微生物快速检测方法ppt课件
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个人防护措施及注意事项说明
实验服与护目镜
进入实验室需穿着实验服，佩戴合适的护目镜， 防止试剂飞溅或粉尘刺激。
手套与口罩
根据实验需要选择合适的手套和口罩，避免皮肤 接触有害试剂或吸入有害气体。
实验操作规范
规范实验操作，避免产生气溶胶或飞溅物，减少 交叉污染的风险。
实验废弃物处理及环保要求讲解
废弃物分类处理
医学检验微生物ppt课件完 整版x
目录
• 微生物学基础 • 医学微生物学概述 • 常见病原微生物介绍 • 微生物检验技术与方法 • 临床标本中常见病原微生物检测实例分析 • 实验室安全与防护措施
01 微生物学基础
微生物定义与分类
微生物定义
微生物是一类形体微小、结构简单、 必须借助光学显微镜或电子显微镜 才能看到的微小生物。
微生物生长与繁殖
01
微生物营养
微生物从外界环境中摄取和利用营养物质的过程称为营养。微生物营养
类型有光能自养型、光能异养型、化能自养型和化能异养型四类。
02 03
微生物生长
微生物在适宜的环境条件下，通过摄取营养物质、合成细胞物质、增加 细胞数量的过程称为生长。生长曲线可分为迟缓期、对数期、稳定期和 衰亡期四个时期。
通过对微生物基因组进行测序和 分析，了解其基因组成和功能， 为微生物的鉴定和分型提供准确
依据。
基因芯片技术
将大量特异性基因探针固定在芯 片上，通过与待测微生物DNA杂
交来鉴定其种类和型别。
宏基因组学技术
通过对环境中所有微生物的基因 组进行高通量测序和分析，了解 微生物群落的组成和功能，为环 境微生物检测和生态学研究提供
尿液标本中常见病原微生物检测实例分析
尿常规检查
食品微生物检验课件PPT
和安全性。
报告撰写
按照规定的格式和要求，撰写食品 微生物检验报告，包括实验目的、 实验方法、实验结果、结论等部分。
结果沟通与反馈
及时将检验结果反馈给相关部门和 企业，为食品安全监管和企业生产 提供依据和建议。
05
食品微生物检验案例分析
案例一：乳制品中沙门氏菌的检测
总结词
乳制品中沙门氏菌的检测是食品微生物检验的重要案例，涉及乳制品安全和消费者健康。
微生物种类与特点
细菌
常见的食品污染菌，如 沙门氏菌、大肠杆菌等， 可导致食品腐败和食物
中毒。
霉菌
部分霉菌可产生霉菌毒 素，影响食品安全和人
体健康。
酵母菌
部分酵母菌可引起食品 发酵和变质。
病毒
如肠道病毒、轮状病毒 等，可通过食品传播，
引发疾病。
微生物检验的重要性和应用
重要性
食品微生物检验是保障食品安全的关键环节，可有效预防和控制食源性疾病的 传播。
详细描述
沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌，容易在乳制品中滋生。检测沙门氏菌的方法包括传统的培养法和现代的免 疫学、分子生物学方法。在检测过程中，应关注乳制品的采集、运输、储存和实验室处理等环节，确保检测结果 的准确性和可靠性。
案例二：蔬菜中大肠杆菌的检测
总结词
蔬菜中大肠杆菌的检测是食品微生物检验的又一重要案例，强调食品安全和蔬菜加工过程的控制。
实验室内质量控制
实验环境要求
保持实验室的清洁和消毒，确保 无菌操作，避免微生物污染。
实Байду номын сангаас设备校准
定期对实验设备进行校准和维护， 确保设备的准确性和可靠性。
实验操作规范
遵循标准的实验操作流程，确保 实验结果的准确性和可重复性。
报告撰写
按照规定的格式和要求，撰写食品 微生物检验报告，包括实验目的、 实验方法、实验结果、结论等部分。
结果沟通与反馈
及时将检验结果反馈给相关部门和 企业，为食品安全监管和企业生产 提供依据和建议。
05
食品微生物检验案例分析
案例一：乳制品中沙门氏菌的检测
总结词
乳制品中沙门氏菌的检测是食品微生物检验的重要案例，涉及乳制品安全和消费者健康。
微生物种类与特点
细菌
常见的食品污染菌，如 沙门氏菌、大肠杆菌等， 可导致食品腐败和食物
中毒。
霉菌
部分霉菌可产生霉菌毒 素，影响食品安全和人
体健康。
酵母菌
部分酵母菌可引起食品 发酵和变质。
病毒
如肠道病毒、轮状病毒 等，可通过食品传播，
引发疾病。
微生物检验的重要性和应用
重要性
食品微生物检验是保障食品安全的关键环节，可有效预防和控制食源性疾病的 传播。
详细描述
沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌，容易在乳制品中滋生。检测沙门氏菌的方法包括传统的培养法和现代的免 疫学、分子生物学方法。在检测过程中，应关注乳制品的采集、运输、储存和实验室处理等环节，确保检测结果 的准确性和可靠性。
案例二：蔬菜中大肠杆菌的检测
总结词
蔬菜中大肠杆菌的检测是食品微生物检验的又一重要案例，强调食品安全和蔬菜加工过程的控制。
实验室内质量控制
实验环境要求
保持实验室的清洁和消毒，确保 无菌操作，避免微生物污染。
