药物分析课件第4章-药物定量分析与分析方法验证共47页文档
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4章 药物定量分析与分析方法验证
枸橼酸铋钾、葡萄糖酸锌 ——EDTA滴定法测定
2013-07-29
9
碱水解后测定法 适合于卤素与脂肪链相连的卤代烷烃，经加热回流使其水解，有机结 合的卤素转变成无机的卤素离子，然后用适当方法进行测定。 例 三氯叔丁醇的含量测定 CCl3－C(CH3)2－OH + 4NaOH 回流 3NaCl Fw=186.47 用银量法(佛尔哈德法)测定氯化钠含量：氯化钠与硝酸银生成氯化银沉 淀，过量的硝酸银用硫氰酸铵液回滴定。
磺溴酞钠的换算因数=
被测组分重 = 32.06 233.3 称量形式重
BaSO4
2013-07-29
20
与测S不同 溴 取本品约0.2g，精密称定，照氧瓶燃烧法（附录Ⅶ C）进行
有机破坏,选用1000ml燃烧瓶，以0.4％氢氧化钠溶液10ml、浓过 氧化氢溶液0.5ml与水10ml作为吸收液,俟生成的烟雾完全吸入吸 收液后，用水稀释至100ml，煮沸5分钟，放冷，加稀硝酸使成酸 性，精密加硝酸银滴定液(0.1mol/L)20ml，摇匀，再加硫酸铁铵 指示液2ml，用硫氰酸铵滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果 用空白试验校正。每1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于7.990mg 的溴(Br)。
氨苯砜中检查“有关杂质”采用TLC法：取本品， 精密称定，加水适量制成10mg/mL的溶液，作为 样品测定液。取样品测定液1.00mL加水稀释至 100.0mL，作为杂质对照液。取样品测定液10μl 和杂质对照液5μl点在同一块薄层板上，展开。 样品测定液所显杂质斑点颜色不得比杂质对照液更 深 。 计 算 样 品 中 “ 有 关 杂 质 ” 的 限 量 。 (0.5%) 样品测定液: 10mg/mL 杂质对照液: (10mg/mL1.00mL)/100.0mL=0.1mg/mL
药物分析课件第4章药物定量分析与分析方法验证
○ A．做空白试验 B．做对照实验 ○ C．做回收试验 D．增加平行测定次数 ○ E．选用多种测定方法
[B型题]
HPLC。
按分离方法分为：PC；TLC；柱色谱；GC；
（一）HPLC法
1. 对HPLC仪器一般要求 色谱柱、流动相按品种项下要求。
色谱柱的理论板数：n = 5.54(tR /Wh/2)2
2. 系统性试验 于1.5
分离度：R = 2（tR1 – tR2)/(W1 + W2); 要大
拖尾因子：T = W /2d 应在0.9 ～
1. 原料药 可用已知纯度对照品或样品进行测定；或与已建准 确
度的另一方法测定的结果进行比较。 2. 制剂 要考察辅料对回收率的影响。采用在空白辅料中加入 原
料对照品的方法作回收率试验，然后计算RSD。 具体做法：测定高、中、低三个浓度，n=3, 共9个数据来评价
回收率的RSD＜2%；用UV和HPLC发时，一般
三．含量测定 常用的方法对照品比较
法:Ci = (Ri-Rib)/(Rr-Rrb) ×Cr
Ch.P收载地高辛片、利血平片、洋地黄毒苷片。
二．荧光分析仪 有二个单
色光器—激发单色光器与
发射单色光
器；且激发光源、样品池和检测器成直 角。
三、色谱分析法
按分离原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色 谱
方法分类
2. 用硫酸水解后测定法 例如：硬脂酸镁的含量测定
Mg(C17H35COO)2 + H2SO4
H2SO4 + 2NaOH
MgSO4 + 2C17H35COOH Na2SO4 + 2H2O
（三）经氧化还原后测定法
COOH
I
I
[B型题]
HPLC。
按分离方法分为：PC；TLC；柱色谱；GC；
（一）HPLC法
1. 对HPLC仪器一般要求 色谱柱、流动相按品种项下要求。
色谱柱的理论板数：n = 5.54(tR /Wh/2)2
2. 系统性试验 于1.5
分离度：R = 2（tR1 – tR2)/(W1 + W2); 要大
拖尾因子：T = W /2d 应在0.9 ～
