蛋白质与酶工程复习题

一．选择题：1.影响蛋白质化学修饰反应的主要因素有：（）一是蛋白质功能基的反应活性；二是修饰剂的反应活性。

2. 蛋白质化学修饰有以下作用（以酶为例），请指出错误的一条： ( )(1)改造酶的作用特性（包括改变酶活性、专一性、对效应物响应性能及对辅助因子的要求）;(2)提高酶的稳定性;(3)扩大在体内应用可能性（防止在体内非专一性水解、减少和消除免疫原性以利于医疗应用）.3．蛋白质侧链上的巯基在进行烷基化修饰时，常用的烷基化试剂是：（）碘乙酸、碘乙酰胺、N-乙基马来酰亚胺、5,5-二硫 -2- 硝基苯甲酸4. 下面哪一项叙述是错误的： ()5. 人类基因组计划的启动和草图完成时间在：（）1990年正式启动，2000年6月26日人类基因组工作草图完成。

6. 人类基因组计划的启动到人类基因组序列图测序完成时间在： ( )1990年正式启动到2003年4月14日7. 通过比较两个或多个蛋白质序列的相似区域和保守性位点，确定相互间具有共同功能的序列模式和分子进化关系，进一步分析其结构和功能。

此方法为： ( )序列两两比对8. 通过对目标蛋白质进行定位突变或化学修饰改变其结构和功能，为蛋白质分子设计中的：（）称为“小改“，最广泛使用的方法，主要是通过定点突变或盒式替换技术来有目的地改变几个氨基酸残基9. 通过对来源于不同蛋白质的结构域进行拼接和组装，为蛋白质分子设计中的：（）“中改“，”分子剪裁“10. 完全从头设计出一种具有特异结构与功能的全新蛋白质，为蛋白质分子设计中的：（）“全新蛋白质设计“或”蛋白质从头设计“11 下面哪一条不是真核基因在原核中正确表达的必备条件：（）第一，克隆到原核表达系统中的序列必须是去掉内含子的cDNA序列；第二，要用原核的启动子；第三，真核基因可能在表达过程中需要有分子伴侣帮助折叠成正确的构象才会有活性；第四，注意控制表达条件，尽量不要形成包涵体。

12 外源基因在大肠杆菌（）高效表达时，常会发生一种特殊的生理现象，形成包涵体。

13 由欧洲生物信息学研究所进行维护和管理的SWISS-PROT数据库：（）SWISS-PROT是经过注释的蛋白质序列数据库，由欧洲生物信息学研究所(EBI)维护。

数据库由蛋白质序列条目构成，每个条目包含蛋白质序列、引用文献信息、分类学信息、注释等，注释中包括蛋白质的功能、转录后修饰、特殊位点和区域、二级结构、四级结构、与其它序列的相似性、序列残缺与疾病的关系、序列变异体和冲突等信息。

SWISS-PROT中尽可能减少了冗余序列，并与其它30多个数据建立了交叉引用，其中包括核酸序列库、蛋白质序列库和蛋白质结构库等。

利用序列提取系统(SRS)可以方便地检索SWISS-PROT和其它EBI的数据库。

SWISS-PROT只接受直接测序获得的蛋白质序列，序列提交可以在其Web页面上完成。

14 核酸序列数据库GenBank是由：（）美国国立生物技术信息数据库是由美国国立生物技术信息中心（中心（NCBI）维护的一级核酸序列数据库。

）维护的一级核酸序列数据库；数据库的数据来源有三种（1）、直接来源于测序工作者提交的序列；（2）、与其它数据机构协作交换的数据；（3）、美国专利局提供的专利数据。

15 通过改变某些条件或添加某种试剂，使酶的溶解度降低，而从溶液中沉淀析出，与其他溶质分离的技术，为：（）（1）盐析法；（2）等电点沉淀法；（3）有机溶剂沉淀法；（4）非离子型聚合物沉淀法；（5）聚电解质沉淀法；（6）亲和沉淀法；（7）选择性沉淀法。