实Байду номын сангаас设备校准
定期对实验设备进行校准和维护， 确保设备的准确性和可靠性。
实验操作规范
遵循标准的实验操作流程，确保 实验结果的准确性和可重复性。
微生物快速检测技术..75页PPT
60、人民的幸福是至高无个的法。— —西塞 罗
21、要知道对好事的称颂过于夸大，也会招来人们的反感轻蔑和嫉妒。——培根 22、业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。——韩愈
23、一切节省，归根到底都归结为时间的节省。——马克思 24、意志命运往往背道而驰，决心到最后会全部推倒。——莎士比亚
25、学习是劳动，是充满思想的劳动。——56、极端的法规，就是极端的不公。 ——西 塞罗 57、法律一旦成为人们的需要，人们 就不再 配享受 自由了 。—— 毕达哥 拉斯 58、法律规定的惩罚不是为了私人的 利益， 而是为 了公共 的利益 ；一部 分靠有 害的强 制，一 部分靠 榜样的 效力。 ——格 老秀斯 59、假如没有法律他们会更快乐的话 ，那么 法律作 为一件 无用之 物自己 就会消 灭。— —洛克
21、要知道对好事的称颂过于夸大，也会招来人们的反感轻蔑和嫉妒。——培根 22、业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。——韩愈
23、一切节省，归根到底都归结为时间的节省。——马克思 24、意志命运往往背道而驰，决心到最后会全部推倒。——莎士比亚
25、学习是劳动，是充满思想的劳动。——56、极端的法规，就是极端的不公。 ——西 塞罗 57、法律一旦成为人们的需要，人们 就不再 配享受 自由了 。—— 毕达哥 拉斯 58、法律规定的惩罚不是为了私人的 利益， 而是为 了公共 的利益 ；一部 分靠有 害的强 制，一 部分靠 榜样的 效力。 ——格 老秀斯 59、假如没有法律他们会更快乐的话 ，那么 法律作 为一件 无用之 物自己 就会消 灭。— —洛克
3M 微生物快速检测产品.ppt
工序及影响产品安全的人为因素进行分析，确定加工过程中的关键 环节，建立、完善监控程序和监控标准，采取规范的纠正措施。
• 国际标准CAC/RCP-1“食品卫生通则1997修订3版”对HACCP的定义： 鉴别、评价和控制对食品安全至关重要的危害的一种体系。
• 较为常见的定义解释为： HACCP是对可能发生在食品加工环节中的危害进行评估，进而
ATP检测替代微生物检测
ATP 实时监控环境的卫生状况，微生物的 检测可以更好的追本溯源，让我们清楚地意识到 是何种微生物引起的环境污染，从而降低企业的 风险，两者相辅相成，不存在谁替代谁的问题。
NG 主要优点
物理优点:
• 更小& 更轻 - 400g! • 功能完备的底座 • 锂电池 • 背光，高分辨率屏幕 • 腔盖感应装置 • 腕带，改进的便携包，
水质检测
为以下场合检测设计… • 水质洁净程度---3M™ Aqua-Trace™-Total
原位清洗（CIP）清洗水 快速 & 较脏的系统水质 （工业工艺用水, 冷却塔循环水, 等） • 杀菌效果鉴定---3M™ Aqua-Trace™ Total& Free 消毒剂/杀菌剂的杀菌效果验证
水质洁净程度的检测
ATP检测技术原理
• 什么是 ATP? • ＡＴＰ检测原理
• 微生物+食品残渣+有机分泌物 Vs ATP含量
磷酸基团
什么是 ATP?
• 三磷酸腺苷，含高 能磷酸键的有机化 合物
• 存在于所有活的生 物细胞中
• 能量分子 –储存 & 细胞间 运输
• RNA的组成 腺嘌呤核苷
ＡＴＰ检测原理
荧光素(Luciferin) / 荧光素酶(Luciferase) 在细胞中，ATP通过脱去磷酸基来释放能量
• 国际标准CAC/RCP-1“食品卫生通则1997修订3版”对HACCP的定义： 鉴别、评价和控制对食品安全至关重要的危害的一种体系。
• 较为常见的定义解释为： HACCP是对可能发生在食品加工环节中的危害进行评估，进而
ATP检测替代微生物检测
ATP 实时监控环境的卫生状况，微生物的 检测可以更好的追本溯源，让我们清楚地意识到 是何种微生物引起的环境污染，从而降低企业的 风险，两者相辅相成，不存在谁替代谁的问题。
NG 主要优点
物理优点:
• 更小& 更轻 - 400g! • 功能完备的底座 • 锂电池 • 背光，高分辨率屏幕 • 腔盖感应装置 • 腕带，改进的便携包，
水质检测
为以下场合检测设计… • 水质洁净程度---3M™ Aqua-Trace™-Total
原位清洗（CIP）清洗水 快速 & 较脏的系统水质 （工业工艺用水, 冷却塔循环水, 等） • 杀菌效果鉴定---3M™ Aqua-Trace™ Total& Free 消毒剂/杀菌剂的杀菌效果验证
水质洁净程度的检测
ATP检测技术原理
• 什么是 ATP? • ＡＴＰ检测原理
• 微生物+食品残渣+有机分泌物 Vs ATP含量
磷酸基团
什么是 ATP?