1. 原料药 可用已知纯度对照品或样品进行测定；或与已建准 确
度的另一方法测定的结果进行比较。 2. 制剂 要考察辅料对回收率的影响。采用在空白辅料中加入 原
料对照品的方法作回收率试验，然后计算RSD。 具体做法：测定高、中、低三个浓度，n=3, 共9个数据来评价
回收率的RSD＜2%；用UV和HPLC发时，一般
三．含量测定 常用的方法对照品比较
法:Ci = (Ri-Rib)/(Rr-Rrb) ×Cr
Ch.P收载地高辛片、利血平片、洋地黄毒苷片。
二．荧光分析仪 有二个单
色光器—激发单色光器与
发射单色光
器；且激发光源、样品池和检测器成直 角。
三、色谱分析法
按分离原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色 谱
方法分类
2. 用硫酸水解后测定法 例如：硬脂酸镁的含量测定
Mg(C17H35COO)2 + H2SO4
H2SO4 + 2NaOH
MgSO4 + 2C17H35COOH Na2SO4 + 2H2O
（三）经氧化还原后测定法
COOH
I
I
药物分析课件 第四章 药物定量分析与分析方法验证_OK
样品能在足够的氧气中燃烧分解完全样品能在足够的氧气中燃烧分解完全有利于将燃烧分解产物较快地吸收到吸有利于将燃烧分解产物较快地吸收到吸防止爆炸的可能性防止爆炸的可能性26燃烧瓶要洁净不能残留有机溶剂不能用有机润滑剂涂抹瓶塞要有防爆措施氧气要充足确保燃烧完全产物不能有黑色炭化物燃烧产生的烟雾要被完全吸收充分振摇和放置都是为了保证吸收完全例
③要有防爆措施 ④氧气要充足，确保燃烧完全，产物不能有黑色
炭化物 ⑤燃烧产生的烟雾要被完全吸收
充分振摇和放置都是为了保证吸收完全 例：碘产生紫色烟雾；氯、氟产生白色烟雾，烟
雾颜色完全消失后，即表示吸收完全 ⑥测定含氟有机化合物时要用石英燃烧瓶
26
4、应用
含卤素、硫、磷、氟及硒等有机药物的鉴别、杂 质的检查及含量测定
100%
注射剂：标示量％＝
V0
V T 标示量
100%
V VO
T F 标示量
100%
VO : 量取注射剂的体积， ml
36
(2)间接滴定法 1）生成物滴定法
供试品＋试剂 A 化合物 B
化合物 B＋滴定液 C 化合物 D
计量滴定液消耗的量，计算供试品的含量 计算同直接滴定法
37
2）回滴定法（剩余滴定法） 原理：先在待测样品溶液中加定量、过量的滴定
10
（一）湿法破坏
（1） 硝酸-高氯酸法 适用于血、尿、组织等生物样品的破坏，有
机金属药物经破坏后，得到的无机金属离子一 般呈高价态。
本法不能用于含氮杂环药物的破坏
干法灼烧法 11
（2） 硝酸-硫酸法 适用于大多数有机物质的破坏，破坏得到的
无机金属离子均为高价态。 不能用于含碱土金属有机药物的破坏
27
氧瓶燃烧
③要有防爆措施 ④氧气要充足，确保燃烧完全，产物不能有黑色
炭化物 ⑤燃烧产生的烟雾要被完全吸收
充分振摇和放置都是为了保证吸收完全 例：碘产生紫色烟雾；氯、氟产生白色烟雾，烟
雾颜色完全消失后，即表示吸收完全 ⑥测定含氟有机化合物时要用石英燃烧瓶
26
4、应用
含卤素、硫、磷、氟及硒等有机药物的鉴别、杂 质的检查及含量测定
100%
注射剂：标示量％＝
V0
V T 标示量
100%
V VO
T F 标示量
100%
VO : 量取注射剂的体积， ml
36
(2)间接滴定法 1）生成物滴定法
供试品＋试剂 A 化合物 B
化合物 B＋滴定液 C 化合物 D
计量滴定液消耗的量，计算供试品的含量 计算同直接滴定法
37
2）回滴定法（剩余滴定法） 原理：先在待测样品溶液中加定量、过量的滴定
10
（一）湿法破坏
（1） 硝酸-高氯酸法 适用于血、尿、组织等生物样品的破坏，有
机金属药物经破坏后，得到的无机金属离子一 般呈高价态。
本法不能用于含氮杂环药物的破坏
干法灼烧法 11
（2） 硝酸-硫酸法 适用于大多数有机物质的破坏，破坏得到的
无机金属离子均为高价态。 不能用于含碱土金属有机药物的破坏
27
氧瓶燃烧
药物定量分析与分析方法验证
例3、枸橼酸铁铵的测定
ChP（2000）
ห้องสมุดไป่ตู้取本品约 0.5g ，精密称定，置具塞锥形瓶中。加
水15ml溶解后，加硫酸lml，加热至溶液由暗棕色变成
