平面色谱法

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3.扫描方式 直线扫描和曲折扫描。 （二）定量分析法 常用外标一点法。
m样 A样 m标 A标
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第三节 纸色谱法简介
以纸做载体进行的液-液分配色谱法


固定相：纸纤维吸附的水 流动相：与水不互溶的有机溶剂（饱和正丁醇） 分离机制：同液-液分配色谱 定性参数：
L 1 Rf L0 1 K VS Vm

讨论：Rf与组分性质、流动相及溶解度有关 极性组分→易保留，Rf 小（流动相极性↑， Rf ↑） 非极性组分→易流出，Rf大（流动相极性↑，Rf ↓）
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（二） 相对比移值Rr
相对比移值：是在一定条件下，被测组分的比移值与参 考物质的比移值之比。
原点到组分斑点中心的距离 L1 Rr R f（参） 原点到参考物斑点中心的距离 L2
讨论
•
R f（组）
参考物与被测组分在完全相同条件下展开，可以消除系统 误差，大大提高重现性和可靠性. 参考物可以是后加入的纯物质，也可是样品中已知组分。 相对比移值Rr与组分、参考物性质及色谱条件有关，范围 可以大于或小于1.
吸附剂裝于柱中。都是经典液相色谱法的一种。
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（四）薄层色谱操作方法
操作步骤:制板、点样、展开、斑点定位 1.制板 ⑴薄层板的选择：表面光滑、平整、洁净、厚度均匀
⑵薄层板的涂布： 软板（不加粘合剂)：干,湿法铺 硬板（加粘合剂）：湿法铺板(匀浆） 要求：涂布均匀 ，厚度0.25mm ~ 0.5mm 常用硅胶： 硅胶G——自含粘和剂 硅胶H——不含粘和剂，铺板时另加入CMC-Na 硅胶G254——含荧光剂，254nm紫外光照发绿光 硅胶HF356——含荧光剂，356nm紫外光照发光
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粘合剂：煅石膏和CMC-Na 。
硅胶- CMC-Na板: 机械强度好。 硅胶-G板:机械强度较差，易脱落。 2.点样 ①样品溶液的溶剂：溶解样品，易挥发。 ②点样器：平口微量注射器，毛细管。 ③点样量：一般几微升；制备时可多至几百微升。
④点样方式：
位置: 距板一端1.5~2cm处。 原点大小: 2~4mm.
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适用：分析酸性或中性物质 ；不适用碱性物质 的 分离，碱性物质与硅胶发生酸碱反应。
分离效能：粒度越小、越均匀，效能越高。 2. 氧化铝 碱性氧化铝 pH 9～10 适于分析碱性、中性物质 中性氧化铝 pH＞7.5 适于分析酸性碱性和中性物质 酸性氧化铝 pH 4～5 适于分析酸性、中性物质 活性：含水量↑，活性↓。图示 3. 聚酰胺 氢键作用 氢键能力↑强，组分越后出柱
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1.波长选择： 测定波长λs：选择被测组分的最大吸收波长。
参比波长λR：选择被测组分吸收光谱的吸收峰邻近基线
处的波长。既不被组分吸收的波长。在此 波长处所测的值作为薄层板空白吸收。 2.扫描方法 ⑴透射法：测定透射光。 优缺点：光强度大；但受薄：测定反射光。 优缺点：光强度小；但受薄层厚度、均匀度影响较小。 基线稳定，重现性好。
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“相似相溶”原则 ：
根据组分性质、吸附剂的活性，选择适当极性的流动相.
▲ 三者关系图示： 组分 极性 非(弱)极性
吸附剂 活性小 活性大
流动相 极性 非极性或弱极性
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注：吸附薄层色谱法的分离原理、吸附剂、流动相及其选择 都同于液-固吸附柱色谱法，不同的是液-固吸附柱色谱法把
第十九章
▲平面色谱法概述
平面色谱法
平面色谱法：组分在以平面为载体的固定相和流动相之间 进行的一种色谱方法。 分类：薄层色谱法（TLC） 纸色谱法 薄层电泳法 特点：操作简便；
仪器较简单；
分析速度快； 结果较直观；
分离能力较高。
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第一节 平面色谱法参数
一、定性参数 （一） 比移值Rf 在一定色谱条件下，溶质移动的距离与流动相移动 的距离之比，称为比移值。
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4.斑点确定 ①目视法-有色斑点
②紫外法-在紫外灯下显示荧光斑点或暗斑.
③显色剂法 a 碘-适用生物碱、氨基酸衍生物、肽类、脂类、皂苷类等。 b 10%硫酸乙醇溶液-适用大多数有机物。 c 0.05%荧光黄甲醇溶液-适用芳香族与杂环化合物。 （五）定性与定量分析 定性分析——比移值（对照品对照）。 杂质检查——杂质对照品比较和主成分自身对照。 定量分析——洗脱法，目视比较法，薄层扫描法。
n 16( L 2 ) W W斑点宽度
影响因素： 固定相的粒度、均匀度、活度，色谱纸的厚薄及均 匀度，展开剂（流动相）的流速及展开方式等。 （二）塔板高度 四、分离参数 （一）分离度
R
H
L0 n
d 两斑点中心的距离
2( L2 L1 ) 2d W1 W2 W1 W2
（二）分离数：分离度均为1.177时，在Rf=0与Rf=1两斑 点之间所能容纳的斑点数。
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• •
图示