• 三磷酸腺苷，含高 能磷酸键的有机化 合物
• 存在于所有活的生 物细胞中
• 能量分子 –储存 & 细胞间 运输
• RNA的组成 腺嘌呤核苷
ＡＴＰ检测原理
荧光素(Luciferin) / 荧光素酶(Luciferase) 在细胞中，ATP通过脱去磷酸基来释放能量
食品微生物快速检测常用方法纸片法测大肠菌群精-优秀PPT文档
结果判定
（纸
阴性结果：纸片保持紫蓝色不变，无论有否色
片
斑点或红晕均为阴性；
法 测
阳性结果及可疑现象：纸片上呈现红色斑点或
大 肠
红晕，其周围变黄整个纸片变黄均为阳性。若
菌
所检样品为未经消毒的食(饮)具，纸片结果是全
群
黄且无红色斑点或红晕，可直接列为阳性；如
）
若是已消毒的，应按发酵法做证实试验或加pH
7.4的无菌PBS溶液证实，以免误判。
（纸片法大测大肠菌群 ） 固轻体轻样 压品平肠菌，，吸置取36l℃:1混±悬1℃液恒3个温1箱m培L(养m1g5)，h，分观别察涂结布果于。3张纸片，再吸取l:10、1:100稀释液各3个mL(mg)，分别涂布于3张纸片，而后用手
群
）
食品营养与检测专业教学资源库
接种
（纸
液体样品吸取3个1mL分别涂布于3张纸片，再
目录页
食品营养与检测专业教 学资源库
一
设备和培养基
二
操作步骤
三
结果报告
—
过渡页
一
食品营养与检测专业教 学资源库
设备和培养基
食品营养与检测专业教 学资源库
纸片(纸片制备：定性滤纸，切成10cm×12cm， 叠成5cm×6cm大小的双层纸片，经烘干或高压灭菌后 备用)、塑料袋(为耐高温的聚丙烯塑料薄膜袋，可按实 验要求压合成一定取l:10和l:100稀释液各3个1mL，分别涂布于3张
法 测
纸片；
大 肠
固体样品，吸取l:1混悬液3个1mL(mg)，分别
菌
涂布于3张纸片，再吸取l:10、1:100稀释液各3个
群
mL(mg)，分别涂布于3张纸片，而后用手轻轻压平，
食品安全快速检测技术微生物快速检测专题PPT课件
加水的纸片
大肠杆菌
大肠杆菌革兰氏染色
电子显微镜下的出血性大肠杆菌
细菌
大肠菌群检测试剂盒
图1加样后排气泡
图2 大肠菌群阳性（左） 大肠菌群阴性（右）
图3 大肠菌群试管阳性（左） 大肠菌群试剂盒阳性（右）
方法原理：与国标法相同。事先将浓缩乳糖胆盐培养基、亚硒酸盐胱氨酸 增菌液、GN增菌液、7.5%氯化钠培养基、包被在试剂盒中，随时取用
食品安全快速检测技术及应用
7
项目八 食品中微生物的 快速检测
概述
我国细菌性食物中毒中，70% ～ 80%是由沙门 菌引起的。
在食品生产、加工、储存、运输、销售等各个环节 中都有污染微生物的可能。 一旦污染，微生物将大 量繁殖而引起食品腐败变质，或导致食源性感染和 食物中毒。
食品中病原菌的快速检测面临的主要问 题
案例
夏令时节是各类冷饮产品的销售 旺季，某市消保委近期对该市流 通领域的冰淇淋进行了比较试验。 检测显示，22件样品中，有10 件不符合标准。其中，冰雪皇后 (DQ)、酷圣石、多乐星等多个 知名品牌因大肠菌群超标等原因 上了“黑榜”。
据专家分析，大肠菌群超标的主 要原因是二次污染。如加工器具 没有定期清洗消毒，操作人员在 上完卫生间后洗手不彻底，个人 卫生状况未达标，直接影响最终 产品的卫生状况。
食品菌落总数严重超标，会破坏食品的营养成分，加速食品腐败变质，使食品 失去食用价值。消费者食用微生物超标严重的食品，容易患痢疾等肠道疾病， 可能引起呕吐、腹泻等症状，危害人体健康安全。
食品中菌落总数——纸片法
细菌在测试片 上生长后会显 示红色斑点， 选择菌落数适 中（30～300个） 的测试片进行 计数，乘以稀 释倍数后即为 每毫升（或每 克）样品中所 含的细菌菌落 总数。
大肠杆菌
大肠杆菌革兰氏染色
电子显微镜下的出血性大肠杆菌
细菌
大肠菌群检测试剂盒
图1加样后排气泡
图2 大肠菌群阳性（左） 大肠菌群阴性（右）
图3 大肠菌群试管阳性（左） 大肠菌群试剂盒阳性（右）
方法原理：与国标法相同。事先将浓缩乳糖胆盐培养基、亚硒酸盐胱氨酸 增菌液、GN增菌液、7.5%氯化钠培养基、包被在试剂盒中，随时取用
食品安全快速检测技术及应用
7
项目八 食品中微生物的 快速检测
概述
我国细菌性食物中毒中，70% ～ 80%是由沙门 菌引起的。