淡黄色，放冷至约 15℃，滴加高锰酸钾试液至溶液显 粉红色并持续 5s ，加盐酸 15ml 与碘化钾试液 15ml ，密 塞，静置 3min ，加水 50ml 稀释后，用硫代硫酸钠滴定 液(0.1mol/L)滴定至近终点时，加淀粉指示液2ml，继 每 lml 的硫代硫酸钠滴定液 (0.1mol/L) 相当于 5.585mg
续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。 的Fe。
（二）经水解后测定法
1.碱水解后测定法 是将含卤素的有机药物溶于适当 溶剂（如乙醇）中，加氢氧化钠溶液或硝酸银溶液后， 加热回流使其水解，将有机结合的卤素经水解作用转 变为无机的卤素离子，然后选用间接银量法进行测定。 本法适用于含卤素有机药物结构中卤素原子结合不牢 固的药物，如卤素和脂肪碳链相连者。
(0.1mol/L)相当于25.29mg的汞撒利。
3、经还原分解后测定法 ①碱性还原后测定 卤素结合于芳环上时，由
于分子中碘的结合较牢固，需在碱性溶液中加还原
剂（如锌粉）回流，使碳-碘键断裂，形成无机碘 化物后测定。 ②酸性还原后测定法 两法均是将含卤素有机药物在碱性或酸性下，加
还原剂（如锌粉）加热回流，药物产生还原裂解反
C4H7Cl3O·1/2H2O。
反应摩尔比为1∶3
T——滴定度，每1ml滴定液相当于被测组分的mg数
c——滴定液浓度，mol/L
M——被测物的摩尔质量，g/mol n——1mol样品消耗滴定液的摩尔数，常用反应摩尔比体现，即 反应摩尔比为1∶n
药物分析 第4章 药物定量分析与分析方法验证
三氯叔丁醇的含量测定
CCl3-C(CH3)2-OH + 4NaOH
+ HCOONa +2H2O
△
(CH3)2CO +3NaCl
NaCl + AgNO3
AgCl
+ NaNO3
AgSCN +
AgNO3 + NH4SCN
NH4NO3
2. 用酸水解后测定法
某些含金属的有机药物，用 适当的酸性水溶液溶解并转化为 可溶性盐，适合于分析。
含量% = （V 空白 – V 剩余) ×T ×F /W×100%
例如：司可巴比妥钠的含量测定 间接碘量法 做空白试验 90页
CH2 CH CH2 C C3H7 CH CH3
O H C N C ONa C N O
司可巴比妥钠
求滴定度？ 写出含量计算式？
二、光谱分析法
（一）紫外-可见分光光度法（200nm～760nm) 灵敏度高，可达10-4g/ml ～ 10-7g/ml 1. 特点 准确度高，SRD（%）为2% ～5% 仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用 范围广。
湿法破坏 干法破坏
(一)湿法破坏
HNO3-H2SO4法 H2SO4-硫酸盐法
H2SO4-HClO4法
H2SO4-KMnO4 分解剂 和 氧化剂 破坏共价键
应用实例：凯氏定氮法
用于蛋白质、氨基酸、含有氨基的药物、
含有酰胺结构的药物的含量测定
常量法和半微量法
操作过程：
1、消化：
药物置凯氏烧瓶中，加入硫酸、硫酸钾，
（2）间接滴定法
①生成物滴定法
例如 葡萄糖酸锑钠的含量测定
H+
Sb5+ + 2KI
药物分析药物定量分析与分析方法验证 ppt课件
单质溴还原为溴负离子。
测定含碘药物时，分解产生的碘化氢可被氧
气进一步氧化，其燃烧产物主要为单质碘，
并 含 有 少 量 的 五 价 碘 （ HIO3 ） 与 一 价 碘
吸
（HI）。当使用AgNO3滴定法测定含量时，
收 液 的
用H2O-NaOH溶液-SO2饱和溶液作为吸收液， 上述不同价态的碘均转变为负一价的碘
H2O2与水的混合液作为吸收液，燃烧产物经
吸收转变为H2SO4，加入盐酸溶液并煮沸除
去剩余的过氧化氢后，加入BaCl2，使硫酸生
吸
成BaSO4，以重量法测定含量。
收 液
含磷药物（有机膦酸类）的燃烧产物为P2O5，
的 以水为吸收液，加入少量硝酸溶液并经煮沸
选 择
使焦磷酸（H4P2O7）和偏磷酸[(HPO3)n]转 化为磷酸后，采用钼蓝比色法测定含量。
f. 砷盐的检查：有机结合的砷经与无水Na2CO3或 Ca(OH)2 、 Mg(NO3)2 共 热 （ <700℃ ） 转 化 为 无机砷酸盐后，依法检查。本法主要用于高分子 化合物（如：右旋糖酐铁）或植物提取物（如： 大豆油）中砷盐的检查，亦应用与少数有机药物 （如吡罗昔康、布美他尼等）.