L0 L2 L1
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二、相平衡参数
（一）分配系数K= Cs/Cm,容量因子 k= CsVs/CmVm (二）K、k 与Rf之间的关系
L uR Lt R f ( R' 1) 定时展开保留比 R' u0 L0 t L0
▲保留比相当于组分在流动相中出现的几率或组分 在流动相中所占的比率。
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（三）吸附剂和流动相的选择：
依据被测组分、吸附剂和流动相的性质 1. 被测组分性质（极性大小）： 烃＜ 烯烃 ＜醚类＜硝基化合物 - - - ＜醇＜羧酸， 2. 吸附剂的活性及选择： 吸附剂的活性↑大，对被测组分的吸附能力↑强 强极性物质——选择弱吸附剂 弱极性物质——选择强吸附剂 3. 流动相的极性： 流动相极性↑大，对被测组分的洗脱能力↑大 常用溶剂极性：水＞酸＞吡啶＞甲醇＞乙醇＞正丙醇 ＞丙酮＞乙酸乙脂＞乙醚＞氯仿＞二氯甲烷＞甲苯＞ 三氯乙烷＞四氯化碳＞环己烷＞石油醚
特性：
1）与极性物质或不饱和化合物形成氢键。 物质极性↑，吸附能力↑→强极性吸附中心，不易洗脱。 吸附活性次序：活泼型>游离型>束缚型。 2）吸水→失活（活性与含水量有关，含水量↑，活性↓。 ▲105～110OC烘干30分钟(可逆失水)→吸附力最大 ▲500OC烘干(不可逆失水)→活性丧失，无吸附力
SN L0 1 (W1 / 2 )0 (W1 / 2 )1
W1/2：由薄层扫描所得半峰宽。
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第二节 薄层色谱法
一、概述
1．定义：将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上， 形成薄层而进行色谱分离和分析的方法 2．操作过程：见图示 铺板 →活化 →点样 → 展开 →定位(定性)/洗脱(定量) 3．分离机制：吸附（分配，离子交换，空间排阻） 4．特点：分析快速、灵敏、显色方便
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三、吸附薄层色谱法
（一）分离原理
各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心，利用吸附
剂表面的活性吸附中心对不同组分的吸附能力差异而实现 分离。 （二）常用吸附剂 多孔、微粒状物质 1. 硅胶 2. 氧化铝 3. 聚酰胺
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1. 硅胶（SiO2· H2O）
结构：内部——硅氧交联结构→多孔结构 表面——有硅醇基→氢键作用→吸附活性中心
VS L0 1 1 K 1 k R' Vm L
L0 L K VS Vm L
Vm 1 1 R f R' 1 K VS Vm Vm K Vs 1 k
K R f K不同，Rf不同，产生分离。
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三、面效参数 （一）塔板数
5．应用：药物杂质检查、纯度测定
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图示
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二、薄层色谱法的主要类型
（一）按分离机制分类 1.吸附薄层色谱法 2.分配薄层色谱法
3.分子排阻薄层色谱法
4.胶束薄层色谱法 （二）按分离效能分类 1.经典薄层色谱法 2.高效薄层色谱法 （三）按两相极性分类 1.正相薄层色谱法 2.反相薄层色谱法
原点到组分斑点中心的距离 L1 Rf 原点到溶剂前沿的距离 L0
Rf=0~1; 适宜范围：0.2~0.8； 最佳范围：0.3~0.5
讨论
Rf与组分性质以及固定相和流动相的性质有关； 在色谱条件一定下，Rf只与组分性质有关，是平面色 谱的基本定性参数，说明了组分的色谱保留行为。
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四、高效薄层色谱法
在经典薄层色谱法的基础上发展起来的一种方法。
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特点：
1.高效薄层板 固定相颗粒小且均匀，采用喷雾技术制板。
2.点样量少且原点较小。 3.流动相流速慢，展距短。 4.斑点小且园而整齐。
5.展开方式与经典方式相同。可采用高效薄层专用层析缸，
可严格控制分离条件，使重现性好。 6.分离度好，灵敏度高。 7.定量分析 采用薄层扫描。由于斑点小、均匀和整齐，
扫描时基线稳定，误差小，重现性和线性好，准确度高。
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五、薄层扫描法简介
（一）基本原理 薄层扫描法是以一定强度波长的光扫描组分的斑点， 测定斑点对光吸收的强度或发出的荧光强度，进行定 量分析的方法。 仪器：常用的是双波长薄层扫描仪。
点样方式：多次点样。
点间距离：0.8~1.5cm.
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3.展开 ①展开装置：层析缸 ②展开方式 近水平展开，倾斜角度：15~30˚，板浸入展开剂0.5cm. 上行展开, (常用方式) 多次展开,在一次展开不能分离的情况下使用. 双向展开,纵向展开后,更换展开剂,再横向展开. ③注意事项: 层析缸要密闭良好. 防止边缘效应:在展开时,薄层板边缘部分展开剂中弱极性 和沸点较低的溶剂比薄层板中间部分挥发较快,致使 边缘部分展开剂极性较大,Rf比中间部分大.在展开之 前,薄层板先在层析缸内饱和15～30min.