在食品生产、加工、储存、运输、销售等各个环节 中都有污染微生物的可能。 一旦污染，微生物将大 量繁殖而引起食品腐败变质，或导致食源性感染和 食物中毒。
食品中病原菌的快速检测面临的主要问 题
案例
夏令时节是各类冷饮产品的销售 旺季，某市消保委近期对该市流 通领域的冰淇淋进行了比较试验。 检测显示，22件样品中，有10 件不符合标准。其中，冰雪皇后 (DQ)、酷圣石、多乐星等多个 知名品牌因大肠菌群超标等原因 上了“黑榜”。
据专家分析，大肠菌群超标的主 要原因是二次污染。如加工器具 没有定期清洗消毒，操作人员在 上完卫生间后洗手不彻底，个人 卫生状况未达标，直接影响最终 产品的卫生状况。
食品菌落总数严重超标，会破坏食品的营养成分，加速食品腐败变质，使食品 失去食用价值。消费者食用微生物超标严重的食品，容易患痢疾等肠道疾病， 可能引起呕吐、腹泻等症状，危害人体健康安全。
食品中菌落总数——纸片法
细菌在测试片 上生长后会显 示红色斑点， 选择菌落数适 中（30～300个） 的测试片进行 计数，乘以稀 释倍数后即为 每毫升（或每 克）样品中所 含的细菌菌落 总数。
卫生微生物检测方法精品PPT课件
7
世卫组织感染性微生物的危险度等级分类
• 危险度等级一级
✓ 无或极低的个体和群体危险 ✓ 不太可能引起人或动物致病的微生物
• 危险度等级二级
✓ 个体危险中等，群体危险低 ✓ 病原体能引起人或动物的疾病，但不太可能对实验室
工作人员、社区、牲畜或环境造成严重危害。 ✓ 实验室暴露也许会引起严重感染，但是
发生个体之间的直接或间接传播 ✓ 一般没有有效的预防和治疗措施
BSL-1
• 不太可能引起人类疾病或兽医学意义的无疾病 • 安全措施：参照标准微生物学安全操作（= 标准
预防措施）。 • 预期的安全设备：不需要，所以也不需要生物安
全柜 • 实验室设备要求：需要开放实验台和水槽。
BSL-2
• 对群体中出现的中等危险和人类疾病有关系的的 微生物。
• 危险性在于皮肤损伤、摄食、黏膜暴露。 • 这一防护级别代表的微生物为：金黄色葡萄球菌
、沙门菌、轮状病毒、甲型流感病毒、麻疹病毒 等。
BSL-2
• 安全措施：参照一级生物安全实验室操作，+
进入受限 生物危害警告标志 “锐器”防范措施 清除污染生物安全手册
• 预期的安全设备： 在操作产生喷溅或气溶胶的感 染微生物时，使用验收过的物理防护设备，如I 级 或II级生物安全柜。
• 危险性在于呼吸暴露接触到传染性的气溶胶、黏 膜，或是暴露的损伤皮肤接触到传染唾沫。
BSL-4
• 安全措施：参照三级生物安全实验室操作，+
进入前更换衣服 出口处淋浴 离开实验室时，全部物品都要清除污染
• 预期的安全设备： 全部操作程序均在III级生物安 全柜内进行，或者穿正压供气的的连体防护服（ Hazmat 套服）并I级和II级生物安全柜。
世卫组织感染性微生物的危险度等级分类
• 危险度等级一级
✓ 无或极低的个体和群体危险 ✓ 不太可能引起人或动物致病的微生物
• 危险度等级二级
✓ 个体危险中等，群体危险低 ✓ 病原体能引起人或动物的疾病，但不太可能对实验室
工作人员、社区、牲畜或环境造成严重危害。 ✓ 实验室暴露也许会引起严重感染，但是
发生个体之间的直接或间接传播 ✓ 一般没有有效的预防和治疗措施
BSL-1
• 不太可能引起人类疾病或兽医学意义的无疾病 • 安全措施：参照标准微生物学安全操作（= 标准
预防措施）。 • 预期的安全设备：不需要，所以也不需要生物安
全柜 • 实验室设备要求：需要开放实验台和水槽。
BSL-2
• 对群体中出现的中等危险和人类疾病有关系的的 微生物。
• 危险性在于皮肤损伤、摄食、黏膜暴露。 • 这一防护级别代表的微生物为：金黄色葡萄球菌
、沙门菌、轮状病毒、甲型流感病毒、麻疹病毒 等。
BSL-2
• 安全措施：参照一级生物安全实验室操作，+
进入受限 生物危害警告标志 “锐器”防范措施 清除污染生物安全手册
• 预期的安全设备： 在操作产生喷溅或气溶胶的感 染微生物时，使用验收过的物理防护设备，如I 级 或II级生物安全柜。
• 危险性在于呼吸暴露接触到传染性的气溶胶、黏 膜，或是暴露的损伤皮肤接触到传染唾沫。
BSL-4
• 安全措施：参照三级生物安全实验室操作，+
进入前更换衣服 出口处淋浴 离开实验室时，全部物品都要清除污染
