两种转染试剂转染 C2C12 细胞效率比较分

两种转染试剂转染 C2C12 细胞效率比较分精品论文

两种转染试剂转染 C2C12 细胞效率比较分

析

韦伟，赵元元，张维娅，赵书红，李新云

5 ,农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室～华中农业大学～武汉 430070, 摘

要:C2C12 细胞是鼠的骨骼肌成肌细胞～常用于体外研究肌细胞成肌分化～研

究表明 C2C12 细

胞的转染效率较低～为了提高 C2C12 细胞的转染效率～建立理想的转染条件

～本研究对

比分析了 FuGENE HD 和 Lipofectamine 2000 两种常用转染试剂的转染效

率。研究结果表明

10 FuGENE HD 转染寡核苷酸的效率比 Lipofectamine 2000 高～而转染

质粒的效率比

Lipofectamine 2000 低。另外我们还发现培养基中的血清会降低细胞的转染

效率。本研究结

果为提高 C2C12 细胞的转染效率提供了新的信息。

关键词:转染效率,寡核苷酸,质粒,C2C12 细胞

中图分类号:Q-33

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Compare analysis of the transfection efficiency of two

transfection regents in C2C12 Cells

Wei Wei, Zhao Yuanyuan, Zhang Weiya, Zhao Shuhong, Li Xinyun

(Key Lab of Agricultural Animal Genetics, Breeding and Reproduction of Ministry of Education,

20 Huazhong Agricultural University, WuHan 430070)

Abstract: C2C12 cells are the myoblast of mice, which are used as

the model for investigating the differentiation of myoblast in vitro. The transfection efficiency of the C2C12 cells was not good in many studies. In order to improve the transfection efficiency of C2C12 cells and contribute an ideal condition of transfection. The transfection efficiency of two transfection reagents, FuGENE

25 HD and Lipofectamine 2000, was analyzed in this study. According the results, the transfection efficiency of FuGENE HD was higher than that of Lipofectamine 2000 when oligo nucleic acids was transfected, but it was lower than Lipofectamine 2000 when plasmid was transfected in the C2C12 cells. Also, we found that serum in cultured medium could inhibit the transfection efficiency. These results offered useful information

for improving the transfection efficiency of

30 C2C12 cells.

Key words: transfection efficiency; oligo nucleic acids; plasmid;

C2C12 cells

0 引言

简转染是指将外源遗传物质转入到真核细胞内的过程。转染对现代分子生物学研究意义

35 重大，它解决了外源遗传物质导入细胞的难题，为在细胞水平上进行基因功能研究奠定了基

础。转染技术多种多样，按外源遗传物质是否与基因组整合来分，转染技术分为瞬时转染和

稳定转染两大类。按转染实施手段来分，转染技术分为物理转染法和化学转染法两大类。常

见的物理转染方法有显微注射、电穿孔、基因枪、光学转染等;化学转染法包括 DEAE-葡

聚糖法、磷酸钙法、人工脂质体法等。转染技术的选择会影响细胞转染效率，进而影响到实

40 验结果。因此在进行细胞转染前，应该对转染过程中涉及的因素进行综合分析，以便筛选出

针对特定细胞转染的最适方法和条件。阳离子脂质体因其转染效率高、安全(可降解)、操

作简便等原因而倍受关注(1,2)，现广泛用于人和其他哺乳动物细胞系或体内细胞的瞬时转染

基金项目:本研究受教育部新教师基金项目(20090146120032);国家自然科学基金资助项目(30901020)以及

973 项目(2012CB124702)资助。

作者简介:韦伟(1986-)，女，博士在读，主要研究方向:骨骼肌生长发育分子机理

通信联系人:李新云(1976-)，男，副教授，主要研究方向:骨骼肌生长发育分子机理. E-mail:

xyli@

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(3-7)。目前已有许多研究针对阳离子脂质体的转染效率进行了条件优化，比

如 DNA 用量、脂质体和 DNA 的体积质量比、细胞汇合度、脂质体浓度、转染时间等(8-10)。

45 本研究主要对实验室常用的 FuGENE HD 和 Lipofectamine 2000 两种脂质体转染试剂的转染效率进行了对比分析。我们选取了比较难于转染的鼠 C2C12 成肌细胞，对比分析了这两种转染试剂在 C2C12 细胞中转染寡核苷酸以及质粒的效果。同时，我们还研究了血清对 C2C12 细胞转染效率的影响。本研究发现 FuGENE HD 转染寡核苷酸的效率比 Lipofectamine 2000 高，而转染质粒的效率比Lipofectamine 2000 低。另外，血清会降低 C2C12 细胞的转

50 染效率。

1 实验

1.1 材料

DMEM 高糖、胰酶、胎牛血清(Hyclone 公司);Opti-MEM I Reduced Serum Medium

(Gibco 公司);转染试剂 Lipofectamine 2000(Invitrogen 公司);FuGENE HD Transfection

55 Reagen(tRoche 公司);FAM 标记的 small RNA 模拟物 FAM-NC(上海吉玛公司);pEGFP-C1及 C2C12 细胞由实验室保存;六孔细胞培养板(Corning 公司)。

1.2 主要仪器

CO细胞培养箱为 Thermo Scientific 公司产品，倒置荧光显微镜为 Nicon 公司产品。 2

1.3 方法