② 氧瓶燃烧法：
1. 湿法破坏
适用于含氮有机合成药物分析的前处理，在生物制 品分析中用于氮（包括蛋白质）、磷、硫柳汞及氯 化钠测定法的前处理； 亦可用于生物样品中金属元素测定时生物基质的去除。 主要分解剂：硫酸 辅助分解剂：硝酸、高氯酸、过氧化氢。 湿法破坏可分为：硫酸-硝酸法、硫酸-高氯酸法、 硫酸-硫酸盐法、硝酸-高锰酸钾法。
选 （ NaI ） ； 若 使 用 间 接 碘 量 法 测 定 时 ， 用
择
H2O-NaOH溶液为吸收液，此时吸收液中的
第四章药物定量分析与方法验证PPT课件
5ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
（二）容量分析法的计算问题
1.滴定度（T）：
每1ml规定浓度的滴定液相当于被测物质的质量(mg)
2.滴定度的计算
aA（待测物） + bB（滴定液）
a
b
T/M
1·m
cC + dD
T = m×a/b×M m：滴定液浓度 (mol/L)
M：被测物分子量
WA=T×VB 6
3.百分含量的计算
（1）直接滴定法 设至终点时，消耗滴定液体积为V ml
CX
CX＝—C—AR·R—AX—
要求：进样量准确、操作条件稳定
33
34
（二）GC法 1. 对GC仪器一般要求
载 气：氮气 色谱柱：填充柱或毛细管柱 填充柱：内径2～4mm，长1～10m，内装吸附剂
高分子多孔小球或涂渍固定液的载体 毛细管柱：内径0.2～0.5mm，长10～100m，
片数＝ W
W
15
16
2）吸收系数法：
E C X
AX
1%
1cm
E 注意： 1％ 1cm
应>100
应注意仪器的校正和检定：E
1％ 1cm
作为计算浓
度的因数进行定量的方法，不是任何情况下都
适用的，特别是单色光不纯的情况下，A会随
仪器不同而变化，误差较大。
但若认定一台仪器，固定其工作状态和测 定条件，则C和A间的关系在多数情况下仍符合 Lambert－Beer定律。
2. 系统适用性试验
色谱柱的理论板数：n = 5.54(tR /Wh/2)2 分离度：R = 2（tR1 – tR2)/(W1 + W2); 应大于1.5
重复性：对照液连续进样5次，峰面积RSD≤2.0％
（二）容量分析法的计算问题
1.滴定度（T）：
每1ml规定浓度的滴定液相当于被测物质的质量(mg)
2.滴定度的计算
aA（待测物） + bB（滴定液）
a
b
T/M
1·m
cC + dD
T = m×a/b×M m：滴定液浓度 (mol/L)
M：被测物分子量
WA=T×VB 6
3.百分含量的计算
（1）直接滴定法 设至终点时，消耗滴定液体积为V ml
CX
CX＝—C—AR·R—AX—
要求：进样量准确、操作条件稳定
33
34
（二）GC法 1. 对GC仪器一般要求
载 气：氮气 色谱柱：填充柱或毛细管柱 填充柱：内径2～4mm，长1～10m，内装吸附剂
高分子多孔小球或涂渍固定液的载体 毛细管柱：内径0.2～0.5mm，长10～100m，
片数＝ W
W
15
16
2）吸收系数法：
E C X
AX
1%
1cm
E 注意： 1％ 1cm
应>100
应注意仪器的校正和检定：E
1％ 1cm
作为计算浓
度的因数进行定量的方法，不是任何情况下都
适用的，特别是单色光不纯的情况下，A会随
仪器不同而变化，误差较大。
但若认定一台仪器，固定其工作状态和测 定条件，则C和A间的关系在多数情况下仍符合 Lambert－Beer定律。
2. 系统适用性试验
色谱柱的理论板数：n = 5.54(tR /Wh/2)2 分离度：R = 2（tR1 – tR2)/(W1 + W2); 应大于1.5
重复性：对照液连续进样5次，峰面积RSD≤2.0％
第4章-药物定量分析
验证分析方法的具体内容
鉴 别 准确度 重复性 精密度 中间精密度 专属性 检测限 定量限 线性 范围 耐用性 － ＋ － － － － ＋ ＋* ＋ －** ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ － － － ＋ ＋* ＋ － － ＋ ＋ ＋ － － 杂质检查 定量 ＋ ＋ 限度 － － 含量测定及 溶出度测定 ＋ ＋
系统适用性试验
色谱柱的理论塔板数 分离度 重复性 拖尾因子
色谱柱的理论塔板数
N = 5.54 (tR/W1/2)2 = 16(t/W)2 改变柱长、内径、固定相牌号、固定 相颗粒粒径等
分离度
定量峰与其它峰或内标峰之间的分离度 R应大于1.5
重复性
取各品种项下的对照品溶液，连续进样5 次，其峰面积测量值的RSD不应大于 2.0% 配制相当于80%，100%，120%的对照品 溶液，加入规定量的内标溶液，配成3种 不同浓度的溶液，分别进样3次，计算平 均校正因子，其RSD不应大于2.0%
全血（加抗凝剂） 测定血样中平均分布于细 胞内和细胞外的药浓
• 种类：
硫酸-硝酸法 硫酸-高氯酸法 硫酸-硫酸盐法 硝酸-高锰酸钾法
凯氏定氮法
（二）干法破坏
1.高温炽灼法
---- 将有机物灼烧灰化 • 适用于湿法不易破坏完全的有机药物及 某些不能用硫酸破坏的有机药物 • 不适用于含易挥发金属有机药物的破坏 （砷、汞） • 常加入无水碳酸钠或轻质氧化镁助灰化
二．精密度
1．表示方法 • 标准偏差SD
• 相对标准偏差
relative standard deviation RSD
即变异系数 coefficient of variation CV