• 预期的安全设备： 全部操作程序均在III级生物安 全柜内进行，或者穿正压供气的的连体防护服（ Hazmat 套服）并I级和II级生物安全柜。
微生物检测技术演示文稿ppt课件
2019
-
134
pH
低温保藏
腌制
微生物 食品
aw
干燥
高温保藏
2019
-
15
消毒 --杀灭或清除传播媒介上病原微生物，使其达 到无害化的FF。
灭菌 --用物理和化学方法杀灭或清除传播媒介上一 切微生物的方法。
2019
-
16
利用温度进行灭菌、消毒或防腐，是最常用而又方便有效的方
细菌的特殊结构有荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等。
2019
-
32
大肠杆菌
2019
-
33
金黄色葡萄球菌
2019
-
34
2019
-
35
2019
-
36
2、酵母
酵母菌（yeast）是一通俗名称，没有确切定义。 一般认为酵母菌具有以下五个特点： ➢ 个体一般以单细胞状态存在 ➢ 多数出芽繁殖，也有的裂殖 ➢ 能发酵糖类产能 ➢ 细胞壁常含有甘露聚糖 ➢ 喜在含糖量较高、酸度较大的环境中生长酸度较
法。高温可使微生物细胞内的蛋白质和酶类发生变性而失活， 从而起灭菌作用。低温通常起抑菌作用。 嗜冷微生物适合于－ 10℃生活的细菌，最适生长温度在20℃左右。 嗜温微生物生 长温度在15～45℃之间，最适生长温度在37℃左右的细菌。
嗜热微生物生长温度在30～75℃之间，最适生长温度在55℃， 在100℃以上温度生长，称为嗜高热微生物。
2019
-
28
2. 快速酶触反应及代谢产物的检测
快速酶触反应是根据细菌在生长繁殖过程中 可合成和释放某些特异性的酶，根据酶的特性，选 用相应的底物和指示剂，反应的测定结果有助于细 菌快速诊断。如美国3M Petfifilm TM微生物测试片 可分别快速测定细菌总数、霉菌、酵母菌、大肠杆 菌、金黄色葡萄球菌、大肠菌群等。
食品微生物检测PPT课件
第58页/共151页
四、 有机酸盐和铵盐的利用试验
2、试验方法
（1）奥梅拉（O’Meara）法 （2）贝立脱（Barritt）氏法 （3）快速法
第15页/共151页
（１）奥梅拉法：
将试验菌接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基， 于36±1 ℃培养48h， 每1ml培养液加奥梅拉 O’Meara试剂0.1ml，摇动试管1~2min，静置于 37℃恒温箱4h ，或在48~50 ℃水浴放置2h后判定 结果。
3、结果观察与记录
呈现玫瑰红色，为阳性反应，记+ 无红色者，为阴性反应，记-
第37页/共151页
（二） 硫化氢（H2S）试验
1、原理： 某些细菌可分解培养基中的含硫氨基酸
或含硫化合物，产生硫化氢，硫化氢遇铅 盐或铁盐可生成黑色沉淀物PbS或FeS， 以此鉴别细菌。
第38页/共151页
2、试验方法：
1、待检菌应是新鲜培养物。培养18~24h。 2、待检菌应是纯种培养物。 3、遵守观察反应的时间。观察结果的时间，多为24或48小时。 4、应做必要的对照试验。 5、提高阳性检出率，至少挑取2~3待检的疑似菌落分别进行试验。
第4页/共151页
二、糖醇类代谢试验
（一）糖醇类发酵试验 （二）葡萄糖氧化发酵（O/F）试验 （三）V-P试验 （四）甲基红（Methyl Red）试验 MR （五）七叶苷水解试验 （六）甘油品红试验
3、结果观察与记录
培养基变呈粉红色，为阳性，记 + 培养基颜色不变，为阴性，记 -
第44页/共151页
（四） 氨基酸脱羧酶试验
1、原理： 某些细菌能产生氨基酸脱羧酶, 可使赖
氨酸、鸟氨酸生产脱羧作用, 生成胺 类物质和CO2。胺类物质使培养基呈 碱性变紫色，为阳性, 如呈黄色为阴 性，以此鉴别细菌。
四、 有机酸盐和铵盐的利用试验
2、试验方法
（1）奥梅拉（O’Meara）法 （2）贝立脱（Barritt）氏法 （3）快速法
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（１）奥梅拉法：
将试验菌接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基， 于36±1 ℃培养48h， 每1ml培养液加奥梅拉 O’Meara试剂0.1ml，摇动试管1~2min，静置于 37℃恒温箱4h ，或在48~50 ℃水浴放置2h后判定 结果。
