实验一常用培养基的配制

器皿清洗和包扎小结
微生物学实验室所用的玻璃器皿，大多要进行消毒、 微生物学实验室所用的玻璃器皿，大多要进行消毒、灭菌 和用来培养微生物，因此对其质量、 和用来培养微生物，因此对其质量、洗涤和包扎方法均有一定 的要求。一般来说，玻璃器皿的质量要求硬质玻璃， 的要求。一般来说，玻璃器皿的质量要求硬质玻璃，才能承受 高温和短暂烧灼而不致破损；器皿的游离碱含量要少，否则会 高温和短暂烧灼而不致破损；器皿的游离碱含量要少， 影响培养基的酸碱度；对玻璃器皿的形状和包扎方法的要求， 影响培养基的酸碱度；对玻璃器皿的形状和包扎方法的要求， 以能防止污染杂菌为准；洗涤方法不恰当也会影响实验结果。 以能防止污染杂菌为准；洗涤方法不恰当也会影响实验结果。 因此，在实验准备的时候要严格按照要求洗涤实验器皿。 因此，在实验准备的时候要严格按照要求洗涤实验器皿。包扎 并灭菌后备用。 并灭菌后备用。
实Baidu Nhomakorabea思考
1.培养微生物的培养基应具备哪些条件？为什么？ 1.培养微生物的培养基应具备哪些条件？为什么？ 培养微生物的培养基应具备哪些条件 2.培养基配好后，为什么必须立即灭菌？ 2.培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查 培养基配好后 灭菌后的培养基是无菌的？ 灭菌后的培养基是无菌的？
高压蒸汽灭菌原理
高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌 锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。 锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水 蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀， 蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀， 继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力， 继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力， 从而使沸点增高，得到高于 从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固 ℃的温度。 变性而达到灭菌的目的。 变性而达到灭菌的目的。
培养基配制
培养一般细菌用） 牛肉膏蛋白胨培养基 （培养一般细菌用） 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水 3g 10g 5g 15～20g ～ 1000ml
调节pH 至7.2～7.4 调节 ～
实验原理
牛肉膏蛋白胨培养基含有牛肉膏、蛋白胨和 牛肉膏蛋白胨培养基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。在配制固体培养基时 。 还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化， 还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下 ℃时溶化，在40℃时 ℃ 凝固，通常不被微生物分解利用。 凝固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质 量和气温的不同而有所不同。 量和气温的不同而有所不同。 培养基要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性 调至中性或微碱性， 培养基要用稀酸或稀碱将其 调至中性或微碱性，以利于细菌的生长 繁殖。 繁殖
器皿包扎
培养皿的包扎
培养皿常用牛皮纸密密包紧，一般以5 培养皿常用牛皮纸密密包紧，一般以5～8套培养皿作 一包，包好后进行灭菌。 一包，包好后进行灭菌。
试管和三角烧瓶等的包扎
试管和三角瓶盖上铝帽或者塑料帽后用牛皮纸包扎， 试管和三角瓶盖上铝帽或者塑料帽后用牛皮纸包扎，进 行灭菌。包纸的目的在于保存期避免灰尘侵入。 行灭菌。包纸的目的在于保存期避免灰尘侵入。
微生物学实验
生命科学实验教学中心510 生命科学实验教学中心510室
实验一 常用培养基配制
实验目的 1. 掌握实验器皿的清洗和包扎方法 2. 掌握常用微生物培养基配制的一般方法和操作步骤 3. 掌握高压灭菌的原理和操作步骤
器皿清洗和包扎 培养基配制 高压蒸汽灭菌
器皿清洗
试管、培养皿、三角瓶、烧杯等玻璃器皿的清洗
4.灭菌 灭菌
将上述培养基以121℃， 20分钟高压蒸汽灭菌。 ℃ 分钟高压蒸汽灭菌。 将上述培养基以 分钟高压蒸汽灭菌
5.倒板 倒板
将灭菌后的培养基冷至50℃左右，取出高压过的培养皿， 将灭菌后的培养基冷至 ℃左右，取出高压过的培养皿，制 备牛肉膏蛋白胨培养基固体平板 。
培养基配制小结
值不要调过头， 注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基 值不要调过头 以避免回调，否则， 内各离子的浓度。 内各离子的浓度。
2.溶化 溶化