2. 重复性
• 在相同操作条件下，由同一个分析人员 测定同一种样品所得结果的精密度。
4药物定量分析与分析方法验证解析精品PPT课件
反应摩尔比为1∶6
T cM 0.02 416.34 1.388mg / ml
n
6
98：140. 氧瓶燃烧法中的装置有 A. 磨口硬质玻璃锥形瓶 B. 磨口软质玻璃锥形瓶 C. 铂丝 D. 铁丝 E. 铝丝
96：133（99x：138）．选择氧瓶燃烧 法所必备的实验物品 A. 磨口硬质玻璃锥形瓶 B. 铂丝 C. 普通滤纸 D. 氢气 E. 无灰滤纸
Fe (SCN) 2+ （淡棕红色）
测定方法 取本品约0.1g，精密称定，加 乙醇5ml溶解后，加20%氢氧化钠溶液5ml， 加热回流15min，放冷至室温，加水20ml 与硝酸5ml，精密加硝酸银滴定液 (0.1mol/L) 30ml，再加邻苯二甲酸二丁酯 5ml，密塞，强力振摇后，加硫酸铁铵指 示液2ml，用硫氰酸铵滴定液(0.1mol/L)滴 定，并将滴定的结果用空白试验校正。每 1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于 6.216mg的C4H7Cl3O·1/2H2O。
OH SO3Na
磺溴酞钠
实验诊断用药 （肝功能）
（二）含卤素有机药物的分析
C X 适当的处理 X
直接回流后测定法 碱性或酸性还原后测定法 氧瓶燃烧分解后测定法
1. 直接回流后测定法 本法是将含卤素有机药物溶于适当
溶剂（如乙醇）中，加入氢氧化钠溶 液（或一定量过量的硝酸银滴定液） 后，加热回流使其水解，将有机结合 的卤素转变为无机的卤素离子，然后 采用银量法（Volhard法）测定。
本法特点是简便、快速、破坏 完全，尤其适用于微量样品的分析
（ 2） 仪器与材料
①仪器装置 燃烧瓶为500、1000或
2000ml无色、磨口、厚壁、 硬质玻璃锥型瓶；瓶塞空 心，底部熔封铂丝一根， 下端呈螺旋状或网状
T cM 0.02 416.34 1.388mg / ml
n
6
98：140. 氧瓶燃烧法中的装置有 A. 磨口硬质玻璃锥形瓶 B. 磨口软质玻璃锥形瓶 C. 铂丝 D. 铁丝 E. 铝丝
96：133（99x：138）．选择氧瓶燃烧 法所必备的实验物品 A. 磨口硬质玻璃锥形瓶 B. 铂丝 C. 普通滤纸 D. 氢气 E. 无灰滤纸
Fe (SCN) 2+ （淡棕红色）
测定方法 取本品约0.1g，精密称定，加 乙醇5ml溶解后，加20%氢氧化钠溶液5ml， 加热回流15min，放冷至室温，加水20ml 与硝酸5ml，精密加硝酸银滴定液 (0.1mol/L) 30ml，再加邻苯二甲酸二丁酯 5ml，密塞，强力振摇后，加硫酸铁铵指 示液2ml，用硫氰酸铵滴定液(0.1mol/L)滴 定，并将滴定的结果用空白试验校正。每 1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于 6.216mg的C4H7Cl3O·1/2H2O。
OH SO3Na
磺溴酞钠
实验诊断用药 （肝功能）
（二）含卤素有机药物的分析
C X 适当的处理 X
直接回流后测定法 碱性或酸性还原后测定法 氧瓶燃烧分解后测定法
1. 直接回流后测定法 本法是将含卤素有机药物溶于适当
溶剂（如乙醇）中，加入氢氧化钠溶 液（或一定量过量的硝酸银滴定液） 后，加热回流使其水解，将有机结合 的卤素转变为无机的卤素离子，然后 采用银量法（Volhard法）测定。
本法特点是简便、快速、破坏 完全，尤其适用于微量样品的分析
（ 2） 仪器与材料
①仪器装置 燃烧瓶为500、1000或
2000ml无色、磨口、厚壁、 硬质玻璃锥型瓶；瓶塞空 心，底部熔封铂丝一根， 下端呈螺旋状或网状
第四章药物定量分析与分析方法验证pptPowerPoi
例 泛影酸的测定 ChP (2000)
取本品约0.4g，精密称定，加氢氧化钠溶 液30ml与锌粉1.0g，加热回流30min，放冷，冷 凝管用少量水洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水洗 涤3次，每次15ml，洗液与滤液合并，加冰醋 酸5ml与曙红钠指示液5滴，用硝酸银滴定液 (0.1mol/L)滴定。每1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L) 相当于20.46mg的C11H9 I 3N2O4。
第四章药物定量分析与分析方法验证 pptPowerPoi
本法适用于含卤素有机药物结构中 卤素原子结合不牢固的药物（如卤原 子和脂肪碳原子相连者）。
第四章药物定量分析与分析方法验证 pptPowerPoi
例:三氯叔丁醇的测定 ChP（2000）
原理 三氯叔丁醇在氢氧化钠溶液中加热 回流水解，氯元素全部转变成氯化钠，然 后用剩余滴定法，即于水解液中加硝酸酸 化，再加入定量过量的硝酸银滴定液，使 Cl-生成AgCl沉淀，过量的硝酸银，以Fe3+ 为指示剂，用硫氰酸铵液回滴定。
本法不能用于含氮杂环药物的破坏。
第四章药物定量分析与分析方法验证 pptPowerPoi
2. 硝酸-硫酸法
本法适用于大多数有机物质的破坏， 破坏得到的无机金属离子均为高价态。
本法不能用于含碱土金属有机药物的 破坏。
第四章药物定量分析与分析方法验证 pptPowerPoi
3. 硫酸-硫酸盐法