3、结果观察与记录
呈现玫瑰红色，为阳性反应，记+ 无红色者，为阴性反应，记-
第37页/共151页
（二） 硫化氢（H2S）试验
1、原理： 某些细菌可分解培养基中的含硫氨基酸
或含硫化合物，产生硫化氢，硫化氢遇铅 盐或铁盐可生成黑色沉淀物PbS或FeS， 以此鉴别细菌。
第38页/共151页
2、试验方法：
1、待检菌应是新鲜培养物。培养18~24h。 2、待检菌应是纯种培养物。 3、遵守观察反应的时间。观察结果的时间，多为24或48小时。 4、应做必要的对照试验。 5、提高阳性检出率，至少挑取2~3待检的疑似菌落分别进行试验。
第4页/共151页
二、糖醇类代谢试验
（一）糖醇类发酵试验 （二）葡萄糖氧化发酵（O/F）试验 （三）V-P试验 （四）甲基红（Methyl Red）试验 MR （五）七叶苷水解试验 （六）甘油品红试验
3、结果观察与记录
培养基变呈粉红色，为阳性，记 + 培养基颜色不变，为阴性，记 -
第44页/共151页
（四） 氨基酸脱羧酶试验
1、原理： 某些细菌能产生氨基酸脱羧酶, 可使赖
氨酸、鸟氨酸生产脱羧作用, 生成胺 类物质和CO2。胺类物质使培养基呈 碱性变紫色，为阳性, 如呈黄色为阴 性，以此鉴别细菌。
微生物快速检测技术ppt课件
采用流式细胞原 理。对微生物进 行核酸染色，用 流式细胞技术进 行计数
BactoScan FC的优缺点
• 优点：速度快(50-150样品/小时)
• 缺点：死活细胞一起检测，消耗成本较 高，仪器比较难保养。灵敏度不够高。
• 适合牛奶企业检测原奶中细菌总数。
美国Chemunex公司 微生物快速检测系统
其它即用胶，MPN改良法
主要用于 水样或澄 清样品的 大肠菌群 或大肠杆 菌检测 Simplate
colilert
• SimPlateTMTPC 法：基于食源性细菌的蛋白 质有特异性酶类，TPC培养基内含有多种细菌 酶类所对应的底物。检样被细菌污染时，只要 具有一种酶的活性即能与底物作用生成4-甲基 伞形酮，培养24h后，在紫外线照射下，发出 蓝色荧光。 • 食源性细菌悬浮于TPC培养基表面，在分隔的 小池内能迅速进行生化反应，若有检样颗粒亦 无干扰；它不是由48h形成的菌落来计数，而 是24h后在紫外灯照射下记录培养皿内能发出 蓝色荧光的阳性池数，进而由最大近似值 (MPN) 表查出细菌的MPN。阳性池数与 MPN 呈松泊分布。
基于ATP原理的用于成品检测的 微生物检测系统
• Charm LUM-96 （用于UHT产品-高温 瞬间灭菌） • Biotrace • Celsis（主要用于化妆品） • Millipore公司的MicroScan
Celsis和LUM-96
保温2天，检测30分钟（96个样）
ATP法检测成品的优缺点
• 美国Chemunex公司将流式细胞技术与活细胞荧 光探针标记及激光扫描技术相结合，推出的最 新一代的速度更快的Bactiflow以及更高端的 ScanRDI和D-count微生物快速检测仪。 • 其最大的特点是只检测活细胞数，速度极快， 处理量大。与FOSS的BactoScan FC检测死活细 胞都检测不同。 • 是目前国际上正在认可的生物荧光定量检测微 生物数量的两种方法之一。另一种是Millipore 的一款叫MicroStar的基于ATP检测的产品。
微生物检验ppt课件
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目 录
• 微生物检验概述 • 微生物检验的基本原理与方法 • 微生物检验的样品采集与处理 • 微生物检验的常用技术与操作 • 微生物检验的质量控制与保证 • 微生物检验的挑战与发展趋势
01
微生物检验概述
微生物检验的定义与重要性
定义
微生物检验是对环境中的微生物进行定性、定量和鉴定的一种技术，通过特定 的方法和技术手段，对微生物的种类、数量、生理生化特性、遗传物质等进行 分析和研究。
。
04
微生物检验的常用技术与操作
显微镜技术
光学显微镜
01
利用可见光和光学透镜成像，可观察细菌、真菌等微生物的形
态和结构。
电子显微镜
02
利用电子束成像，能够观察更细微的结构，如病毒、细菌的超
