生鲜牛乳中氟喹诺酮类药物残留的检测方法(1)

生鲜牛乳中氟喹诺酮类药物残留的检测方法张均媚1吴晓明2刘伟娟1李卓1薛刚1张燕1马文红1

（1.天津市乳品食品检测中心，天津300381；

2.天津理工大学材料科学与工程学院，天津300384）

摘要：

本方法在生鲜牛乳中莱克多巴胺的检测限为2μｇ/kg，本方法在2ppb～100ppb添加浓度水平上回收率为60%～120%，本方法与仪器技术分析相比具有操作简便，快速，准确度和灵敏度高，样品加标率回收效果好，检出限低，试剂盒稳定性好，重现性好等特点。

关键词：生鲜牛乳；氟喹诺酮类药物；残留量；酶标仪

Determination Method of Fluroquinolones Residues in Fresh Milk

ZHANG Jun-mei 1 WU Xiao-ming 2 LIU Wei-juan 1 LI Zhuo 1 XUE Gang 1 ZHANG Yan 1MA

Wen-hong1

(1. Tianjin Monitoring Center for Milk Products and Food, Tianjin 300381, China;

2. School of Materials Science & Engineering, Tianjin University of Technology,

Tianjin 300384, China )

Abstract:

The method in fresh milk ractopamine detection limit of 2 μg / kg, this method 2ppb ~ 100ppb level of recovery of the added concentration of 60% to 120% of this method compared with the instrumentation is simple, fast accuracy and high sensitivity, rate of recovery of spiked effective, low detection limit kit, good stability, reproducibility is good.

Keywords: Fresh milk, Fluroquinolones, Residues, ELISA reader

氟喹诺酮类(fluoroquinolones，FQNS或FQS)药物属第3代喹诺酮类抗菌药，因其在喹诺酮萘啶环的6位处引入了氟原子，7位上都连有哌嗪环，所以统称氟喹诺酮类，是一系列新型氟取代的喹诺酮类衍生物。该类药物抗菌谱广、抗菌活性强，抗菌活性好，对葡萄球菌、肺炎球菌、某些厌氧菌和支原体等均有效，特别是对绿脓杆菌效果很好，几乎适用于奶牛临床常见的各种细菌感染性疾病。但由于药物本身特性及不合理用药和滥用药物现象的存在，引起了一系列的不良反应，人体累计摄入量超过一定值或食用了高残留的含有氟喹诺酮类药物的食物后可能会出现中毒症状，常见的有皮肤过敏及光敏反应、中枢神经系统反应、循环系统反应、消化系统反应、泌尿系统反应、呼吸系统反应、软骨毒性、肝脏毒性、生殖毒性、跟腱炎和局部刺激症状等。

1 材料和方法

1.1仪器与试剂

以下所用的试剂，除特别注明外均为析纯试剂，水为符合GB/T 6682-2008分析实验室用水规格和试验方法，规定的二级水。

1.1.1 乙腈，优级纯试剂，天津市光复科技发展有限公司；正己烷，优级纯试剂，天津市光

复科技发展有限公司；二氯甲烷，优级纯试剂，天津市光复科技发展有限公司；氢氧化钠，优级纯试剂，天津市光复科技发展有限公司；十二水合磷酸氢二钠，优级纯试剂，天津市光复科技发展有限公司；二水合磷酸氢二钠，优级纯试剂，天津市光复科技发展有限公司。1.1.2 氟喹诺酮快速检测试剂盒（2℃～8℃冰箱中保存），北京望尔生物技术有限公司。1.1.2.1 氟喹诺酮类系列标准溶液

0μｇ/ｇ、1.0μｇ/ｇ、3.0μｇ/ｇ、9.0μｇ/ｇ、27μｇ/g、81μｇ/ｇ

1.1.

2.2 包被有氟喹诺酮类药物偶联抗原的96孔板

12条×8孔。

1.1.

2.3 氟喹诺酮类药物抗体工作液

1.1.

2.4 酶标记物工作液

1.1.

2.5 底物液A液

1.1.

2.6 底物液B液

1.1.

2.7终止液

1.1.

2.82倍浓缩缓冲液

1.1.

2.9 20倍浓缩洗涤液

1.1.3 缓冲液工作液

用水将2倍浓缩缓冲液按1:1体积比进行稀释（1份2倍浓缩缓冲液+1份灭菌水），用于溶解干燥的残留物。4℃保存，有效期1个月。

1.1.4 洗涤工作液

用水将20倍浓缩洗涤液按1:19体积比进行稀释（1份20倍浓缩洗涤液+19份灭菌水），用于酶标板的洗涤。4℃保存，有效期1个月。

1.1.50.1mol/L氢氧化钠溶液

称取0.4g氢氧化钠加水溶解稀释至100mL。

1.1.6乙腈-0.1mol/L氢氧化钠溶液（50:10,v/v）

取乙腈50mL，0.1mol/L氢氧化钠溶液10mL混合均匀。

1.1.7磷酸盐缓冲液（0.02mol/L，pH7.2）

称取5.16g十二水合磷酸氢二钠和0.87g二水合磷酸二氢钠加水溶解稀释至1L。

1.2 仪器

1.2.1酶标仪配备450nm滤光片RT-6000, 深圳霖杜生命科学股份有限公司；

1.2.2氮吹仪M32 上海大普仪器有限公司；

1.2.3振荡器E11 天津市三水科学仪器有限公司；

1.2.4涡旋仪X 55 北京星海有限公司；

1.2.5离心机L31 上海医用仪器厂；

1.2.6电子天平：感量0.001g，AB204德国赛多利斯公司；

1.2.7微量移液器：单道200μL、1000μL，多道100μL北京吉尔森有限公司。

2测定步骤

2.1样品制备：取500g生鲜牛乳试样混匀备用，称取5g±0.001g备用试样于50mL离心管

中，加乙腈—0.1mol/L氢氧化钠溶液（50:10,v/v）12mL，震荡5min，4000r/min离心5min；取上清液6mL，加0.02mol/L磷酸盐缓冲液6mL，再加二氯甲烷7mL，震荡5min，4000r/min离心5min；取下层有机相6mL于10mL离心管中，于50℃下氮气吹干；加0.02mol/L磷酸盐缓冲液0.5mL，涡旋震动2min，加正己烷1mL，涡旋震动30s，4000r/min离心5min；取下层清液50μL进行分析。本方法稀释倍数为0.5倍。

2.2测定