本法是往样品中加入浓硫酸作氧化剂， 加入硫酸盐提高硫酸的沸点，增强硫酸的 氧化破坏能力，且防止硫酸的分解损失。
第四章药物定量分析与分析方法验证 pptPowerPoi
原理： Mg(C17 H35COO)2 + H2SO4
△ MgSO4 + 2 C17 H35COOH
第四章药物定量分析与分析方法验证课件
Ar W
含量%= Ax×D ×100%(原料）
E×100×W
3.计算分光光度法 a.解线性方程组法，b.双入测定法 c.系数倍率法，d.导数法
片剂和注射剂
Ax×Cr×D×W 标示量%= ————————×100%
Ar×W样×标示量
A×D×W 标示量%=—————————————
E 11c%m×100×W样×标示量
(1).内标加校正因子 对照品+内标：进样
f= As/Cs( 内）
Ar/Cr(外）
供试液+内标
Cx=f Ax
As’/Cs’
1）一般两次进样量相同 2）两次所加内标量相同
HPLC. 测定（用A或h定量）
(2).外标法：
12))标单准点曲比线较法法：：C回x归=C方r AA程xr ，相关系数，求Cx
NaOH/H2O,Br用H2O/NaOH/H2O2,S用H2O2/H2O, Se用AgNO3
氧瓶燃烧 . (2)操作
称样于无灰滤纸中包好，并固定在铂丝下端， 露出尾巴。
在燃烧瓶中加入规定吸收液，快速通氧使之充 满瓶子。
点燃滤纸包尾部，迅速放入燃烧瓶，按紧瓶塞， 少量水封住瓶口。
燃烧完后，振摇，使烟雾全部吸收于吸收液中。 用适当方法测定，同时做空白。
+ 2KBrO3
3 N
+3N2+3H2O+2KBr
含量计算
1. 直接滴定：
原料：含量= T.V(mg) ×F×100%
W
F: C/C0(浓度系数）
T·V·F×W 片剂的标示量%=———————×100%
W×标示量
2.间接滴定
(1)置换滴定
待测物与化合物A反应, 生成B, 再用标准滴定液
04第四章药物定量分析与分析方法验证
▪ 2010年，美国科学家理查德·赫克与日本科学家根岸荣一和铃木章因在 有机合成领域中钯催化交叉偶联反应方面的卓越研究成果而获奖。这 一成果广泛应用于制药、电子工业和先进材料等领域，可以使人类造 出复杂的有机分子。
▪ 2009年，英国科学家文卡特拉曼·拉马克里希南、美国科学家托马斯·施 泰茨和以色列科学家阿达·约纳特因对“核糖体的结构和功能”研究的 贡献而获奖。
H2O2-NaOH液 或NaOH液硫酸肼饱和液
NaOH液硫酸肼饱和液
测定方法
pH4.3 HAc-NaAc Buffer 茜素氟蓝 分光光度法
银量法 汞量法 分光光度法
银量法 分光法
银量法 碘量法 汞量法 分光法
碘苯酯含量测定
取本品约20mg，精密称定，照氧瓶燃烧法进行有机破坏，用NaOH T.S. 2ml与H2O 10ml为吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液10 ml，密 塞，振摇放置数分钟，加甲酸约1ml，用水洗涤瓶口，并通入空气流约 3~5min，以除去剩余的溴蒸气，加KI 2g，密塞，摇匀，用Na2S2O3液 (0.02mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失， 并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml的硫代硫酸钠液(0.02mol/L)相当 于1.388mg的C19H29IO2
（四）最低定量限LOQ 3～5倍t1/2，或1/10～1/20倍Cmax
（五）样品稳定性 室温、冻融、长期冰冻
（六）提取回收率（绝对回收率） 一般低于100％，须稳定
（七）质控样品 已知浓度样品均匀放入待测生物样品序列中，以
确保定量测定的准确度
样品 固相净化 及 反相高效液相色谱法 测定血浆中茶碱
测定条件稍有变动时，对测定结果的影响程度。
▪ HPLC法变动因素有：流动相组成与pH，色谱柱， 柱温，流速等。
▪ 2009年，英国科学家文卡特拉曼·拉马克里希南、美国科学家托马斯·施 泰茨和以色列科学家阿达·约纳特因对“核糖体的结构和功能”研究的 贡献而获奖。
H2O2-NaOH液 或NaOH液硫酸肼饱和液
NaOH液硫酸肼饱和液
测定方法
pH4.3 HAc-NaAc Buffer 茜素氟蓝 分光光度法
银量法 汞量法 分光光度法
银量法 分光法
银量法 碘量法 汞量法 分光法
碘苯酯含量测定
取本品约20mg，精密称定，照氧瓶燃烧法进行有机破坏，用NaOH T.S. 2ml与H2O 10ml为吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液10 ml，密 塞，振摇放置数分钟，加甲酸约1ml，用水洗涤瓶口，并通入空气流约 3~5min，以除去剩余的溴蒸气，加KI 2g，密塞，摇匀，用Na2S2O3液 (0.02mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失， 并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml的硫代硫酸钠液(0.02mol/L)相当 于1.388mg的C19H29IO2
（四）最低定量限LOQ 3～5倍t1/2，或1/10～1/20倍Cmax
（五）样品稳定性 室温、冻融、长期冰冻
（六）提取回收率（绝对回收率） 一般低于100％，须稳定
（七）质控样品 已知浓度样品均匀放入待测生物样品序列中，以