微结构等。
相差显微镜
03
利用光的相位差原理，可观察无色透明的微生物，如支原体、
衣原体等。
培养基制备技术
01
补体结合试验
利用补体参与抗原抗体反 应，形成复合物并激活补 体系统，用于检测微生物 抗原或抗体。
微生物的分子生物学检测方法
PCR技术
应用聚合酶链式反应（PCR）技术扩 增微生物特异性基因片段，实现快速 、灵敏的微生物检测。
生物信息学分析
应用生物信息学方法对微生物基因组 数据进行挖掘和分析，揭示微生物种 类、进化关系等信息。
脱羧酶试验等。
酶活性检测
检测微生物产生的特定酶活性 ，如过氧化氢酶试验、氧化酶
试验等。
抗生素敏感性试验
检测微生物对抗生素的敏感性 ，以指导临床用药。
微生物的血清学试验
凝集试验
应用特异性抗体与微生物 抗原结合，形成可见的凝 集现象，用于鉴定微生物 种类。
目 录
• 微生物检验概述 • 微生物检验的基本原理与方法 • 微生物检验的样品采集与处理 • 微生物检验的常用技术与操作 • 微生物检验的质量控制与保证 • 微生物检验的挑战与发展趋势
01
微生物检验概述
微生物检验的定义与重要性
定义
微生物检验是对环境中的微生物进行定性、定量和鉴定的一种技术，通过特定 的方法和技术手段，对微生物的种类、数量、生理生化特性、遗传物质等进行 分析和研究。
。
04
微生物检验的常用技术与操作
显微镜技术
光学显微镜
01
利用可见光和光学透镜成像，可观察细菌、真菌等微生物的形
态和结构。
电子显微镜
02
利用电子束成像，能够观察更细微的结构，如病毒、细菌的超
微结构等。
相差显微镜
03
利用光的相位差原理，可观察无色透明的微生物，如支原体、
衣原体等。
培养基制备技术
01
补体结合试验
利用补体参与抗原抗体反 应，形成复合物并激活补 体系统，用于检测微生物 抗原或抗体。
微生物的分子生物学检测方法
PCR技术
应用聚合酶链式反应（PCR）技术扩 增微生物特异性基因片段，实现快速 、灵敏的微生物检测。
生物信息学分析
应用生物信息学方法对微生物基因组 数据进行挖掘和分析，揭示微生物种 类、进化关系等信息。
脱羧酶试验等。
酶活性检测
检测微生物产生的特定酶活性 ，如过氧化氢酶试验、氧化酶
试验等。
抗生素敏感性试验
检测微生物对抗生素的敏感性 ，以指导临床用药。
微生物的血清学试验
凝集试验
应用特异性抗体与微生物 抗原结合，形成可见的凝 集现象，用于鉴定微生物 种类。
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电阻抗法测定细菌总数
M=(R0-RT)/R0×100% 其中R0表示开始时培养基的阻抗值
RT表示任意时刻培养基的阻抗值 M表示培养基电阻减少的百分数。
➢ 电阻越小细菌活动越多，在一定范围内，菌落形成单位的 对数Log(CFU)与IDT（阻抗检测时间）呈直线关系。
电阻抗法测定细菌总数
优缺点： ➢ 电阻抗法较省力，样品细菌数在4～18小时内出结果。但
清洗保养要求特别高。另外，有存在假阴性的可能。
电阻抗法测定细菌总数
原理
供细菌生长的液体培养基是电的良导体，在特制的测量 管底部装入电极插头，即可对接种生长的培养基的阻抗变 化进行检测。阻抗变化的产生是由于微生物生长过程中的 新陈代谢使培养基中的大分子营养物质(糖、脂类、蛋白 质等）被分解成小分子代谢物，即较小的带电离子（乳酸 盐、醋酸盐、重碳酸或氨等）这些代谢产物的出现和聚集， 增强了培养基的导电性能，从而降低了其阻抗值。
应用
➢ 用于食品生产线和管道进行快速清洁程度检测。 ➢ 用于水质检测。 ➢ 改良后用于食品的商业无菌检测或终产品检验。
ATP生物荧光法
表面清洁度/水质检测
涂抹采样
混合:震荡5s 10秒获得结果
检测
ATP生物荧光法
ATP法检测成品的优缺点
➢ 优点：大大缩短库存时间，减少物流压力和成本。 ➢ 缺点：ATP方法需要消耗大量的较昂贵的试剂，对仪器的
原理
液体样品流过仪器中的激光照射的流动池，当微生物流过 显微镜聚焦的流动池时就能被自动地检测到。
特点
检测方法与使用的仪器有高度的特异性，所以应遵循生产 厂商提供的方法。
流式细胞技术
FOSS公司BactoScan FC牛奶中总菌数快速检测 仪
➢ 采用流式细胞原理。对微生物进行核酸染色，用流式细胞 技术进行计数。
螺旋平板法
