精灯，载玻 片，接种环，香柏油，檫镜纸等
四、革兰氏染色操作步骤
1、制片 载玻片上滴半滴蒸馏水后将大肠杆菌和枯草杆菌 涂在一起制一混合片，干燥。 2、染色 （1）初染：结晶紫染1min后水洗。 （2）媒染：碘液染1min后水洗。 （3）脱色：用95%的乙醇脱色30s后水洗。 （4）复染：沙黄或番红液染1～2min后水洗。 3 、镜检 干燥后用油镜观察菌体颜色和形态。
Counts all cells; cannot distinguish between living and dead
三、操作步骤
（1）酵母菌或霉菌孢子悬液的制备 （2）计数室上加样 （3）显微镜下计数 （4）清洗血球计数板
四、实验报告
1、显微镜计数结果将计数结果填入下表
各中格中菌数 A B 菌数/ml
菌名 大肠杆菌 淀粉水解试验 葡萄糖发酵试验 柠檬酸盐利用试验
变形杆菌
枯草杆菌
实验六 土壤和水体中微生物的 分离和计数
一 、实验目的
1. 掌握用稀释平板法分离土壤和水体中好气性细菌 2. 了解稀释平板测数的原理,掌握稀释倒平板法的操作 技能,认识细菌,霉菌的菌落特征
二 、实验原理
三 、实验步骤
1. 土壤样品的称取(5g);
平均值
1. 分析实验结果 2. 在分离真菌时为什么需加链霉素?
Viable Count
CFU = colony forming unit
四、实验结果
原液 10-1 10-2 霉菌总数 原液 （cfu / ml） 10-1 10-2 细菌总数 （cfu / ml）
河水
平均值 10-1 土壤 10-2 10-3 10-4 霉菌总数 （cfu / ml） 10-5 10-6 细菌总数 （cfu / ml）