确保定量测定的准确度
样品 固相净化 及 反相高效液相色谱法 测定血浆中茶碱
测定条件稍有变动时，对测定结果的影响程度。
▪ HPLC法变动因素有：流动相组成与pH，色谱柱， 柱温，流速等。
第四章药物定量分析与分析方法验证文稿演示
1. 碱性还原后测定 例如：泛影酸的含量测定
COOH
I
I
+ 11NaOH
CH3CONH NHCO3CH I
COOH
+ 3Zn H2N
NH2
+ 3NaI 3+CO2OCNHa + 32 N+aZ23OnHO
N3aI + AgNO AgI3 + NaNO
2. 酸性还原后测定 例如：碘番酸的含量测定 Zn还原 后银量法
2.氧瓶燃烧法
系指将含有待测元素的有机药物置于充满氧气的密闭 的燃烧瓶中充分燃烧，使有机结构部分彻底分解为CO2 和H2O，待测元素根据电负性的不同转化为不同价态 的氧化物，被吸收于适当的吸收液中，再根据其性质 和存在方式选择方法进行分析。
1. 仪器装置 500ml, 1000ml, 2000ml, 磨口、硬质玻璃锥形瓶 2. 称样 固体样；液体样 3. 燃烧分解操作法 4. 吸收液的选择 用于X、S、Se等的鉴别、检查、含量测定时
H2O
银量法；分光法
银量法；碘量法；汞量 法；分光法
磷钼蓝比色法
第二节 定量分析方法特点
一、容量分析法
（一）容量分析法的特点 操作简单、快速； 比较准确（RSD＜0.2%）； 仪器普通易得。
——凯氏定氮法
测定含有氨基和酰胺结 构的药物结构
分解剂/消化剂 辅助分解剂
第一节 定量分析样品的前处理方法
凯氏定氮法原理 将含氮药物与硫酸在凯氏烧瓶中共热，药物分子中
有机结构被“消化”成CO2和H2O，有机结合的氮转 化为无机氮，与过量的硫酸结合为硫酸氢铵和硫酸铵， 经碱化后释放出氨气，随水蒸气馏出，用硼酸溶液或 定量的酸滴定液吸收后，再用酸或碱滴定液滴定。
COOH
I
I
+ 11NaOH
CH3CONH NHCO3CH I
COOH
+ 3Zn H2N
NH2
+ 3NaI 3+CO2OCNHa + 32 N+aZ23OnHO
N3aI + AgNO AgI3 + NaNO
2. 酸性还原后测定 例如：碘番酸的含量测定 Zn还原 后银量法
2.氧瓶燃烧法
系指将含有待测元素的有机药物置于充满氧气的密闭 的燃烧瓶中充分燃烧，使有机结构部分彻底分解为CO2 和H2O，待测元素根据电负性的不同转化为不同价态 的氧化物，被吸收于适当的吸收液中，再根据其性质 和存在方式选择方法进行分析。
1. 仪器装置 500ml, 1000ml, 2000ml, 磨口、硬质玻璃锥形瓶 2. 称样 固体样；液体样 3. 燃烧分解操作法 4. 吸收液的选择 用于X、S、Se等的鉴别、检查、含量测定时
H2O
银量法；分光法
银量法；碘量法；汞量 法；分光法
磷钼蓝比色法
第二节 定量分析方法特点
一、容量分析法
（一）容量分析法的特点 操作简单、快速； 比较准确（RSD＜0.2%）； 仪器普通易得。
——凯氏定氮法
测定含有氨基和酰胺结 构的药物结构
分解剂/消化剂 辅助分解剂
第一节 定量分析样品的前处理方法
凯氏定氮法原理 将含氮药物与硫酸在凯氏烧瓶中共热，药物分子中
有机结构被“消化”成CO2和H2O，有机结合的氮转 化为无机氮，与过量的硫酸结合为硫酸氢铵和硫酸铵， 经碱化后释放出氨气，随水蒸气馏出，用硼酸溶液或 定量的酸滴定液吸收后，再用酸或碱滴定液滴定。
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应用示例：碘苯酯的测定
I
CH 3 CH (CH 2)8-COOC 2H5
O2 I2 (I _)
I2 + 2NaOH
NaIO + NaI + H 2O
3NaIO
NaIO 3 + 2NaI
3Br 2 + I - +3H 2O
CH 3COOH IO
-
3
+
6HBr
Br 2(guo) + HCOOH
IO
-
3
T = M×b/a×B
3. 百分含量的计算
（1）直接滴定法 D% = V ×F × T/W ×100% F = 实际标定的浓度/规定的浓度
（2）间接滴定法（回滴定法；剩余滴定法）
D% = （VO – VB) ×F ×T/W ×100%
二、光谱分析法
（一）紫外-可见分光光度法（200nm～760nm)
＜0.10 ＜0.05
5. 测定方法
要求供试品溶液的A应在0.3 ～0.7
对照品比较法：Cx=(Ax/Ar)Cr; 含量%=Cx×D/W×100 % 常用方法 吸收系数法： 含量%= (E1%1cm )x/(E1%1cm )r ×100 %
计算分光光度法：VA的三点校正法
（二）荧光分光光度法
灵敏度高，可达10-10g/ml ～ 10-12g/ml 在低浓度进行测定，防止F与C不成正比及自熄灭作用 1. 特点 用基准物溶液校正仪器灵敏度，防止样品液荧光衰减 灵敏度高，但干扰因素多。 制备荧光衍生物，可提高其灵敏度和选择性。 用样品量少，操作简单，方法快速，应用范围较广。
(三)氧燃瓶燃烧法(oxygen flask combustion method)
1. 仪器装置 500ml, 1000ml, 2000ml, 磨口、硬质玻璃锥形瓶 2. 称样 固体样；液体样要求详见P68 3. 燃烧分解操作法 4. 吸收液的选择 用于X、S、Se等的鉴别、检查、含量测定时
多数是H2O或H2O-NaOH；少数为H2O-NaOH-H2O2.