在上述三角瓶中可加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后， 在上述三角瓶中可加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后， 加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。 加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。
3.调节 调节pH 调节
在未调pH前 先用精密 试纸测量培养基的原始 试纸测量培养基的原始pH值 在未调 前，先用精密pH试纸测量培养基的原始 值，如果 pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入 偏酸， 偏酸 用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌， ，边加边搅拌， 并随时用pH试纸测其 试纸测其pH值 直至pH达 ２ 并随时用 试纸测其 值，直至 达7.２～7.4。反之，则用 。反之， 1mol/L HCl进行调节。 进行调节。 进行调节
实验器材
牛肉膏，蛋白胨， 牛肉膏，蛋白胨， NaCl，琼脂；1mol/L NaOH， 1mol/L HCl；三角瓶， ，琼脂； ， ；三角瓶， 烧杯，量筒，玻璃棒，培养皿，电子天平，高压蒸汽灭菌锅， 试纸 试纸（ 烧杯，量筒，玻璃棒，培养皿，电子天平，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（ pH 6.4~8.0）等。 ）
用瓶刷或海绵沾上洗衣粉等洗涤剂刷洗， 用瓶刷或海绵沾上洗衣粉等洗涤剂刷洗，然后用自来水充分 冲洗干净。热的肥皂水去污能力更强， 冲洗干净。热的肥皂水去污能力更强，可有效地洗去器皿上的油 污。
载玻片与盖玻片的清洗
用过的载玻片与盖玻片如滴有香柏油， 用过的载玻片与盖玻片如滴有香柏油，要先用皱纹纸擦去或 浸在二甲苯内摇晃几次，使油垢溶解，再在肥皂水中煮沸5 浸在二甲苯内摇晃几次，使油垢溶解，再在肥皂水中煮沸5～10 分钟，用软布或脱脂棉花擦试，立即用自来水冲洗， 分钟，用软布或脱脂棉花擦试，立即用自来水冲洗，最后用蒸馏 水换洗数次，待干后浸于95 酒精中保存备用。 95％ 水换洗数次，待干后浸于95％酒精中保存备用。使用时在火焰上 烧去酒精。 烧去酒精。
实验步骤 1.称量 称量
按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入 按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入 三角瓶中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量， 三角瓶中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用 热水溶化后倒入三角瓶 琼脂在调节好pH后加入 三角瓶(琼脂在调节好 后加入) 热水溶化后倒入三角瓶 琼脂在调节好 后加入 。
高压蒸汽灭菌方法
1. 将灭菌篮取出，再向锅内加入适量的水，使水面与底孔相平为 将灭菌篮取出，再向锅内加入适量的水， 宜。 2. 放回灭菌篮，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防 放回灭菌篮，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤， 碍蒸汽流通而影响灭菌效果。 碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与壁面 接触。 接触。 3. 关闭高压锅盖排气阀，设定工作状态，本实验用 121℃，20分 关闭高压锅盖排气阀，设定工作状态， ℃ 分 钟灭菌。 钟灭菌。
4.灭菌所需时间到后，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋 灭菌所需时间到后，当压力表的压力降至 时 打开排气阀， 灭菌所需时间到后 松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。如果压力未降到 时 松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。如果压力未降到0时，打开排气 就会因锅内压力突然下降， 阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不 平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成管塞沾染培养基而发生污染。 平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成管塞沾染培养基而发生污染。 5. 将取出的液体灭菌培养基放入 ℃保存，如果是制备固体培养基平 将取出的液体灭菌培养基放入4℃保存， 板则要待固体培养基温度降至50℃左右制备平板， 板则要待固体培养基温度降至 ℃左右制备平板，固体培养基平板 也放4℃保存。 也放 ℃保存。