[医学]胃肠肿瘤基因检测

胃腺癌HER2检测可见不完全细胞膜染色
胃癌的HER2 评分标准
IHC 阴性 (0) 不染色或 <10% 的细胞膜染色
IHC阴性 (1+) >10% 的细胞膜淡染/勉强可见染色；或仅有部分膜染色
IHC 可疑 (2+) >10%的细胞轻到中度完整细胞膜或基侧细胞膜染色
IHC 阳性 (3+) 完整细胞膜或基侧细胞膜强染色，且具有如下两种情况之一 • 切除标本中，染色细胞比例>10% • 活检标本中，不管染色细胞比例多少(如<10%)，具有聚集的强
胃癌组织中Her2表达具异质性
印戒细胞型
无扩增
肠型
高度扩增
FISH技术的特点
色证实 • 切片厚度可能影响结果的解读，保证切片厚度为2–4 μm • 将切片置于玻片上，放置于室温下 12–24 h 或 60°C 1 h
干燥
脱蜡 • 标本用二甲苯脱蜡、梯度乙醇水化 • 确保脱蜡完全，残余石蜡会增加非特异性染色
免疫组化技术
• 概念：用标记的特异性抗体对组织切片标本中某 种化学成分的分布和含量进行组织原位定性、定 位或定量研究。
HER2
HER：human epidermal growth factor receptor，人类表皮 生长因子受体
HER2，又名c-erbB-2；原癌基因，位于17q21，编码跨 膜糖蛋白，具有跨膜酪氨酸激酶活性；
通过参与信号传道通路的一系列活动影响细胞的增殖与 分化。
HER2 受体跨膜二聚体的信号传导途径
石蜡包埋
• 标本用梯度乙醇/二甲苯脱水，石蜡包埋 • 避免标本长时间置于融化的石蜡中，因为高温会减少抗
原表位 • 切片前，石蜡包埋标本可长期存放
– 用新鲜的石蜡 – 石蜡包埋标本最小 1 cm2 – 以利于切片
切片和脱蜡
切片 • 理想的切片应该在进行HER2检测前的短时间内立即进行 • 切片应该在肿瘤最有代表性的部位进行，且应该有HE染
生长因子（配体）
细胞膜 细胞浆
信号传导 至细胞核
接合部
酪氨酸激酶 活性部分
细胞核
促进细胞分裂、增殖
HER2过度表达：正常状态的10-100倍
细胞质
正常
C
扩增/过度表达
3
B
A
细胞膜
A = HER2 DNA B = HER2 mRNA C = HER2 receptor protein
细胞核
2 1
4
1 = 基因拷贝数 2 = mRNA 转录 3 = 细胞表面受体蛋白表达 4 = 细胞外受体功能域释放
免疫组化
0
1+
2+
3+
FISH
–+
可接受赫赛汀治疗
评分系统基于: Hofmann M, et al. Histopathology 2008; 52:797–805.
标本收集
• 标本来源：手术或活检标本可用于HER2检测
标本初步处理 • 立即 (20–30分钟内)进行标本标记、切开、固wenku.baidu.com
定 • 避开出血和坏死组织
胃肠肿瘤基因 检测
内容提要
胃癌与HER2检测 结直肠癌与EGFR、KRAS检测 胃肠间质瘤与C-KIT检测
胃癌与HER2检测
胃癌概述
胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤，全世界恶性肿瘤的病 死率中胃癌居第二位
年龄：40-60岁；性别：男女比例约为3:1 临床表现：
症状：上腹隐痛、腹胀、食欲不振、恶心呕吐、呕血 与黑便、贫血、体重下降
HER2基因的致瘤机制：
抑制凋亡，促进增殖； 增加肿瘤细胞的侵袭力； 促进肿瘤血管新生和淋巴管新生。
研究表明： 30％以上的人类肿瘤中存在HER2基因的扩增/ 过度表达（如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜 癌、输卵管癌、胃癌和前列腺癌等
HER2在胃癌中表现
大约16% 的进展期胃癌患者 HER2检测呈阳性 胃癌组织的HER2过表达与肿瘤侵犯程度高和预后
• 基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异 性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色 剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确 定组织内抗原，对其进行定位、定性及定量的检 测
免疫组化步骤
• 对组织切片进行预处理 • 抗原修复：微波修复、热修复等 • 阻断内源性过氧化物酶：H2O2去离子水 • 滴加一抗 • 滴加二抗 • 应用DAB溶液显色、封片 • 结果观察
手术治疗仍然是根治胃癌的最有效方法，然而， 仅有30-40％患者可能通过单纯的手术治疗而获得治愈 大部分患者死于肿瘤的再发或远处转移
寻求手术以外的途径治疗胃癌、预防其复发转移成为胃癌 综合治疗的重点和热点
晚期胃癌急需有效的治疗措施 研究显示HER2阳性胃癌患者使用靶向药物赫赛汀有效
标本固定
• 标本固定不合格是HER2检测结果错误最常见的原因 • 在最快的时间内固定标本(20分钟内) • 固定时间
–手术标本: 6–48 h (至少 1 h/mm组织) –活检标本: 不长于 24 h (至少 1 h/mm组织) • 固定液种类 –10% 中性福尔马林
• 新配制的福尔马林 (定期更新) –其他试剂必须经过验证，以保证结果可靠 –非福尔马林制剂可能会妨碍IHC和FISH检测的可靠性
差密切相关；因此对于胃癌病人都要检测HER2 赫赛汀是一种针对HER2阳性的胃癌患者新的靶向
药物。准确的HER2 检测对判断胃癌患者接受赫赛 汀治疗是否有效至关重要
胃癌HER2 检测流程
• 关键步骤包括
标本收集 固定 石蜡包埋 切片 脱蜡 IHC / FISH 检测
胃癌HER2 检测流程
肿瘤标本
染色细胞克隆
FISH技术介绍
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五步完成实验操作
样本预处理 探针、样本变性 探针＋样本杂交
杂交后洗涤 结果观察
观察荧光信号在染色体上的位置及数量可反映相应染色体的情况
体征：上腹部深压痛、肿块、左锁骨上淋巴结肿大
胃癌病理表现
早期胃癌 • 概念：局限于粘膜或粘膜下层，不论其有无淋巴
结转移 • 肉眼分型：表浅型、隆起型、凹陷型 进展期胃癌 • 概念：癌组织浸润到粘膜下层以下者 • 肉眼分型：隆起型、溃疡型、浸润型 组织学类型:腺癌(管状-、乳头状-、粘液-等)
胃癌治疗