阿 基 米 德 螺 旋 型 轨 迹
平皿旋转
接种针往外移动 同时自动将样品 稀释1000倍
螺旋平板法
优点
➢ 与传统方法相比，无需稀释梯度，每个梯度倒2个平板， 节省了大量人力物力。
缺点
➢ 检测时间并没有缩短，菌落总数仍需要培养48小时。 ➢ 需要配合自动菌落计数仪，否则人工计数更麻烦。
与阻抗法类似，可以实现快速检测。 缺点：需要购买原厂的预装培养基，
应用范围受限制，成本高昂。
梅里埃的BacT/Alert微生物检测仪
基于微生物生成产生CO2的原 理。CO2积累越多，底部的 CO2传感器变黄，由LED发射 一束光至底部，探头检测反射 光的强度。光强度与微生物数 量有一定关系。
流有热稳定的核酸酶反应片，核酸酶反应产生的粉 红色环带色围着一个红色或兰色菌落即为金黄色葡萄球菌， 26小时可确认结果。
螺旋平板法
DWS螺旋平板接种仪
自动菌落计数仪
螺旋平板法
原理
样品制备的菌悬液在琼脂表面形成阿基米德螺旋型轨迹。 当用于分液的空心针从平板中心移向边缘时，菌液体积减 少，注入的体积和琼脂半径间存在指数关系。培养时菌落 沿注液线生长。用一计数的方格来校准与琼脂表面不同区 域有关的样品量，计数每个区域的已知菌落数，在计算细 菌浓度。
时间。
培养膜法_快速检测纸片技术
应用
➢ 细菌总数 测试片中含有一种红色指示染剂，使所有菌落易认别计数。
➢ 大肠菌群 测试片中含有指示剂，使菌落为红色，且有气泡产生。
➢ 大肠杆菌 指示剂可使所有菌落为红色，并可留住大肠杆菌产生的气 泡。 24小时可确定大肠杆菌数。
培养膜法_快速检测纸片技术
➢ 霉菌和酵母菌计数 测试片中加入的抗生素，可以抑制细菌生长；指示剂使酵 母菌易认别计数；霉菌可产生特有的色泽。
➢ 优点：速度快(50-150样品/小时) ➢ 缺点：死活细胞一起检测，消耗成本较高，仪器比较难保
养。灵敏度不够高。 ➢ 适合牛奶企业检测原奶中细菌总数。
流式细胞技术
美国Chemunex公司微生物快速检测系统
➢ 将流式细胞技术与活细胞荧光探针标记及激光扫描技术相 结合，推出的最新一代的速度更快的Bactiflow以及更高 端的ScanRDI和D-count微生物快速检测仪。
对于菌数太低的不好，样品中还不能用防腐剂，否则结果 是乱七八糟的。 ➢ 电阻抗法制作标准曲线过程中工作量较大，但以后的检测 简便的多，不需要一系列稀释，只需样品1ml，培养基 9ml，测量管一只。
通过颜色变化检测
微生物生长导致培养基pH值发生变 化，由光学检测器检测底部琼脂层 的颜色变化，记录达到突变点的时 间。
滤膜法
滤膜法常用于可过滤样品的微生物检测。
优点
灵敏度增大，菌落无扩散情况，便于计数。
缺点
需要额外的支出购买真空泵，多联支架及一次性滤膜； 如果抽滤过程空气洁净度不够，有可能造成二次污染， 尤其是对菌数要求特别严格的产品，如啤酒，澄清果 汁，桶装饮用水等。
ATP生物荧光法
原理
ATP＋萤光素+萤光素酶+O2—AMP+Ppi+CO2+氧化萤光 素+光
快速检测的新方法
1、ATP生物荧光法 2、电阻抗法 3、颜色变化 4、流式细胞技术及激光扫描技术 5、其它：热量法，放射测量法
培养膜法_快速检测纸片技术
原理
二片塑料膜构成，上薄为盖，下厚为培养基。
操作方法：
检样稀释→取1ml滴于下膜正中央→盖上膜→扩展器压成 20cm2圆圈 →37℃培养24h →计数(显色的斑点)
培养膜法_快速检测纸片技术
优点：
➢ 可节约玻璃仪器、培养基。 ➢ 可节省培养基等试剂的配置灭菌和玻璃仪器灭菌和清洗的
时间、人力和费用。 ➢ 因为有显色剂和小方格，计数方便。 ➢ 节约稀释的繁琐动作。 ➢ 可快速测试致病菌，节省大量的实验步骤。
缺点
➢ 成本比传统方法要稍高些。 ➢ 测试细菌总数、大肠菌群、霉菌和酵母菌时不能节约培养
微生物快速检测方法简介
常见微生物检测项目
常规微生物项目
细菌总数、大肠菌群、大肠杆菌、霉菌及酵母菌
致病微生物项目
沙门氏菌、李斯特菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157： H7、弯曲杆菌、致病弧菌、副溶血弧菌、志贺氏菌、假 单胞菌等
常规微生物检测方法
传统计数改良法
1、培养膜法 2、螺旋平板计数法：螺旋接种仪＋菌落计数 3、滤膜法：常用于一些可过滤样品的检测