NaCl + AgNO3
AgCl + NaNO3
AgNO3 + NH4SCN
AgSCN + NH4NO3
2. 用硫酸水解后测定法 例如：硬脂酸镁的含量测定
Mg(C17H35COO)2 + H2SO4
H2SO4 + 2NaOH
MgSO4 + 2C17H35COOH Na2SO4 + 2H2O
（三）经氧化还原后测定法
第四章 药物定量分析与分析方法验证
基本要求 第一节 定量分析样品的前处理方法 第二节 定量分析方法特点 第三节 药品质量标准分析方法验证 第四节 生物样品分析方法的基本要求 练习与思考
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基本要求
一、掌握定量分析方法验证的效能指标。 二、熟悉定量分析样品的前处理方法。 三、了解定量分析样品的前处理方法的进展
药物分析中常用的分析方法
经有机破坏的分析方法
二、不经有机破坏的分析方法
（一）直接测定法
例如：富马酸亚铁
CH C O
0 C CH
O
Fe
溶于热稀矿酸，采用铈量法 ，邻二氮菲作指示剂
（二）经水解后测定法
1. 直接回流后测定法 例如：三氯叔丁醇的含量测定
△
CCl3-C(CH3)2-OH + 4NaOH (CH3)2CO +3NaCl + HCOONa +2H2O
E1%1cm 124.5
144.0
48.62
106.6
杂散光检查： 试剂 浓度(g/ml) 测定波长 透光率(%)
NaI 1.00
220nm
＜ 0.8
NaNO2 5.00
340nm
＜ 0.8
4. 对溶剂的要求:
220～240nm 241～250nm 251～300nm 300nm以上
溶剂+吸收池A ＜0.41 ＜0.20
及在药物分中的应用。
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第一节 定量分析样品的前处理方法
一、概述
1.为什么要对定量分析的样品进行前处理？
含卤素有机药物 R-X （F，Cl, Br, I ）
金属有机药物 R-O-Me（有机酸或酚的
含金属有机药物
金属盐；结合不牢固）
有机金属药物 R-Me （结合牢固）
2. 常用的处理方法
不经有机破坏的分析方法
灵敏度高，可达10-4g/ml ～ 10-7g/ml
1. 特点 准确度高，SRD（%）为2% ～5%
仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用
范围广。
2. 朗伯-比耳定律
A = ECL E1%1cm = ε ×10/M
3. 仪器校正和检定
波长校正用汞灯中较强谱线237.38,253.65,275.28,296.73,
1. 碱性还原后测定 例如：泛影酸的含量测定
COOH
COOH
ห้องสมุดไป่ตู้
I
I
+ 11NaOH + 3Zn
CH3CONH NHCO3CH
H2N
NH2
I
+ 3NaI 3+CO2OCNHa + 32 N+aZ23OnHO
N3aI + AgNO AgI3 + NaNO
2. 酸性还原后测定 例如：碘番酸的含量测定 Zn还原 后银量法
3. 利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量
（1）含锑药物 例如：葡萄糖酸锑的含量测定
Sb5+ + 2KI H+ Sb3+ + 2K+ ++ I2
I2 + 2Na2S2O3
2NaI + Na2S4O6
（2）含铁药物
2Fe3+ + 2KI I2 + 2Na2S2O3
2Fe2+ + 2K+ + I2 2NaI + Na2S4O6
313.16,334.15,365.02,404.66,425.83,546.07nm与576.96nm
或用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm进行校正。
吸收度的检定：用K2CrO7(60mg)+0.005mol/LH2SO4液至1000ml 波长(nm) 235(最小) 257(最大) 313(最小) 350(最大)
三、经有机破坏的分析方法
湿法破坏
药物分析中常用的有机破坏的方法有 干法破坏
(一)湿法破坏 (二)干法破坏
HNO3-HClO4法
氧瓶燃烧法
HNO3-H2SO4法
H2SO4-硫酸盐法
HNO3- H2SO4-HClO4法； H2SO4-H2O2； H2SO4-KMnO4
加Na2CO3或MgO以助灰化；温度控制在420℃
+
5I
-+
6H
+
HBr + CO
2
3I 2 + 3H 2O
I2 + 2Na 2S2O3
2NaI + Na 2S4O6
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第二节 定量分析方法特点
一、容量分析法
（一）容量分析法的特点 操作简单、快速； 比较准确（RSD＜0.2%）； 仪器普通易得。
（二）容量分析法的计算问题
1. 滴定度（T）的概念 每1mlmol溶液相当于被测物质的量(mg) 2. 滴定度的计算 aA + bB cC + dD