16 酶反应器类型很多，不同的反应器特点各不相同。

对于那些有气体参与的酶催化反应，可选择：（）鼓泡式反应器17 酶反应器类型很多，不同的反应器特点各不相同。

对于那些产量有限、价格昂贵的酶，酶的回收利用特别重要，可选择：（）膜式反应器16 酶反应器类型很多，不同的反应器特点各不相同。

对于一些耐高温酶(如耐高温α-淀粉酶)，可选择：（）喷射式反应器17 采用物理吸附法固定化酶有以下特点：（）条件温和，操作简便，酶活力损失少18 采用包埋法固定化酶有以下特点：（）1）固定化酶颗粒小，有利于底物和产物扩散。

2）半透膜能阻止蛋白质分子渗漏和进入，注入体内既可避免引起免疫过敏反应，也可使酶免遭蛋白水解酶的降解，具有较大的医学价值。

不与酶蛋白氨基酸残基反应，很少改变酶的高级结构，酶活回收率高。

19 采用共价结合法固定化酶有以下特点：（）酶与载体结合牢固，不会轻易脱落，可连续使用。

20 酶反应器与化学反应器和发酵罐的区别是：（）见下面21 采用磷酸钙共沉淀法将重组载体导入受体细胞的方法属于：（）转染22 采用花粉管通道法将重组载体导入受体细胞的方法属于：（）共转染23 采用基因枪法将重组载体导入受体细胞的方法属于：（）基因转移24 利用免疫学方法可以筛选重组子，其筛选过程主要是检测：（）插入基因表达产物与抗体反应形成的沉淀圈25 利用抗药性方法可以筛选重组子，其筛选过程主要是检测：（）抗药基因26 利用蓝白斑方法可以筛选重组子，其筛选过程主要是检测：（）LacZ基因27下列对氨基酸分类正确的是：（）（1）脂肪族氨基酸：①R为烷基的中性氨基酸：甘氨酸Gly、丙氨酸Ala、缬氨酸Val、亮氨酸Lue、亮氨酸Lue；②R基含羟基或硫的氨基酸：丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、半胱氨酸(Cys)、甲硫氨酸(Met)；③ R基中含有羧基或酰胺的氨基酸：天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、天冬酰胺(Asn)、谷氨酰胺(Gln)；④R基中含有氨基或亚氨基的氨基酸：赖氨酸(Lys)、精氨酸(Arg)、组氨酸(His)；（2）芳香族氨基酸：苯丙氨酸（Phe,F）、苯丙氨酸（Phe,F）、色氨酸（Trp,W）；（3）杂环氨基酸：组氨酸（His, H）、脯氨酸（Pro, P）（4）脯氨酸（亚氨基酸）28 下列哪项称述是错误的：四．名词解释：1. 生物信息学：是研究生物信息的采集，处理，存储，传播，分析和解释等各方面的一门学科，它通过综合利用生物学，计算机科学和信息技术而揭示大量而复杂的生物数据所赋有的生物学奥秘。

2. 定点突变：是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法对已知的目的基因DNA片段进行碱基的添加、删除、点突变等，从而改变对应的氨基酸序列和蛋白质结构。

3. 蛋白质的化学修饰：凡通过活性基团的引入或除去，而使蛋白质一级结构发生改变的过程4. 基因融合技术：是将不同的基因连接起来从而表达具有复合功能的融合蛋白5. 报告基因：是指一组编码易被检测的蛋白质或酶的基因，将其与目的基因融合表达后，可通过报告基因产物的表达来“报告”目的基因的表达调控。

6.蛋白质芯片：是一种高通量的蛋白功能分析技术，可用于蛋白质表达谱分析，研究蛋白质与蛋白质的相互作用，甚至DNA－蛋白质、RNA－蛋白质的相互作用，筛选药物作用的蛋白靶点等。

7. 噬菌体展示技术：是一种基因表达产物和亲和选择相结合的技术，以改构的噬菌体为载体，把待选基因片段定向插入噬菌体外壳蛋白质基因区，使外源多肽或蛋白质表达并展示于噬菌体表面，再通过亲和富集法表达有特异肽或蛋白质的噬菌体。

8. 细菌表面展示技术：运用DNA重组技术在噬菌体、细菌、真菌、病毒等微生物表面呈现外源蛋白和多肽。

9. 酵母表面展示技术：是将外源靶蛋白基因与特定的载体基因序列融合后导入到酵母细胞，利用酵母细胞内蛋白转运到膜表面的机制使靶蛋白固定化表达在酵母表面。

10. 蛋白质组：指由一个基因组(genOME)，或一个细胞、组织表达的所有蛋白质(PROTein).11 蛋白质组的时空性：DNA通常位于细胞核内，且保持稳定，因此测定基因组的DNA序列不受时空的影响。

12 二维凝胶电泳技术：是指建立等电聚焦/SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（IEF/SDS-PAGE）分离和分析蛋白质组分的技术。

13 酶反应器：用于酶进行催化反应的容器及其附属设备14 酶传感器：以酶作为分子识别元件上的敏感材料，同各种不同的转换器结合所构成的一类生物传感器15 固定化酶：用物理或化学手段定位在限定的空间区域，并使其保持催化活性，可重复利用的酶。

16 固定化细胞：将具有一定生理功能的生物细胞（如微生物细胞、植物细胞或动物细胞等），用一定的方法将其固定，作为固体生物催化剂而加以利用的一门技术。

17 传感器：能感受(或响应)一种信息并变换成可测量信号(一般指电学量)的器件18 生物传感器：将生物体的成份（酶、抗原、抗体、DNA、激素）或生物体本身（细胞、细胞器、组织）固定化在一器件上作为敏感元件的传感器。

20 酶基因的克隆：把酶基因同有自主复制能力的载体DNA在体外人工连接，构建成新的重组DNA，然后送入受体生物中去表达，从而产生遗传物质和状态的转移和重新组合。

21 融合酶：指一条多肽链上含有2种或2种以上催化活性的酶。

22 蛋白质工程：通过基因工程技术或化学修饰技术改造现有蛋白或组建新型蛋白的现代生物技术。

23 酶工程：是将酶或者微生物细胞，动植物细胞，细胞器等在一定的生物反应装置中，利用酶所具有的生物催化功能，借助工程手段将相应的原料转化成有用物质并应用于社会生活的一门科学技术。

24 肽键：一个氨基酸的∝—NH2与另一个氨基酸的∝—COOH缩合脱去一分子水，可以形成一个共价酰胺键。

25 蛋白质的二级结构：指肽链主链不同区段通过自身的相互作用，形成氢键，沿某一主轴盘旋折叠而形成的局部空间结构，是蛋白质结构的构象单元．26 蛋白质的结构域：对于较大的蛋白质分子或亚基，多肽链往往由两个或两个以上相对独立的三维实体缔合而成三级结构，这种相对独立的三维实体称结构域27 蛋白质变性：天然蛋白质分子受到某些物理因素或化学因素的影响时，会引起蛋白质天然构象的破坏，导致生物活性的降低或完全丧失。

28 蛋白质复性：当变性因素去除后，变性蛋白又可以恢复到天然构象。

29 分子伴侣：是一类相互之间有关系的蛋白，它们的功能是帮助其他含多肽结构的物质在体内进行非共价健的组装和卸装，但不是这些结构在发挥其正常生物学功能的永久组成成分(从功能上定义)。

30 第二遗传密码：氨基酸顺序与蛋白质三维结构之间存在着对应的关系。

31 生物柴油：以动植物油脂为原料，用甲醇或乙醇在催化剂作用下经脂交换制成的柴油。

五．简答题：1. 蛋白质化学修饰的反应类型有哪些？主要修饰部位是什么？（1）巯基的化学修饰，半胱氨酸的巯基；(2) 氨基的化学修饰；赖氨酸、精氨酸、组氨酸和谷氨酰胺的氨基；(3) 羧基的化学修饰，天冬氨酸和谷氨酸的羧基；(4)二硫键的化学修饰，二硫键。

2. 基因突变的种类有几种？各自的特点是什么？（1）定点突变，特点：突变位点是确定的、突变的个数也是预知的、突变的效应往往是未知的、定点突变的方法一般是以PCR技术为基础的；（2）定向突变，特点：突变位点是随机的，不确定的、突变位点的数目也是不确定的、突变的效应更是不可预知的。